Medios y cultivo de microorganismos

1. Objetivos:
 Preparar diferentes medios de cultivo identificando los requerimientos nutricionales
para su desarrollo y con ello elaborar un protocolo para su elaboración.
 Cultivar colonias de microorganismos en los medios de cultivo y describir sus
características o morfología con el paso de los días.
 Aplicar un agente físico y químico en los medios de cultivo.
2. Marco teórico:
2.1. Medios de cultivo
El cultivo in vitro es una técnica que ha permitido la propagación de distintas especies,
pero el lento crecimiento, así como el costo de las sales minerales y del agente
gelificante (agar) empleados en los medios de cultivo, pueden limitar su aplicación. Los
medios de cultivo constituyen la herramienta fundamental en los laboratorios de
Microbiología. Desde la época de Koch hasta hoy en día se ha incrementado
enormemente el arsenal de medios de cultivo con que cuentan los microbiólogos. La
responsable directa de tal incremento de los medios de cultivo es la expansión de la
microbiología desde la medicina hacia la agricultura, la alimentación y la industria
farmacéutica. Teniendo en cuenta que los medios de cultivo seguirán jugando un papel
importante en las investigaciones microbiológicas durante el presente siglo, es
necesario tomar todas las medidas que garanticen su correcta preparación y
esterilización. Se debe controlar su calidad con el fin de comprobar si estos cumplen
con sus especificaciones y si la metodología empleada en su preparación es
satisfactoria. También decir que hay laboratorios tecnológicos, que brindad facilidades
auxiliares, destinadas a la producción de parenterales líquidos y liofilizados, que
disponen de un departamento de control de la calidad en el que se encuentra ubicado
el laboratorio de microbiología que utiliza diferentes medios de cultivo para realizar el
monitoreo ambiental de las áreas clasificadas donde se realiza la producción de los
parenterales. Los medios de cultivo, una vez preparados, deben someterse a un
programa mínimo de análisis que asegure su aceptación, lo que garantiza la validez de
los resultados de los ensayos. Asimismo los medios de cultivo, son sustancias nutritivas
líquidas, sólidas o mixtas que se utilizan en el laboratorio para el crecimiento de los
microorganismos, pudiendo ser similares a sustratos naturales, en los cuales estos
crecen normalmente. Por otro lado, para que las bacterias crezcan adecuadamente en
un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones que van desde la
temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado
correcto de acidez o alcalinidad; por otro lado los componentes básicos deben
satisfacer las mínimas exigencias nutricionales para el desarrollo microbiano y varían
según el tipo de bacteria, entre ellos está el agua, los nutrientes como fuentes de
nitrógeno, carbono y energía; y en ciertos casos, factores de crecimiento. También se
considerarán para el crecimiento, necesidades de O2 (aerobios), CO2 parcial
(microaerófilos) o total (anaerobios) y condiciones óptimas de pH y temperaturas de
incubación.
Por lo general los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas con
otros tipos de microorganismos, lo cual se da en la naturaleza, asimismo los cultivos de
estas mezclas se llaman por ello cultivos mixtos; sin embargo, el conocimiento al nivel
científico de los microorganismos se consigue mediante el estudio de cepas aisladas y
cultivadas en el laboratorio en cultivos puros o axénicos.
3. Desarrollo
3.1. Elaboración de medio de cultivo
Medio de cultivo solido casero a base de caldo de pollo como nutriente, para ello
necesitaremos los siguientes materiales (añadir que será sólido para poder identificar
con mayor facilidad los microorganismos que crezcan en ellos):
 1 mascarilla, 1 par de guantes, 1 guardapolvo.
 1 litro de agua de grifo.
 1 cubo de caldo de pollo.
 1 bolsa de colapís.
 1 mini bol de vidrio.
 2 ollas.
 3 vasos acrílicos pequeños.
 Cocina para hacer el caldo de pollo.
 1 marcador.
 1 cinta film.
 3 hisopos.
Con estos materiales se procederá a preparar los medios de cultivos:
Paso 1: Para elaborar el medio de cultivo casero, se necesita tener las epps adecuadas
que van desde ponerse una mascarilla, un par de guantes, hasta un guardapolvo para
protegernos de cualquier agente químico o físico que suceda durante la práctica.
Paso 2: Se usa una botella de agua para medir la cantidad de agua, donde 200 ml de
agua serán para el mini bol, asimismo se verterá 400 ml de agua cada olla.
Paso 3: Se calienta el agua de las dos ollas en la cocina hasta cierto punto; en la primera
olla se pondrá los vasos acrílicos para esterilizarlos durante un tiempo de 5 minutos,
mientras que en la otra olla se procederá a echar el cubo de caldo de pollo, donde se
moverá con una cuchara hasta que se disuelva.
Paso 4: En los 250 ml de agua que reservamos en el mini bol, se añadirá la bolsa de
colapís; asimismo, esta mezcla se añadirá en el caldo caliente y también se moverá con
una cuchara hasta que el colapís esté completamente disuelto, preferiblemente hasta
que empiece a hervir. Por otro lado se apagara la otra hornilla y se moverá la olla hacia
el lavadero para sacar con cuidado los vasos acrílicos que ya están esterilizados.
Paso 5: Se apagara la hornilla faltante, luego la mezcla de caldo de pollo y colapís se
verterá en los vasos acrílicos esterilizados; asimismo con la cinta film se procederá a
tapar los recipientes con cuidado.
Paso 6: Se llevara los vasos acrílicos a la nevera y reposaran ahí durante 3 horas o más
hasta que se solidifique.
Paso 7: Se sacara los vasos acrílicos de la nevera, sacando la cinta film que los mantenía
cerrados para proceder a utilizar los hisopos, donde cada hisopo será pasado por una
muestra diferente, entre las muestras que se pasa son las patas de un gato, billete de
20 soles y unas llaves.
Paso 8: Los hisopos con cada muestra serán pasados en la superficie de los medios de
cultivo, luego se volverán a sellar con la cinta film, aparte de ser rotulados con las
respectivas muestras y serán colocados en el repostero a temperatura ambiente.
4. Resultados
4.1. Evolución de los microorganismos
Luego de dejar los medios de cultivo a temperatura ambiente, microorganismos
empezaron a aparecer y esta detallado a continuación por cada día de reposo:
Día 1: Al primer día, los medios de cultivo no presentaban ninguna característica
peculiar.

Día 2: Para el segundo día, los medios de cultivo tampoco presentaban algún tipo de
crecimiento de microorganismos; por lo podemos decir que el crecimiento microbiano
estaría en la fase de latencia.

Día 3: Para el tercer día, los medios de cultivo tampoco presentaban algún tipo de
crecimiento de microorganismos por lo cual seguirían en estado de latencia.

Día 4: Para el cuarto día los medios de cultivo tampoco presentaban algún tipo de
crecimiento de microorganismos y posiblemente sea por factores como la naturaleza
del medio; por lo cual la fase de latencia aun continúa.
Día 5: En el quinto día, se empieza a apreciar ciertos puntos de diferente color, en la
muestra de las patas de gato aparecen puntos negros y en la muestra del billete
aparece un punto blanco, por lo cual podríamos decir que se está iniciando la fase de
crecimiento exponencial.

Día 6: En el sexto día los pequeños puntos evolucionaron en puntos más grandes y en
la muestra de los billetes (2da imagen) su crecimiento fue más rápido, formando una
especie de colmena.
Día 7: En el séptimo día estas colmenas de microorganismos crecieron muchísimo más,
como se ve en la primera imagen que es la muestra de las patas del gato, donde la
colmena se extendió de forma muy rápida llenando casi la mitad de la superficie y en
la muestra de los billetes creció más la colmena y apareció un punto verde.

Día 8: En el octavo día estas colmenas de microorganismos crecieron, se extendieron

un poco más por la superficie y también creció un poco su elevación, podríamos decir
que se está entrando en la fase estacionaria.

Día 9: En el noveno día estas colmenas de microorganismo crecieron, se extendieron

por toda la superficie pero el volumen empezó a disminuir, lo cual indicaría que los
nutrientes están disminuyendo y por ende daría inicio a la fase de muerte celular;
asimismo decir que en la tercera imagen que es la muestra de las llaves aparentemente
no creció nada durante los 9 días, aunque se muestras unos puntos transparentes que
podrían indicar algo.
 4.2. Morfología
Para determinar la morfología de cada medio de cultivo donde se encuentran bacterias
u hongos es necesario evaluar varias características como su coloración, tamaño,
forma, etc., de la colonia para determinar a qué grupo principal pertenecen.
Primero tenemos al medio de cultivo con la muestra de las patas de un gato y por las
características halladas podemos decir que se trata colmena de hongos.

El pigmento de esta colmena es El pigmento de esta colmena es

medio amarillento, tiene forma blanco, tiene forma irregular,
irregular, margen ondulado, margen ondulado, textura
textura escamosa, elevación escamosa, elevación
umbilicada y superficie suave. umbilicada y superficie suave.

El pigmento de esta colmena es El pigmento de esta colmena es

blanco, tiene forma irregular, blanco, tiene forma irregular,
margen ondulado, textura
margen lobulado, textura
escamosa, elevación
escamosa, elevación
umbilicada y superficie suave. umbilicada y superficie suave.

En segundo lugar tenemos al medio de cultivo con la muestra de un billete y por las
características halladas podemos decir que se trata colmena de hongos.

El pigmento de esta colmena es

El pigmento de esta colmena es
blanco, tiene forma irregular,
verde, tiene forma irregular,
margen ondulado, textura
margen rizoide, textura
escamosa, elevación elevada y
escamosa, elevación elevada y
superficie suave.
superficie rugosa suave.
 En tercer lugar tenemos al medio de cultivo con la muestra de unas llaves y aunque
no se enfoca muy bien el cultivo, con las características halladas podemos decir que
se trata colmena de bacterias.

En el caso de la apariencia de esta

colmena es traslucida ya que
aparecen unos puntos
transparentes, tiene forma
circular, margen entero, textura
lisa, elevación plana y superficie
brillante.

4.3. Aplicación de agentes químicos y físicos

Luego de determinar la morfología de cada cultivo se procederá a aplicar agentes
químicos y físicos que sirven para controlar los microorganismos, en otras palabras
estos agentes van acelerar la fase de muerte, lo cual se detallara a continuación que
sucedió con cada cultivo:
Primero tenemos el cultivo con la muestra de las patas de un gato, al cual se le aplicara
un agente químico que en este caso será el alcohol de 70 grados, es así que se aplicó
dos gotas en cada colmena donde y luego de treinta minutos se puede observar que
las zonas aplicadas están de color negro, lo cual indicaría la muerte de microorganismos
de esas zonas. Luego se aplicó más gotas en las colmenas, se esperó media hora y de
igual maneras se convirtieron de color negro, lo cual indicaría la muerte de
microorganismos de esas zonas.

Segundo tenemos el cultivo con la muestra de unas llaves, al cual se le aplicara un

agente físico que en este caso será generar temperatura alta con el acercamiento de
un foco, es así que se acerca el cultivo al foco durante 5 minutos y aparentemente se
observa que algunos puntitos se dispersaron. Luego se volvió acercar el medio de
cultivo hacia el foco durante 10 minutos y de igual manera los puntitos se dispersaron
aunque no es tan visible.
 En el tercer cultivo con la muestra de un billete no se pudo aplicar un agente físico o
químico, ya que fue desechado por accidente.
4.4. Discusión de Resultados
De acuerdo a los resultados obtenidos podemos decir que los microorganismos
pasaron por las cuatro fases, cumpliendo cada una de ellas, asimismo se cuestiona el
crecimiento del cultivo con la muestra de unas llaves, ya que no se observó con total
claridad los microorganismos, pero probablemente con un microscopio se hubiera
podido observar a estos microorganismos a mayor escala, de igual manera hubiera
observado mejor las otras muestras; por lo cual podemos decir que los implementos
de un laboratorio ayudarían a identificar mejor los microorganismos y así identificar
crecimiento de microorganismos en medios de cultivo que aparentan no tener nada.
5. Conclusiones
- Podemos concluir que la preparación del medio de cultivo fue realizado de forma
correcta ya que los microorganismo pudieron crecer y esto es debido por los nutrientes
otorgados por la el caldo de pollo, asimismo añadir que cada microorganismo necesita
de tiempo y ciertos factores ambientales o nutricionales para su crecimiento.
- Por otro lado decir que el agua es un componente fundamental para su desarrollo de
los microorganismos, donde la actividad de agua promedio es de 0.9 a 0.99. Asimismo
decir que este cultivo de pequeña magnitud tiene grandes aplicaciones, por ejemplo en
el caso de un biodigestor, nos ayuda a comprender el proceso que sufre la materia
orgánica.
6. Bibliografía

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