DIAPOSITVAS TOMADAS DE: www.genomica.uaslp.mx/Academia/Biomol_basico/A11-TranscripPro.

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Transcripción en los
Procariotas
CA García Sepúlveda MD PhD

Laboratorio de Genómica Viral y Humana

Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de San Luis
Potosí
Transcripción generalidades
La transcripción ocurre en las inmediaciones
del DNA y requiere de una enzima especial
(RNA polimerasa DNA dependiente o DDRP
o RNAP).

Es regulada por secuencias específicas

presentes en el DNA.

Genera transcritos de mRNA, tRNA y rRNA.

En los procariotas se lleva a cabo en el

mismo lugar que la traducción
(protoplasma).

En los eucariotas el proceso requiere del

procesamiento del RNA transcrito para su
exportación al sitio de la traducción.

El objetivo de la transcripción es
EXPRESAR el material genético.

Sin expresión no hay función ni evolución.

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Transcripción generalidades
La información presente en el DNA se transduce hacia sus efectores (Proteinas o
RNA) gracias a un código genético que asegura la integridad y fidelidad (motivo
de un tema aparte).

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Transcripción generalidades

Unidad transcripcional.

Reconocimiento de promotor.

Iniciación de la Transcripción.

Cadena referencia, la codificante y el

RNA.

Elongación.

Terminación.

Prokarya: Transcrito

Eukarya: Transcrito primario (pre-

mRNA)
Transcrito maduro (mRNA)

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Promotores procariotas

Región -35 posee secuencia TTGACA, brinda alta tasa de transcripción.

Región -10 posee secencia TATAAT y es esencial (también llamada caja
Pribnow y equivalente a caja TATA eucariota).
Transcrito inicia en +1.
Codon de iniciación downstream de +1.
RNAP procariota no requiere de scanning, localiza directamente sobre promotor.

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Anatomia de los eventos

RNAP emplea cadena de

referencia (template) para
leer en sentido 3’-5’.

RNAP escribe en sentido 5’-

3’ (extiende RNA).

Uso de helicasas.

Pequeña región con una

especie hibrida de DNA- Cadena codificante ATGATGATG
RNA. Cadena referencia TACTACTAC
mRNA AUGAUGAUG
¿Por que este híbrido no es
blanco del silenciamiento?

Footprint!

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Transcripción procariota

La transcripción es el proceso mediante el

cual una secuencia de DNA es copiada
hacia una secuencia de RNA.

En procariotas solamente una enzima

(RNAP) es empleada para sintetizar las
distintas especies de RNA (tRNA, mRNA y
rRNA).

Los procariotas utilizan distintas enzimas

(con sus distintos protomores) para
sintetizar las distintas especies de RNA.

Principal transcriptasa es diferente a la

primasa.

Existen tres etapas al proceso de

transcripción: Iniciación, Elongación y
Terminación.

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Transcripción procariota

La transcripción es el proceso mediante el

cual una secuencia de DNA es copiada
hacia una secuencia de RNA.

En procariotas solamente una enzima

(RNAP) es empleada para sintetizar las
distintas especies de RNA (tRNA, mRNA y
rRNA).

Los procariotas utilizan distintas enzimas

(con sus distintos protomores) para
sintetizar las distintas especies de RNA.

Principal transcriptasa es diferente a la

primasa.

Existen tres etapas al proceso de

transcripción: Iniciación, Elongación y
Terminación.

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Transcripción procariota

La transcripción es el proceso mediante el

cual una secuencia de DNA es copiada
hacia una secuencia de RNA.

En procariotas solamente una enzima

(RNAP) es empleada para sintetizar las
distintas especies de RNA (tRNA, mRNA y
rRNA).

Los procariotas utilizan distintas enzimas

(con sus distintos protomores) para
sintetizar las distintas especies de RNA.

Principal transcriptasa es diferente a la

primasa.

Existen tres etapas al proceso de

transcripción: Iniciación, Elongación y
Terminación.

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Transcripción procariota

La transcripción es regulada durante la

iniciación (Si, No, que tanto).

En las bacterias inicia con la unión de

la RNAP (Subunidad σ) al DNA en el
promotor (región -35 y -10).

Aproximadamente 12 bp se
desnaturalizan para darle acceso a la
RNAP.

Burbuja transcripciional (= a ojo

replicacional) se extiende a 18 bp para
dar inicio a la transcripción.

Subunidad σ es liberada y otros factores

de elongación son reclutados al sitio.

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Transcripción procariota

La transcripción es regulada durante la

iniciación (Si, No, que tanto).

En las bacterias inicia con la unión de la

RNAP (Subunidad σ) al DNA en el
promotor (región -35 y -10).

Aproximadamente 12 bp se
desnaturalizan para darle acceso a la
RNAP.

Burbuja transcripciional se extiende a 18

bp para dar inicio a la transcripción.

Subunidad σ es liberada y otros

factores de elongación son reclutados
al sitio (NusA).

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RNA polimerasa procariota (RNAP o RNApol)

Nucleotidil transferasa.

En 1959 el premio Nobel fue para Arthur

Kornberg por lo que entonces se creia era
RNAP (en realidad otra enzima).

Finalmente descubierta por Sam Weiss,

Audrey Stevens y Jerard Hurwitz en 1960.

Roger Kornberg (hijo) fotografio con ME a

la RNAP en acción.

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RNA polimerasa procariota (RNAP o RNApol)

Holoenzima consta de 5 subunidades (aprox

400 kDa).

α = hay dos, andamiaje enzimatico y

ensamblaje de la holoenzima.

β = Principal subunidad catalítica

(polimerasa) durante iniciación y elongación.

β’= Permite unión inespecífica al DNA

(estado reposo) con poca afinidad para
permitir su liberación rápida.

σ = Subunidad polimórfica que brinda la

especificidad por el promotor.

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Regulación de la transcripción en procariotas

Dos modelos de control de la expresión procariota:

Negativos
Operón inducible – lac
Operón represible - Tryp

Positivos
CRP

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Operón lac
Normalmente la bacteria emplea glucosa
como energético.

A falta de glucosa requiere de mecanismo

alterno para el aprovechamiento de
carbohidratos.

En presencia de Lactosa seria conveniente aprovecharla como fuente de energia.

Lactosa = β-D-galactosa & β-D-glucosa.

Necesita: Transportador que permita entrada de lactosa

Enzima que digiera lactosa
Enzima que ayude a digerir lactosa (transfiriendo Acetilo)

En presencia de glucosa no es necesario gastar tanta energia para el

aprovechamiento de la lactosa!
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Operón lac
Operón inducible - normalmente apagado (reprimido) en ausencia del
inductor (lactosa).

Bacteria solamente requiere del operón lac en presencia de Lactosa...

por ende, el operón se encuentra apagado cuando no hay lactosa
(reprimido) y encendido cuando si la hay...

La lactosa se une al represor y evita que interactue con el operador y

apague (reprima) al operon.

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Operón lac
Si hay lactosa se transcriben los tres genes contiguos del operón lac:

•lacZ (enzima que digiere la lactosa)

•lacY (transportador de lactosa), y
•lacA (el auxiliar)

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Operón lac
Si hay lactosa se transcriben los tres genes contiguos del operón lac:

•lacZ (enzima que digiere la lactosa)

•lacY (transportador de lactosa), y
•lacA (el auxiliar)

Enzima catalítica que hidroliza a los ß-galactósidos

hacia monosacáridos.

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Operón lac
Si hay lactosa se transcriben los tres genes contiguos del operón lac:

•lacZ (enzima que digiere la lactosa)

•lacY (transportador de lactosa), y
•lacA (el auxiliar)

Transportador que permite el ingreso de la lactosa.

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Operón lac
Si hay lactosa se transcriben los tres genes contiguos del operón lac:

•lacZ (enzima que digiere la lactosa)

•lacY (transportador de lactosa), y
•lacA (el auxiliar)

Conenzima que auxilia en la digestión de la lactosa

(transfiriendo un grupo acetilo)

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Operón lac
La bacteria supera la inanición de glucosa aprovechando la energia
alternativa brindada por la lactosa... Todos felices.

21
Operón lac
No obstante, en ausencia de lactosa no hay por que mantener este
sistema energéticamente costoso encendido... No servirá de nada.

Lactosa no se une al represor, el cual se puede unir al operador y

reprimir al operón.

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Regulación Positiva por CRP-cAMP
cAMP normalmente bajo cuando
glucosa está presente como la
principal fuente de carbono.

cAMP aumenta al faltar la glucosa.

cAMP se une al cAMP receptor

protein (CRP) activándolo.

cAMP-CRP activo se une al sitio CRP

del operón lac y activa la transcripción
de los genes lac.

23
Ejercicio - Operón de la lactosa

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Ejercicio - Operón de la lactosa

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Ejercicio - Operón de la lactosa

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Ejercicio - Operón de la lactosa

27
Ejercicio - Operón de la lactosa

Glucosa Lactosa
Presente Ausente
Presente Ausente

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Ejercicio - Operón de la lactosa

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Operón del triptófano
Operón reprimible – Molécula represora únicamente se une a operador cuando
existe inductor.

Las bacterias requieren del aminoácido para su crecimiento, lo aporte o nó el

medio en que vive.

Cuando hay trp en el medio, la bacteria apaga al operón que fabrica trp, el
mismo trp incementa la afinidad del represor por el operador (secuencia de
DNA).

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Operón del triptófano

Triptofano se une a represor.

Complejo triptofano-represor se unen a operador.

RNA pol incapaz de transcribir genes trpE a trpA

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Operón del triptófano

En ausencia de Trp, el represor nunca se une a operador ni puede

bloquear el paso de la RNA pol.

RNA pol transcribe genes trpE a trpA

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Operón del triptófano

Estos genes le permiten a la bacteria sintetizar Trp ella misma sin

depender del suministro ambiental.

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Terminación de la transcripción procariota

Dos mecanismos de terminación descritos:

Rho dependiente, y
Rho-independiente

La terminación prematura de la transcripción (atenuación) tiene función

regulatoria también.

Para incrementar la complejidad (y el estrés de los estudiantes) la

transcripción también puede regularse por anti-terminacion...
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Terminación de la transcripción procariota

Rho-dependiente

RNA pol pasa codon de terminación en DNA.

Después del TER se topa con una secuencia

específica: Rho-Binding Site

Proteina Rho reconoce esta región y se une a

ella (proceso que requiere de ATP).

Unión de Rho a mRNA “libera” al transcrito y

detiene la transcripción.

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Terminación de la transcripción procariota

Rho-independiente

Después de transcribir y pasar el TER se topa con

una secuencia especial.

A- Palindromo rico en repeticiones invertidas

“GGGG=CCCC” que forma estructura “hairpin”
secundaria.

B- La secencia palidromica es seguida (en el

transcrito primario) por región Poly-U.

Ambos elementos bastan para determinar la

liberación del transcrito primario y el final de la
transcripción.

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Labilidad del RNA

rRNA y tRNA bastante estables bajo condiciones normales.

mRNA poco estable bajo condiciones normales (t½ <1 min)

Esta vida media corta tiene relevancia funcional...

Es aprovechada por los procariotas para responder rápidamente a las exigencias
ambientales.

Cualquier molécula (transcrito) de RNA es vulnerable a la degradación

Cuando se encuentra desnudo (no asociado a proteinas).

Cuando no ha sido modificado (Cap 5’ y poliadenilado en 3’).
Cuando permanece en forma de ssRNA en vez de conform dsRNA.

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Labilidad del RNA

rRNA es procesado (modificado) por diferentes enzimas (>10 para 16S y

>13 para 23S, procariotas) para estabilizar su estructura.

Proteinas
rRNA también es estabilizado RNA
por proteinas.

No obstante, en algunas
situaciones el rRNA también
es degradado rápidamente
(depleción de Mg++).

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Labilidad del RNA

tRNA adopta estructura dsRNA que lo estabiliza.

tRNA es sometido a procesamiento postranscripcional que modifica el
contenido de bases y estabiliza su estructura.

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Acoplamiento transcripto-traduccional procariota

En los procariotas, la transcripción se encuentra acoplada a la traducción.

Los ribosomas se unen al mRNA y

comienzan a traducirlo a aminoácidos
tan pronto como comienza a ser
transcrito.

Mecanismo optimizado para

aprovechamiento de recursos
(concordante con filosofia simplista).

La regulación de cualquiera de estos

dos procesos afecta al otro.

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