UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICA

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGA

CITOGENTICA

PREPARACIN DE LMINAS DE MERISTEMO APICAL DE Vicia faba (Haba)

ALUMNOS:
- Tello Zumaran, Lucero
PROFESORA:
- Blga. Maritza San Martn

2016

PREPARACIN DE LMINAS DE MERISTEMO APICAL DE Vicia faba (Haba)

I.

INTRODUCCIN

El estudio citolgico del ciclo celular se bas tradicionalmente en el anlisis de la mitosis, ya que
ste es el momento en que se producen alteraciones morfolgicas de las clulas fcilmente
apreciables.
Las habas (Vicia faba), entre otras especies de plantas, han sido muy utilizadas para observar
clulas en mitosis; debido a que, es una organismo que permite obtener meristemos radiculares en
corto tiempo, pueden ser mantenidas en espacios pequeos a bajo costo y son fciles de trabajar
para la observacin de clulas en divisin, posee poco y grandes cromosomas permitiendo observar
sus caractersticas.
La prctica tuvo como objetivo observar clulas en divisin mittica en lminas de races de Vicia
faba diferenciando la construccin secundaria en clulas en anafase.
II.
MARCO TERICO
Vicia faba
Haba (2n = 12 cromosomas) es una especie anual. El sistema radical presenta una raz primaria
pivotante, muy desarrollada y bastante profundizadora, pues puede alcanzar hasta 1,5 m, y
numerosas races secundarias y terciarias con ndulos que fijan entre 50 a 100 u de nitrgeno por
hectrea, que son aprovechadas en un 80% por la misma planta.
Esta especie ha demostrado ser verstil y eficiente, las clulas meristemticas de la raz de haba
(Vicia faba), debido a que es de fcil manejo, de mantenimiento relativamente econmico y que
tienen pocos cromosomas, los cuales tienen buen tamao para realizar un estudio citolgico, se
distinguen con claridad a un aumento de 40X en su anlisis al microscpico; otra de las ventajas
para su estudio es que se conocen perfectamente los tiempos de cada una de las etapas de su ciclo
celular, siendo la duracin total de stas 19 h y 30 min a 19C; adems que en los meristemos
apicales hay una gran cantidad de clulas indiferenciadas en divisin, lo que favorece los estudios
de mitosis y citotoxicidad.

Profase

Es la primera fase de la mitosis, se distingue porque aparecen los cromosomas como formas
distinguibles, al hacerse visibles, stos adoptan una apariencia de doble filamento denominada
cromtidas, mismas que se mantienen juntas en una regin llamada centrmero, y es en este
momento cuando desaparecen los nuclolos.
La membrana nuclear se vuelve invisible (ya no se puede observar con el microscopio ptico). Los
nuclolos desaparecen pues se dispersan en el citoplasma. Se inicia la formacin del huso
acromtico. Los cromosomas se ven como largos filamentos dobles que, conforme avanza la
profase, se van acortando y engrosando.
En lo que se conoce como profase tarda termina de formarse el huso, que es donde se fijan los
cromosomas, por medio del centrmero. Los cromosomas comienzan a trasladarse al ecuador de la
clula, es decir, al centro.

Figura 1. Profase.

Figura 2. Micrografa Tcnica Meristemo primario de haba (Vicia faba). Profase.

Metafase

En esta fase los cromosomas se desplazan al plano ecuatorial de la clula (parte media). Cada
cromosoma se fija a las fibras del huso por el centrmero.
Los cromosomas alineados en la regin ecuatorial de la clula, muestran la mxima condensacin y
acortamiento.

En la metafase tarda los centrmeros y la cromtidas hermanas comienzan a separarse para

emigrar hacia los polos celulares.

Figura 3. Metafase.

Figura 4. Micrografa tcnica meristemo primario de Vicia faba. Hematoxilina eosina. Metafase.

Anafase

Esta fase comienza cuando los centrmeros duplicados de cada par de las cromtidas hermanas se
separan, movindose cada una a un polo de la clula debido a la accin del huso. Al final de sta, un
juego completo de cromosomas se agrupa en cada polo de la clula. Los cromosomas se ven en el
microscopio en forma de< > y los nuevos cromosomas hermanos se van moviendo a los polos
opuestos de la clula.

Figura 5. Anafase.

Figura 6. La imagen muestra dos diferentes clulas en Anafases: las cromtidas hermanas se separan y cada
una se desplaza hacia los polos de las clulas.

Figura 7. Fragmento cromosmico observable en una anafase de haba.

Telofase

Inicia cuando los cromosomas estn en los polos celulares. Nuevamente los cromosomas se alargan
y se descomprimen. Se forma el nuclolo. Desaparece el huso mittico y alrededor de cada grupo de
cromosomas se inicia la formacin de una nueva clula hija.

Figura 8. Telofase.

Figura 9. En la imagen se ve el final de la Telofase y el principio de la citocinesis. Se aprecian las dos nuevas
clulas separadas por su nueva membrana y pared celular.

Citocinesis

Fase de culminacin de la mitosis. Es la divisin del citoplasma con sus respectivos organelos
celulares para formar dos clulas hijas separadas. Con la citocinesis y la telofase termina el proceso
de la mitosis.
Ahora cada clula hija, nueva, inicia su ciclo celular en G1 (primera fase del ciclo celular).

Figura 10. Citocinesis.

Figura 11. Citocinesis en clula animal y vegetal. Una diferencia importante es que al formarse las dos
nuevas clulas hijas, en el caso de la clula animal se restablece la membrana celular. En el caso de la clula
vegetal tambin se forma, adems, la pared celular.

III.

MATERIALES Y MTODO
Materiales
Lminas portaobjeto y cubreobjetos
Papel toalla
Frasco koplin
Estiletes
Hoja de bistur
HCl al 50%
Carnoy
cido actico
Orcena
Agua destilada
Microscopio
Habas
Algodn
Mtodo
Se coloc en una placa Petri 4 habas en algodn hmedo y en oscuridad por 4 das a
temperatura ambiente. Al quinto da por la maana, se cort las races a 1 cm. e
inmediatamente se colocaron en un frasco de koplin que contena solucin Carnoy. Este
frasco se guard en la refrigeradora.
Se coloc las races en una placa Petri con agua destilada por 5 minutos con el fin de
remover el fijador. Repetir el paso tres veces renovando el agua destilada. Retirar las races
en otra placa Petri que contenga HCl al 50 % y esperar 15 minutos. Se elimin el cido
realizando 3 lavadas en agua destilada de 5 minutos cada uno.
En una lmina portaobjetos completamente seca y limpia se agreg una gota de cido
actico al 45% dentro de la cual se coloc una de las races. Con una hoja de bistur limpia,
se cort a 2mm de distancia del pice de la raz y se elimin el resto. Con un par de estiletes
finos se disgreg todo el tejido en tiras finas, eliminando en lo posible tejido de la caliptra o
cofia. Se mantuvo el tejido embebido en el cido, sin dejar que se seque.
Se coloc una gota de orcena lacto actica y dejar entre3 minutos, evitando que se seque.
Se coloc encima de la muestra una lmina portaobjetos completamente limpia evitando la
formacin de burbujas y realizar el squash, para lo cual primero hacer presin de forma
vertical directamente sobre los puntos donde se encuentra el tejido, utilizando el borrador de
un lpiz.
Luego se coloc la lmina dentro de un pliegue de papel toalla y presion con el dedo pulgar
de manera firme pero sin romper la lmina, evitando hacer algn tipo de desplazamiento
lateral de la laminilla.
Se observ al microscopio, localizando primero la posicin del tejido meristemtico. Luego
con el objetivo 40X, se identificaron las clulas segn las diferentes fases del ciclo en la que
se encuentran (Interfase, profase, metafase, anafase, telofase); ubicando la Anafase y
observando la constriccin secundaria.

IV.

RESULTADOS

Se observaron clulas en interfase y en mitosis: profase, metafase, anafase y telofase. Se encontr

mayor nmero de clulas en profase (Tabla 1).
Se pudo observar la constriccin secundaria en clulas de anafase (Figura 12).
Tabla 1. Nmero de clulas por fase encontradas en un total de 45 clulas contabilizadas.

Fase

Interfase

Profase

Metafase

Anafase

Telofase

31

36

C
B

Figura 12. Clulas de Vicia faba. Aumento 400 X: a. Interfase, b. Profase y c. Anafase. (Observndose la
constriccin secundaria).

Figura 13. Clulas de Vicia faba. Aumento 400 X: a. Interfase, b. Profase y c. Anafase (Observndose la
constriccin secundaria).

Figura 14. Clulas de Vicia faba. Aumento 400 X: a. Anafase (constriccin secundaria)

V.

DISCUSIONES
La constriccin secundaria es la regin del cromosoma ubicado en los extremos de
losbrazos que en algunos cromosomas corresponde a la regin organizacin del
nuclolo, donde se sitan los genes que se transcriben como ARN. Se observa
principalmente en clulas en anafase como se pudo confirmar en la prctica. (Belmond,
2002).
La fase ms vista en clulas de mitosis fue de profase, siendo mayor al nmero de
interfase esto concuerda con Garca, et al. (2006) que observ tambin mayor nmero
de clulas en profase (20) en habas evaluando su grupo control; y estas a su vez fueron
mayor a las clulas en interfase (15); tambin encontramos 4 anafase en 71 clulas
examinadas.

VI.
CONCLUSIONES
- La constriccin secundaria es observada en clulas de anafase.
- Profase es la fase de la mitosis con mayor nmero de clulas encontradas en habas.

VII.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
- BELMOND A. (2002). Mitotic chromosome scaffold structure: new approaches to an old
controversy. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 99:15855 -15857.
- EVANS, H. & SCOTT, D. (1964). Influence of DNA synthesis on the production of cromatid
aberrations by X-rays and maleic hydrazide in Vicia faba, Genetics, 49, p. 17-38.
- GARCIA, F. (2006). Daos txicos en tejidos vegetales, producidos por aguas contaminadas
con arsnico en Zimapn, Hidalgo, Mxico. En: http://www.scielo.br
- VALENCIA Q. (1992). Efecto de los Insecticidas carbamicos Metomil y Oxamil sobre los
cromosomas de las clulas meristematicas de la raz de Vicia faba. UNAM. Mxico.