Instituto Tecnológico de Estudios Superiores de Occidente

Ingeniería en Biotecnología

PRE- REPORTE DE LABORATORIO No. 2

“Preparación y esterilización de material y medios de cultivo”

Laboratorio de microbiología
Isabella Aguilar Paz, Karla Sofía Padilla Hermosillo, Valeria
Preciado Lara

Profesora Xitlalli Desideria Hernandez Mancillas

Jalisco, febrero de 2021
 Pre-Reporte practica No.2: “Preparación y esterilización del material y medios de cultivo”.

Cuestionario:
Físicos / Químicos Ejemplo de material que:

Método Mecanismo de acción Condiciones Ventajas Desventajas Puede esterilizarse por No puede esterilizarse
este método por este método

Calor Se emplea vapor Tiempo, Rápido calentamiento y Corrosivo sobre ciertos Medios de cultivo, Emulsiones que se
húmedo saturado para producir temperatura,presión del penetración del calor, materiales metálicos, no útil diluyentes, desnaturalizan a
la hidratación, vapor destrucción de bacterias y para material termosensible textiles,instrumental, temperaturas superiores a
coagulación e hidrólisis 15 min. a 121°C endosporas en corto tiempo, soluciones, ropa de 100ºC
de las albúminas y las 10 min. a 126°C no deja residuos tóxicos, poco laboratorio,
proteínas en las células 7 min. a 134°C deterioro del material
microbianas expuesto, es económico.

Calor seco La esterilidad se Tiempo, temperatura No deja residuos, es un Son necesarias altas Polvos inertes, sustancias Materiales plásticos,
consigue por las altas 30 min. a 180 °C método rápido, económico, temperaturas, con lo cual los oleosas, material metálico y guantes y artículos de
temperaturas del aire, 60 min. a 170°C permite la esterilización de instrumentos a esterilizar algunos materiales de vidrio goma, frascos con
oxidando los 120 min. a 160°C materiales no miscibles con el pueden deteriorarse por el líquidos acuosos, frascos
compuestos celulares. agua como es el caso de excesivo calor, sólo debe con líquidos inflamables,
polvos, aceites y grasas. emplearse para esterilizar textiles, así como
materiales termoestables instrumental rotatorio

Incineración Los objetos o los Tiempo, temperatura Nula toxicidad residual y la Largo tiempo de exposición, Esterilizar objetos de vidrio Materiales que no se
productos se introducen 30 min. a 180°C posibilidad de utilizar cajas la posibilidad de dañar termorresistentes, porcelana, pretendan destruir por
en el horno que se 60 min. a 170 °C herméticas metálicas, debido algunas aleaciones metálicas material de acero inoxidable, completo
calienta a una 120 min. a 160 °C a que la propagación del calor y la difícil certificación de aceites, vaselinas, petrolatos
temperatura muy alta, 150 min. a 150 °C es por conducción y no por este método. y polvos.
de modo que elimina los 180 min. a 140 °C penetración.
microorganismos al 360 min. a 120 °C
mismo tiempo que
destruye el objeto

Irradiación La ionización del ADN Se define Dosis de Inducen menos alteración que Requiere instalaciones para Materiales termosensibles Medios de cultivo o
ionizante de los microorganismos, Irradiación a la cantidad el calor sobre los productos, radioesterilización y ser como jeringas, sondas, soluciones porque
lo que conduce a la de energía por unidad de proceso fácil de realizada por profesionales suturas, guantes, etc producen alteraciones de
ruptura de cadenas y a masa absorbida por el controlar,excelente capacidad especializados, no aptos los componentes.
 la formación de enlaces producto. Cuando la de penetración en los para productos con teflón,
transversales energía se mide en materiales. puede provocar cambios de
impidiendo la Joules y la masa en Kg, color y aumento de fragilidad
multiplicación celular. la unidad de dosis queda en vidrios y algunos
definida en Gray. plásticos.
Típicamente en los
procesos de
esterilización gamma se
utiliza el kGy (kiloGray =
1.000 Gray)

Óxido de Es un agente Tiempo, temperatura, Puede propagarse en los El proceso de esterilización Todos los elementos o Productos termosensibles
etileno microbiano que concentración, humedad pliegues y en los lugares resulta excesivamente largo, materiales que no pueden ser que no pueden ser
consigue un efecto 2,5 h a 55° C ETO 100% inaccesibles del elemento a plantea problemas de esterilizados con el proceso esterilizados por métodos
alquilante sobre esterilizar. toxicidad residual, por ello, tradicional, es decir todos los tradicionales
distintos radicales Esterilizar entre los 30ºC y los necesita sistemas de productos termosensibles.
químicos, modificando 60ºC (a baja temperatura) lo monitorización ambiental y
la estructura molecular que garantiza la no exposición personal.
de las proteínas deformación o la no
celulares. destrucción de los elementos
a esterilizar.
Atravesar las membranas de
los envoltorios que contienen
los elementos (por ejemplo el
film polietileno).

Alcohol Producen precipitación y A concentraciones de Es rápidamente bactericida No tiene buena penetración Materiales semicríticos y no Es considerado un
desnaturalización de 60%-80%, tanto el etanol sobre las formas vegetativas sobre materia orgánica, no críticos (termómetros clínicos, desinfectante intermedio,
proteínas, también como el isopropanol, son bacterianas tanto esteriliza sino que desinfecta. pinzas, limpieza de mesadas, no esteriliza sino que
lesionan la membrana potentes agentes grampositivas como Los alcoholes se evaporan etc.) y antisepsia de piel desinfecta. Su uso repetido
citoplásmica. La virucidas, inactivando gramnegativas, es rápidamente, sin dejar puede deteriorar plásticos
precipitación y casi todas las especies tuberculicida, fungicida y residuos sobre las y goma.
desnaturalización de de virus lipofílicos y viricida. superficies tratadas es
proteínas depende de la muchos de los virus Los alcoholes se evaporan inconveniente cuando se
presencia de agua y hidrofílicos. rápidamente, sin dejar aplica a objetos inanimados,
materia orgánica residuos sobre las superficies ya que no se consiguen
tratadas. Es ventajoso largos períodos de contacto
cuando se aplica sobre la piel, entre el desinfectante y el
ya que no mancha ni deja mal objeto
olor
Introducción:

En el ambiente existen diversos patógenos y contaminantes que llegan a causar

enfermedades y afecciones a los seres humanos; la limpieza es primordial tanto en
la vida diaria como en diversas disciplinas, es sumamente necesario en la
Microbiología, para evitar la contaminación de muestras y cultivos al momento de
realizar las prácticas de laboratorio; de esta manera, se obtienen resultados
efectivos.

Principalmente, se debe considerar la muerte de los microorganismos

contaminantes, esto resulta cuando se inhibe su crecimiento, es decir, no puede
volver a dividirse para formar nuevos organismos. Este control se obtiene con
diversos métodos, tales como la esterilización, destruye todas las formas de vida
microbiana; la desinfección, que reduce el número de microorganismos patógenos a
niveles donde ya no es posible que se produzca una enfermedad, aquí se utilizan
ciertos químicos como el cloro; la descontaminación, para que un objeto que llegó a
ser expuesto a microorganismos pueda volver a utilizarse sin ningún riesgo; y la
antisepsia, que es la eliminación de microorganismos de la piel u otros tejidos vivos,
manteniendo el área esteril. (Ingraham, 1999).

Las poblaciones microbianas se pueden controlar por medio de diferentes agentes

físicos, como calor, frío, radiación, filtración, desecación, elevada presión osmótica,
entre otros. Dentro de estos métodos físicos, el calor es el más simple, barato y
efectivo, ya que penetra a través del objeto y llega a matar a todos los
microorganismos. La esterilización puede realizarse mediante calor seco o calor
húmedo todos los tratamientos por calor matan ya que desnaturalizan las proteínas;
en el seco (flameado directo), se aumentan los procesos de oxidación que inactivan
las macromoléculas, se utiliza para material seco que pueda resistir la temperatura
elevada o para el material que se daña con la humedad; en el calor húmedo
(ebullición y autoclave) se rompen los enlaces que dan lugar a las estructuras
secundarias terciarias y cuaternarias de las proteínas, se utiliza para líquidos y
material que se puede estropear con altas temperaturas. (Ingraham, 1999).

La baja temperatura es un tratamiento microbiostático no esteriliza, el choque frío,

es decir, el enfriamiento repentino a 5°C, puede matar a la mayoría de las células de
un cultivo que se encuentre en crecimiento activo; la congelación mata a la mayoría
de las bacterias, pero las supervivientes permanecen vivas durante largos períodos
de tiempo en un estado congelado, esta congelación rápida es un sistema para
conservar los cultivos bacterianos. Ahora bien, existen dos formas de radiación que
matan las bacterias; la luz ultravioleta (UV) y la radiación ionizante (Rayos x y Rayos
Gamma), la luz UV mata los microorganismos porque lesiona su ADN esterilizando
las superficies solamente; mientras que la radiación ionizante, los destruye porque
hace que los átomos expulsen electrones, este método, se utiliza para esterilizar
material de plástico y superficies como de frutas y verduras. (Ingraham, 1999).
La filtración no mata los microorganismos simplemente los elimina de un material,
no es un método de esterilización tal cual, porque los virus pueden pasar a través
de los poros del filtro, solo elimina físicamente las células, es muy utilizado en el
laboratorio para tratar medios de cultivo, antibióticos y otras sustancias sensibles al
calor, también para conservar algunas bebidas. La desecación es la eliminación del
agua mediante evaporación o sublimación; este método mata muchos
microorganismos, detiene el crecimiento microbiano ya que se distorsionan las
membranas y se detienen la mayoría de las reacciones químicas; ayuda a controlar
los microorganismos porque se elimina un nutriente esencial, el agua. (Ingraham,
1999).

Además de estas técnicas, son muy utilizados los agentes químicos, como fenoles y
sus compuestos (desnaturalizan proteínas y altera la membrana plasmática),
alcoholes (desinfecta superficies), halógenos (oxida compuestos bioquímicos
esenciales), peróxido de hidrógeno y metales pesados (antisépticos de tipo medio
para la piel); agentes surfactantes como el jabón y detergente (desinfectan las
superficies) y agentes alquilantes, como formaldehído y glutaraldehído (que son
utilizados para conservar tejidos, preparar vacunas y esterilizar material quirúrgico).
(Ingraham, 1999).

Para que sea posible llevar a cabo una práctica de manera eficaz en las
instalaciones del laboratorio de Microbiología, es necesario tomar en cuenta todos
los métodos antes mencionados y su importancia para la eliminación de
microorganismos indeseados. A continuación se presentan las indicaciones para
realizar la preparación y esterilización del material utilizado en el laboratorio y los
diversos medios de cultivo; con la finalidad de permanecer en un ambiente libre de
patógenos y contaminantes que pueden llegar a perjudicar los instrumentos de
laboratorio.
Quick Protocol:
Reactivo EPP/ Lineamientos ¿Qué hacer en Disposición final
Pictogramas de seguridad caso de
accidentes?

Cloruro de No es En caso de contacto En general, los

sodio considerada con los ojos, residuos químicos se
(NaCl) una sustancia enjuagar con pueden eliminar a
peligrosa. abundante agua través de las aguas
con los párpados residuales, por el
abiertos. desagüe otra
En caso de alternativa segura.
ingestión en gran
cantidad, si hay
malestar pedir
atención médica.

Agar Papa Producto -Tras contacto con Eliminarlos según

Dextrosa clasificado la piel: Lavar con normativa vigente en
como no abundante agua instalaciones
peligroso. No -Tras contacto con autorizadas
contiene los ojos: Lavar con
sustancias abundante agua,
corrosivas o manteniendo
explosivas. abiertos los
párpados

Agar Mac Este producto -Inhalación: Eliminarlos según

conkey no contiene Trasladar a la normativa vigente en
constituyentes persona donde instalaciones
que exista aire fresco. Si autorizadas
representen un respira
riesgo dificultosamente, se
debe suministrar
oxígeno.
-Contacto con la
piel: quitar ropa
contaminada. Lavar
con abundante
agua corriente a lo
menos 15 minutos,
de preferencia en
ducha de seguridad.
-Contacto con los
ojos: Lavar con
abundante agua
corriente a lo menos
15 minutos.
-Ingestión: Lavar la
boca con agua
corriente y dar a
 beber abundante
agua.

Caldo BHI No es una -Tras inhalación: Pequeñas cantidades

(Infusión sustancia o aire fresco. pueden ser
Cerebro mezcla -Tras contacto con desechadas con la
Corazón) peligrosa la piel: aclarar con basura doméstica
abundante agua.
Eliminar ropa
contaminada.
- Tras contacto con
los ojos: aclarar con
abundante agua.
-Tras ingestión:
hacer beber agua
Bibliografía:

A. (2011). Proceso de esterilización (1.a ed.) [Libro electrónico].

https://codeinep.org/wp-content/uploads/2017/04/PE-C1.pdf

C.Perticaro, D. (2019). Esterilizacion por radiación: algunos aspectos

técnico-operacionales. Revista SAF y BI, 53-45.
http://www.ionics.com.ar/prensa/Revista-SAFyBI-num.141-IONICS-Esterilizacion-irra
diacon-aspectos-tecnico-operacionales.pdf

¿Cómo funciona un autoclave de vapor? – CertoClav. (s. f.). Certo Clav. Recuperado
7 de marzo de 2021, de
https://certoclav.com/es/como-funciona-un-autoclave-de-vapor/#:%7E:text=Las%20t
emperaturas%20y%20presiones%20m%C3%A1s,%C2%B0C%20a%2027%20Psi.C
ouso,

División de alimentos, medicamentos y cosméticos subcomisión de buenas

prácticas. (s. f.). Manual microbiología aplicada.
https://www.aam.org.ar/descarga-archivos/manual-microbiologia-aplicada.pdf

Esterilización. Procedimientos relacionados. (s. f.). En Esterilización. Procedimientos

relacionados (pp. 185-203).
https://www.mheducation.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf

Esterilización con agentes físicos. (s. f.). Esterilización con agentes físicos.
Recuperado 7 de marzo de 2021, de
https://www.ugr.es/%7Epomif/pom-bac/pb-ii/pb-ii-2-fisicos.htm

Ingraham, J. (1999a). Introduccion a la Microbiologia 1. Reverte.

Método esterilización Oxido Etileno | RSD Esterilización Industrial. (s. f.). RSD.
Recuperado 7 de marzo de 2021, de
https://www.rsd-engineering.com/es/esterilizacion-oxido-de-etileno/proceso-de-esteri
lizacion-oxido-de-etileno#:%7E:text=M%C3%A9todo%20de%20esterilizaci%C3%B3
n%20Oxido%20de%20Etileno&text=Este%20proceso%20qu%C3%ADmico%20de%
20esterilizaci%C3%B3n,que%20no%20superan%2060%C2%BA%20

Radiaciones utilizadas para la esterilización de productos sanitarios. (s. f.). El blog

de Salusplay. Recuperado 7 de marzo de 2021, de
https://www.salusplay.com/blog/radiaciones-esterilizacion-productos-sanitarios/#:%7
E:text=Radiaciones%20Ionizantes%20como%20medio%20de,transversales%20impi
diendo%20la%20multiplicaci%C3%B3n%20celular

Reagents S.A. (2006). Hojas de Datos de Seguridad. Obtenido de:

http://iio.ens.uabc.mx/hojas-seguridad/Cloruro%20de%20Sodio.pdf