5.5 CINÉTICA Dra.

Sandra Luz Cabrera

ENZIMÁTICA
Hilerio
 Cinética enzimática: Definición
La cinética enzimática estudia la velocidad de las
reacciones químicas que son catalizadas por las enzimas

El estudio de la Los detalles de su

cinética y de la
dinámica química
de una enzima
permite explicar:
mecanismo catalítico,
Cómo es controlada su
actividad en la célula y
Su papel en el metabolismo,
Cómo puede ser inhibida su
actividad por fármacos o
venenos o potenciada por
otro tipo de moléculas
 Energía libre
Para comprender el funcionamiento de las enzimas es necesario considerar
dos propiedades termodinámicas de toda reacción:

1. La diferencia de energía libre (G) entre Productos y Sustratos

2. La energía requerida para iniciar la transformación del sustrato

Recordar que:
G de una reacción depende sólo de la diferencia:

G = Gp − Gs
Independientemente del mecanismo seguido por la reacción
G sólo indica si la reacción es o no posible sin considerar la
velocidad a la que se realice.
Considerando la reacción

A+B C+D

Go en Bioquímica se define a pH = 7 y se representa por Go’

En el equilibrio Go = 0 y por lo tanto la ecuación se transforma en

G = G 0
+ RT ln
C D
AB
G 0'
= − RT ln
C D
Keq =
C D
AB AB

G = − RT ln Keq
0'
G 0' = − 2.303RT log Keq

➢ La espontaneidad de una reacción depende de G y no de G0

➢ La concentración de sustratos y productos determina si la reacción es o no espontánea
 Energía libre de activación
AB

La energía de activación [Ea] es la

energía mínima que necesita un
sistema antes de poder iniciar un
Eai
determinado proceso.

Ea
A+B C+D
Eai
A y B
Las enzimas NO modifican el equilibrio, pero SI facilitan la formación
del estado de transición del sustrato.
La formación de este complejo se evidenció mediante:
1. Toda reacción catalizada por enzimas tiene una velocidad máxima
2. La cristalografía de Rayos X ha proporcionado imágenes de enzimas unidos a sustratos

• El sustrato tiene color y desaparece

• El producto tiene color y aparece
• Medir absorbancias de uno u otro
• Medir cambios de pH
• Usar indicadores de pH o de
reacciones redox
• Usar reacciones complementarias
que produzcan un cambio evidente
 ¿Cómo se mide la velocidad?
La velocidad de una reacción va estar determinada por

V = Número de moles de producto formados/seg

Si medimos absorbancias por ejemplo, la velocidad se puede representar por la diferencia de

valores/unidad de tiempo

Variables que influyen en la velocidad de una reacción enzimática

1. Concentración de enzima
2. Temperatura
3. pH
4. Concentración de sustrato
5. Efectores (Activadores e Inhibidores)
 Efecto de la Concentración de la enzima
Manteniendo [S], T, pH = constantes

Manteniendo la
concentración de sustrato
constante la velocidad de
Velocidad de Reacción
reacción es directamente
proporcional a la
concentración de la
[E] enzima
 Efecto de la temperatura
Manteniendo [S], [E], pH = constantes

La temperatura afecta a
las reacciones químicas. Las
reacciones enzimáticas no
son la excepción. Pero
debido a que las enzimas
son proteínas se presenta
una desnaturalización
térmica
 Efecto del pH
Manteniendo [S], [E], temperatura = constantes

Las enzimas presentan un

comportamiento diferente
frente a los cambios de pH
dependiendo del
comportamiento ácido-base de
la enzima y el sustrato
Estos comportamientos pueden explicarse por:
1. Una alteración de la carga neta de la proteína que
repercute en la solubilidad.

2. Alteración de la conformación de la proteína al afectar

los niveles 3º y/o 4º lo cual repercute en una mayor o
menor actividad.

3. Un efecto del pH sobre el sustrato

4. Una combinación de los efectos anteriores.

El pH óptimo de una enzima no es necesariamente idéntico al

pH de su entorno intracelular normal. Esto probablemente sea
una de las maneras de controlar la actividad enzimática.
 Efecto de la concentración de sustrato
Manteniendo [S], [E], pH = constantes
Relacionando la velocidad con las concentraciones
de sustrato, enzima y complejo enzima-sustrato
 Cinética de Michaelis-Menten
La cinética de Michaelis-Menten describe la velocidad de reacción de muchas reacciones enzimáticas.
Recibe este nombre en honor a Leonor Michaelis y Maude Menten.

Este modelo sólo es válido

cuando la concentración del
sustrato [S] es mayor que la
concentración de la enzima [E],
y para condiciones de estado
estacionario, es decir, cuando la
concentración del complejo
enzima-sustrato es constante.
Leonor Michaelis
Bioquímico, fisicoquímico y médico
alemán, conocido por su trabajo en la
cinética enzimática y concretamente por
la formulación, junto con Maude Menten,
del modelo cinético de Michaelis-Menten.
Maud Leonora
Menten

Doctora canadiense
que realizó importantes
aportes en el área de la
cinética enzimática
junto con la histología.
ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN

Vo = V max [S]
Km + [S]
Constante de Michaelis-Menten (Km)
¿Vmax?

¿KM?
Vmax

KM
La velocidad de formación del producto sería:
Cuando:

Vo= Vmax Todos los sitios activos están ocupados y no

hay moléculas de E libre.

KM= [S] Sí... ½ Vmax

KM representa la cantidad de sustrato necesaria para

fijarse a la mitad de la E disponible y producir la mitad
de la Vmax

KM representa la concentración del sustrato en una

célula
 Km de algunas enzimas
ENZIMA SUSTRATO Km (mM)
Catalasa H2O2 25.0
Hexoquinasa ATP 0.4
D-Glucosa 0.05
D-Fructosa 1.5

Anhidrasa carbónicoa HCO3- 9.0

Quimotripsina Gliciltirosinilglicina 108
N-Benzoiltirosinamida 2.5
-Galactosidasa D-Lactosa 4.0
Treonina deshidrogenasa L-Treonina 5.0
Determinación de la Km graficamente
 Significado de la constante Km

1. Constante de equilibrio de disociación del complejo ES (en condiciones de equilibrio rápido)

2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato (en condiciones de equilibrio rápido)
Valores de Km Grandes -----------Afinidad Pequeña
Valores de Km Pequeños ---------Afinidad Grande

3. Mide la función de fijación (en cond.de equilibrio rápido)

4. Es la concentración de sustrato que produce la mitad de la velocidad máxima y donde están

saturadas la mitad de las moléculas enzimáticas

5.- Este concepto, relaciona la afinidad de unión y saturación de una enzima con la especificidad de la
misma

6. Se define para una pareja enzima-substrato

7. Se mide en unidades de concentración

Transformación de los Dobles Recíprocos
(Lineweaver-Burk)

pendiente