Protocolo Preparación de Soluciones

Creado por: Yohan Sebastian Mejia Florez Versión: 01

Fecha de creación: Noviembre 03 de 2021 Última modificación:

Índice
A. Propósito (pág. 1)
B. Raciocinio (pág. 1)
C. Materiales (pág. 1)
D. Reactivos (pág. 1)
E. Equipos (pág. 2)
F. Descripción de actividades (pág. 2)
G. Anexos: Cálculos desarrollados (pág. 3)

A. Propósito
Preparar soluciones de diferentes sustancias a distintas concentraciones.

B. Raciocinio
En este protocolo se desea describir el procedimiento para preparar soluciones de NaOH,
NaCl y HCl a diferentes concentraciones.

C. Materiales
- Guantes
- Beakers de 100mL y 250mL
- Probeta de 50mL
- Espátula
- Papel filtro
- Gradillas para viales de 1mL
- Viales de 1mL
- Cinta enmascarar
- Marcadores
- Micropipetas
- Puntas de micropipetas azules y amarillas
- Agitador magnético
- Tubos de propileno de 50mL
- Frasco con agua destilada
D. Reactivos
- NaOH al 0.1M
- NaCl
- Agua destilada
- Oligonucleótidos forward y reverse
E. Equipos
- Balanza analítica
- Agitador magnético
- Cabina de extracción de gases

F. Descripción de actividades
- Lavar manos, secar y luego ponerse guantes
- Limpiar área de trabajo
- Rotular todos los tubos de propileno y viales a usar, con cinta de enmascarar y marcador,
anotando concentración y nombre del solvente empleado. .
1. Solución de NaOH al 0.1M
1.1. Tomar Beakers de 50mL y 250mL limpios y purgar con agua destilada, al igual
que bureta de 50mL.
1.2. Adicionar cerca de 100mL en beaker de 250mL, será usado en este y las otras
preparaciones.
1.3. Tomar beaker de 50mL, llevarlo a balanza analítica encendida y tararlo.
1.4. Luego pesar 0.1600 g de NaOH, agregando lentamente con espátula dentro del
beaker de 50mL.
1.5. En cámara de extracción, adicionar aproximadamente 20mL de agua destilada.
1.6. Dejar caer por las paredes del beaker un imán y luego llevar al agitador
magnético.
1.7. Agitar hasta que no se observe la presencia de cristales.
1.8. Después, regresar a lugar de trabajo y verter contenido del beaker en la bureta,
previamente purgada.
1.9. Aforar bureta hasta alcanzar el menisco de 40mL, con agua destilada.
1.10. En tubo de propileno de 50mL, previamente rotulado, verter contenido de bureta
y almacenar.
2. Solución de NaCl al 0.7M
2.1. Purgar beaker de 50mL, limpio, con agua destilada.
2.2. Luego llevar a balanza analítica y tarar con dicho beaker.
2.3. Pesar 3.0700 g de NaCl .
2.4. Adicionar aproximadamente 20mL de agua destilada.
2.5. Llevar esto a la bureta, previamente purgada.
2.6. Completar volumen hasta 75mL con agua destilada
2.7. Tomar 50mL y almacenar en tubo de propileno, previamente marcado.
3. Solución de NaCl a 100000ppm
3.1. Tomar papel filtro, llevarlo a balanza analítica y tarar.
3.2. Pesar 0.100g de NaCl.
3.3. Tomar vial de 1mL, purgar y luego adicionar 200µL.
3.4. Tapar y agitar muy bien, hasta que la sal se disuelva.
3.5. Adicionar el NaCl al vial y completar volumen con 800µL.
 4. Solución madre NaCl a 50ppm
4.1. En beaker de 50mL, previamente limpio y purgado con agua destilado, agregar
aproximadamente 20mL de agua destilada.
4.2. Adicionar 20µL de solución de NaCl al 100000ppm (la solución preparada
anteriormente), homogenizar insertando la punta de una micropipeta y tomando una
pequeña cantidad del líquido y soltándola nuevamente en la misma solución, repetir
varias veces, para homogenizar completamente.
4.3. Transferir a bureta de 50mL, previamente limpia y purgada con agua destilada.
4.4. Completar con agua destilada hasta 40mL, luego transferir a beaker de 50mL.

5. Disoluciones seriadas 10ppm, 1ppm, 0.1ppm, 0.01ppm y 0.001ppm

5.1. Rotular cada uno de los viales, con cada una de las concentraciones que se desean
preparar.
5.2. Con la micropipeta de 1000µL, adicionar 800µL de agua destilada.
5.3. Luego, con la micropipeta de 200µL, agregar este mismo de volumen de solución
madre, en el vial de 10ppm, por último agitar bien y dejar en gradilla de viales.
5.4. En el vial de 1ppm, agregar 100µL de la solución previamente preparada y luego
agregar 100µL de agua destilada, agitar bien y dejar en gradilla.
5.5. Repetir el paso anterior con el vial de 0.1ppm, pero esta vez usando la solución
preparada anteriormente, luego hacer lo mismo para los viales restante, siempre
usando la solución preparada previamente, agitar bien.

6. Oligonucleótidos al 100µM
6.1. Rotular viales con los oligonucleótidos forward y reverse.
6.2. Agregar 23nmol, en vial de forward y 27 en el reverse.
6.3. Para el vial de forward agregar 230µL de solución y para el vial reverse, 270µL
de solución.
6.4. Agitar bien y almacenar.

G. Anexos: Cálculos realizados

.
1. x = 0.04L ∗ ∗
x𝐠 = 1.600g NaOH
. .
2. y = 0.075L ∗ ∗
y = 3.0681g NaCl
3. z ∗ ∗ ∗
z = 0.1g NaCl
4. 𝑪𝒊 𝑽𝒊 = 𝑪𝒇 𝑽𝒇
100000ppm ∗ V = 50ppm ∗ 40mL
V = ∗ 40mL
V = 0.020mL = 20𝜇L
5.

6. X( ) = 23nmol ∗ ∗

X( ) = 230μL

Y( ) = 27nmol ∗ ∗

Y( ) = 270μL

Luego: 100𝜇M = 100 * *

100𝜇M = 100