UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

CUAUTITLÁN
CAMPO 1
Química industrial
 
Laboratorio de Química Analítica IV
Grupo: 

Proyecto: Separación de isómeros de ácidos

grasos insaturados cis/trans en aceites
comestibles por CG-FID

Equipo: 5

Profesores:

Dra. María Guadalupe Pérez Caballero

Dr. José de Jesús Olmos Espejel

ALUMNOS: 

González Macias Erick Rafael

Leyva Minor Ana Fernanda

OBJETIVOS
1.1
 Determinar por el método de cromatografía de gases FID isómeros en ácidos grasos
insaturados en una muestra comercial “Oli”.

Determinar de los isómeros Ácido palmítico (ácido hexadecanoico) y Ácido oleico (ácido
cis-9-octadecanoico) bajo un Análisis rápido de FAME saturados e insaturados e isómeros
cis-trans clave.

Confirmar el compuesto en el cromatograma con base al tiempo de retención obtenido y

desarrollar el análisis cuantitativo gracias a su área para el grado de cumplimiento del
aceite en cuestión

INTRODUCCIÓN

_____________________________

En esta introducción se responde a la pregunta sobre ¿por qué debemos 2.1

preocuparnos por la composición de las grasas y aceites que consumimos? Existen dos
motivos básicos que dan respuesta a dicha interrogante: El primero es porque
necesitamos poder analizar el grado de cumplimiento del consumo de alimentos con las
recomendaciones nutricionales referentes a la ingesta de grasas y aceites; sólo así se
pueden efectuar las modificaciones e intervenciones necesarias para asegurar que las
recomendaciones se cumplan. Las grasas de la dieta comprenden todas las fuentes de
lípidos encontradas en los alimentos, en primera instancia las grasas y aceites como
tales, pero también las paredes celulares de los tejidos animales y vegetales que
consumimos. Las grasas son una fuente importante de energía en la dieta; de acuerdo
2.2
con las tablas de balance de la FAO son el componente del consumo de energía que más
ha aumentado en las últimas décadas en el ámbito global y también en México. Las
necesidades de consumir grasa en la dieta están dadas por la necesidad de contar con un
aporte energético suficiente y también por el carácter esencial de los ácidos grasos
omega-3 y omega-6, los cuales no podemos sintetizar. La energía de las grasas sirve
para mantener la vida; crecer, en el caso de los niños, y apoyar el embarazo y la lactancia
2.3
en el caso de las mujeres.

El segundo motivo es para asegurar que la composición de las grasas y aceites

consumidos no sólo cumpla con lo requerido para una buena nutrición, sino que dicho
consumo promueva la mejor salud y bienestar posibles a través del curso vital, desde la
concepción a la vejez. Esto implica evitar las enfermedades y la discapacidad vinculada al
consumo de grasa dietaria. Hoy en día, las principales causas de muerte y de pérdida de
años de vida saludable son las enfermedades crónicas relacionadas con la dieta y la
actividad física; dentro de éstas, las cardiovasculares y el cáncer son las más frecuentes.
Los factores dietarios más importantes que condicionan las enfermedades
cardiovasculares, la diabetes, la obesidad y posiblemente la evolución de algunas formas
de cáncer están en la calidad de las grasas. Conocer la composición de las grasas en los
alimentos bajo esta perspectiva implica no sólo asegurar los componentes esenciales
(grasas n-3 y n-6) para la salud y nutrición, sino también asegurar que aquellas grasas no
esenciales que sirven como combustible contribuyan a una salud óptima. Con esto en
mente nos debe interesar no solamente la histórica relación de grasas saturadas a
poliinsaturadas, sino cuáles son los ácidos grasos saturados que consumimos, ya que no
da lo mismo consumir cualquier saturado (C 12:0, 14:0, 16:0 o 18:0) o consumir
insaturados n-3 o n-6, o si los dobles enlaces responsables de la insaturación están en
posición cis >=< o trans <=>, o si los ácidos grasos n-3 tienen una cadena de 18, de 20 o
de 22 carbonos. Todo esto adquiere especial importancia al evaluar los alimentos
industrializados, ya que en éstos la cantidad y calidad de las grasas utilizadas en su
manufactura puede variar en forma muy amplia. La tendencia comercial es siempre la de
usar el ingrediente más conveniente que cumpla con el fin que se busca, lo que
habitualmente supone la utilización del más barato. Esto ha llevado a la inclusión de las
grasas trans de origen industrial en nuestros alimentos, ya que en general son más
3.1
baratas y evitan la rancidez.

3.2

DIAGRAMA DE FLUJO
________________________________
 INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA

_________________________________

Calibración indirecta, relativa o método del patrón interno

En este método, el patrón elegido no puede ser un analito de la muestra. Este

patrón se añade a la muestra a analizar en una concentración conocida; de ahí el nombre
de patrón interno. Este patrón interno debe cumplir una serie de requisitos: eluir cerca de
los picos de interés, estar resuelto de ellos, ser de naturaleza química similar a los
analitos de interés y no reaccionar con ellos y debe existir en estado puro. La forma
experimental de realizar este proceso es la siguiente: se preparan muestras que
contengan dos patrones, uno, el del analito presente en la muestra a concentración
variable y otro, el elegido como patrón interno, a una concentración fija.
4.1

Se cromatografían estas muestras y se realiza una curva de calibración que debe

ser lineal. A continuación, se representa el cociente de áreas del analito patrón a
concentración variable (Ax), respecto al patrón interno, a concentración fija (Api), frente a
la masa variable del analito patrón (mx). Cuando se cromatografía la muestra problema en
presencia de una concentración dada de patrón interno, se obtienen las áreas del analito
problema y del patrón interno. Basta entonces, interpolar el cociente de áreas en la recta
de calibración para conocer la masa del analito problema.

Calibración indirecta, relativa o método del patrón interno En este método, el

patrón elegido no puede ser un analito de la muestra. Este patrón se añade a la muestra a
analizar en una concentración conocida; de ahí el nombre de patrón interno. Este patrón
interno debe cumplir una serie de requisitos: eluir cerca de los picos de interés, estar
resuelto de ellos, ser de naturaleza química similar a los analitos de interés y no
reaccionar con ellos y debe existir en estado puro. 
5.1
La cromatografía de gases y la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)
son dos técnicas de separación de analitos que permiten identificar y cuantificar un gran
número de compuestos. La cromatografía de gases es un método físico de separación
basado en la distribución de muestras en dos fases, una es la fase estacionaria, que se
trata de un sólido empacado en una columna, y la fase móvil consiste en un gas inerte
que percola sobre la fase estacionaria en este gas inerte (gas transportador) es donde se
transportan las moléculas de la muestra a través de la columna. La cromatografía de
gases tiene ventajas como la alta resolución, la velocidad, la sensibilidad y resultados 5.2

cuantitativos, las desventajas de la cromatografía de gases son solo muestras volátiles,

deficiente para análisis cualitativos.

Detector de ionización de llama (FID): es un detector utilizado, se basa en el

principio en el que la conductividad eléctrica de un gas es directamente proporcional a la
concentración de partículas cargadas dentro del gas. Las características son la cantidad
mínima detectable es de  10^-11 g; respuesta lineal de 10^6. excelente estabilidad,
temperatura límite de 400 °C. 

 Para la cuantificación de compuestos, existen diversas técnicas como la

normalización de áreas, el método de patrón externo o el método de patrón interno. En
5.3
este proyecto se va a llevar a cabo la cuantificación de compuestos por el método de
patrón interno este método se lleva a cabo cuando el estándar interno se añade a todas
las muestras y estándares en cantidad conocida y a la vez en cantidad suficiente para
poder ser determinado sin problemas, además de que su adición no debe causar
interferencia con el análisis, además el estándar interno no debe estar presente en la
matriz en estudio. 

En las técnicas de cromatografía de gases y HPLC, cuando se realiza un análisis,

se obtiene un cromatograma. Un cromatograma es la representación gráfica de la señal
que da el detector al paso de los distintos analitos en función del tiempo. En un
cromatograma se observan una serie de picos que se corresponden con los analitos
detectados. Cada pico sale a un tiempo de retención (tR) determinado y tiene una altura y
área determinadas. El tR es el parámetro que se emplea para llevar a cabo el análisis
cualitativo. Para hacer un análisis cuantitativo se puede utilizar la altura del pico o el área,
siendo este último el más empleado por su mayor precisión.

Método del estándar interno: Se emplea normalmente en una curva de calibración, 6.1

con la preparación de una serie de soluciones que contienen igual cantidad de estándar
interno e incrementos en la cantidad del analito, se inyectan las soluciones y en el
cronograma obtenemos el área del analito y el área del estándar interno y se calcula la
relación entre las áreas obtenidas ( área del analito/area de est int) y se gráfica contra la
concentración del analito, finalmente se interpola en la gráfica obtenida, el valor de la
razón de áreas de una muestra desconocida, la cual contiene la misma cantidad de
estándar interno que el de los patrones.

6.2

PARTE EXPERIMENTAL

Tabla 1: Materiales y Reactivos

MATERIAL REACTIVO EQUIPO

 7.1

1 Vidrio de reloj Ácido 1 cromatógrafo de gases

Oleico

1 Vaso de precipitado Cromatógrafo de Gases Marca BUCK 910.

Ácido
Pentanoico

1 Pipeta Columna DB-WAX (Polietilenglicol) Dimensiones 60m X 0.

mm D.I X 1.5 um espesor de película.
Ácido
Palmítico

1 Matraz Erlenmeyer Gas acarreador: Nitrógeno @ 7psi (aprox. 10 mL/min).

3 matraces aforados de 10 mL Gases para el Detector de Ionización de Flama (FID):

10 tubos de ensayo Hidrógeno @ 20 psi; Aire @ 7 psi

1 micropipeta 100-1000 uL

Jeringa para inyectar al

cromatógrafo de gases
 Preparación de la muestra

Para optimizar el programa de temperatura y realizar la separación cromatográfica es

necesario derivatizar los ácidos grasos y formar ésteres metílicos volátiles mediante una
reacción de esterificación. Se seleccionó el procedimiento en medio básico por ser una
metodología más rápida y sencilla que conlleva la adición de 0, 5 mL de una disolución 2
M de KOH en metanol y 4 mL de hexano a 60 mL de aceite en hexano. La mezcla se
agita usando un vortex durante 5 minutos y centrifugando durante otros 5 minutos para
finalmente separar por decantación los ésteres metílicos

Concentraciones de los estándares

100 mL 0.1mL
(
100 mL 10 mL )
=1 x 1 0❑−2 % v /v sistema 1

100 mL 0.2mL
100 mL 10 ( )
=2 x 1 0❑−2 sistema 2

100 mL 0.3 mL
100 mL 10 ( )
=3 x 1 0❑−2 sistema 3

100 mL 0.4 mL
100 mL 10 ( )
=4 x 1 0
❑−2
sistema 4

100 mL 0.5 mL
100 mL 10 ( )
=5 x 10
❑−2
sistema 5

100 mL 0.6 mL
100 mL 10 ( )
=6 x 1 0
❑−2
sistema 6

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

Analito tr (min) W1/2 (min) ÁREA

Ac. Oleico

Ac. Palmítico
Ac. Pentanoico

Analito tR W½ tR W½ tR W½ tR (min) W ½ (min)

(min) (min) (min) (min) (min) (min) programada
programada
100ºC 150ºC 200ºC
100º 150º 200º
C C C

Ac. Oleico

Ac.
Palmítico

Ac.
Pentanoico

Sistema Ac. Palmítico Ac. Problema Aforo mL

Ac. Oleico (mL)Std Pentanoico (mL)
(mL)Std
(mL)P. I

1 0.1 0.1 1 10

2 0.2 0.2 1 10

3 0.3 0.3 1 10

4 0.4 0.4 1 10

5 0.5 0.5 1 10

6 0.6 0.6 1 10
 Prob. Ac. - - 0.02 10
Oleico

Prob. Ac. - - 0.05 10

Palmítico

Tabla 2: Resultados de los cromatogramas para Ac. Oleico, Ac. palmítico  

Área Área
[Ac. [Ac. [Ac Área [Ac
Sistema Ac. Ácido
Oleico]Std Pentanoico]Std Pentanoico]P. I Pentanoico]P. I
Oleico Pentanoico

Problema - -
Ac.
Oleico

Problema - -

Ac.
Palmitico

ANEXOS 
 Tabla 3: Preparación de los sistemas para la cuantificación de Ac. Oleico y Ac. Palmítico
por el método de curva de calibración

Miscibilida
d en H2O

+++ muy
P miscible
Punt
Nomb Masa u
Punto de o de ρ ++
re/ Edo. Molar r Uso en
Estructura Ebullición   Fusi (g/cm3 miscible Toxicidad la
Fórmu Físico (g/mol e
(ºC) ón ) práctica
la ) z + poco
(ºC) miscible
a
- No
miscible

Líquido
aceitos
Ácido o 282.4
286 16.3 - 0.895 - Estándar
Oleico ligeram 7
ente
amarillo

Ácido Líquido 102.1 Patrón

186 -34.5 - 0.930 +
Penta incoloro 3 Interno

noico
 Ácido Sólido 256.4
271.4 65 0.852 - Estándar
Palmít blanco 2

ico

12.1

BIBLIOGRAFÍA

● Microlab Industrial - Perfil de ácidos grasos por cromatografía de gases. (n.d.).

Www.microlabindustrial.com. Retrieved October 11, 2021, from

https://www.microlabindustrial.com/blog/perfil-de-acidos-grasos-por-cromatografia-
de-gases

● Sur, N. del. (n.d.). Composición del Aceite de Oliva | NOBLEZA DEL SUR -

ACEITE DE OLIVA VIRGEN EXTRA - ACEITES CASTELLAR.

https://www.noblezadelsur.com/composicion-del-aceite-de-oliva/

● Villalpando, S. (2007). Grasas, dieta y salud. In Tablas de composición de ácidos

grasos de alimentos frecuentes en la dieta mexicana. https://www.insp.mx/images/

stories/Produccion/pdf/100722_cp36.pdf

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 Índice de comentarios

1.1 Pasar esto a la siguiente hoja

2.1 Todo eso debe quedar claro sin mencionarlo. Se puede sustituir por: Es importante analizar el grado de
cumplimiento...

2.2 Tienen que definir esta abreviatura antes de usarla. ¿Qué significa FAO?

2.3 Falta la referencia dentro del texto en toda esta información. No basta con poner la lista al final del trabajo.

3.1 Faltan las referencias en el texto.

3.2 Se encima la información, tal vez es por el archivo generado en el aula, pero de todoas formas, revisen que en su
archivo final esté bien

4.1 Tiene mque mejorar su redacción. No existe el verbo "cromatografíar". En todo caso sería "Se realiza el análisis
cromatográfico de ..." Aunque así venga en la referencia que consultaron está mal continuar usando esa palabra.

5.1 No hay que mencionarla si no se usará en el trabajo

5.2 Todos estos fundamentos de la técnica no son importantes aquí porque ya los debimos haber revisado en la
práctica 4. Aquí solo deben poner la importancia del análisis que harán

5.3 Esto lo explicaron en la hoja anterior

6.1 Es la tercera vez que mencionan esto. Tiene que ser más directos y no escribir ni hablar en círculos porque todo se
hace muy confuso y repetitivo. Esto le quita interés a su trabajo.

6.2 Le falta el título y la referencia a esta tabla

7.1 A partir de aquí, todo lo siguiente ya es parte del segundo avance, deben apegarse a los puntos que se solicitan.
Revisen que en su archivo la tabla no se corte.

12.1 Ninguna de etas referencias está correctamente citada en su documento. Esto hace que sea difícil contrastar su
información con las fuentes originales.
Revisen esta página:
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