practica 9

BIOLOGIA PARA CIENCIAS E INGENERIA

extracción del ADN

Preparado y presentado por:

Pérez Dávila Walter Luiggi

Lessly Yackelin Trejo Osorio
Huamán Chacón Elio
Cahuana Ancco David Alex
Tito Sotelo Saúl Javier
Vásquez Gonzales José
Depaz Doroteo Dayly Gloria
 INTRODUCCION
LA EXTRACCIÓN DEL ADN COMPRENDE DIVERSAS ETAPAS, EN FORMA SECUENCIAL
SE TIENE:
● Liberar el ADN en forma soluble por medio de la destrucción de la pared celular y
de
los sistemas membranosos de las células (membrana celular y carioteca).
● Separar los complejos de nucleoproteína por desnaturalización de la parte
proteica y
protección del ADN.
● Separación del ADN de las otras macromoléculas por solubilidad diferencial.
● Eliminación de ARN mediante reacción enzimática.
● Precipitación del ADN por insolubilidad en alcohol y bajas temperaturas.
 MATERIALES
- 250gr de fresas frescas
− 250gr de plátano de seda
_250gr de tomate
_2 vasos transparentes (plástico o vidrio).
_ Palitos de madera o de plástico (brocheta o de chupetín)
_ Tres bolsas con cierre o bolsa plástica mediana, o en su reemplazo un mortero y
pilón. Cualquiera nos permitirá triturar la muestra.
_Colador plástico o de metal o papel filtro.
_100 ml de Etanol 96° helado (colocado en el congelador durante 4 horas)
_ 1 cucharita
_1 cuchara sopera
_Solución lisis (agua destilada o embotellada sin gas, sal común y detergente líquido
de manos.
Mezcle estos componentes suavemente 10 ml de detergente líquido para (1
sobre de detergente líquido ó 2 cucharas aprox.) colocar en el vaso con agua
salada y mezcle suavemente.
Cortar en trozos muy pequeños el material biológico antes de triturarlo,
Colocar la solución de lisis en la bolsa con cerrado hermético, y mezclar bien la fruta o
vegetal triturado. Puede seguir triturando aun apretando con la cuchara por 3
minutos
Colocar el contenido de la bosa en una tasa (resistente a la temperatura) y colocar en
baño maría (entre 40°C - 60°C aprox.), NO VIERTASEL CONTENIDO DE LA TAZA EN LA
OLLA O RECIPIENTE DE BAÑO MARÍA.
Reposar unos 10 minutos. A los cinco minutos de reposo vuelve a mezclar con ayuda
de una cuchara
Filtrar el contenido de la bolsa para separar los restos de tejido no triturado
adecuadamente en uno de los vasos de vidrio
Retirar del congelador o freezer el alcohol 96°. Verter suave y lentamente el alcohol
helado por la pared del vaso, aproximadamente 3 volúmenes con respecto al
volumen del lisado. NO MEZCLAR o AGITAR, observe en la interface la formación de
fibras finas de coloración blanquecina, estas son las fibras de ADN
dejamos unos minutos para observar que las fibras de coloración
blanquesina esten en la superficie del vaso
Con ayuda de un palito largo coloque sobre la capa media y gire suavemente
extrayendo las fibras de ADN.