MARCO TEORICO

CROMATOGRAFIA

La cromatografía es una técnica muy versátil que presenta distintas variantes. Esta
técnica se puede realizar con dos objetivos diferentes que no son excluyentes:
Preparativo y Analítico. La cromatografía preparativa se realiza para separar los
componentes de una mezcla mientras que la cromatografía analítica tiene la finalidad de
identificar y cuantificar las distintas sustancias que la componen.

En toda cromatografía hay dos fases: Una móvil y otra estacionaria. La fase móvil se
mueve respecto de la estacionaria manteniendo un contacto íntimo con ella y arrastrando
a la muestra, cuyos componentes se distribuyen entre ambas fases, cumpliendo con la
ley del reparto.

Los componentes de la mezcla invierten un tiempo diferente en interactuar con cada una
de las fases, con lo que se produce la separación y/o identificación. Si un componente
está la mayor parte del tiempo en la fase móvil el producto se mueve rápidamente,
mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda
retenido y su salida es mucho más lenta.

Clasificación:

Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir atendiendo a distintos criterios.

Una clasificación, según esté dispuesta la fase estacionaria, es:
A Cromatografía plana: La fase estacionaria se sitúa sobre una superficie plana.
Las principales técnicas son:
 Cromatografía en papel
 Cromatografía en capa fina
B Cromatografía en columna: La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna.
Según el fluido empleado como fase móvil pueden ser:
 Cromatografía de líquidos
 Cromatografía de gases
 Cromatografía de fluidos supercríticos
Otros tipos de cromatografía son: Intercambio iónico, afinidad, exclusión y otros.

Cromatografía de Papel

Es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya es

sencilla de implementar y no requiere de equipamiento sofisticado. En esta técnica la fase
estacionaria está constituida simplemente por una tira o circulo de papel de filtro. La
muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de una solución de la
muestra y evaporando el disolvente luego de cada aplicación. Luego el disolvente o
mezcla de disolventes empleada como fase móvil (eluente o eluyente) se hace ascender
por capilaridad. Para esto se coloca una porción del papel en contacto con la fase móvil
dentro de un recipiente que la contiene (Cámara de desarrollo). Después de unos
minutos, cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al borde extremo del papel,
se retira el papel y seca. Es importante que la cámara de desarrollo permanezca bien
tapada durante el proceso de ascenso capilar de la fase móvil (desarrollo
cromatográfico), pues de lo contrario no se alcanza el equilibrio necesario entre el líquido
(fase móvil) y el vapor del líquido. Si el disolvente elegido fue adecuado y las sustancias
tienen color propio se deberán ver manchas de distinto color separadas a lo largo del
papel. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de
revelado.
La cromatografía es un sistema de separación dinámica, porque continuamente se
producen equilibrios entre los componentes de la mezcla a separar y las fases móvil y
estacionaria. El proceso de separación se produce a causa de las interacciones entre los
componentes de la mezcla con la fase móvil y la fase estacionaria; lo cual causa la
distribución de los componentes de la mezcla entre las dos fases. A este proceso se le
denomina partición de los componentes. Las interacciones mencionadas pueden tener su
origen en dos fenómenos:

1. La adsorción: Que es un fenómeno de interacción superficial por el cual átomos,

iones o moléculas son retenidas en la superficie de un material. Puede ser de dos
tipos:
a Fisisorción: Debida a fuerzas atractivas débiles, generalmente fuerzas de
Van der Waals; es la forma más simple de adsorción.
b La Quimisorción: Ocurre cuando se forma un enlace químico

2. La resistencia: Es un fenómeno de retención que incluye la penetración de una

especie química en todo el volumen del material por lo cual se la considera como
un fenómeno másico y no superficial.

Cromatografía en Capa Fina

La cromatografía en capa fina (en inglés thin layer chromatography o TLC) es una técnica
analítica rápida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de Química Orgánica. Entre
otras cosas permite:
 Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar así, por
ejemplo, la efectividad de una etapa de purificación.
 Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podrían ser idénticas.
Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia.
 Realizar el seguimiento de una reacción. Es posible estudiar cómo desaparecen
los reactivos y cómo aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, saber
cuándo la reacción ha acabado.
La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lámina de plástico o
aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase
estacionaria). Entonces, la lámina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o
varios disolventes mezclados (eluyente o fase móvil). A medida que la mezcla de
disolventes asciende por capilaridad a través del adsorbente, se produce un reparto
diferencial de los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente.

Determinación Del Rf
La retención se puede explicar en base a la competencia que se establece entre el soluto
a separar y la fase móvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase
estacionaria. Así, las moléculas de soluto se encuentran adsorbidas en la fase
estacionaria y a medida que se produce la elución van siendo desplazadas por la fase
móvil. La retención y la selectividad en la separación dependen de los valores respectivos
de las constantes de los diferentes equilibrios químicos que tienen lugar, que están en
función de:
 La polaridad del compuesto, determinada por el número y naturaleza de los
grupos funcionales presentes. Los solutos más polares quedarán más retenidos
puesto que se adsorben más firmemente a los centros activos de la fase
estacionaria, mientras que los no polares se eluirán con mayor facilidad.
 naturaleza del disolvente. Así, para un mismo compuesto, un aumento en la
polaridad del disolvente facilita su desplazamiento en la placa.

La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen
de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas
condiciones cromatográficas determinadas (adsorbente, disolvente, tamaño de la cubeta,
temperatura, etc.). Debido a que es prácticamente imposible reproducir exactamente las
condiciones experimentales, la comparación de una muestra con otra debe realizarse
eluyendo ambas en la misma placa. Para calcular el Rf se aplica la siguiente expresión:

distanciarecorrida por el compuesto

Rf =
distancia recorrida por el frente del solvente

Cromatografía de columna:
Este método es utilizado para la separación y purificación de distintos
compuestos orgánicos que se encuentran tanto en estado líquido como
sólido.
En este tipo de cromatografía la fase estacionaria, es decir, el absorbente se
coloca dentro de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para
controlar el paso de la sustancia al exterior de la columna. La fase
estacionaria se impregna con el eluyente o fase móvil, seguidamente la
mezcla organica que nos interesa separa la depositamos por la parte
superior de la fase estacionaria y así la fase móvil podrá ir atravesando el
sistema. Los compuestos que se encuentran en la fase móvil poco a poco
saldrán de la columna cromatografica, y se recogen en fracciones. Las
fracciones menos polares son las que se retienen poco o nada en el
absorbente, serán las primeras en salir de la columna , en cambio las
sustancias más polares quedaran retenida por más tiempo en el absorbente
y a menudo es necesario el uso de varios disolventes con la finalidad de
incrementar su polaridad y ser arrastrados por estos. El tiempo que se
necesita para hacer fluir un componente en la columna se llama tiempo de retención, este
tiempo varia de acuerdo al compuesto en las condiciones cromatográficas. El absorbente
mayormente utilizado para la cromatografía de columna es el gel de sílice. La
cromatografía en columna puede realizarse por gravedad o a media presión. Por lo
general la cromatografía a media presión produce mejores resultados que la
cromatografía por gravedad y además la ser más rápida es la más utilizada.
 CÁLCULOS EXPERIMENTALES Y RESULTADOS

Cromatografía de papel

1.9
Rf =
6.3
6.3c
Rf =0.30

1.9c

Cromatografía de capa fina

1.2
Rf =
1.2c
3

Rf3=0.4
cm
 DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Cromatografía de papel
Una vez iniciado el proceso cromatográfico se pudo observar el desplazamiento de parte
de la solución en forma vertical ascendente, esto debido a la propiedad de capilaridad
que posee y esto hace que se desplacen ascendentemente. La mancha móvil del soluto
en este caso pasa a ser el pigmento extraído obtiene un Rf el cual sirve como
identificador de pigmentos dependiendo de su valor.
La muestra en algunos casos debe permanecer a oscuras ya que la luz hace que se
produzcan diversas reacciones; se utilizó el ácido clorhídrico debido que este degrada
las moléculas grandes de la solución.
El Rf obtenido de la cromatografía de papel realizada fue de 0.30.
Cromatografía de capa fina
Al finalizar el proceso de cromatografía se observó el desplazamiento de parte de la
solución coloreado de manera vertical hacia arriba, en este caso a diferencia de la
cromatografía de papel el desplazamiento del soluto posee mayo coloración y es mucho
más notorio esto debido a que el material es capaz de poder adsorber mejor el soluto en
la capa fina dándole mayor visibilidad ya que se tiene como cromatofolio un material
adsorbente el cual da una cromatografía de mejor calidad.
Al igual que en la cromatografía de papel se halla el Rf para conocer el tipo de pigmento
hallado.
El Rf se el cromatograma fue de 0.4