Discusión

La turbidez del caldo tioglicolato evidencia la presencia de crecimiento bacteriano, a pesar de que C.
perfringens haya sido sometida a la lisis química de la práctica anterior, y a la centrifugación por
gradiente discontinuo. Este resultado marca la capacidad de la bacteria para formar esporas, una
característica típica del género Clostridium, que le permite su transmisión para causar infección (Li J y
col. 2015). Esta es una estrategia reproductiva y de supervivencia, y se puede comparar el resultado
obtenido con el estudio realizado por Hayakawa y col. (2003) en el que demuestran la capacidad de la
bacteria Nocardia spp. para la formación de esporas, utilizando la misma técnica de centrifugación
por gradiente de densidad. Durban E. y col. (1974) utilizaron la técnica de centrifugación por
gradientes de densidad en conjunto con agentes químicos reductores y lisozima para cambiar la
osmolaridad de las esporas de Clostridium botulinum, y de esta forma estudiar el DNA bacteriano;
este estudio podría sugerir una continuación a la práctica realizada para poder proseguir el análisis de
las esporas obtenidas a partir del lisado celular.

Referencias
Durban E, Durban E y Grecz N, 1974. Production of spore spheroplasts of Clostridium botulinum and DNA
extraction for density gradient centrifugation. Canadian Journal of Microbiology, Vol. 20, páginas 353-358.
https://doi.org/10.1139/m74-054

Hayakawa M, Yamamura H y Limura Y, 2003. Application of sucrose-gradient centrifugation for

selective isolation of Nocardia spp. from soil. Journal of Applied Microbiology, Vol 95, páginas 677-
685. https://doi.org/10.1046/j.1365-2672.2003.02025.x
Li J, Paredes-Sabja D, Sarker MR, McClane BA. 2016. Clostridium perfringens sporulation and sporulation-
associated toxin production. Microbiol Spectrum Vol. 4(3):TBS-0022-2015. doi:10.1128/microbiolspec.TBS-
0022-2015.

Conclusión
Clostridium perfringens es un bacilo gram-positivo que posee la característica de formar esporas ante
situaciones como lisis química y ante las fuerzas centrifugas de gran velocidad; esto le confiere una
gran resistencia bacteriana, lo cual promueve su transmisión.

Preguntas
¿Cuál es el fundamento del proceso de centrifugación?
La centrifugación es una técnica que utiliza la fuerza centrífuga, aquella fuerza que se aplica sobre un
cuerpo cuando éste gira alrededor de un eje; con el fin de separar y purificar una mezcla que se
encuentra en un medio líquido. La separación de las partículas en la muestra se realiza en base a su
tamaño, forma, densidad, viscosidad del medio y la velocidad del rotor.
El principio en el que se basa esta técnica es de la sedimentación: bajo la influencia de una fuerza
gravitacional (g), las sustancias presentes en la solución se separarán en base a su densidad. Las
sustancias con una densidad más alta que la del solvente en el que se encuentran se hundirán
(sedimentarán); mientras que las sustancias con una densidad más baja se quedarán en la parte
superior del tubo. El uso de la centrífuga reemplaza la fuerza gravitacional por la fuerza centrífuga, en
 la que el tubo con la solución rota alrededor de un axis fijo, aplicándosele una potente fuerza
perpendicular al axis en el que gira.

Tipos de rotores de una centrífuga

- Ángulo fijo: estos rotores mantienen los tubos en un ángulo respecto al
eje de rotación. El ángulo varía con los diferentes rotores, siendo común
entre 25° y 40°. Aunque las partículas se sedimentan a lo largo de una
trayectoria radial, pronto golpean el lado opuesto del tubo donde se
deslizan por la pared hasta el fondo. El resultado es una sedimentación
más rápida que la que puede lograrse en los rotores de columpio. Pero como el fondo del tubo no
está alineado con la dirección de la fuerza centrífuga, las partículas se acumularán en parte en el
lateral del tubo. Esto puede hacer que la recogida de un pellet poco compacto sea algo más difícil que
cuando se utiliza un rotor horizontal.

- Columpio: Los bastidores que sostienen los tubos de la

centrífuga están suspendidos de manera que les permite
oscilar hacia arriba en el plano horizontal cuando están bajo
la influencia de un campo centrífugo. De este modo, cuando
la centrífuga está en funcionamiento, las partículas se
sedimentan a lo largo de una trayectoria radial sin
obstáculos, alejándose del centro de rotación, y se depositan uniformemente en el fondo del tubo.

¿Qué significa el término gravedad (g) en una centrifugación?

La fuerza g o fuerza centrífuga relativa (RCF) es la cantidad de aceleración que se aplica a la muestra.
Depende de las revoluciones por minuto (RPM) y del radio del rotor, y es relativa a la fuerza de la
gravedad terrestre.

Componentes celulares que se pueden separar por gradientes de densidad

En células eucariotas los componentes celulares que se separan son los organelos, tales como el
núcleo, mitocondria, lisosomas, RE, vacuolas, etc. En células procariotas se separa el nucleoide y
ribosomas.

Referencias (preguntas)
Aryal S, 2021. Centrifugation – Principles, types and applications. Microbe notes.
https://microbenotes.com/centrifugation-principle-types-and-applications/