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Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5:409–
424 DOI 10.1007/s11947-011-0573-z
DOCUMENTO DE REVISIÓN
Extracción de flavonoides asistida por microondas: una revisión
ruta ganadora&Valerie Orsat
Recibido: 5 de enero de 2011 / Aceptado: 29 de marzo de 2011 / Publicado en línea: 12 de abril de 2011
# Springer Science+Business Media, LLC 2011
ResumenLos flavonoides son importantes compuestos
bioactivos que se sabe que son beneficiosos contra
muchas enfermedades crónicas como el cáncer, los
trastornos cardiovasculares y la inflamación. Los
productos alimenticios obtenidos de las plantas son
fuentes clave de flavonoides para los humanos. Sin
embargo, durante los diferentes pasos del
procesamiento de alimentos, los flavonoides se pierden
en cantidades notables. La suplementación de
flavonoides como aditivo alimentario ayudará a retener
la cantidad necesaria de flavonoides beneficiosos para la
salud en la dieta, y la extracción es un paso importante
en la preparación de aditivos alimentarios. La extracción
por microondas es uno de los métodos de extracción
más avanzados, que tiene el potencial de desempeñar
un papel importante en la extracción y cuantificación
analítica de flavonoides.
Palabras claveFlavonoides. Extracción asistida por microondas.
Extracción
Introducción
Los compuestos bioactivos son los constituyentes extranutricionales
presentes en algunos alimentos que cuantitativamente constituyen solo
una pequeña parte de ellos (Kris-Etherton et al.2002). Varios compuestos
bioactivos se utilizan como nutracéuticos, que pueden definirse como
compuestos que tienen efectos beneficiosos para la salud.
W. Routray:V. Orsat (*)
Departamento de Ingeniería de Biorecursos, Campus Macdonald,
Universidad McGill,
Ste-Anne-de-Bellevue, Quebec, Canadá H9X 3V9 Correo
electrónico: valerie.orsat@mcgill.ca
para el tratamiento o prevención de ciertas enfermedades
(Bravo y Mateos2008). Algunos de los compuestos bioactivos
más importantes de origen vegetal son los compuestos
polifenólicos y principalmente los flavonoides. Los flavonoides
son generalmente antioxidantes y actúan como eliminadores
de radicales libres, ya que son agentes reductores potenciales y
protegen de las reacciones oxidativas que tienen lugar dentro
del cuerpo. Actúan contra muchas enfermedades crónicas
como el cáncer (Birt et al.2001; Middleton et al.2000),
inflamación (Manthey et al.2001; Middleton et al.2000),
cardiovascular (Kris-Etherton y Keen2002; Mennen et al.2004), y
trastornos neurodegenerativos (Lu et al.2010; Moosmann y
Behl2002). Son beneficiosas contra muchos otros problemas de
salud como la osteoartritis (Farid et al.2010) y trastornos
oculares (Majumdar y Srirangam2010) y actúan como
fitoestrógenos (Cherdshewasart et al.2007; Han et al.2002) y
compuesto antitiroideo (Chandra y De2010; Chandra et al.2010
). Los flavonoides están presentes en todas las plantas
superiores y en algunos animales donde se sospecha que se
derivan del consumo de alimentos de origen vegetal (Bravo y
Mateos2008). Los flavonoides son beneficiosos para los
humanos y también para las plantas. Desempeñan un papel
importante en el crecimiento de las plantas, la reproducción y
el mecanismo de defensa de las plantas contra factores como
los patógenos y las radiaciones UV (Treutter2006). Se
encuentran en muchas frutas y verduras que son una gran
parte de una dieta humana diaria equilibrada. Dependiendo de
los constituyentes de la dieta, la ingesta de flavonoides puede
variar en el rango de 50 a 800 mg por día (Stalikas 2007).
En las últimas décadas, la creciente conciencia sobre la salud ha
atraído la atención de los científicos alimentarios hacia los
flavonoides. Se recomienda la fortificación con flavonoides en los
alimentos procesados para asegurar una ingesta diaria adecuada
para mejorar el sistema inmunológico. La industria alimentaria ha
conocido una gran expansión debido al aumento de la población
410
demanda de alimentos procesados saludables y convenientes.
Esto ha llevado a un aumento en la cantidad de subproductos y
desechos industriales, como cáscaras, pulpa y semillas. Estos
residuos de la industria alimentaria pueden utilizarse para la
extracción de los flavonoides que contienen como
complemento a las fuentes directas que son las propias frutas y
verduras. Puede haber margen para la síntesis de estos
compuestos, pero el uso de una fuente natural para la
extracción y el enriquecimiento es la opción preferible desde el
punto de vista de la aceptabilidad del mercado. Por lo tanto, la
extracción representa un elemento importante que contribuye
al desarrollo de alimentos procesados e ingredientes
alimentarios nutracéuticos. Debido a la diversidad inherente de
los flavonoides, es difícil para los químicos y bioquímicos
analíticos cuantificar rápida y sistemáticamente los flavonoides
(Stalikas2007). Los métodos comunes de extracción de
flavonoides incluyen métodos convencionales como la
extracción de fluidos, extracción Soxhlet y extracción por
ultrasonidos o métodos modernos como la extracción
supercrítica y subcrítica y la extracción de líquidos
presurizados. Los científicos están explorando otros posibles
métodos que sean más respetuosos con el medio ambiente,
que utilicen menos energía y menos disolventes y produzcan
mayores rendimientos. En el escenario actual, para satisfacer
estos requisitos, la extracción asistida por microondas puede
ser una opción potencial. Este artículo, por lo tanto, explora la
posibilidad de utilizar la extracción por microondas para
extraer flavonoides. Presenta una breve discusión sobre los
flavonoides, sus métodos generales de extracción, extracción y
cuantificación asistida por microondas,
Flavonoides
Los flavonoides son metabolitos vegetales secundarios,
presentes en casi todas las partes en crecimiento de las
plantas. Se ha informado que son el pigmento vegetal más
abundante junto con la clorofila y los carotenoides (Stalikas
2007). El núcleo de flavan, 1,3-difenilpropano (Fig.1) es la
estructura esquelética básica de los flavonoides que consiste en
dos anillos aromáticos unidos por una estructura de tres
carbonos. Esta estructura forma un heterociclo oxigenado
excepto en los casos de chalconas y dihidrochalconas. Los
flavonoides se pueden agrupar en diferentes clases. Las
principales clases de flavonoides basadas en la abundancia en
los alimentos son flavonoles y flavonas, isoflavonas, flavanonas
y flavandioles, antocianinas y proantocianidinas, y catequinas y
sus estructuras se presentan en la Tabla1(Bravo y Mateos2008).
Otras clases de flavonoides incluyen flavan-3-oles,
antocianidinas, chalconas y otros intermediarios biosintéticos
de la biosíntesis de flavonoides como auronas, biflavonoides y
dihidrochalconas (Bravo y Mateos2008; Stalikas2007). Él
Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5: 409–424
Las variaciones estructurales, que conducen a otras variaciones
(variaciones en las propiedades físicas y químicas) entre las
diferentes clases y dentro de las clases, dependen del grado y
patrón de hidroxilación, metoxilación, prenilación o
glicosilación (Stalikas2007). Las estructuras de diferentes
flavonoides con sus patrones de sustitución se han discutido en
detalle en diferentes revisiones y capítulos de libros (Bravo y
Mateos2008; Stalikas2007) junto con diferentes fuentes de
alimentos ricos en flavonoides. La fuente general de
flavonoides alimentarios son fuentes vegetales con algunas
excepciones. Por ejemplo, los flavonoles y las flavonas también
están presentes en algas y hongos. Los estudios han
demostrado que las partes aéreas (Bravo y Mateos2008),
especialmente las capas externas (hojas, cáscaras de frutas,
tallos y cubiertas de semillas) de las plantas son ricas en
flavonoides, lo que ha sido respaldado por el hecho de la
relación de la síntesis de flavonoides con la luz solar (Herrmann
1976). Las diferentes vías de biosíntesis de los flavonoides han
sido descritas en detalle en el libro “The Flavonoids” (Harborne
et al.1975). Se derivan principalmente de una combinación de
los productos de la vía del shikimato y la reacción de la acetil
CoA carboxilasa. Los carbohidratos en el ciclo de Calvin forman
ácido shikímico, a partir del cual se forma la fenilalanina. Estos
se convierten en cumaril CoA a través de la ruta de los
fenilpropanoides. La reacción de acetil CoA carboxilasa
convierte acetil CoA en malonil CoA. Coumaryl CoA y malonyl
CoA se combinan para formar chalconas de las que se derivan
diferentes flavonoides. Las vías de formación de diferentes
flavonoides han sido discutidas por varios autores (Stafford
1990; Hendry y Houghton1996). También se ha informado que
los aminoácidos aromáticos como la fenilalanina, la tirosina y el
malonato son los compuestos a partir de los cuales se forman
los flavonoides (Stalikas 2007).
Como se mencionó anteriormente, los flavonoides tienen muchos
efectos beneficiosos para la salud y son una parte importante de la
industria alimentaria y nutracéutica. Las frutas, verduras y diferentes
bebidas son las principales fuentes de flavonoides. Sin embargo,
durante el almacenamiento y muchas técnicas de procesamiento, el
contenido de flavonoides disminuye debido a diferentes factores de
degradación. En caso de almacenamiento, por ejemplo, se están
produciendo varias reacciones enzimáticas en diferentes sistemas
alimentarios que afectan el contenido de flavonoides. Se ha informado
que la mayor parte del contenido de flavonoides en frutas y verduras
está presente en la capa superficial, es decir, la piel, por lo que
Figura 1Núcleo Flavan, la estructura
esquelética básica de los flavonoides
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tabla 1Estructuras químicas esqueléticas de las principales clases de flavonoides

Clases de Estructura química básica

flavonoides
Flavonoles

Flavonas

catequinas

Isoflavonas

Flavanonas

antocianinas

Proantocianidinas

antocianidinas

chalcones

Datos adaptados de Bravo y Mateos (2008). Los sustituyentes son –OH, –OCH3, glucosa, galato, ramnosa, ramnoglucósido, rutinósido, galactósido o
neohesperidosido. Para las chalconas, los sustituyentes podrían ser algunos de los grupos mencionados anteriormente y algunos haluros.
412
Es muy fácil perder esos flavonoides ya que el simple pelado puede
reducir significativamente el contenido. Otros pasos de procesamiento,
como el tratamiento térmico, la maceración y la extracción de jugo,
reducen aún más el contenido de flavonoides debido a la
descomposición enzimática y térmica. La síntesis o extracción de
flavonoides de fuentes naturales y su uso para la fortificación de
alimentos procesados ayudaría a mantener altos contenidos de
flavonoides en los alimentos que consumimos. Esto daría lugar a más
opciones tanto para los productores como para los consumidores,
además de mantener la calidad nutricional esperada de los alimentos.
Métodos convencionales de extracción
Todo el procedimiento de extracción se puede dividir en diferentes
pasos, como se ilustra en la Fig.2—pretratamiento, extracción,
aislamiento y purificación (Stalikas2007). La producción de
ingredientes alimentarios funcionales/nutracéuticos también puede
implicar el paso adicional de encapsulación, que puede implicar el
simple secado o la adición y mezcla de diferentes estabilizantes
seguido del secado. Es evidente que para la química analítica en la
determinación del contenido de flavonoides así como para la
producción de flavonoides como ingredientes alimentarios, la
extracción es un paso importante del proceso. Los pasos previos al
tratamiento pueden incluir maceración, homogeneización,
trituración, molienda o secado (generalmente liofilización para
evitar la degradación de los flavonoides). El secado puede ser útil
para aumentar el rendimiento por unidad de peso de materia
prima, aumentar la vida útil de almacenamiento de la materia
prima, disminuir el espacio necesario y, en algunos casos, para
facilitar el procesamiento posterior. Maceración, trituración,
molienda, y la homogeneización aumentan el área de superficie de
contacto entre el solvente y la muestra que contiene el soluto;
siendo el soluto el flavonoide contenido dentro de las estructuras
celulares de las muestras biológicas. Estos pasos de pretratamiento
conducen a la descomposición de las estructuras celulares, lo que
mejora aún más el rendimiento de los compuestos bioactivos. Uso
de vortex seguido de centrifugación (Montedoro et al.1992),
Pretratamiento: Extracción:
• maceración
• Molienda
• Molienda
• Homogeneización
• Agitación mecánica
• El secado
Figura 2Diferentes pasos que pueden estar involucrados en la extracción de flavonoides
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agitación mecánica y extracción rotatoria continua (Guillén et
al.1996) son algunos otros métodos que se pueden aplicar para
aumentar aún más las interacciones moleculares (Stalikas2007).
A partir de varios estudios de extracción, se observa que la
elección del pretratamiento no es coherente, lo que puede
explicarse por la complejidad de las propiedades de los
flavonoides. Polaridad, acidez, presencia de grupos hidroxilo y
anillos aromáticos son algunas de estas propiedades (Stalikas
2007). Además, la matriz biológica es muy compleja y difiere
con cada fuente; la matriz biológica de una variedad de uva es
diferente de otra que también difiere con las condiciones de
crecimiento de la planta.
El método de extracción más apropiado depende de la
fuente y del tipo de flavonoide a extraer. El criterio de selección
del mejor método de extracción se basa en la mayor
recuperación, por lo que la degradación de los compuestos
debido a los diferentes pasos del proceso debe ser mínima. Se
informa que algunas formas de flavonoides (agliconas) se
absorben más fácilmente de la dieta como un compuesto
bioactivo que las otras formas de glucósidos flavonoides
(Stalikas2007). Entonces, junto con los parámetros
involucrados, la decisión sobre la elección del método de
extracción también depende del producto final requerido. Ha
habido numerosas revisiones e investigaciones sobre el avance
de diferentes técnicas de extracción con discusiones
comparativas entre ellas (Camel2001; Dai et al.2010; Kaufmann
y Christen2002; Raynie2006; Stalikas2007).
La extracción con solventes es el método más común de
extracción de flavonoides. Actualmente se utilizan diferentes tipos
de métodos de extracción por solventes, de los cuales la extracción
por baño de agua caliente (de Rijke et al.2006; Soltoft et al.2009) y
método de extracción soxhlet (Kalia et al.2008) son los más
comunes para la extracción de compuestos bioactivos, incluidos los
flavonoides. Para la comparación de métodos avanzados en
términos de su rendimiento, el método soxhlet todavía se usa como
estándar en casi todos los casos (Fan et al.2010; MacDonald et al.
2010; Pan et al.2010; Zhu et al.2010). Se usa metanol o acetona
como solvente para la extracción soxhlet de
Aislamiento y Purificación:
• baño de agua caliente • Extracción de fase sólida
• extracción soxhlet • A base de acidez
• Sonicación asistida fraccionamiento
extracción • Cromatografía de columna
• Extracción de fluidos a presión
• Extracción acelerada de fluidos
• Extracción de fluidos subcríticos
• extracción supercrítica
• Asistido por microondas
extracción
Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5: 409–424
flavonoides El proceso de extracción soxhlet utilizado en la
industria nutracéutica ha sido descrito brevemente por Wang y
Weller (2006). La utilidad y las perspectivas del método de
extracción soxhlet en comparación con los métodos modernos
de extracción han sido analizadas en detalle por Luque de
Castro y García-Ayuso (1998). El principal inconveniente en el
uso de la extracción soxlet es la combinación de largas horas
de extracción y alta temperatura que afectan la recuperación
de componentes principalmente termolábiles, lo que es
preocupante en el caso de los flavonoides (Wang y Weller2006).
El uso de grandes cantidades de disolventes también es un
problema en términos de sostenibilidad y protección del medio
ambiente.
Otro método de extracción con solventes, como la extracción
asistida por ultrasonidos, también se usa para la extracción de
flavonoides (Maksinovic et al.2005). El uso de ultrasonido (ondas de
sonido que tienen frecuencias superiores a 20 kHz) puede romper
las paredes celulares de las plantas con el consiguiente aumento de
la penetración del solvente, lo que ayuda a obtener un mayor
rendimiento de extracción. La extracción asistida por ultrasonido
puede ser una técnica de elección para componentes termolábiles
ya que la temperatura de operación puede permanecer baja
durante este proceso, manteniendo así la calidad del extracto
(Wang y Weller2006). Se han aplicado ultrasonidos en el caso de
extracción de flavonoides de diferentes fuentes como plantas
medicinales comoSelaginella doederleinii (Li et al.2010) yCitrus
aurantium (Yang et al.2010), desechos del procesamiento de
alimentos como el pericarpio de litchi (Rao2010), y pericarpio de
frutos de longan (Prasad et al.2010).
Métodos Avanzados de Extracción
Muchos métodos de extracción existentes tienen algunos
inconvenientes importantes, como un tiempo de proceso
prolongado, que eventualmente conduce a la degradación térmica
de los flavonoides (de Rijke et al.2006), y altos requisitos de
solventes, elevando los costos del proceso y reduciendo la
sostenibilidad ambiental. La presencia de oxígeno y luz durante la
extracción contribuye a la degradación adicional de los compuestos
objetivo. Algunos de los métodos de extracción más nuevos, como
la extracción de fluidos presurizados, la extracción de fluidos
acelerados, la extracción de fluidos subcríticos y la extracción
supercrítica, son útiles para mediar en los problemas de extracción
asociados junto con un mayor rendimiento extraído. Wang y Weller
(2006), Stalikas (2007) y Raynie (2006) han discutido en detalle sobre
varios métodos modernos de extracción con sus ventajas y
desventajas.
La extracción de fluidos presurizados se ha aplicado
ampliamente para la extracción de flavonoides en los últimos años
(Chen et al. 2007d; Husni et al.2009; Qian et al.2009; Vichapong et
al. 2010). Este es un método de extracción controlado donde se
mantienen temperaturas y presiones relativamente más altas,
413
disminuyendo así notablemente el tiempo de extracción,
incluso hasta menos del 50% del tiempo requerido en la
mayoría de los otros métodos (Qian et al.2009). Debido a la
aplicación de alta presión y alta temperatura, la velocidad de
extracción aumenta con el aumento de la difusividad del
disolvente en la matriz biológica. Este proceso necesita menos
solvente y la degradación oxidativa de los flavonoides es
menor, ya que el proceso está libre de oxígeno y luz (Raynie
2006; Stalikas2007; Wang y Weller2006).
La extracción por solvente acelerada es un tipo de
extracción por solvente presurizado donde el rango de
temperatura es de 50 a 200 °C, la presión generalmente varía
de 10 a 15 MPa, y el solvente permanece por debajo de la
condición crítica, en su estado líquido (Wang y Weller2006). El
solvente, en el caso de la extracción acelerada por solvente, es
usualmente un solvente orgánico (Abourashed et al.2002;
Waksmundzka-Hajnos et al.2008). El agua también se puede
utilizar como medio de extracción; donde la aplicación de alta
presión permite que el solvente se use por encima de su punto
de ebullición. Como lo menciona Raynie (2006), el agua pierde
su polaridad efectiva a estas altas temperaturas, lo que le
permite actuar como disolvente de compuestos tanto polares
como no polares. Este método también se conoce como
extracción subcrítica o extracción con agua caliente a presión.
La extracción con agua caliente se ha utilizado eficientemente
para la extracción de flavonoides (Ibanez et al.2003; Rodríguez-
Meizoso et al. 2006).
La extracción con fluidos supercríticos es otro método popular
aplicado para la extracción de muchos compuestos bioactivos. El
estado supercrítico se alcanza cuando tanto la temperatura como la
presión se elevan por encima de su valor crítico. Esto aumenta la
fluidez que explica el aumento de la transferencia de masa. Es un
método limpio, considerado respetuoso con el medio ambiente
como CO2se utiliza generalmente como disolvente. Es un método
muy eficiente para la extracción de compuestos no polares, como
CO2es un solvente no polar, sin embargo, para aumentar la
solubilidad de los compuestos polares, se pueden agregar
solventes como metanol, etanol, acetonitrilo, acetona, agua, éter
etílico y diclorometano (Wang y Weller2006). Esto aumenta la
selectividad de extracción de este método de extracción. Como se
evidencia en la literatura, la modificación de la composición del
solvente ha llevado a la extracción exitosa de flavonoides de
matrices biológicas (Catchpole et al. 2004; Liza et al.2010; Yu et al.
2007), sin embargo, para algunos compuestos muy polares, la
eficiencia de extracción de la extracción supercrítica es bastante
baja (Stalikas2007).
La extracción asistida por microondas es otro método
avanzado de extracción que se ha vuelto popular para la
separación de compuestos bioactivos de matrices vegetales. La
siguiente sección de este documento describe brevemente el
proceso de extracción asistido por microondas y compara el
proceso con otros métodos para la extracción en particular de
flavonoides de muestras biológicas.
414
Extracción asistida por microondas
Las microondas son ondas electromagnéticas no ionizantes (EM)
ubicadas entre el rango de radiofrecuencia en la frecuencia más
baja y el infrarrojo en la frecuencia más alta del espectro
electromagnético, dentro de la banda de frecuencia de 300 MHz a
300 GHz; 915 MHz se considera más útil para aplicaciones
industriales con su mayor profundidad de penetración, mientras
que la frecuencia de 2450 MHz se usa generalmente en hornos de
microondas domésticos y para aplicaciones de extracción con una
amplia gama de unidades comerciales diseñadas para fines de
química analítica.
La distribución de la energía EM en los sistemas asistidos por
microondas se rige por las ecuaciones de Maxwell con las
condiciones de contorno apropiadas definidas por la configuración
de los sistemas y las interfaces entre los materiales tratados y el
espacio restante de la cavidad. Las propiedades dieléctricas de las
muestras son los principales parámetros de propiedades de las
ecuaciones de Maxwell y, como tales, influyen significativamente en
la eficiencia de la energía EM acoplada a los materiales, la
distribución del campo EM y la conversión de la energía EM en
energía térmica dentro de esas muestras biológicas. Las
propiedades dieléctricas de un material se describen mediante la
permitividad relativa compleja (ε*relativa a la del espacio libre) en la
siguiente relación:
pag
"»¼ "0-j"00;dondej¼ ð-1Þ:
La parte real ε′,es la constante dieléctrica que refleja la
capacidad del material para almacenar energía eléctrica cuando se
encuentra en un campo EM; la parte imaginaria ε",es el factor de
pérdida dieléctrica que influye en la conversión de la energía EM en
energía térmica. La relación entre las partes real e imaginaria de la
permitividad representa otro parámetro importante, la tangente
del ángulo de pérdida (tan δmi=ε′′/ε′),que junto con la constante
dieléctrica determina la atenuación de la potencia de microondas
en una matriz biológica. Cuando se expone a un campo EM, la
cantidad de energía convertida en calor en el material biológico es
proporcional al valor del factor de pérdida ε" (Datta et al.2005;
Espiga2005).
Cada sistema de microondas consta normalmente de tres partes
básicas: la fuente de microondas, la guía de ondas y el aplicador. La
fuente de microondas es un magnetrón. Un magnetrón consta de
un tubo de vacío con un cátodo emisor de electrones central de
potencial altamente negativo que está rodeado por un ánodo
estructurado que forma cavidades, que están acopladas por los
campos marginales y tienen la frecuencia de resonancia de
microondas deseada. La potencia de salida de un magnetrón puede
controlarse mediante la corriente del tubo o la intensidad del
campo magnético. Para guiar una onda electromagnética, se
pueden usar líneas de transmisión y guías de ondas. Debido a las
menores pérdidas de energía de las guías de ondas a frecuencias
más altas, como las de las microondas, estas partes
Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5: 409–424
se utilizan para aplicaciones de potencia de microondas. La guía de
ondas se puede utilizar como aplicador para el calentamiento por
microondas, cuando el material que se va a calentar se introduce por las
ranuras de la pared y la guía de ondas termina con una carga adaptada.
Esta configuración se denomina dispositivo de ondas viajeras ya que las
ubicaciones de los máximos de campo cambian con el tiempo. Más
comunes en la industria alimentaria y las aplicaciones de hornos
domésticos son los dispositivos de onda estacionaria, donde las
microondas irradian mediante conjuntos de ranuras (que cortan las
corrientes de pared) o antenas de bocina (extremos abiertos
especialmente formados) de guías de ondas (Regier y Schubert).2005).
Los hornos de microondas pueden ser de cavidades
monomodo o multimodo. La cavidad monomodo (usada en el
caso de un horno de microondas enfocado) puede generar una
frecuencia que excita solo un modo de resonancia. La muestra
se puede colocar en el máximo del campo eléctrico ya que se
conoce la distribución del campo. La cavidad multimodo es
grande y la onda incidente puede afectar varios modos de
resonancia. Esta superposición de modos permite la
homogeneización del campo. Se incluyen sistemas como placas
giratorias para la homogeneización. La extracción por
microondas se puede operar bajo presión (con o sin regulación)
o a presión atmosférica (Letellier y Budzinski1999). El uso de
hornos domésticos de microondas en el laboratorio fue
mencionado por primera vez por Abu-Samra et al., en1975para
el tratamiento de muestras biológicas para análisis de metales.
Los primeros estudios sobre la extracción por microondas
fueron realizados por Ganzler et al. (1986). Utilizaron un horno
de microondas para calentar muestras biológicas y muestras de
suelo para extraer compuestos orgánicos. Pare et al. (1991),
patentó un proceso para la extracción por microondas de
productos naturales en 1991. Actualmente, se han desarrollado
dos tipos de sistemas de extracción por calentamiento por
microondas disponibles comercialmente: el sistema de
recipiente cerrado y el sistema de recipiente abierto. La primera
suele denominarse extracción asistida por microondas (MAE),
mediante la cual se pueden extraer muchos compuestos con
bioactividad. Esta última se denomina soxhlet asistida por
microondas enfocada o extracción con solvente, en la que la
muestra se sumerge en un solvente absorbente de microondas
en un recipiente abierto y se irradia con energía de microondas
enfocada hasta que se completa la extracción.
La principal matriz de extracción en el caso de los flavonoides es
la matriz biológica y es bien sabido que la calidad de una extracción
de un material vegetal depende en gran medida del grado de
aislamiento de los analitos de su matriz. Cuanto menor sea el nivel
de un analito en una matriz, más esencial es su recuperación y más
importante es el desarrollo de procedimientos de aislamiento
efectivos para un análisis preciso (Wianowska et al.2009). En el caso
de los flavonoides, esta regla se aplica plenamente. Con el aumento
de los precios de la energía y el objetivo medioambiental de reducir
el CO2emisiones, hay un impulso para utilizar nuevas técnicas para
la extracción de
Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5: 409–424
sustancias, que normalmente utilizan menos disolvente y energía.
Las características específicas de la interacción entre la radiación de
microondas y los solventes son un gran apoyo en este sentido, por
lo que este método se usa cada vez más y permite una mejora
significativa de la eficiencia de extracción de componentes
orgánicos (Kubrakova y Toropchenova2008). Con el calentamiento
por microondas, la transferencia de energía ocurre a través de dos
mecanismos, específicamente, por rotación de dipolos y conducción
iónica, es decir, por medio de inversiones de dipolos y
desplazamiento de iones cargados presentes en el soluto así como
en el solvente. La frecuencia de radiación corresponde al
movimiento de rotación de las moléculas; en la materia
condensada, la absorción de energía provoca inmediatamente la
redistribución de energía entre las moléculas y el calentamiento
homogéneo del medio (Kubrakova y Toropchenova2008). Durante
el calentamiento por microondas, la ruptura de los enlaces de
hidrógeno débiles promovidos por la rotación del dipolo de las
moléculas tiene lugar con la liberación de calor relacionada.
También hay migración de iones disueltos que aumenta la
penetración del solvente en la matriz, facilitando así la recolección
de los compuestos objetivo (Mandal et al.2007). Para extraer
cualquier constituyente complejo de una fuente biológica, primero
debe liberarse de la matriz con liberación celular en un solvente
adecuado (Jain et al.2009; Cannell1998). Durante el procesamiento
por microondas, se acumula una cantidad considerable de presión
dentro del biomaterial que modifica las propiedades físicas de los
tejidos biológicos mejorando la porosidad de la matriz biológica, lo
que permite una mejor penetración del solvente de extracción a
través de la matriz (Kratchanova et al.2004; Yeoh et al.2008). El
efecto de creación de presión de las microondas conduce a la
hinchazón que generalmente obliga a las células a dividirse. En el
caso de la extracción de pectina de la piel de naranja, se ha
observado que el grado de desintegración con la extracción por
microondas es mucho mayor en comparación con el método
tradicional (Zhongdong et al.2006). Mientras que en el caso del
método de extracción tradicional, la pectina permaneció
principalmente en forma de cúmulos, mientras que en el caso de la
extracción por microondas, la formación de cúmulos se rompió y la
pectina se convirtió en partículas de una manera similar a los
cristales (Zhongdong et al.2006). A veces, el proceso de extracción
por microondas se puede mejorar con un módulo de corte
mecánico que usa la fuerza física para fracturar las paredes
celulares de las plantas, lo que puede acelerar aún más la
disolución de los ingredientes activos de las células en la solución
(Jang et al. 2009). Hay muchos casos en los que las microondas se
utilizan directamente para la extracción (con o sin disolventes) o se
utilizan para el pretratamiento antes de llevar a cabo el
procesamiento final, lo que conduce a un aumento en el
rendimiento del producto final. Por ejemplo, el pretratamiento con
microondas utilizado para calentar el puré de manzana antes de
exprimir el jugo conduce a un aumento del contenido de
flavonoides en el jugo (Roberts y Gerard2004).
415
Para comprender mejor los mecanismos del proceso, la
siguiente sección detallará los factores que afectan la
extracción por microondas.
Factores que afectan la extracción por microondas
Efecto del sistema solvente
El solvente es uno de los factores más importantes en un proceso
de extracción, particularmente más en un entorno de microondas.
En general, cuanto mayor sea la constante dieléctrica y la pérdida
dieléctrica, mayor será la capacidad del solvente para absorber
energía de microondas, lo que puede conducir a una mayor
velocidad de calentamiento del solvente con respecto al material
vegetal. Pero las propiedades del solvente se pueden modificar
combinando diferentes solventes, lo que también conduce a una
selectividad variable del solvente para diferentes compuestos. Para
la extracción de compuestos termolábiles, se puede usar una
combinación de solventes con propiedades dieléctricas
relativamente más bajas para garantizar que la temperatura del
solvente permanezca más baja para enfriar los solutos una vez que
se liberan en el solvente. En este caso, la energía de microondas
interactúa preferentemente con la matriz vegetal (Kaufmann y
Christen2002) que conduce a una liberación eficiente de los
compuestos de la planta en el solvente más frío. La eficiencia de
extracción depende de la solubilidad de los analitos en el solvente
de extracción. Ambos polares (Li et al. 2009; Casazza et al.2010) y
solventes no polares (Barnabas et al.1995) se puede utilizar en la
extracción por microondas. Los flavonoides varían en polaridad, por
lo que los solventes pueden ser altamente polares o menos polares.
Se utilizan disolventes menos polares para la extracción de
agliconas de flavonoides y disolventes más polares para la
extracción de glucósidos de flavonoides y antocianinas. El benceno,
el cloroformo, el éter y el acetato de etilo son los solventes
comunes para la extracción de agliconas menos polares como las
isoflavonas, flavanonas, dihidroflavonoles, flavonas y flavonoles que
están altamente metilados (Harborne et al.1975). Los glucósidos
flavonoides más polares, como las flavonas hidroxiladas, los
flavonoles, los biflavonilos, las auronas y las chalconas, se extraen
tradicionalmente con acetona, alcohol o agua (Harborne et al.1975).
Para la extracción por microondas tanto de agliconas polares como
de glucósidos de flavonoides, los solventes comúnmente utilizados
incluyen metanol o etanol, con diferentes concentraciones
obtenidas por dilución con agua (Ding et al.2003; Terigar et al.2010;
Tsukayama et al.2010). También disolventes como la acetona
(Kothari y Seshadri2010) y el cloroformo se utilizan para la
extracción asistida por microondas. La variación en la concentración
de solventes también afecta la extracción de flavonoides como se
observa en el caso de la extracción de quercetina y rutina por
microondas usando diferentes concentraciones de etanol (Zhang et
al.2009). Se encontró que el rendimiento de extracción aumentaba
cuando la concentración de etanol aumentaba del 30 % al 50 %.
416
y disminuyen con la dilución adicional de etanol (Zhang et al.2009).
Hay muchos otros ejemplos que respaldan el hecho de que la
eficiencia de extracción se ve afectada por el tipo de solvente
utilizado para la extracción (Kiss et al.2000; Escribano-Bailón y
Santos-Buelga2003; Canción et al.2007) junto con sus diferentes
niveles de dilución obtenidos utilizando agua (Chen et al.2008;
Canción et al.2007). Se observó que no solo la composición del
sistema solvente sino también el pH del solvente pueden afectar
significativamente la diferente eficiencia de los pasos de extracción
(Stalikas2007). A medida que los científicos están más preocupados
por los impactos ambientales, el volumen de solvente se convierte
en otro factor importante a considerar y, por lo general, con la
extracción por microondas, el volumen de consumo total de
solvente disminuye (Chen et al.2007un). Sin embargo, también se
ha informado que en el caso de un sistema de extracción por
microondas de recipiente cerrado, el calentamiento es más rápido
cuando se usa un mayor volumen de solvente (Letellier y Budzinski
1999).
Las soluciones líquidas iónicas también se pueden utilizar como
disolventes potenciales para la extracción asistida por microondas
de compuestos polifenólicos, incluidos flavonoides como la
quercetina, que fue extraído por Du et al. (2009) a partir de plantas
medicinales muestras dePsidium guajavaLinn. hojas ychina smilax
tubérculos Se investigaron los líquidos iónicos, su concentración y
las condiciones de extracción asistida por microondas. Los aniones
y cationes de los líquidos iónicos influyeron en la extracción de
compuestos polifenólicos y se descubrió que los líquidos iónicos
con un sistema π aromático rico en electrones mejoran el
rendimiento de la extracción.
Efecto del Tiempo de Aplicación de Microondas
En muchos de los estudios informados, se ha observado que el
rendimiento de extracción tiende a aumentar con el aumento del tiempo
de extracción, pero se encontró que el aumento en el rendimiento es
muy pequeño con un mayor aumento en el tiempo (Wang et al. 2008b).
En el caso de los flavonoides extraídos deRadix astrágalo,hubo un
aumento en el rendimiento con el tiempo hasta una exposición de 25
min y luego el rendimiento de extracción comenzó a disminuir (Xiao et
al.2008). Como la tasa de calentamiento de los solventes polares como el
etanol y el metanol es bastante alta, debido a las propiedades
dieléctricas comparativamente altas, y la dilución adicional con agua
aumenta la capacidad de calentamiento de la combinación de solventes,
la aplicación prolongada de microondas puede conducir a la
degradación de los compuestos objetivo con sobrecalentamiento del
sistema soluto/disolvente. No obstante, se ha encontrado que el tiempo
de extracción generalmente tiene una influencia positiva en el
rendimiento del producto extraído (Lucchesi et al.2007). A veces, las
muestras se extraen en múltiples pasos utilizando ciclos de extracción
consecutivos, lo que también es un ejemplo del uso de un mayor
volumen de solvente y un mayor tiempo de aplicación de microondas
(Xiao et al. 2008). Esta práctica ayuda a mejorar aún más la
Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5: 409–424
rendimiento de extracción, evitando calentamientos prolongados con el
mismo volumen de disolvente. El uso de lotes nuevos de solvente evita
la saturación del solvente con el soluto, aumentando la transferencia de
masa y la cinética de extracción.
Efecto del nivel de potencia de microondas
La intensidad de la potencia de microondas incidente controla la
cantidad de energía suministrada a la muestra que se convierte en
energía térmica en el material dieléctrico para aumentar su
temperatura. Afecta las interacciones y la tasa de equilibrio y
controla la partición de analitos entre la muestra y el solvente (Ma
et al.2009). Generalmente, se ha observado que hay un aumento en
el rendimiento del compuesto extraído cuando hay un aumento en
la potencia de microondas (Hu et al.2008). Un estudio reveló que
cuando la potencia de microondas se incrementó de 200 a 1000 W,
el rendimiento de extracción de flavonoides deRadix astrágalose
incrementó. Sin embargo, la alta potencia de microondas podría
aumentar demasiado la temperatura del producto y disminuir el
rendimiento de extracción debido al daño del producto o la
descomposición del compuesto (Ma et al.2009). Además, se ha
encontrado que una disminución en los rendimientos de
flavonoides con el aumento de la potencia es significativa cuando se
extiende el período de extracción (Gao et al.2006; Xiao et al.2008).
Efecto de la temperatura
La extracción a alta temperatura puede ser rentable con el
consiguiente aumento de la solubilidad. Esto se debe a que una
temperatura más alta provoca un aumento de las interacciones
intermoleculares dentro del disolvente, lo que da lugar a un mayor
movimiento molecular que aumenta la solubilidad. El aumento de la
temperatura también puede provocar un aumento de la presión
celular que puede provocar la ruptura de la célula y la apertura de
la matriz celular y, como resultado, una mayor disponibilidad de los
componentes para ser extraídos en la solución. Además, a alta
temperatura, la viscosidad del solvente disminuye, aumentando su
movilidad y solubilidad, aumentando así la eficiencia de extracción
(Khajeh et al. 2009). Sin embargo, en algunos casos, se ha
observado que la eficiencia de extracción aumenta con el aumento
de la temperatura hasta que se obtiene una temperatura y una
relación de disolvente a sólido óptimas y luego comienza a
disminuir con el aumento adicional de la temperatura. Esto también
varía según el tipo de compuestos a extraer, ya que la temperatura
de degradación de cada compuesto es diferente. La temperatura
más alta o la aplicación prolongada de alta temperatura, inducida
por la aplicación prolongada de altos niveles de potencia, puede
conducir a la degradación y la subsiguiente disminución en el
rendimiento y la calidad.
Liazid et al. (2007) investigaron la estabilidad de los compuestos
fenólicos durante la extracción por microondas. Se observó que de
los 22 compuestos de diferentes familias fenólicas
Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5: 409–424
(ácidos benzoicos, aldehídos benzoicos, ácidos cinámicos,
catequinas, cumarinas, estilbenos y flavonoles), todos los
compuestos estudiados fueron estables a 100 °C, mientras que
a 125 °C hubo una degradación significativa de epicatequina,
resveratrol y miricetina. Se concluyó que los compuestos que
tienen un mayor número de sustituyentes de tipo hidroxilo, se
degradan más fácilmente en condiciones de extracción a alta
temperatura. La temperatura de trabajo durante su estudio
varió de 50 a 175 °C (Liazid et al.2007).
Xiao et al. hicieron observaciones similares. (2008), donde el
rendimiento de flavonoides aumentó notablemente con el aumento de
la temperatura de 90 a 110 °C, mientras que por encima de 110 °C, el
rendimiento aumentó solo lentamente y se encontró que el extracto
estaba chamuscado.
Efecto del área de superficie de contacto
Cuando aumenta el área de superficie de contacto del material
vegetal, generalmente aumenta la eficiencia de extracción. Debido
a esto, los pasos de preparación de la muestra incluyen los pasos
de molienda, trituración y homogeneización para que aumente la
interacción de la matriz celular biológica con el solvente. Este
concepto también se aplica para la extracción por microondas y
para la extracción de flavonoides. Xiao et al. (2008) mezcló y pasó la
muestra mezclada a través de un tamiz antes de secarla para
obtener una muestra de superficie de contacto uniforme. Kothari y
Seshadri (2010) utilizó semillas finamente molidas para la
extracción de flavonoides deAnnona escamosay carica papaya
semillas
Aplicación y Beneficios de MAE para Extracción de
Flavonoides
La extracción asistida por microondas tiene varias ventajas, que han
sido bien establecidas desde que fueron reportadas por primera
vez por Ganzler et al., en1986y la tecnología ha evolucionado bien
con el tiempo, con sistemas desarrollados para química analítica
Tabla 2Varios ejemplos de aplicación de la extracción asistida por microondas para la extracción de flavonoides en los últimos años
Material biológico
Epimedium koreamumNakai
Achillea millefoliumProa Radix
astrágalo
morus albaL hojas
Alpinia zerumbet (Pers.) Burtt et Smith deja Vitis
viniferadesperdiciar
Buddleia officinalisMáxima
Radix puerariae
Portulaca oleraceal
Uncaria sinensis
417
Aplicaciones y extracción de muestras. En la Tabla se mencionan
ejemplos de aplicaciones exitosas de MAE para la extracción de
flavonoides en los últimos años.2.
En comparación con los métodos convencionales de extracción,
la extracción por microondas puede llevar mucho menos tiempo.
Por ejemplo, la extracción soxhlet tarda al menos 1 hora y, a veces,
entre 12 y 24 horas para la mayoría de las extracciones y consume
una gran cantidad de disolvente, la extracción por microondas
tarda unos 30 minutos o menos, lo que reduce significativamente el
tiempo necesario para la extracción, que es un factor muy
importante. en el caso de aplicaciones de química analítica (Chen et
al.2007un; Ding et al.2003; Gao et al.2006; Kothari y Seshadri2010).
Los períodos de extracción prolongados y las exposiciones a altas
temperaturas en el caso del soxhlet pueden afectar significativamente la
calidad del extracto. Los compuestos termolábiles se pierden durante el
proceso, lo que conduce a rendimientos más bajos. Pero en el caso de la
extracción por microondas, como el proceso es más rápido, el
rendimiento de los compuestos bioactivos es generalmente mayor y
comparable a los métodos de extracción modernos, como la extracción
con líquido presurizado, la extracción con líquido supercrítico y la
extracción subcrítica.
Otro inconveniente de la extracción convencional es que influye
en la integridad de los glucósidos flavonoides durante la extracción
prolongada, lo que afecta la reproducibilidad y la estabilidad
(Stalikas2007), mientras que la degradación de los flavonoides se
evita durante la extracción por microondas (Gao et al.2006; Xiao et
al.2008). Por ejemplo, durante la extracción convencional de
isoflavonoides y saponinas de Radix astrágalo,se observó que los
glucósidos malonatos de flavonoides se convertían en sus
glucósidos relacionados durante la extracción convencional
prolongada, lo que afectaba a la reproducibilidad. Sin embargo, la
conversión glucosídica se inhibió cuando se utilizó la extracción
asistida por microondas (Song et al.2007). El aumento de la
reproducibilidad de los procedimientos analíticos conduce a
mejores resultados en la investigación analítica y las aplicaciones de
cuantificación de compuestos. Generalmente, el análisis sobre la
estabilidad de los flavonoides (Xiao et al. 2008) se lleva a cabo antes
de la extracción, lo que ayuda a la
Solvente Referencia
Etanol (40%) Liu et al.2006
metanol Trendafilova y Todorova2008
Etanol (90%) Xiao et al.2008 Li et al.2009
Etanol (60%)
Etanol (70%) y agua Victorio et al.2009
Metanol Casazza et al.2010
Etanol Pan et al.2010
Etanol (70%) Wang et al.2010
Etanol (70% v/v) Zhu et al.2010
Agua ultra pura Tan et al.2011
418 Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5: 409–424

investigadores para conocer la temperatura de degradación.
Esto ayuda a establecer la temperatura segura de extracción y
la optimización adecuada del proceso (Mao et al.2008; Yan et al.
2010).
A lo largo de los años, las modificaciones y la optimización de las
metodologías establecidas de extracción por microondas han dado
como resultado mejores resultados en términos de prevención de
la degradación de los flavonoides. Algunos de los métodos
avanzados de extracción mediante microondas se han resumido en
la Tabla3. Un aparato para la extracción de flavonoides de Herba
epimediifue construido que utilizó una técnica de microondas para
calentar en un modo dinámico (Chen et al. 2008). Una MT de
laboratorio010cavidad de resonancia de microondas construida por
Chen et al. (2008) se usó para concentrar la energía de microondas
y, por lo tanto, la energía necesaria para lograr una extracción
eficiente se redujo significativamente, lo que generó ahorros de
energía. Cuando se comparó el método con otros métodos de
extracción, como la extracción asistida por microondas presurizada,
la extracción ultrasónica, la extracción por reflujo térmico y la
extracción soxhlet, los resultados mostraron que el rendimiento de
extracción de flavonoides enHerba epimediiobtenido por extracción
dinámica asistida por microondas (DMAE), donde hay un flujo
continuo de solvente fresco a través del extractor de microondas,
fue mayor que el obtenido por otros métodos. Se encontró que el
rendimiento de extracción obtenido por DMAE era similar al
obtenido por extracción asistida por microondas presurizada. Pero
los flavonoides enHerba epimediino se descompuso fácilmente al
aumentar el tiempo de extracción en DMAE. El beneficio del sistema
de extracción dinámica es que puede transferir los analitos
extraídos de la matriz de la muestra con el solvente de flujo fresco
fuera del recipiente de extracción evitando el daño a los
compuestos a temperaturas de operación más altas (Chen et al.
2008). Gao et al. también utilizaron un tipo similar de tecnología. (
2006) para la extracción de flavonoides deSaussurea medusa
Máxima
células cultivadas y en otros casos como la extracción de
flavonoides deFlos sophaoae (Li et al.2004). La extracción
dinámica asistida por microondas se puede combinar con un
paso analítico directamente como se hace en la determinación
de andrographolide y dehydroandrographolide en
Andrographis paniculataNees utilizando cromatografía líquida
de alta resolución (Chen et al.2007C). Existen otras aplicaciones
similares en diferentes casos (Chen et al.2007b; Chen et al.2006
), pero hay comparativamente menos informes de aplicación de
esta tecnología con flavonoides (Chen et al. 2007un).
La extracción soxhlet de microondas enfocada de
compuestos puede demostrar ser una combinación eficiente de
extracción soxhlet y microondas y ha sido reportada por
muchos (Garcia-Ayuso et al. 1998; Luque de Castro y García-
Ayuso1998; Prados-Rosales et al.2002y2003), pero aún falta en
la literatura su aplicación para flavonoides a partir de matrices
biológicas. Como el proceso parece ser prometedor en otros
campos, se puede esperar que la aplicación de esta nueva
tecnología también sea útil con los flavonoides.
Otra ventaja notable del uso de microondas es que tanto los
compuestos polares como los no polares se pueden extraer
simultáneamente durante la extracción con microondas. Se
aplicó con éxito MAE simultáneo de compuestos polares
(biofenoles) y no polares (ácidos grasos) de alperujo (un residuo
obtenido del proceso de decantación en dos fases utilizado en
la industria del aceite de oliva) usando una mezcla de dos
solventes de extracción adecuados en un corto tiempo de
proceso (Pérez-Serradilla et al.2007). La prevención de pasos
adicionales que consisten en la aplicación de procesos
individuales para la extracción de compuestos polares y no
polares ayuda a prevenir la degradación de la matriz biológica y
el compuesto objetivo.
El uso de solventes polares ayuda en el calentamiento eficiente del
solvente por microondas, lo que conduce a un calentamiento eficiente de

Tabla 3Métodos avanzados de extracción por microondas para la extracción de flavonoides utilizados en los últimos años

Método Biomaterial Referencia

Extracción asistida por microondas de alta presión Acanthopanax senticosussale de Liu et al.2005
Extracción dinámica asistida por microondas acoplada Platycladus orientalis (L.) Franco Chen et al.2007un
con derivatización en línea y detección ultravioleta-
visible
Extracción dinámica asistida por microondas directamente Andrographis paniculatanees Chen et al.2007C
acoplado con cromatografía líquida de alta
resolución de paso analítico
Extracción dinámica asistida por microondas Herba epimedii Chen et al.2008
Extracción al vacío asistida por microondas Hierbas chinas (Rizoma polígono Wang et al.2008un
Cuspidati, Myrica rubra,yFlos
carthami)
Hidrodifusión por microondas sin disolventes Cebolla (Allium cepal.) Zill-e-Huma et al.2009
y extracción por gravedad
Hidrodifusión por microondas sin disolventes Espino cerval (Hippophae rhamnoides)subproductos alimentarios Perino-Issartier et al.2010
y técnica de gravedad
Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5: 409–424
la matriz solvente/biológica y la extracción más rápida de los
flavonoides. También los solventes como el hexano y el cloroformo, que
son más transparentes a la EM (absorben menos energía), se pueden
usar de manera efectiva para extraer compuestos termolábiles. En el
caso de los flavonoides, generalmente se utilizan disolventes polares
aunque también se han utilizado disolventes iónicos. El agua también
puede ser un solvente potencial para compuestos polares y no polares
cuando se usa microondas para la extracción, lo que puede ser una
opción cuando se requiere un proceso más amigable con el medio
ambiente. Como la conducción iónica es uno de los efectos directos del
calentamiento por microondas, la velocidad de calentamiento aumenta
con la adición de solventes iónicos (Sparr Eskilsson y Björklund2000). Los
solventes iónicos pueden absorber energía de microondas de manera
eficiente y aumentar también la selectividad de calentamiento de
microondas (Du et al.2007; Du et al.2009). La extracción por microondas
sin solventes es el desarrollo reciente en el campo de la extracción por
microondas y ha sido ampliamente utilizada para la extracción de
aceites esenciales (Lucchesi et al.2004a; Lucchesi et al.2004b; Lucchesi et
al.2007; Wang et al. 2006) pero aún no se ha explorado su uso para los
flavonoides.
También se informa que una de las mayores ventajas del MAE es
el menor uso de disolventes orgánicos, que puede mejorarse aún
más mediante la reutilización de los disolventes orgánicos
mediante el uso de un condensador con flujo continuo de agua
helada para condensar el vapor que se escapa. para que el solvente
pueda ser reciclado en el proceso de extracción repetidamente
(Mao et al. 2007).
Existe una clara ventaja de utilizar la extracción asistida por
microondas para muestras pequeñas, ya que la tecnología permite
la determinación de analitos en muestras pequeñas de tan solo 0,1
g. Los tamaños de muestra pequeños ayudan a mantener las
concentraciones de compuestos en los extractos para superar la
pérdida de sensibilidad causada por la dilución (Jin et al.1999). La
extracción con bajo volumen de solventes disminuye el tiempo
requerido para la evaporación de estos solventes, lo que podría ser
el próximo paso de mejoras en la investigación analítica. Esto
también evita la degradación de los compuestos durante el
calentamiento prolongado requerido para la evaporación del
solvente.
La extracción convencional de flavonoides implica a menudo la
adición de un ácido. El uso de la extracción por microondas puede,
en la mayoría de los casos, reducir la necesidad de un ácido (Gao et
al. 2006; Kothari y Seshadri2010; Xiao et al.2008). Sin embargo, en
los casos en que se utilizan ácidos, como para la extracción de
antocianinas (Sun et al.2007; yang y zhai 2010), se pueden utilizar
ácidos menos concentrados con microondas en comparación con
los métodos convencionales de extracción, sin afectar el
rendimiento final. El uso de ácidos menos concentrados reduce los
riesgos de seguridad causados por la acumulación rápida y
excesiva de presión en los recipientes de reacción. El poder
oxidante de los ácidos diluidos puede ser menor, pero absorben
más energía de microondas a medida que hay más agua (Wong et
al.1997).
419
Comparación de la extracción asistida por microondas
con otros métodos de extracción modernos
En aplicaciones de química analítica se ha observado que la extracción
por microondas obtiene rendimientos similares o superiores a la
extracción por ultrasonidos en el caso de los flavonoides (Song et al.
2007) y se ha observado que la combinación de ambos aumenta aún
más el rendimiento de extracción (Lou et al.2010). Para la extracción de
ultrasonido, la potencia máxima se observa en las proximidades de la
superficie radiante de la bocina de ultrasonido y, a medida que nos
alejamos de la fuente, la intensidad disminuye. La presencia de
partículas sólidas puede disminuir aún más la intensidad. Por lo tanto,
generalmente es necesario agitar y sacudir adicionalmente para evitar
ondas estacionarias o la formación de regiones sólidas libres para
asegurar una estimulación adecuada para una extracción mejorada
(Wang y Weller2006). Mientras que para la extracción por microondas, el
proceso óptimo tiene lugar en la región de máxima potencia
electromagnética que también puede requerir agitación para mejorar el
rendimiento. Por lo tanto, la combinación de ambos métodos puede
aliviar la carga de sus debilidades para mejorar la extracción.
Se ha descrito que la extracción asistida por microondas en
recipiente cerrado es similar a la extracción con líquido presurizado que
se utiliza con éxito para la extracción de flavonoides (Chen et al.2007d;
Qian et al.2009). Los sistemas cerrados permiten realizar experimentos
en un ambiente cerrado lo que evita la contaminación y pérdida de
compuestos volátiles y reducen los posibles errores durante la
transferencia de la muestra de un contenedor a otro. La extracción por
microondas de recipiente cerrado se usa generalmente para condiciones
extremas de temperatura y presión que pueden no ser las más
adecuadas para aplicaciones alimentarias (Llompart et al.1997a;
Llompart et al. 1997b). Se debe explorar el uso de un sistema de
microondas de recipiente cerrado en condiciones estrictas y controladas
para la extracción de flavonoides, ya que podría producir mejores
resultados similares o mejores que la extracción líquida presurizada,
reduciendo aún más el tiempo y la energía de microondas requerida.
Como se mencionó anteriormente, la extracción con fluidos
supercríticos es un método prometedor en términos de rendimiento de
extracción y es uno de los métodos más comparables con la extracción
asistida por microondas. Sin embargo, algunos de los atributos
operativos de la extracción por microondas son más versátiles que en el
caso de la extracción con fluido supercrítico. En extracción supercrítica,
CO2es el principal solvente, pero el proceso no es eficiente para la
extracción de compuestos polares. Para la extracción de compuestos
polares, se deben agregar solventes polares como metanol o etanol, lo
que disminuye la selectividad de extracción. La alta concentración de un
modificador de polaridad puede conducir a una temperatura de la
mezcla más baja que la temperatura crítica, lo que cancela el beneficio
de usar la extracción supercrítica (Camel2001). Por otro lado, la
extracción por microondas se puede utilizar para la separación eficiente
de compuestos polares y no polares. Una gran ventaja
420
permanece en el caso de la extracción con fluidos supercríticos por su
idoneidad en la extracción de compuestos volátiles. Esta propiedad
ventajosa se puede obtener con la extracción por microondas utilizando
un sistema cerrado y enfriando el recipiente de extracción a una
temperatura más baja antes de liberar la presión (Kaufmann y Christen
2002). Otra ventaja de usar extracción por microondas en lugar de
extracción con fluido supercrítico es que se puede evitar el secado de las
muestras para la preparación de muestras con extracción por
microondas, mientras que todas las muestras generalmente se secan
antes de la extracción supercrítica (Stalikas2007). Cuando se utilizan
microondas para la extracción, el agua es un parámetro clave, ya que las
microondas interactúan con las moléculas de agua presentes en las
glándulas celulares y los sistemas vasculares de la matriz biológica de la
planta, lo que provoca un calentamiento rápido y un aumento de la
temperatura. Esto conduce posteriormente a la ruptura de las paredes
celulares y la liberación rápida de compuestos bioactivos (Camel2001).
La extracción con fluidos supercríticos también depende más de la
matriz, ya que para cada matriz se debe optimizar el proceso de
extracción de ciertos compuestos. La extracción por microondas
depende menos de la matriz ya que inicialmente utiliza condiciones
menos selectivas al usar solventes orgánicos de amplio espectro (Camel
2001).
La extracción por microondas es un método más nuevo con sus
propios beneficios y desventajas, sin embargo, con las muchas
observaciones e investigaciones de la literatura, la extracción asistida
por microondas parece tener aplicaciones potenciales continuas.
Futuro de MAE de Flavonoides
La extracción asistida por microondas tiene resultados notables de
rendimiento, calidad y selectividad que han ayudado a conservar su
utilidad. Con la modificación continua del equipo y el uso de
microondas, los desarrollos han contribuido a establecerlo como
uno de los principales métodos de extracción analítica. A lo largo de
los años se han producido algunas modificaciones importantes en
los procesos básicos de extracción mediante microondas, que se
mencionan brevemente a continuación.
Se desarrolló un proceso de extracción conocido como
hidrodifusión por microondas utilizando la combinación de
calentamiento por microondas y trabajo por gravedad a presión
atmosférica. En este método simple, el material vegetal se coloca
directamente en un reactor de microondas sin ningún solvente o
agua añadida. El calentamiento interno del agua in situ dentro del
material vegetal distiende las células vegetales y conduce a la
ruptura de las glándulas y los receptáculos celulares. El
calentamiento bajo microondas libera así moléculas de interés
junto con agua in situ. Este fenómeno físico, conocido como
hidrodifusión, permite que el extracto se difunda fuera del material
vegetal y caiga por gravedad fuera del reactor de microondas a
través de un disco perforado (Ferhat et al.2007). Un intercambiador
de calor fuera del horno de microondas enfría continuamente el
extracto. Jugo o extracto crudo (agua in situ y metabolitos)
Tecnología de bioprocesos alimentarios (2012) 5: 409–424
lites) se pueden recoger y separar en matraces receptores. Es
importante señalar que este método permite la extracción de
sustancias naturales sin destilación o extracción con solventes, que
son las operaciones unitarias que más energía y solventes
consumen. Las pérdidas de algunos compuestos volátiles, los
largos tiempos de extracción, la degradación de compuestos
insaturados o éster a través de efectos térmicos o hidrolíticos son
algunas de las principales desventajas de los métodos de extracción
comunes, como la hidrodestilación tradicional o la destilación al
vapor. Estas desventajas se superan en la extracción por
microondas sin disolventes, que se está volviendo cada vez más
popular para la extracción de fitoquímicos.
Se ha informado que la extracción asistida por microondas es un
sustituto económico de las técnicas de extracción de
homogeneización y vórtex utilizadas de forma rutinaria (Akhtar2005
). También se ha observado que el método MAE seguido de la
determinación HPLC-UV-ELSD es un método simple, rápido y
confiable para la evaluación de la calidad de los extractos (Song et
al.2007). La difusión de vapor por microondas es uno de los otros
métodos que se desarrolló como un proceso más limpio y nuevo
diseñado y operado para el aislamiento de aceites esenciales y se
comparó con la difusión de vapor convencional. La combinación de
MAE con la extracción de microondas en fase sólida también se ha
probado como un método de extracción de compuestos volátiles en
algunos de los materiales vegetales y durante estos estudios se ha
encontrado que el rendimiento del producto final es alto y consume
menos tiempo (Zhou et al. 2009). Esto muestra una gran promesa
para la extracción de flavonoides por microondas.
A veces, el proceso de extracción asistido por microondas
está respaldado por alta presión, lo que mejora
significativamente la eficiencia del proceso de extracción. En la
extracción asistida por microondas a alta presión, la tasa de
aumento de la temperatura y la presión del sistema parecía
estar relacionada con la capacidad del solvente para absorber
energía de microondas, su calor específico y su calor de
vaporización. La combinación de tecnología de microondas y
presión se ha aplicado con éxito para la extracción de
ginsenósidos (Zhang et al. 2008; Wang et al.2008b), y muestra
potencial para la extracción de flavonoides.
También se ha demostrado que el acoplamiento de la extracción
asistida por microondas y la extracción del punto de
enturbiamiento (extracción mediante separación de fases a una
temperatura específica para un disolvente en el que los sólidos
disueltos ya no son completamente solubles) podría emplearse
como un enfoque nuevo y eficaz para la extracción rápida y
preconcentración de ingredientes farmacológicamente activos de la
raíz de regaliz sin perturbar el análisis cromatográfico posterior
(Sun et al.2008). La masa de la porción analítica debe seleccionarse
cuidadosamente para evitar una presión excesiva durante el
proceso de digestión. Para cada matriz alimentaria, las condiciones
óptimas de microondas se rigen por sus propiedades (Khajeh et al.
2009).
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Conclusiones
En general, los procesos de extracción asistidos por
microondas son mejores o comparables con los
métodos de extracción por solventes convencionales. La
optimización de los parámetros del proceso y el uso de
tecnologías modernas pueden mejorar
significativamente las eficiencias de extracción. Por lo
tanto, para la mejora de la extracción de flavonoides,
aún queda mucho por explorar en términos de
parámetros y tecnologías del proceso de extracción. Ha
habido muchos avances en investigación y desarrollo en
la extracción asistida por microondas de una serie de
compuestos vegetales, sin embargo, se ha avanzado
muy poco en la extracción de flavonoides asistida por
microondas. Teniendo en cuenta todos los factores del
proceso y su combinación potencial, se puede
desarrollar un proceso optimizado.
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