La zearalenona, un metabolito secundario con propiedades estrogénicas, es producida por varios Fusarium

especies que colonizan granos de cereales en el campo y en almacenamiento. Recientemente, ha habido

informes de contaminación con zearalenona en maíz, avena, cebada, trigo, y sorgo en grano. El maíz y el
sorgo en grano fueron examinado para detectar contaminación debido a un moho obvio daño. El trigo, el maíz
y el sorgo se han examinado para determinar la incidencia de zearalenona en granos que se mueven a través
de canales comerciales y almacenados en granjas y elevadores de campo. Otros cereales como la avena y la
cebada se analizaron debido a alteraciones estrogénicas asociadas en animales de granja.
Los pasos en los procedimientos para la determinación de zearalenona son la extracción de una muestra
representativa, la purificación parcial del extracto por cromatografía en columna, el tratamiento con álcali o el
reparto líquido-líquido, y medición posterior de la toxina aislada. La zearalenona se mide en extractos
parcialmente purificados. por cromatografía en capa fina (TLC), gas líquido cromatografía (G LC) y líquido a
alta presión cromatografía (HPLC). La confirmación de la contaminación con zearalenona se puede lograr
mediante cromatografía de gas-espectroscopia de masas (GC-MS). Se han desarrollado procedimientos de
detección de multitoxinas para zearalenona en combinación con uno o más de los siguientes micotoxinas:
aflatoxina, toxina T-2, diacetoxiscirpenol, patulina, ocratoxina, ácido penicílico, citrinina, penitrem A y
esterigmatocistina

Se han informado varios métodos para la detección productos agrícolas para micotoxinas, incluida la
zearalenona. Normalmente, los métodos de detección de multitoxinas incluyen los siguientes pasos:
extracción, purificación parcial del extracto, y cromatografía en capa fina (TLC) (Tabla VI). Los métodos de
purificación han incluido la transferencia líquido-líquido, cromatografía en columna, diálisis de membrana,
filtración en gel, y precipitación con sales inorgánicas. Otras micotoxinas examinados son aflatoxina,
ocratoxina, esterigmatocistina, patulina, toxina T-2, citrinina, ácido penicílico, diacetoxiscirpenol y penitrem A.
Tres esquemas de TLC para diferenciar e identificar un
Se ha informado de un gran número de micotoxinas. El primero separó 11 micotoxinas y utilizó gel de sílice G
en suspensión con ácido oxálico como adsorbente de TLC (51). El segundo tiene se ha utilizado en extractos
de alimentos y piensos y fue diseñado para separar e identificar 18 micotoxinas (52). Un método se ha
publicado para el TLC de 37 micotoxinas y metabolitos fúngicos, pero no se proporcionó información sobre la
eficacia cuando se aplica a extractos de cereales y piensos (53).
Se han utilizado varios aerosoles para mejorar la fluorescencia de zearalenona en placas de TLC o para
formar derivados coloreados. Se aplicó una pulverización de cloruro de aluminio informó que mejora la
fluorescencia de la zearalenona en Placas de TLC (34). La zearalenona forma una mancha marrón cuando
Las placas de TLC se rocían con anisaldehído en ácido metanol (52). Otros reactivos que se han utilizado
como aerosoles son fericianuro de potasio-cloruro férrico y luego ácido clorhídrico (17), fluoborato de 4-
metoxi-benceno-diazonio (54) y bencidina bis-diazotizada (55). Tan poco como 5 ng zearalenona se puede
detectar en placas de TLC con un spray del reactivo de sal de diazonio Fast Violet B (39).
Detección y cuantificación de zearalenona en cereales los granos se vuelven difíciles cuando el nivel de
contaminación es bajo (50 ppb). Esta dificultad se debe principalmente a los antecedentes interferencia de
materiales que se extraen con la zearalenona y enmascaran la débil fluorescencia de la zearalenona en
Placas TlC. Un procedimiento versátil para eliminar las interferencias se introdujeron compuestos que se
extraen con zearalenona por i \ lirocha et al. (17). Este procedimiento de limpieza implica Partición de la
zearalenona de la extracción orgánica. solvente en la fase alcalina acuosa, lavando la fase acuosa con
cloroformo y, después de un ajuste cuidadoso a pH 9,5, volver a repartir la zearalenona en cloroformo. Este
procedimiento se utilizó como limpieza antes de cuantificación por TlC, espectros ultravioleta, cromatografía
de gas líquido (G LC) y espectroscopia de masas combinada G lC (GLC-MS). Se debe tener sumo cuidado al
dividir el solvente de extracción con hidróxido de sodio acuoso para evitar la formación de emulsión. Este
procedimiento de limpieza se utilizó para aislar la zearalenona del maíz y la cebada extractos. La
cuantificación posterior por GlC dio el porcentaje recuperación (de zearalenona añadida) de 83,5 ± 7% y un
límite de detección de 50 ppb.
El análisis por G lC requiere la formación de una derivada de zearalenona para aumentar la volatilidad de este
compuesto. Los Los derivados más comunes utilizados en el análisis G lC de zearalenona son los derivados
de trimetilsililo (TMS) (primero 'informado en 1968 por Vandenheuvel) (58), derivado dimetoxi y el derivado de
metil oxima (17). Estos compuestos son detectado fácilmente con detectores de ionización de llama (FID), y
Se pueden detectar fácilmente 50 ng de zearalenona estándar Más recientemente, Holder et al. (59) informó
la detección de el derivado de tafluoropropionilo de pluma de zearalenona con un detector de captura de
electrones. Estos procedimientos GLC fueron desarrollado para analizar muestras contaminadas donde el
Las concentraciones de zearalenona fueron de 50-100 ppb o más. Problemas encontrados en el análisis G lC
de contaminantes Los granos de cereales son causados por componentes de granos que extraen con
zearalenona, forman derivados similares y, por lo tanto, interfieren tanto con la fluidez del pico G lC adecuado
como con la cuantificación precisa del pico de zearalenona.
Un método para la determinación inequívoca de la contaminación por zearalenona es el combinado G lC-M S.
La ventaja de este método es la identificación precisa de pequeñas cantidades de zearalenona en una matriz
compleja. El derivado de TMS de z · earalenona se resuelve mediante cromatografía de gases y luego se
somete a análisis por espectroscopia de masas. Usando un técnica conocida como detección de iones
múltiples (MID), se logra la identificación definitiva de zearalenona (17).
El derivado de TMS de la zearalenona tiene iones característicos que son monitoreados selectivamente.
Estas características e iones de diagnóstico son m / e + 462 (ion padre), 447,444.429,333, 305, 260 y 151.
Shotwell et al. (56) han informado de la confirmación de zearalenona en trigo mediante una modificación de
este método. Los iones característicos monitoreados fueron m / e + 462,447,444,429 y 333. Estos iones
seleccionados y sus intensidades se trazaron bajo la ionización total patrón, y la superposición simultánea de
estos cinco iones es utilizado para confirmar la presencia de zearalenona (Fig. 2). Trigo extractos contienen
alquilresorcinoles y ácidos grasos que confunden la cuantificación de zearalenona por GlC solo. El límite de
detección en dicha matriz fue 0,2 pg de zearalenona en 350 pg de extracto inyectado en la columna GLC. GlC
La espectroscopia de masas de alta resolución también se ha utilizado para detectar niveles bajos de
zearalenona en copos de maíz y productos derivados del maíz destinados al consumo humano (39). El
seguimiento de los patrones de iones totales no cumplió ::> !! detección de zearalenona; sin embargo, cuando
solo el ion padre (m / e + 462) fue monitoreado, la contaminación se detectó a 12.9 ppb zearalenona. Los
resultados coincidieron con los valores obtenidos por análisis de cromatografía líquida de alta presión (HPLC).
Uno extracto de harina de maíz que contenía un falso positivo para La zearalenona por HPlC fue claramente
negativa por GlC-MS
Análisis
La aparición casi simultánea de estos cuatro publicaciones reflejan la utilidad de HPLC para zearalenona
análisis. Malaiyanda y Barrette (64) utilizaron agua acuosa al 1%. hidróxido de sodio para limpiar los extractos
originales. Después el intercambio de disolvente de cloroformo a benceno, el extracto se purificó
adicionalmente en una columna de gel de sílice G-60.
Después de lavar la columna con benceno, la zearalenona se eluido con benceno / acetato de etilo (90:10 v /
v). Después de intercambio de disolvente en metanol, se separó la zearalenona en la columna j1Bondapak
C18 y detectado por ultravioleta detector con un filtro de 280 nm. La cuantificación se logró mediante la
construcción de una curva de calibración analítica con zearalenona estándar. Este documento informó que
mejor se obtuvieron recuperaciones de zearalenona cuando el benceno en lugar de cloroformo se usó para
transferir la muestra extraer a la columna de gel de sílice. Además, los espectros de LTV y la masa Los
espectros de zearalenona estándar y zearalenona tratada con álcali no mostraron pérdida apreciable de
toxina debido a esto. procedimiento de limpieza. Sin embargo, las bajas recuperaciones (67%) fueron
obtenido en análisis de piensos para cerdos: esto se atribuyó a la problema de formación de emulsión e
hidrólisis parcial de zearalenona durante el tratamiento con álcalis. Ware y Thorpe (65) informaron valores de
recuperación superiores al 89% (para concentraciones de 10-200 j1g / kg) para zearalenona añadida a maíz.
Este procedimiento implica la extracción con cloroformo, tratamiento alcalino, transferencia líquido-líquido a
benceno y análisis directo mediante HPLC utilizando un detector de fluorescencia.
La confirmación se logró determinando las proporciones de las siguientes longitudes de onda de excitación:
236: 254: 236: 274: 236: 314. Las proporciones de altura de pico de las muestras deben coincidir dentro del
5% de los obtenidos para la zearalenona estándar. Esta El método se aplicó a II muestras de harina de maíz
de la venta al por menor. historias. Se detectó zearalenona en nueve muestras de harina de maíz en niveles
de 12 a 60 ppb. Confirmación adicional se obtuvo en dos de las muestras positivas por MS después de
aislamiento de zearalenona por HPLC.
Scott et al. (39) también utilizó un detector de fluorescencia para cuantificar la zearalenona aislada por HPLC.
Las muestras extraídas con metanol se purifican parcialmente con álcali. tratamiento y una minicolumna de
gel de sílice. Recuperaciones de 84-104% se obtuvieron con harina de maíz, palomitas de maíz y maíz
congelado enriquecido a 50 y 100 j1g / kg. Límites de detección eran 5-15 j1g / kg dependiendo del producto.
GLC alto Se usó MS de resolución para confirmar los resultados de TLC y HPLC. La zearalenona se detectó
en hojuelas de maíz obtenidas de un tienda minorista a niveles de 14 j1g / kg. Holder et al. (59) informó un
método de HPLC para detectar zearalenona hasta 10 ppb en comida para animales. El procedimiento de
limpieza hace uso de partición líquido-líquido, cromatografía en columna Sephadex LH-20, tratamiento con
álcali débil y cromatografía en gel de sílice. Se requirió cromatografía en gel de sílice para separar
zearalenona de zearalenoI. Un detector fluorescente fue utilizado, y se informaron recuperaciones del 76-86%
para piensos enriquecido con 1,10, 1,0 y 10 ppm de zearalenona y zearalenoI.
Se describió un procedimiento de confirmación para la zearalenona, que utilizó GLC del derivado de
pentafluoropropionilo y detección por detectores de captura de electrones. Aunque la mayor parte del maíz
producido se destina al ganado, más de quinientos millones de bushels se procesan para fabricar productos
alimenticios e industriales. Las industrias de la molienda (seca molienda y molienda húmeda) tamice el maíz
entrante para eliminar maíz dañado por el moho: sin embargo, el maíz se compra en grandes cantidades
cantidades de muchos lotes de historial de almacenamiento variable. Esta permite la posibilidad de procesar
maíz contaminado. Para determinar el alcance de la contaminación por zearalenona y la distribución de esta
contaminación. fresado en seco y húmedo
Se han realizado estudios de molienda en maíz contaminado naturalmente. Los estudios de molienda en seco
se llevaron a cabo utilizando tres lotes de maíz naturalmente contaminado (66). Estos lotes de maíz fueron
recolectados en el norte de Corn Belt \ vdonde la FDA informó una incidencia del 17% de contaminación con
zearalenona en niveles de 0,1-5,0 ppm. Esta alta incidencia y niveles no son habitual (35) pero puede ocurrir
siempre que las condiciones climáticas prevalecen que favorecen los brotes de Fusaria
Resultados de los estudios de molienda en seco en lotes de maíz que contienen En la Tabla VIII se muestran
0,8, 3,5 y 8,1 ppm. Principal La mezcla de productos (Mezcla n. ° 1) contenía solo 10-22% de zearalenona,
aunque esta mezcla representó el 58-60% del total del molino. productos. Los niveles más altos de
zearalenona se encontraron en el germen fracciones (2.4-18.4 ppm), y estos niveles fueron de 2 a 3 veces los
niveles en el maíz de partida. El peligro más obvio en molienda en seco de maíz contaminado con zearalenón
se produce en el fracciones de pienso producidas. El germen y el maíz se alimentan las fracciones contenían
60-70% de la contaminación con zearalenona. Se realizaron estudios de molienda en húmedo (67) en
muestras. de maíz de los lotes descritos anteriormente (66) y el los resultados se muestran en la Tabla IX.
Durante este proceso, la toxina concentrado en las fracciones de gluten en gran medida (49-56% del total de
zearalenona) aunque el gluten representó sólo el 8-12% de las fracciones de maíz molido. La zearalenona
concentrada en fracciones molidas en húmedo en el orden de gluten> solubles de molienda> fibra> germen.
Almidón, que representa el 65-71% de los productos molidos. no contenía
Cantidades detectables de zearalenona. Sin embargo. Las fracciones de alimento obtenidas de la molienda
húmeda de maíz contaminado contenían niveles mucho más altos de zearalenona que los maíz original.
Como en el caso de las fracciones de pienso de seco molienda de maíz contaminado, la distribución selectiva
de zearalenona en fracciones de pienso aumenta el potencial de Las alteraciones de los animales deben
procesarse el maíz contaminado.
Manejo adecuado de granos contaminados con zearalenona debe involucrar un programa de vigilancia rígido
para identificar el lotes contaminados de grano y desviar ese grano a para fines industriales o para la
alimentación de animales de corral de engorde únicamente. Uno factor importante que limita una vigilancia o
programa de cribado es la falta de un método de ensayo verdaderamente rápido de zearalenona para uso en
granjas o en ascensores.
Dado que la prevención de la contaminación por zearalenona es actualmente no es factible con los
conocimientos actuales, métodos para Descontaminar los granos infectados deben desarrollarse. Limitado
Hay información disponible sobre la desintoxicación de granos contaminados con zearalenona. Tamas y
Woller (68) informaron que tratar el maíz con peróxido de hidrógeno acuoso al 3-6% (IO litros por 100 kg de
maíz) o el hidróxido de amonio destruyó la contaminación por zearalenona. Sin embargo, este patentado
proceso no informó los niveles de zearalenona en el com contaminado. Los experimentos en NRRC han
demostrado que la zearalenona es muy estable al calor y tampoco se ve afectada por el proceso de amoníaco
desarrollado para desintoxicar el maíz contaminado con aflatoxinas (Bennett, datos no publicados).
Procedimientos analíticos previamente descritos (HPLC y GLC-MS) han demostrado que la zearalenona se
puede encontrar en productos de cereales procesados para consumo humano. Los Se desconocen los
efectos de la zearalenona en humanos, pero los datos de estudios en primates no humanos indican que
hormonal se producen efectos (69). La zearalenona, administrada por vía subcutánea a 14 / lgjkg de peso
corporal, redujo los niveles de hormona luteinizante sérica en monos Rhesus. También, Ruddick y col. (70)
informaron que las ratas preñadas que recibieron 1 mgjkg de zearalenona produjo camadas que exhibieron un
aumento de la incidencia de defectos del esqueleto fetal. El pozo La respuesta estrogénica conocida en
ratones ha sido ampliamente estudiado por Ueno y Yagasaki (71). Han demostrado que La zearalenona
provoca un efecto acelerador sobre el ARN y síntesis de proteínas en el tejido uterino. Otros estudios,
utilizando un monocapa de células de diferentes tejidos, han demostrado que La zearalenona tuvo efectos
citotóxicos en ciertas líneas celulares (R).
Los cultivos de células de testículo porcino parecían ser más sensibles, seguido de células de testículo de
pavo y ternero. Otros tipos de Los cultivos celulares no mostraron sensibilidad a la toxina, y el El método se
propone como un sistema modelo conveniente para determinar la sensibilidad de varias especies de animales
y tejidos. Aunque solo se dispone de pruebas circunstanciales que sugiere que la zearalenona puede ser
dañina si es consumida por humanos, se deben desarrollar medidas adecuadas para prevenir consumo de
cereales contaminados y procesados productos de granos