ESPECTROFOTOMETRÍA

ULTRAVIOLETA - VISIBLE
 PROPIEDADES DE LA LUZ

La luz se describe en términos tanto de partícula

como de onda. Las ondas de luz están
constituidas por un campos eléctricos y
magnéticos, perpendiculares entre si.

Campo eléctrico: se situa en el plano XY

Campo magnético: se situa en el plano XZ
COMPORTAMIENTO ONDULATORIO
La longitud de onda (l) es la distancia entre cresta y cresta
de una onda.
La frecuencia (n) es el número de oscilaciones completas de
la onda por segundo (oscilaciones /seg= Hertz)
 CAMPO ELÉCTRICO

La l y n se relacionan con la velocidad:

c =l * n (ecuación 1)

c: Velocidad de la luz (2.99792458*108 m/s en el vacio)

En otro medio:
l*n=u

c/n=u, n= índice de refracción.

Como n1 la luz se propaga más lentamente.

 ÍNDICE REFRACIÓN

MEDIO n*
Aíre 1.0003
Agua 1.333
50% de sucrosa en agua 1.420
Disulfuro de carbono 1.628
Cuarzo cristalino 1.553
Diamante 2.417

*medido con una radiación de 589.3 nm

 CAMPO MAGNÉTICO

La luz está constituida por partículas llamadas

FOTONES.

Cada fotón tiene una energía:

E = h* n (ecuación 2)

h= Cte. de Planck (6.626*10-34 Js)

Combinando despejando de la ecuación 1 n y

sustituyendo en la ecuación 2, se obtiene:

E=h*c/l

La energía es inversamente proporcional a l.

Numero de Long.de
Frec ν
onda σ onda λ
Tipo de Tipo de transición
cm-1 cm Hz Radiación espectroscopia cuántica

3.3 × 1010 3 × 10-11 1021

3.3 × 108 3 × 10-9 1019

3.3 × 106 3 × 10-7 1017

3.3 × 104 3 × 10-5 1015

3.3 × 102 3 × 10-3 1013

3.3 × 100 3 × 10-1 1011

3.3 × 10-2 3 × 101 109

3.3 × 10-4 3 × 103 107

 RADIACIÓN

TIPO LONGITUD DE ONDA INTERACCIÓN

Rayos g <10 nm emisión nuclear

Rayos X <10 nm ionización nuclear
UV 190-380 nm transiciones electrónicas
Vis 380-800nm transiciones electrónicas
IR 800nm-100mm interacciones de enlace
Radio centímetros absorción nuclear
RMN metros cambios de spín
 Estados
Excitados

Estado
Basal
Absorción Emisión
 ESPECTRO VISIBLE

Longitud de Onda (nm) Color Absorbido Color Complementario

400-420 Violeta Amarillo-verde
420-440 Azul-violeta Amarillo
440-470 Azul Anaranjado
470-500 Verde-azul Rojo
500-520 Verde Púrpura
520-550 Amarillo-verde Violeta
550-580 Amarillo Azul-violeta
580-620 Anaranjado Azul
620-680 Rojo Verde-azul
680-800 Púrpura Verde
 ESPECTROSCOPÍA

TIPOS DE ESPECTROSCOPÍA.

•Intervalo Espectral de la Radiación Electromagnética

•Forma de Intercambio de Energía entre la Radiación

Electromagnética y la Materia:
i) Espectroscopia de Emisión
ii) Espectroscopia de Absorción

•Propiedades del Sistema

i) Espectroscopia Nuclear
ii) Espectroscopia Atómica
iii) Espectroscopia Molecular
 ESPECTROSCOPÍA

ESPECTROSCOPÍA NUCLEAR.
Resonancia Magnética Nuclear (RMN)
Resonancia Paramagnética Electrónica (RPE)

ESPECTROSCOPÍA ATÓMICA
Espectrofotometría de Absorción Atómica (AA)
Espectrofotometría de Fluorescencia Atómica

ESPECTROSCOPÍA MOLECULAR
Espectrofotometría Ultravioleta/Visible (UV/Vis)
Espectrofotometría de Infrarrojo (IR)
 RADIACIÓN

La radiación es absorbida por una sustancia solamente

cuando la energía corresponde a alguna cantidad de
energía necesaria para la transición de la sustancia

Los cambios en la sustancia pueden ser:

• Electrónicos
• Vibracionales
• Rotacionales

Estos dos últimos ocurren sólo en las moléculas

 TRANSICIONES ELECTRÓNICAS

p electrones
H
••
C O• n electrones
•
H

hn + -
C C C X C C C X
 TRANSICIONES ELECTRÓNICAS

•• hn +
N R2 - N R2

•Transiciones de electrones-d para iones de

elementos de transición.

•Transiciones de electrones-f para lantánidos

y actínidos
 s* antienlace

p* antienlace
n s*
s s* n  p*
Energía

s p*
p  p*
p s*
n

p enlace

s enlace

200 300 400

Longitud de onda (nm)
CROMÓFOROS:

Grupo funcional el cual generalmente

es insaturado y que es capaz de absorber
radiación electromagnética en el intervalo de
UV/Vis.
 CROMÓFOROS SIMPLES

Cromóforo Long. máx E máx / M-1cm-1

-Cl 173 200
-Br 204 230
-1 258 365
>S 225 875
>N- 229 875
-O- 184 1000
>C=C< 175 14000
-C=C- 173 6000
>C=O 253 53
>C=N 190 5000
-CN 165 5
-N=N- 340 4.5
-N=O 300 100
 PROCESO DE ABSORCIÓN

Po Po-dP
Haz de luz Solución
Policromético
(Fuente)

x=0 x=b

dx
Haz de luz monocromético
PROCESO DE ABSORCIÓN

Po P

Blanco

Po P

Analito
 LEY DE BOUGUER - LAMBERT

dP
 = k1 P
dx
dP dP es proporcional a Po y
 = k 1 dx
P dx. Formulada en 1729
por Bouguer, establecida
x =b
P
dP por Lambert en 1768
  = k1  dx
Po
P x =0

P0
In = k1 b
P

P0
log = k1 b
P
 LEY DE BEER

dP Existe una disminución

 = k2 P
dC exponencial de la energía
P C radiante transmitida con
dP
  = k2  dC un incremento en la
Po
P 0 concentración.
P0
In = k2 C Formulada en 1859 por
P
Beer

P0
log = k2 C
P
 LEY DE BOUGUER – LAMBERT – BEER

P
Transmitancia (T) 
Po
Po
Absorbancia (A)  log = logT
P
λ
A= ε bC
K = e = coeficiente de absortividad molar (M-1cm-1)
b= espesor de la celda (cm)
C= Concentración (M)
A= absorbancia (adimensional)
 BANDA ESPECTRAL

e
emax

d d

l1/2 lo l1/2 l
Aplicaciones de la ley de Beer
 Calcular la absortividad molar de especies
cuando se conoce la concentración y el
valor de Absorbancia o Transmitancia a
cierta long. de onda y el diámetro de la
celda utilizada.
 ABSORBANCIA
A = Log Po / P

0.7
0.3
0.1

0.4

1.0
0.0

0.5
0.2

40

10
90

20
50

30
60
80
70
100

0
% DE TRANSMITANCIA

T = P / Po
Concentración
CURVA DE CALIBRACIÓN

Concentración
 LEY DE ADITIVIDADES

La Absorbancia de un sistema es igual a la

suma de las absorbancias individuales de
todos y cada uno de los componentes del
sistema
n
A T = A1  A 2  A 3  A 4  ....  A n =  A i
i=1

A T = ε1λ=1bC1  ε 2λ=1bC2  ε 3λ=1bC3  ε λ4=1bC4  ....  εnλ=1bCn

DESVIACIONES A LA LEY DE LAMBERT-
BOUGUER-BEER

•LIMITACIONES REALES

•DESVIACIONES QUÍMICAS

•DESVIACIONES INSTRUMENTALES
 LIMITACIONES REALES

Las desviaciones reales se deben a los cambios en el

índice de refracción del sistema analítico, a
concentraciones bajas el índice de refracción es
prácticamente constante. A concentraciones
elevadas la distancia promedio entre los iones o las
moléculas de las especies que absorben disminuye
hasta el punto en que cada partícula afecta a la
distribución de carga de las moléculas vecinas.
 DESVIACIONES QUÍMICAS

La ley de Beer se cumple a concentraciones

 0.01 M .
Cuando son más altas existen interacciones
del analito con el solvente productos con
características absorbentes distintas de las
del analito. Llegando a pasar que el analito
se convierte en solvente
 DESVIACIONES INSTRUMENTALES

 Falta de monocromaticidad en la
radiación incidente
 Presencia de radiación parásita.
 Fluctuación en el haz de radiación
 Desgaste del amplificador o del detector
 Falta de capacidad del detector
CUIDADOS EN ESPECTROFOTOMETRIAUV/VIS

Elegir las celdas adecuadamente

Calibrar adecuadamente el espectrofotometro

Verificar las condiciones fisicas y químicas de los

sistemas (pH, temperatura, fuerza ionica, solvente)

ESPECTROFOTOMETRO

Instrumento capaz de medir la absorbancia o transmitancia de

sólidos, líquidos o gases como una función de la longitud de onda
de la radiación electromagnética.

Funciones:

•Generar un haz de radiación con la adecuada geometría espacial y

la longitud de onda requerida

•Proveer un lugar adecuado en donde las muestras sean colocadas

de forma correcta y reproducible para interactuar con el haz de
radiación.

•La medición de la absorbancia o transmitancia de la muestra a una

longitud de onda seleccionada, así como el registro, impresión o
procesamiento adecuado de estas mediciones.
 ESPECTROFOTOMETRO

Detector

Fuente Monocromador Portamuestra

Amplificador

Sistema Analizador Registrador

 FUENTES DE RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA

Debe proveer un espectro de emisión continuo de

distribución de energía continua en el intervalo de
interés

Térmicas. Tungsteno
Tungsteno-Halógeno
Fuentes de
Radiación
Electromagnética

Lamparas de descarga. Hidrógeno

Deuterio
Xenón
 LÁMPARA DE FILAMENTO DE
TUNGSTENO

Obedece a las leyes establecidas para la radiación

del cuerpo negro, que es un emisor ideal, cuya
radiación depende de la temperatura únicamente

MT = k T4

MT = Flujo radiante emitido por unidad de área

(W/m2)

k = Constante de Boltzman

T = Temperatura del cuerpo negro

 LÁMPARA DE FILAMENTO DE
TUNGSTENO

•Se operan a temperaturas de 2400-3000K en el intervalo

espectral de 350 a 1300nm. Generalmente son lamparas
de 6-24 V y 5-9 A.

•Con la adición de yoduro o bromuro en cantidades de ppm

dentro del bulbo de la lampara se incrementa su tiempo de
vida media (lamparas de tungsteno-halógeno)

Esto se debe a que se forma yoduro de tungsteno el cual es

volátil este se deposita en el filamento caliente y por
pirólisis se reincorpora como tungsteno elemental
LÁMPARA DE FILAMENTO DE
TUNGSTENO
 LÁMPARA DE DESCARGA

Consisten en dos electrodos separados por un gas

a moderadas presiones obteniéndose un espectro
lineal.

•Hidrógeno: Opera en un intervalo de 240-

375nm, trabajan generalmente a un voltaje de
30-60 V

•Deuterio: Opera en el intervalo de 180-400nm,

trabajan generalmente a un voltaje de 30-60 V.

•Xenón: Opera en el intervalo de 190-750nm,

trabajan a altas presiones (50-70 atm.).
 LÁMPARA DE DESCARGA

DEUTERIO XENÓN
 MONOCROMADORES

Son el corazón del instrumento, cuyo propósito es el de

descomponer la radiación policromática emitida por el
haz de radiación para producir un espectro y aislar de
este un fragmento el cual contiene la l requerida.

Consiste en:
Rendija de Entrada
•Colimador (lentes o espejos), hace paralela la
radiación procedente de la rendija de entrada.
•Elementos dispersivos.
•Elementos de Enfoque, los cuales enfocan la
radiación hacia el plano de detección.
•Rendija de Salida (Slit), la cual selecciona del
espectro la longitud de onda requerida
 Radiación Incidente
30o

PRISMAS l1
l2
l3 60o
l4
Colimador

Rendijas

Prisma
Rotatorio
 REJILLAS DE DIFRACCIÓN

En la actualidad se producen rejillas holográficas. Las

rejillas son producidas por fuentes laser en un
sustrato cubierto por una película fotoresistente.

Se pueden tener rejillas de difracción con una

densidad de rendijas que puede ir de 65 a más de
5000 rendijas/mm

• La dispersión es mucho mejor

• Es menos sensible a la temperatura
• Pueden usarse en UV/Vis
 Radiación Difractada
Radiación Incidente

Radiación Reflejada

REJILLA DE DIFRACCIÓN
REJILLAS DE DIFRACCIÓN
REJILLA DE DIFRACCIÓN:

Rejillas: 3300 rejillas / mm

Sustrato: Silica

Espesor: 3.175 – 10 mm

Cubierta para la reflexión: Oro

Dimensiones: 3mm X 3mm a 50mm X 50mm

REJILLAS DE DIFRACCIÓN
Imagen de microscopío de fuerza atómica
 FOTOMULTIPLICADORES

Son los detectores más empleados en la actualidad, su

principio se basa en el efecto de emisión de electrones
secundarios.

Básicamente su funcionamiento consiste en:

Un haz de radiación incide en el fotocátodo y se

liberan electrones de este. Los electrones liberados son
acelerados en un fuerte campo eléctrico y golpean a un
primer dinodo donde se da la liberación de electrones
(proceso de multiplicación), el proceso continua con los
dinodos sucesivos, hasta que finalmente se emiten un
número deseado de fotoelectrones.
FOTOMULTIPLICADORES
 CELDAS

•CUARZO. Adecuadas para UV/Vis (200-850nm)

•VIDRIO. Adecuadas para un intervalo de 320- 850nm.

•PLASTICO.
Poliestireno (340-800nm)
Metacrilato (275-800nm)
CELDAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS
CELDAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS
 ESPECTROFOTOMETRO DE UN HAZ

Detector

Fuente Monocromador Portamuestra

Amplificador

Sistema Analizador Registrador

 ESPECTROFOTOMETRO
SPECTRONIC-20 (UN HAZ)
ESPECTROFOTOMETRO
DE UN HAZ
 ESPECTROFOTOMETRO DE DOBLE HAZ
Motor
Espejos
Detector

Fuente Monocromador

Espejos
Portamuestra

Amplificador

Sistema Analizador Registrador

ESPECTROFOTOMETRO DE DOBLE HAZ
ESPECTROFOTOMETRO DE DOBLE HAZ
 Aplicaciones
Espectofotometría UV/Vis
 Determinación de impurezas
 Elucidación de compuestos orgánicos.
 Análisis Cuantitativo: curva de
calibración, análisis multicomponente,
análisis por derivadas.
 Análisis Cualitativo: caracterización de
compuestos aromáticos y oleofinas
aromaticas.
 Aplicaciones
Espectofotometría UV/Vis
 Determinación de constantes:
– pKa
– pKc
o Determinación de cinéticas de reacción: