Fosfolipasa

María Antonia Parra González 1006126657

Las fosfolipasas son enzimas del grupo de las hidrolasas, que tienen como función
hidrolizar enlaces Ester que hay en los fosfolípidos, hay varios tipos de fosfolipasas y se
clasifican en  A1, A2, B, C o D a partir del descubrimiento de estas enzimas se ha
tratado de comprender los aspectos estructurales y funcionales básicos pues se han
encontrado gran cantidad de secuencias y estructuras cristalinas
Estas cumplen varias funciones como por ejemplo en el veneno de serpiente, las
enzimas con actividad de fosfolipasa A2 debido a su importancia en el proceso y los
síntomas del envenenamiento, también Las diversas fosfolipasas pueden desempeñar
funciones clave en varios procesos celulares en las plantas que influyen en el
crecimiento y desarrollo de estas:
 En el caso del tubérculo patata, la localización subcelular de la fosfolipasa A pPLA
relacionada con patatina (que son las principales proteínas de almacenamiento en los
tubérculos de patata) hace especular que la enzima podría ejercer su función a través
de la hidrólisis de los lípidos de la membrana del cloroplasto, también se encuentra que
algunas fosfolipasas A pueden regular los niveles de celulosa a través de la departicion
de carbono, por otro lado, pueden tener un papel en la regulación del flujo de carbono
central involucrado en la biosíntesis de la pared celular
 Los FFA y los lisolípidos como productos de los pPLA son los mediadores celulares, y
pueden actuar de otros modos que son desconocidos en los qué pueden regular las
funciones de las plantas. Por ejemplo, cuando se tiene que la actividad de pPLA se
activa con el tratamiento con elicitor (compuestos que actúan como señalizadores de
peligro) y esto da repercusiones que influyen en la regulación transcripcional de la
subunidad α de la proteína G heterotrimérica, es decir que produce la salida de algunos
protones para reducir el pH en el citosol(1)
También varios experimentos revelaron que los ácidos grasos insaturados producidos
por pPLA podrían estimular una proteína quinasa involucrada en la ruta de la MAP
quinasa. Pero también, esta puede determinar los efectos citotóxicos y neurotóxicos
sobre las células tumorales cerebrales y los cultivos primarios neuronales a partir del
veneno de serpientes como por ejemplo la Crotalus molossus nigrescens, además de
que estos venenos tienen toxinas con actividades antimicrobianas, antivirales,
anticoagulantes, analgésicas y antitumorales.
Modo de extracción de la fosfolipasa A2 en veneno de serpiente:
Se debe extraer el veneno de los colmillos de la serpiente y seguidamente, fraccionarlo
en una columna HPLC C-18 con condiciones específicas, con el fin de hacer una
separación realizando a un caudal de 1 ml /min y un gradiente de 0 - 60 %, allí se pone
en un espectrómetro de masas con trampa de iones para así determinar la secuencia
de aminoácidos y de allí unas secuencias de proteínas. Para determinar la actividad de
PLA2 del extracto acuoso se utiliza un kit de ensayo colorimétrico de PLA2 secretor
para dar varios muestreos.(2)
Loa muestreos anteriores tienen varias funcionalidades como la realización de Ensayos
citotóxicos, por ejemplo, en ensayos in vitro de células cancerosas y cual es el nivel de
absorbancia de la enzima del veneno liofilizado, con el fin de encontrar agentes
antineoplásicos presentan un grado de citotoxicidad no tan alto para que puedan servir
y constituir el régimen estándar para la quimioterapia de pacientes con cáncer.
Un hallazgo destacado de las investigaciones acerca del veneno de serpiente fue que
estas neurotoxinas mostraron una cinética comparable de liberación de lisofosfolípidos,
es decir, de actividad enzimática, en neuronas, en contraste con las grandes diferencias
en la actividad sobre sustratos de fosfolípidos en ensayos in vitro no celulares(3) esto
da a entender que no es necesaria la hidrólisis de los fosfolípidos para ejercer la
neurotoxicidad y que no hay correlación entre la toxicidad y la actividad de PLA2
Modo de inhibición con Morinda citrifolia:
Se puede encontrar en los extractos acuosos de la cáscara y pulpa de Morinda una
acción moduladora sobre la hemostasia y actividad enzimática ejercida por fosfolipasas
A2 y proteasas, pues en estudios en que se utiliza veneno de serpiente, y sangre
utilizada para las actividades hemolítica y trombolítica, La actividad de esta se mide
dependiendo del volumen de fluido liberada por cada trombo.
Al realizar este tipo de experimento y evaluar los efectos directos de los extractos sobre
la membrana de los eritrocitos se tuvo en cuenta la evaluación del potencial para inhibir
la citotoxicidad inducida por veneno, se obtuvieron resultados de inhibiciones entre 6%
y 56% en la actividad caseinolítica dependiendo de la concentración de los extractos
acuosos de dicha planta, por tanto se llema a la concluson de que los compuestos
presentes en los extractos acuosos de Morinda citrifolia en la pulpa y cáscara fueron
capaces de modular la actividad de enzimas como fosfolipasas A2 y proteasas
(especialmente serina proteasas de tipo trombina y metaloproteasas hemorrágicas).
Estas enzimas son responsables de los cambios en la hemostasia, como la
coagulación, la formación de trombos.(4)
Estructura General de las fosfolipasas C:
PLC, en estas lo que se hace es  hidrolizar el enlace fosfodiéster cerca del lado del
glicerol para producir un grupo de cabeza fosforilado y DAG. En este grupo se
encuentran las no especificas NPC y las específicas de fosfatidilinositol (PLC)
Para las NPC tenemos que solo se encuentran en bacterias y plantas superiores, se
compone de secuencias de proteínas muy diversas que podrían ser responsables de la
diversidad funcional de diferentes fosfolipasas que hacen parte de este grupo.
Estas hidrolizan fosfolípidos de membrana comunes como PC (Fosfatidilcolina) y PE.
Por otro lado, tienen una distribución subcelular muy singular, debido a la presencia de
secuencias señal en N-terminal en NPC1, NPC2 y NPC6; pues la NPC1 se encuentra
en el retículo endoplasmático, el aparato de Golgi entre otros, NPC2 en el aparato de
Golgi en las raíces y NPC6 aparato de Golgi en las raíces
PLC de hidrólisis de fosfoinositida (PI -PLC) en plantas: Son enzimas importantes en el
crecimiento de las plantas, el desarrollo y las respuestas al estrés, pero el mecanismo
de acción de los PI-PLC sigue siendo difícil de alcanzar en las plantas
Los PI-PLC de plantas contienen varios dominios estructurales conservados, incluidos
los dominios catalíticos que son importantes pata la actividad de la fosfoesterasa y
también desempeña funciones vitales en las enzimas, uniéndolas a la membrana
plasmática.
La localización subcelular y afinidades de sustrato de estas dependen del Ca 2+ que
modula su actividad, y el pH óptimo para la hidrólisis es de 6,0 - 7,0 y 6 - 6,5. Y se
localizan en órganos reproductivos y vegetativos, incluidos raíces, tallos, hojas, flores y
frutos
Estructura General de las fosfolipasas D:
La PLD hidroliza el enlace fosfodiéster de los sustratos, por ejemplo, la fosfatidilcolina
(PC) del sustrato podría metabolizarse en el segundo mensaje ro ácido fosfatídico (PA)
y colina, se clasifican en C2 - PLD y PHPX - PLD, la presencia de detergentes como
SDS y milimolar Ca 2 + estimula la actividad de los PLD. La secuencia de estos se forma
de hasta 200 a 1300 aminoácidos, en estos se pueden encontrar residuos de
aminoácidos AA denominados (HKD), en su mayoría los PLD comparten dos motivos
HKD conservados con cada subdominio HKD que consta de 200 a 400 AA, pero los
eucarióticos solo tienen un motivo de estos. En particular, muchos de los residuos en
esta superficie de interacción se conservan entre C2- PLD(5)
De los residuos de estos aminoácidos, los mas importantes son el residuo de histidina
pues cada subdominio HKD es responsable de la formación del intermediario
fosfohistidina con el sustrato, y el residuo de lisina (K) participa en la estabilización del
sustrato y del intermediario enzima-sustrato
Los PLD tienden a moverse hacia las membranas para hidrolizar los lípidos de la
membrana cuando las plantas enfrentan estrés, por tanto se encuentra presente en
membrana plasmática, los núcleos, la membrana intracelular y las mitocondria. Por otro
lado, se han identificado muchas isoformas de PLD en células eucariotas, en los
mamíferos hay 6 isoformas, pero en las células vegetales hay más cantidad.
La característica esencial que define los genes PLD de mamíferos es la presencia de
dos dominios catalíticos; HKD N-terminal y HKD C terminal, en los que exactamente las
histidinas de ambos dominios HKD coordinan directamente la reacción de
transfosfatidilación.
En un PLD canónico eucariótico se pueden llegar a encontrar dos dominios, un dominio
catalítico ubicado en el terminal C que alberga dos motivos HKD, y un dominio
regulador N-terminal que tiene un dominio de homología de phox (PX) / homología de
pleckstrina
Activación: Estos pueden ser activados por cationes divalentes, como los son el calcio,
el magnesio o el zinc. Además, la endonucleasa como el PLD de un HKD necesitan
dimerización (reacción química en la que dos monómeros forman una estructura
química única) esto crucial para la activación de un HKD PLD como PLD6 (Isoforma del
PLD en mamíferos). Se ha encontrado que la activación de PLD inducida por agonistas
en respuesta a una amplia variedad de agentes de señalización, incluidos
neurotransmisores, hormonas, ligandos de matriz extracelular y mitógenos por medio
de cromatografía en capa fina con el fin de hallar mecanismos que regulan la actividad
de la PLD y las consecuencias fisiológicas que esta genera.(6)
Regulación de la fosfolipasa D:
El mecanismo de regulación de PLD depende en gran medida del sistema modelo
examinado, pero principalmente por tres tipos de proteínas: PKC, Rho GTP asas y ARF
GTP asas. La actividad de PLD está regulada por muchas señales extracelulares.
Agentes que actúan a través de los receptores de tirosina: b-FGF, FEAG, PDGF, ATP,
adenosina; como las Líneas de células madre hematopoyéticas, células acinares
pancreáticas, Feocromocitoma, células endoteliales entre otros. Por otra parte, Las
proteínas ARF también pueden mediar en la activación de PLD
A raíz de enfoques farmacológicos que inhiben la generación de PA por PLD, se ha
encontrado que muchos efectos dependientes de agonistas requieren actividad de PLD,
pues la ARF (factor de ribosilación de ADP) regula PLD Y ESTO ha llevado a la
evaluación de la función de PLD en el transporte de Golgi. Como resultado se llega a
que la actividad de PLD dependiente de ARF en fracciones de membrana de Golgi
Roles fisiológicos y patológicos de diferentes PLD:
Se ha hayado evidencia de que la actividad de la PLD aumenta en respuesta a una
serie de agonistas (sustancia que es capaz de unirse a un receptor celular provocando
acción similar a la producida por una sustancia fisiológica de los receptores, como los
agonistas de la tirosina quinasa del receptor (RTK), el factor de crecimiento epidérmico.
Agentes farmacológicos que modifican la actividad:
Los agentes que modulan esta actividad lo hacen a través de la activación de la
superficie celular, o por activation of upstream pathways, Los agentes más utilizados
para inhibir la actividad de la PLD son alcoholes primarios como el etanol y el 1-butanol,
pero estos no son verdaderos inhibidores de la PLD si no que se utilizan como sustratos
que compiten eficientemente con agua durante la reacción de transfosfatidilación.
fosfolipasa D1 y fosfolipasa D2:
PLD1 está regulado por una serie de moléculas de señalización, incluidas PKC y
pequeñas GTP asas en cambio. PLD2 no esta regulado por Rho o PKC, y su activación
por las proteínas ARF parece ser pequeña en comparación con los efectos de ARF
sobre la actividad de PLD1, en algunos casos PLD2 es la principal isoforma de
señalización
En conclusión las fosfolipasas tienen gran cantidad de funciones fisiológicas y
patológicas, como la digestión de alimentos, la fertilización, efectos neurotóxicos,
 actividad bactericida, señalización celular, aun así se encuentran incógnitas acerca del
modo de funcionamiento de estas en algunos compuestos o especies vegetales pues
se carece de información acerca de roles biológicos, acciones no tóxicas de potencial
uso, determinantes moleculares de la toxicidad entre otros por qué en el tiempo que
estamos y no hay información de n las vías intracelulares asociadas con las acciones
tóxicas de las PLA2, de las relaciones filogenéticas de las PLA2 en el veneno, o por
ejemplo la que más nos podría interesar como químicos farmacéuticos que son Las
actividades biológicas de las PLA2, no relacionadas con la toxicidad, y cuáles son los
usos farmacéuticos potenciales, es decir que es de vital importancia seguir estudiando
estas enzimas para poder hallarle alternativas farmacológicas a su acción.
1. Ali U, Lu S, Fadlalla T, Iqbal S, Yue H, Yang B, et al. The functions of phospholipases and their hydrolysis
products in plant growth, development and stress responses. Progress in Lipid Research [Internet]. 2022
Apr;86:101158. Available from: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0163782722000133

2. Lazcano-Pérez F, Rangel-López E, Robles-Bañuelos B, Franco-Vásquez AM, García-Arredondo A, Navarro-

García JC, et al. Chemical structure of three basic Asp-49 phospholipases A2 isolated from Crotalus
molossus nigrescens venom with cytotoxic activity against cancer cells. Toxicon [Internet]. 2022
Apr;210:25–31. Available from: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0041010122000460

3. Gutiérrez JM, Lomonte B. Phospholipases A2: Unveiling the secrets of a functionally versatile group of
snake venom toxins. Vol. 62, Toxicon. 2013. p. 27–39.

4. Marques TR, Braga MA, Cesar PHS, de Souza NP, Fráguas RM, Oliveira DA, et al. Evaluation of the
Brazilian functional fruit Morinda citrifolia as phospholipases A2 and proteases modulator.
Phytomedicine Plus. 2021 Nov;1(4):100071.

5. Yao Y, Li J, Lin Y, Zhou J, Zhang P, Xu Y. Structural insights into phospholipase D function. Vol. 81, Progress
in Lipid Research. Elsevier Ltd; 2021.

6. Rizzo MA, Romero G. Pharmacological importance of phospholipase D and phosphatidic acid in the
regulation of the mitogen-activated protein kinase cascade.