EXTRACCIÓN DE ADN

➢ OBJETIVO
a) Familiarizarse con las distintas etapas del proceso de extracción del
ADN.
b) Identificar y caracterizar los fragmentos de ADN amplificados y
separados.
➢ INTRODUCCIÓN
La extracción de ADN desde una célula requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar, se debe romper la
pared celular (en caso de que la presenten), luego la membrana plasmática, para finalmente acceder al núcleo
celular. A continuación, también se debe fragmentar la membrana nuclear para liberar al ADN, protegerlo de
enzimas que puedan degradarlo, y aislarlo por precipitación en alcohol. En nuestro trabajo práctico de laboratorio,
la extracción de ADN comenzará por lisar mecánicamente la pared de las células vegetales mediante el uso de
una licuadora, posteriormente se agregará un detergente que romperá a la membrana celular y nuclear, liberando
el contenido molecular hacia el agua, en ese momento, el agua tendrá disuelto ADN y todo un surtido de restos
moleculares tales como: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. El agregado de
los iones salinos (NaCl) será atraído por las cargas negativas del ADN, permitiendo una mejor disolución de esta
macromolécula. Las proteínas asociadas al ADN, como también aquellas que puedan degradarlo serán destruidas
por proteasas presentes en el jugo de kiwi. Sólo queda extraer el ADN de esa mezcla acuosa para lo cual se
utilizará alcohol. NOTA: ANEXAR Y/O MODIFICAR INFORMACION

➢ MATERIALES PARA REALIZAR LA EXTRACCIÓN CASERA DE ADN

•Material vegetal (preferiblemente fresas, kiwi o plátanos, etc.), muestra saliva.

•Mortero, batidora o licuadora (algo que os sirva para triturar la fruta).
•Cuchillo (para cortar la fruta en trozos).
•Gasa o algodón (si no tienen a la mano pueden usar servilletas de cocina).
•Taza para medir (pueden usar una botella de 500 ml, también pueden utilizar un recipiente graduado o con
medición).
•Frascos pequeños (vasos de cristal transparentes).
•Agua destilada o agua mineral (si no agua purificada).
•Detergente lavaplatos tipo líquido.
•Sal de cocina (mejor sal fina porque se disuelve mejor).
•Papel de filtro y colador.
•Etanol (alcohol para desinfectar heridas si está frío mejor) (se puede dejar la noche
anterior en el congelador. No se congelará, opcional la temperatura)

➢ PROCEDIMIENTO

MUESTRA 1:

Para realizar el aislamiento del ADN sigue los siguientes

pasos:

Paso 1: preparación de solución salina-jabonosa Preparamos

una solución salina-jabonosa compuesta con 100 ml de agua
(una quinta parte de la botella de 500ml), 10 ml de detergente
lavaplatos (1 cucharada) y 13 g de NaCl o sal de cocina (una
cucharada). (En algún vídeo que os muestro usan también
bicarbonato) Lo que haremos será añadir en un vaso estos
componentes y mezclar. No conviene agitar bruscamente para
no hacer espuma con el jabón.

Paso 2: preparación de las frutas

Pelamos y cortamos en cubos pequeños, luego lo trituramos en un mortero o batidora.

Paso 3: adición de la solución de sal y detergente

(solución de lisis o rotura) a la fruta En un vaso o mortero
con la fruta triturada vertemos la solución salina-jabonosa
(la que preparamos en el vaso 1) y continuamos el
proceso de romper las frutas. Si lo hacemos en un mortero
seguimos triturando. Si usamos la batidora seguimos
batiendo, pero no mucho más tiempo para que no se haga
demasiada espuma. Podemos sencillamente mezclar con
una cuchara y dejar 5 minutos para que las células se
rompan.

Paso 4: separación del material sólido, proteínas y lípidos Pasamos por un colador para retirar el grueso de la
“sopa de fruta” y luego, a través de la gasa o algodón, hasta obtener 50 ml (equivalente a un volumen de los vasos
usados para “chupitos” de licor) y lo pasamos a un vaso limpio. El jugo de fruta salado-jabonoso se cuela y se
filtra para quitarle los sólidos, proteínas y lípidos a la solución acuosa del ADN.

Paso 5: precipitación del ADN por acción del alcohol Sobre el jugo de fruta
colado, vertemos lentamente por las paredes del tubo de ensayo alcohol
frío (100-150 ml). Dejamos reposar unos minutos. Debe aparecer una capa
blanquecina gelatinosa. Si introducimos una varilla de vidrio o un palito
de madera, con movimientos circulares podremos recuperar el ADN
enrollado en la varilla. El resultado pude ser algo como éste:
MUESTRA 2

1. En uno de los vasos se realiza una disolución saturada de sal en agua. Esto quiere decir que se añadirá sal
mientras siga disolviéndose y no se precipite al fondo del vaso. (A)
2. En otro vaso se mezclan un 70% de agua y un 30% de detergente lavavajillas. (B)
3. En el vaso restante se vierte un poco de agua, aproximadamente un tercio del contenido del vaso. Esta agua se
utilizará para enjuagarse la boca durante un minuto, como mínimo.

4. Después de enjuagar se vierte el agua de nuevo en el vaso.

5. A continuación, se añaden dos cucharadas de la disolución saturada (A) y se agita.

6. Se añade una cucharada de agua con jabón (B) y se agita muy bien.
7. A partir de este momento no se puede mover el vaso para nada.

8. Añadir un par de cucharadas de alcohol al vaso.

9. A partir de este momento comienzan a aparecer dos fases en el líquido:
• Una fase turbia en el fondo, con la saliva.

• Una fase transparente en la superficie, con el alcohol. Dentro de ésta se encuentran unas estructuras, filamentos,
… de color blanco. ¡Eso es tu ADN!
Durante el enjuague el agua ha recogido las células que se desprenden de las encías, las paredes de la boca, la lengua,
etc. Después, al añadir el agua con sal y el jabón, se ha provocado un choque osmótico a las células; el jabón ha
desestabilizado las membranas y todo el contenido celular está vertido en el vaso.

➢ OBSERVACIONES Y EVIDENCIAS
➢ CUESTIONARIO

Dibuja la estructura del ADN y ARN

¿En qué parte de la célula podemos encontrar ADN?
¿Por qué se tritura el material vegetal (plátano, fresa, pimiento, etc.)?
¿Qué función tiene el detergente?
¿Para que se utiliza la solución de sal en esta práctica?
¿Cuál es el liquido que se utiliza para que el ADN precipite? Explica porque pasa este fenómeno.

➢ CONCLUSIÓN