Reporte Experimental Bioquímica General y Estructural 2022-II

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NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Cinética enzimática de la ureasa

OBJETIVO GENERAL
Determinar los diversos factores que influyen en la actividad de las enzimas y la manera en la que pueden ser
observados y medidos en el laboratorio, tomando como ejemplo a la ureasa producida por el frijol de soya.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Anote los resultados de acuerdo con las instrucciones de su asesor, todos los equipos deberán tener los
datos y gráficas correspondientes de una cinética completa.

Efecto del pH sobre la velocidad de la reacción. Equipo: _______8____

moles de
Volumen de
urea
Tubo pH titulación
hidrolizadas/
corregido
30 min
1 0.05 2.5
5
2 6 0.1 5
7.2
3 0.3 15
8.5
4 0.1 5
10
5 0 0

Efecto del tiempo en la velocidad de reacción. Equipo: _____10_________

moles de
Volumen de
urea
Tubo Tiempo (min) titulación
hidrolizadas/X
corregido
min
10
0.5 25
20
0 0
30
0.3 15
40
0.3 15
50
0.4 20

Efecto de la temperatura en la velocidad de la reacción: Equipo:____2________

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moles de
Volumen de
urea
Tubo T (oC) titulación
hidrolizadas/30
corregido
min
0°
1 0.2 10
T° ambiente
2 0.3 15
25°
50°
3 0.4 20
70°
4 0.3 15

90° 0.1 5
5

Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de la reacción: Equipo: ___4_____

Concentración moles de
Volumen
inicial de urea urea
Tubo de titulación
en mmoles/mL hidrolizadas/30
del blanco
en el medio min
1 0.2 0 0
2 0.5 0.3 15
3 0.7 0.1 5
4 1 0.1 5
5 1.5 0.2 10
2 0.2 10
6

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

* Preguntas que deben contestar antes de realizar la práctica

°Explique qué tipo de enzima es la ureasa ¿De qué fuentes se puede extraer?

La ureasa es una metaloenzima que requiere dos modificaciones postraduccionales importantes, dependientes de la
hidrólisis de GTP y consisten en una carbamoilación en un residuo de lisina y la inserción de dos iones de níquel en el
sitio activo. Se encuentra principalmente en semillas, microorganismos e invertebrados

* Escriba la reacción que cataliza la ureasa indicando sustrato, productos y condiciones de reacción.
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* Defina cinética enzimática e indique que factores se estudiarán en la práctica.

La cinética enzimática es el campo de la bioquímica que se encarga de la medición cuantitativa de los índices de
reacciones catalizadas por enzimas, y del estudio sistemático de factores que afectan estos índices

 pH
 Tiempo
 Temperatura
 Concentración del sustrato

* Explique la función de cada reactivo o solución durante la práctica:

Alcohol al 30 % Homogeneizar los frijoles para extraer el sustrato

Urea 0.25 M Es el sustrato para la reacción

Buffer de fosfatos a Propicia un pH adecuado para la enzima

diferentes pH
Bicloruro de mercurio Para inhibir la acción de la ureasa
al 1 %

HCl 0.1 N Se utiliza para realizar la titulación

Solución de rojo de Es el indicador de Ph

metilo al 1 %, indique Color:  varía desde rojo (pH 4,2) a amarillo (pH 6,3)
rango de vire y color Rango de vire: Actúa entre pH 4,2 y 6,3

Anote el orden de adición de los reactivos en los tubos blanco y problema

Urea Urea
+Buffer +Solución buffer
+Bicloruro de mercurio +Ureasa
+Ureasa +Bicloruro de mercurio
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Tubo blanco tubo problema

Encierre en color rojo el bicloruro de mercurio. Explique porqué se adiciona en diferente orden en ambos tubos:
A los blancos se le adiciona para inhibir la reacción e inactivar la ureasa y asi hidrolizar menos urea. Es por eso que
en estos se agrega antes.

Trace las gráficas teóricas de pH, temperatura y [sustrato] de la cinética de la ureasa, indicando los valores óptimos
explicando brevemente el comportamiento en cada una de ellas.

Estudia la velocidad de las reacciones bioquímicas; su estudio se basa en la velocidad de cambio que tiene lugar en
la concentración de reactivos o de productos por unidad de tiempo. Los factores principales que afectan la actividad
enzimática son: concentración de enzima, de sustrato, pH, temperatura e inhibidores.

Relación de la velocidad con la concentración de enzima la velocidad de la reacción es directamente proporcional a la

concentración de la enzima a cualquier concentración de sustrato.

Complete la siguiente tabla de acuerdo con su trabajo experimental.

Parámetro Variable Variable Parámetros

dependiente independiente constantes
Temperatura
Tiempo
pH
[Urea]
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Trace los gráficos de velocidad de reacción contra cada uno de los factores que se trabajaron experimentalmente.
Tome en cuenta que la velocidad de reacción se expresa en micromoles/30 min (micromoles de urea hidrolizadas
durante 30 minutos).

Gráfica 1: Efecto del pH

sobre la velocidad de
reacción.

Gráfica 2: Efecto del

tiempo en la velocidad
de reacción.
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Gráfica 3: Efecto de la
temperatura en la
velocidad de reacción.

Gráfica 4: Efecto de la
concentración sobre la
velocidad de reacción.

Indique sobre el gráfico los valores óptimos que se observan en cada caso.
¿Los gráficos obtenidos con sus datos experimentales, cumplen con el comportamiento teórico? Justifique su
respuesta

Algunos gráficos obtenidos no cumplen con el comportamiento teórico, ya que la relación de velocidad y actividad
enzimática de la reacción debe ser directamente proporcional a la concentración de la enzima a cualquier
concentración de sustrato.

Enliste las condiciones óptimas de trabajo de la enzima que determinaron experimentalmente:

pH= 5
tiempo=
temperatura=

Calcule el valor de Km del gráfico Velocidad de reacción vs [urea] KM =

¿Cuál es la interpretación de este valor?
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Fotografías tomadas de la práctica

CONCLUSIONES:

Se interpretó que cuando hay más o menos enzimas, afecta al gráfico esperado.
Mientras haya suficiente enzima y zonas activas, existirá una mayoría de altas en resultados. En nuestro
experimento existió la diferencia en variables (Y) por las grandes o pequeñas cantidad de concentración que
administramos.
Aunque en los productos hayamos obtenido reacción, no se consiguió el resultado esperado con aumento uniforme.

REFERENCIAS:

Orozco. E (2016). Aspectos estructurales y mecanísticos de la enzima ureasa y sus proteínas accesorias. ResearchGate.
https://www.researchgate.net/publication/316793402_Aspectos_estructurales_y_mecanisticos_de_la_enzima_ureasa_y_sus_prote
inas_accesorias

S. (2020). Ureasa. Química.es. Geraadpleegd op 1 mei 2022, van https://www.quimica.es/enciclopedia/Ureasa.html

QFB. Alquicira J. A. (2020) “ENZIMAS”. Material teórico, diapositivas.