División de Ciencias Biológicas y de la Salud.

Departamento de Ciencias Químico-Biológicas

Laboratorio de Bioquímica II

Practica 1
“Reacción de la Catalasa”.

Carrera:
Licenciatura en Ciencias Nutricionales

Integrantes del equipo:

Félix Ojeda Luisa Nicole

Félix Ponce Paola Andrea
Gámez Gortárez Ana Sofía
Haro Herrera Aileen Silvana

Docente:

Dra. Elena Nohelí Moreno Córdova

Fecha de la práctica: 25 de agosto del 2022

 Introducción

La catalasa es una enzima que consta de 4 grupos heme y

un átomo de hierro en el centro de cada heme. En los
peroxisomas se encuentran cantidades abundantes de
catalasa ya que en estos organelos se generan grandes
cantidades de peróxido de hidrógeno como producto en
varias reacciones oxidativas.

La catalasa de igual manera, es una enzima antioxidante presente en la mayoría de

los organismos aerobios, se ha determinado la estructura cristalográfica de 9
catalasas, algunas de estás tienen subunidades pequeñas con una masa molecular
igual de 60 kDa, y otras grandes cantidades con una masa molecular de 80 kDa.

Es por ello que las catalasas pequeñas son menos resistentes a la

desnaturalización, ya que unen NADPH, tienen hemo b y se inhiben e inactivan por
sustrato, por lo contrario las catalasas grandes tienen un dominio extra en el
C-terminal que es semejante a la flavodoxina, son muy resistentes a la
desnaturalización, tienen hemo d, también presentan enlaces covalentes inusuales
cercanos al sitio activo y son resistentes a concentraciones molares de H2O2.

Por lo tanto, la reacción de la catalasa ocurre como la transferencia de 2 electrones

entre 2 moléculas de peróxido de hidrógeno, en la cual uno de ellos funciona como
donador y otro como aceptor de los electrones, esté mecanismo de reacción se lleva
a cabo en 2 pasos, el primero de ellos la catalasa se oxida mediante una molécula
de peróxido formando un intermediario que será llamado como compuesto I, esté
compuesto se caracteriza por tener un grupo ferroxilo con FeIV y un radical
catiónico de porfirina, dando como resultado una molécula de agua, donde está
después será reducida por otra molécula de peróxido.

En el hombre, la catalasa protege la hemoglobina del peróxido de hidrógeno que se

genera en los eritrocitos. También tiene un papel de protección en la inflamación, en
la prevención de mutaciones, evita el envejecimiento y cierto tipo de cáncer.
 Objetivos

❖ Observar la actividad de la catalasa mediante distintos reactivos.

❖ Comprobar la inactividad de la catalasa, normal e inhibida.
❖ Observar la concentración de la catalasa, si es pequeña o grande.
❖ Entender el uso del peróxido de hidrógeno como antioxidante en la catalasa.

Materiales y métodos

Materiales:
★ 5 tubos de ensaye 13x100
★ 1 placa de calentamiento
★ Baño María con termómetro controlado
★ 1 vaso precipitado de 250 mL
★ Pipetas graduadas (cada reactivo)

Reactivos:
★ Agua destilada
★ 1:50 de sangre anticoagulada y diluída
★ Peróxido de Hidrógeno al 3%
★ Cianuro de Sodio al 5%
★ Nitrato de Plomo al 5%

Procedimiento experimental
● Realizar un Baño María con una placa de calentamiento y un vaso de
precipitados de 250 ml con agua destilada a la mitad de su capacidad.
● Preparar una dilución 1:50 de sangre anticoagulada con agua destilada
colocando 1 mL de sangre con 49 mL de agua.
● Enumerar los 5 tubos de 13x100 para identificarlos (1-5).
● Colocar 1.5 mL de sangre diluida 1:50 al tubo número 5 y calentar al Baño
María por 5 min. Pasado el tiempo, enfriar y reservar.
● Agregar 1 mL de Peróxido de Hidrógeno al 3% a los tubos número 1, 2, 3 y 4.
● Añadir 3 gotas de Cianuro de Sodio al 5% sólo al tubo número 3, mezclar.
● Añadir 3 gotas de Citrato de Plomo al 5% sólo al tubo número 4, mezclar
● Vaciar el contenido del tubo 5 (reservado) al tubo número 2, mezclar.
● Incorporar 1.5 ml de sangre diluída 1:50 (sin calentar) a los tubos 1, 3 y 4,
mezclar bien.
● Llevar los cuatro tubos con reacción en curso al baño de agua con
temperatura controlada a 37 ° C y permitir que ocurra completamente la
reacción durante 5 min.
● Anotar observaciones y resultados.
Diagrama de Flujo
 Resultados y Discusión
Tubo # Descripción del contenido
1 1 ml de peróxido de hidrógeno
1.5 ml de sangre diluida.
2 1 ml de peróxido de hidrógeno.
3 1 ml de peróxido de hidrógeno
1.5 ml de sangre diluida
3 gotas de cianuro de sodio.
Observaciones de cada
tubo/reacción
Se activó más rápido y se elevó la
espuma y el color que se dio fue un
café oscuro esto sucede por que la
sangre contiene una enzima que
actúa como catalizador lo que
acelera la reacción.
No hubo mayor reacción y el color
que se dio fue un café muy claro y
la sustancia se quedó en la parte
de abajo.
Inhibe más que el nitrato de plomo
esto sucede por que el peróxido
provoca la perdida de oxigeno.
 4 1 ml de peróxido de hidrógeno
1.5 ml de sangre diluida
3 gotas de nitrato de plomo.

Es más uniforme la espuma, esto

sucede porque se descompone y
eso hace que se forme la espuma
blanca.

5 1.5 ml de sangre diluida.

No sucedió ninguna reacción,

solamente cambió de color que fue
el cafe.

Conclusiones

En esta práctica pudimos observar en cómo la sangre diluida reacciona con

diferentes reacciones, como las coenzimas ayudan a ser más eficiente a las
enzimas ya que la acción de las enzimas pueden unirse temporal o
permanentemente a una enzima. Las coenzimas pueden catalizar reacciones, pero
no con la misma eficacia que cuando están unidas a una enzima. Se observó cómo
en cada reacción puede ser inhibida de diferentes formas, ya sea mediante
sustancias químicas inhibidoras que afecten el funcionamiento del enzima o la
elevación de temperatura que las desactive por completo. Se pudo comprobar la
actividad de la enzima catalasa en la sangre y como funciona como antioxidante en
el cuerpo concluyendo así que es de vital importancia para el cuerpo humano
porque es el encargado de eliminar residuos químicos de productos que consumen
con frecuencia algunas personas pero que perjudican la salud.
 Cuestionario

1) ¿Cuál es la función normal de la Catalasa en el organismo humano?

Cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno siendo así que
neutraliza la toxicidad y equilibra la producción del organismo siendo también
que la de la catalasa es importante para la actividad de los riñones y el
hígado.

2) ¿Cuál fue la fuente de la enzima en la reacción de la Catalasa que realizó

en el laboratorio? La fuente de la enzima en la reacción de la catalasa fue la
muestra de sangre 1:50.

3) ¿Qué otras fuentes de la enzima podría utilizar en este experimento? La

médula ósea, la mucosa, riñón pero el hígado y la papa estando crudos que
catalizan la reacción del peróxido de hidrógeno con ayuda de la enzima
Catalasa, la cual se separan 2 componentes que son el agua y el oxígeno,
por lo cual al final se ve cómo aparece un burbujeo que representa que se
activó la reacción.

4) ¿Cuál resultó ser el inhibidor más efectivo de la participación

enzimática?¿por qué? Explique.
Al ponerlos en baño de agua, resultó que al ser hervidos ya no se presentaba
el burbujeo con eso nos dimos cuenta que ya no se presentaba el burbujeo
osease que no activó la reacción.

5) Además de los utilizados, ¿qué otros inhibidores pudieran evitar la

participación de la enzima Catalasa? Explique el efecto de algunos de
ellos. El pH es un inhibidor porque al cambiar el pH hace que la catalasa se
cambie de sustancia química ya sea muy base o muy ácida, como también el
plomo, fuerza iónica y concentración de sustrato o enzima.
 Referencias

E. (2019, 12 abril). La catalasa es una enzima producida por casi todos los
organismos vivos. Leer más. Funcion.info. https://www.funcion.info/catalasa/

Díaz, A. (s/f). LA ESTRUCTURA DE LAS CATALASAS. Uacj.mx. Recuperado

el 1 de septiembre de 2022, de
http://www3.uacj.mx/ICB/redcib/Documents/REB_DOC/2003/06/2003-2_LA20
ESTRUC_.pdf
No dice . (No dice). Coenzimas . 31 de agosto del 2022, de MERCK Sitio
web:
https://www.sigmaaldrich.com/MX/es/products/chemistry-and-biochemicals/bi
ochemicals/coenzymes
Aldave, Axel. “Enzimas, identificando a los catalizadores de las reacciones
químicas.” Explorer BioGen, 5 December 2019,
https://explorerbiogen.wordpress.com/2019/12/05/enzimas-identificando-a-los
-catalizadores-de-las-reacciones-quimicas/
Lúa, Irma Noemí, et al. “Regulación no específica de la actividad enzimática |
Manual de prácticas de laboratorio de bioquímica, 3e | AccessMedicina |
McGraw Hill Medical.” AccessMedicina,
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=1496&sectionid
=100110047