Frotis de sangre

periférica
 FUNDAMENTO
El examen microscópico de una extensión de sangre
periférica, nos permite obtener una valiosa información
acerca de los elementos formes de la sangre, muchos de los
cuales no puede ser evaluados mediante las mediciones
cuantitativas realizadas por otros métodos. En general, en un
frotis podemos evaluar lo siguiente:
a) Morfología eritrocitaria. b) Concentración y distribución de hemoglobina.

c) Distribución de los eritrocitos. d) Inclusiones y artificios de los eritrocitos.

e) Morfología y recuento f) Inclusiones y artificios de los
diferencial de los leucocitos. leucocitos.

g) Morfología y apreciación
cualitativa del número de h) Artificios y agrupación de plaquetas.
plaquetas.
 Por lo anterior, se considera que la preparación de un
extendido de sangre periférica es una técnica fundamental en
hematología.
Todo profesional del laboratorio clínico debe ser capaz de
realizar preparaciones excelentes sin conformarse con
resultados mediocres, ya que para observar adecuadamente
la morfología sanguínea se necesita tener preparaciones de
calidad.
 GENERALIDADES
El examen morfológico de las células sanguíneas con el microscopio de
luz requiere la preparación de un frotis de sangre, bien teñido, y la
precisión de la evaluación morfológica depende, en parte de su
calidad.
• En la preparación de un frotis de sangre
se coloca una gota de sangre venosa o
capilar con anticoagulante EDTA, en un
extremo de un portaobjetos de vidrio.
• Un segundo portaobjetos para
extenderla, que es más estrecho que el
portaobjetos de vidrio del microscopio,
se coloca sobre la gota de sangre y se
permite que ésta se propague en toda su
anchura; debe hacer un ángulo de 45º
entre el portaobjetos de esparcimiento y
el del microscopio.
• En un movimiento controlado, se tira de
la sangre a lo largo del portaobjetos de
vidrio del microscopio y el frotis de
sangre se seca de inmediato mediante el
agitado suave del portaobjetos.
Un frotis de sangre óptimo tiene las siguientes características:
Longitud mínima de 2.5 cm
Transición gradual de un frotis grueso a uno delgado
Borde cuadrado o recto
Márgenes lisos y continuos
Márgenes más estrechos que el portaobjetos del microscopio
Ausencia de estrías, ondas o interrupciones
FIGURA
Frotis de sangre periférica inaceptables.
A. Borde astillado o áspero en el portaobjetos extensor.
B. Vacilación en el movimiento hacia adelante del
portaobjetos extensor.
C. Extensor que se empuja de modo demasiado rápido.
D. Gota de sangre demasiado pequeña.
E. La gota de sangre no pudo diseminarse por todo el
ancho del portaobjetos.
F. Suciedad o grasa sobre el portaobjetos; también
puede deberse al aumento de lípidos en la muestra
de sangre.
G. Presión irregular sobre el portaobjetos extensor
H. Retraso en la realización del frotis; la gota de sangre
comenzó a secarse.
(De Rodak BF, Fritsma GA, Keohane EM: Hematology:
clinical principles and applications, ed 4, St. Louis, 2012,
Saunders.)
 La presencia de ciertos trastornos fisiológicos, como anemia,
policitemia, mieloma múltiple y enfermedad de aglutininas frías da
lugar a frotis los cuales son menos óptimos.

El espesor o delgadez del frotis de sangre puede ser regulado al ajustar

la cantidad de sangre de la gota, al modificar la velocidad con la cual se
esparce, o al cambiar el ángulo en el cual se coloca el portaobjetos de
esparcimiento.
• El examen minucioso de un frotis de sangre periférica se puede usar:
• Como instrumento de detección para identificar una enfermedad.
• Para diagnóstico definitivo de ciertos trastornos hemáticos y no hemáticos.
• Para vigilar la respuesta del paciente al tratamiento.
 la observación
de la presencia
de células
anormales

un conteo
distribución
diferencial de
anormal de
100 células de
eritrocitos
leucocitos

El examen
del frotis
de sangre
periférica

un estimado morfología de
de plaquetas los eritrocitos y
totales las plaquetas

un estimado
de los
leucocitos
totales
 distribución regular de leucocitos y
observar células inmaduras o anormales

agrupamientos de plaquetas y patrones

Con el aumento 100 x se rastrea el frotis de
sangre periférica
anormales
agrupamiento de eritrocitos y patrones
anormales de distribución de los
eritrocitos como pilas de monedas o
aglutinación

• Contar el número de leucocitos en cada cinco

campos visuales.
estimado de leucocitos
• Determinar el número promedio de leucocitos.
• Multiplicar ese número por 200.
 • Contar el número de éstas en 5 a 10 campos visuales.
• Determinar su número promedio dentro de estos campos.
un estimado de las plaquetas
• Multiplicar este número por el factor de conversión
apropiado.

observación cuidadosa de su tamaño,

forma, color y presencia de
inclusiones

morfología del eritrocito

Los eritrocitos normales se describen

como normocitos y normocrómicos.

contar 100 células por preparación con el uso

de un método de seguimiento de muralla.

conteo diferencial de los leucocitos Cada leucocito encontrado debe identificarse

y colocarse en la categoría apropiada.
Las células distorsionadas solo se incluyen si
son claramente identificables.
 Alteraciones Alteraciones
morfológicas anticoagulantes
• Trastorno hemático • Vacuolización
subyacente. citoplásmica.
• Exceso de • Desgranulación.
anticoagulante. • Cariorrexis.
• Falta de preparación de • Cariólisis.
los frotis de sangre • Cambios en la forma
dentro de las horas nuclear.
posteriores a la
colección.
 En un frotis de sangre teñido por Romanowsky……….

El área de palidez se produce por la

disco 7 um con área central de palidez que está cercanía entre las dos porciones
rodeada por un reborde de hemoglobina teñido cóncavas de la membrana cuando la
de rosa célula se aplana sobre un portaobjetos
de vidrio.

Esta área no se aprecia en

los eritrocitos suspendidos
en solución salina

El examen cuidadoso de un frotis de sangre teñido revelará estas aberraciones morfológicas: Poiquilocitosis,
anisocitosis, equinocitos, estomatocitos, esferocitos, esquistocitos, leptocitos, codocitos, dacriocitos, drepanocitos,
eliptocitos, queratocitos, anisocitos, macrocitos, microcitos, células hipocráticas, eritrocitos policromatófílicos,
inclusiones de los eritrocitos.
 Tinciones de sangre

los colorantes de anilina

los básicos, como el azul de metileno los ácidos como la eosina

Los núcleos y algunas otras estructuras Ciertas estructuras sólo toman los
de la sangre se tiñen con los básicos, colorantes ácidos y se llaman acidófilas
por lo que se denominan basófilos o eosinófilas

Otras estructuras se tiñen por una

combinación de ambos y se
denominan neutrófilas

El azul de metileno policromo y la eosina son las tinciones derivadas del método de
Romanowsky original.
Tiñen diferencialmente la mayoría de las estructuras normales y anormales de la sangre.
 • consisten en azul de metileno y sus
análogos producidos por:
Componentes básicos de
• Desmetilación oxidativa: azur B y
los son las tiacinas
azur A.
• Dimetiltionina simétrica: azur C.

Colorantes de tipo Romanowsky

Componentes
deriva de un esqueleto de xanteno
acídicos son eosinas

Muchas tinciones de Romanowsky se disuelven en alcohol metílico y combinan la fijación con la tinción.
Entre los método más conocidos se encuentran los de Giemsa y Wright.
• EQUIPO: Ninguno.
• MATERIAL:
• a) Biológico. Sangre venosa obtenida con EDTA.
• b) De laboratorio:
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
TECNICAS PARA LA REALIZACION
DE FROTIS SANGUINEOS
 TÉCNICA PARA EXTENDIDOS SANGUÍNEOS EN
CUBREOBJETOS
Esta técnica se prefiere para obtener la mejor definición y distribución celular posible.
• Colocar en el centro del cubreobjetos una gota de sangre.
• Colocar un segundo cubreobjetos sobre el primero, en una posición rotada de 90° respecto al
primero, de tal modo que los ángulos puedan ser fácilmente cogidos entre los dedos pulgar e
índice de la mano libre.
• Los dos cubreobjetos estarán formando una “estrella de ocho picos”.
• La sangre se extenderá de inmediato como una delgada película uniforme; enseguida que ha
dejado de extenderse, los cubreobjetos se separan suavemente por un movimiento de
deslizamiento en el mismo plano, sin separar las superficies.
• Si no se eleva ningún cubreobjetos, aparecerá una fina y uniforme extensión de sangre en cada
uno de ellos. El grosor de la extensión dependerá únicamente de la cantidad de sangre aplicada,
por lo que es muy importante calcularla bien.
• Secar de inmediato soplando vigorosamente con un pedazo de cartón o una secadora eléctrica.
• VENTAJAS:
• 1. Se obtiene una distribución celular uniforme.
• 2. Los frotis tienen gran definición.
• 3. Se pueden montar 2 ó 3 en un portaobjetos, para su lectura.

• DESVENTAJAS:
• 1. Son difíciles de rotular.
• 2. Es difícil manipularlos.
• 3. Se rompen con facilidad.
• 4. Su conservación es problemática.
• 5. El proceso de tinción es difícil.
 FROTIS TRANSVERSAL
Son similares a la anterior, con la ventaja de que la distribución de las células es homogénea.
• Colocar una gota de sangre de 2 a 3 mm de diámetro en la parte media y cerca del extremo largo de un
portaobjetos.
• Mantenerlo en posición horizontal sujetándolo con los dedos índice y pulgar de manera que se forme un
“puente” con estos dedos sobre el portaobjetos.
• Se coloca un segundo portaobjetos (extensor) haciendo un ángulo de 30° con el primero y con su eje mayor
perpendicular al portaobjetos horizontal, quedando la gota de sangre debajo de él y apoyándolo
firmemente. Se desliza el extensor hasta hacer contacto con la sangre, la que difunde uniformemente en la
superficie de contacto.
• El portaobjetos extensor se mueve en dirección opuesta hasta llegar al extremo contrario a aquel en el que
se depositó la gota de sangre. En este momento, se deja descansar sobre el horizontal formando los dos
portaobjetos una T.
• Soltar unos segundos el extensor para que la sangre se difunda uniformemente, entre ambas superficies, en
una capa fina.
• Cuando la sangre termine de extenderse, se separan los portaobjetos mediante un rápido movimiento,
deslizándolos en el mismo plano horizontal y teniendo cuidado de no elevar ni separar ninguno de los
portaobjetos.
• VENTAJAS:
• Fáciles de manipular, teñir y rotular.
• Su conservación es sencilla.
• Se obtiene una excelente distribución de eritrocitos, leucocitos y plaquetas.

• DESVENTAJAS:
• Es relativamente más difícil dominar la técnica.
 FROTIS LONGITUDINAL
Son más fáciles de manipular, se rompen menos, se rotulan con facilidad y no requieren montaje.
• Colocar una gota de sangre de 2 a 3 mm de diámetro a 1 ó 2 centímetros del borde del portaobjetos, colocando éste
en posición horizontal sobre la mesa de trabajo.
• Colocar un segundo portaobjetos (extensor) de modo que forme un ángulo de 30° - 45° con el portaobjetos
horizontal, con su eje mayor paralelo a él.
• El borde más abajo del portaobjetos extensor, que debe ser liso y regular, se aplica firmemente sobre la superficie del primero,
de manera que la gota de sangre esté por debajo de él.
• El segundo portaobjetos se desliza lentamente hacia la sangre hasta que se produzca el contacto, después del cual la
sangre se deslizará uniformemente entre la superficie de contacto de ambos portaobjetos.
• El portaobjetos extensor es movido rápida y suavemente en dirección opuesta, manteniendo el contacto y el ángulo
entre los dos portaobjetos. La extensión formada debe ser uniforme y de aproximadamente la mitad de la longitud de
la lamina.
• El grosor de la extensión y del ángulo en que se sitúa éste: a mayor ángulo mayor grosor, a mayor velocidad, menor grosor.
• Secar rápidamente el frotis, soplando vigorosamente con un cartón o usando una secadora eléctrica. Esto se hace con
la finalidad de evitar el apilamiento de los eritrocitos (Rouleaux) y de que los leucocitos permanezcan extendidos
sobre el portaobjetos, de lo contrario, tienden a regresar a su forma original dificultando su observación.
• Nunca se debe secar soplando con la boca pues el aire húmedo ocasionaría alteraciones morfológicas.
• VENTAJAS:
• Son fáciles de manipular, teñir y rotular.
• Son los más sencillos de realizar.
• Su conservación es sencilla.
• Son muy útiles para examinar eritrocitos.

• DESVENTAJAS:
• La distribución de leucocitos no es homogénea pues las células más grandes,
como polimorfonucleares y monocitos, tienden a acumularse cerca de los
extremos.
NOTA:
• Para lograr frotis excelentes, es indispensable que los cubreobjetos o
portaobjetos se encuentren perfectamente limpios y libres de grasa.
• Es importante recordar que cuando se practica una extensión de
sangre, se produce un trauma mecánico en las células durante el
proceso.
• Las células, al ser extendidas, se aplanan sobre la laminilla,
permaneciendo así cuando se seca inmediatamente.
• El proceso de tinción puede ocasionar artificios que hay que
considerar cuando se valore la extensión.
• No olvidar que se debe utilizar sangre recientemente extraída, ya que
el anticoagulante puede ocasionar alteraciones morfológicas.