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Manual Micro
Manual Micro
Rector
Dr. Oscar Russo Vogel
Vicerrector Académico
Lic. Javier J. Vales García
Este manual fue editado para uso exclusivo de maestros y alumnos del ITSON que
cursan la materia.
2
PRESENTACION
El presente curso tiene como finalidad dar al estudiante una serie de herramientas
de gran utilidad para el manejo y aprovechamiento de microorganismos. Ya que la
prosperidad del hombre y su bienestar depende en gran parte del dominio que se
tenga sobre las poblaciones microbianas, sea en el aspecto biotecnológico, médico,
agrícola e industrial, para lo cual necesita del conocimiento de las condiciones
físicas, fisiológicas, bioquímicas y su comportamiento tanto en el ámbito
parasitario, como en la reproducción de los mismos, ya sea para el
aprovechamiento industrial de subproductos metabólicos o bien como fuente de
proteína unicelular, para lo cual debemos de conocer las características de su
crecimiento, sus condiciones físicas favorables como son los siguientes
parámetros: temperatura, pH y los medios apropiados en el cual se desarrollan
tanto "in vivo" como "in Vitro".
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REGLAMENTO
Las siguientes sugerencias son con el fin de proporcionar algunas ideas que deben
considerarse en todo trabajo que desarrolles en el laboratorio de Microbiología,
además se pretende evitar al máximo las posibles contaminaciones por
microorganismos patógenos que en algunas prácticas se manejan.
1. Guarde sus enseres en el cajón de las gavetas, nunca los ponga sobre la mesa de
trabajo.
2. Los estudiantes deberán entrar siempre al laboratorio con bata blanca limpia.
5. Manténgase constantemente limpia la mesa así como los aparatos que use.
10. Antes de salir del laboratorio verifique que las llaves de gas y agua estén bien
cerradas y desconectados los aparatos eléctricos (excepto incubadoras y
refrigerador).
4
11. Lave perfectamente sus manos con agua y jabón antes de salir del laboratorio.
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RECOMENDACIONES PARA EVALUACION
- La nota final del laboratorio será "A" (acreditado) o "NA" (no acreditado).
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INDICE
PAGINA
PRESENTACION
REGLAMENTO
RECOMENDACIONES PARA EVALUACION
PRACTICA Nº 1
Equipo y material empleado en el laboratorio de Microbiología
Preparación de colorantes y reactivos 08
PRACTICA Nº 2
Instrucciones generales para el uso del microscopio y
observación de microorganismos 14
PRACTICA Nº 3
Técnicas de preparación y esterilización del material
que se usa en el laboratorio de Microbiología 23
PRACTICA Nº 4
Preparación y esterilización de medios de cultivo 28
PRACTICA Nº 5
Técnicas de siembra en medios de cultivo y observación
de características de crecimiento 34
PRACTICA Nº 6
Técnicas de aislamiento de cultivos puros de una mezcla
de microorganismos
39
PRACTICA Nº 7 y 8
Pruebas relacionadas con el metabolismo bacteriano 44
PRACTICA Nº 9
Efecto del medio sobre las bacterias 50
PRACTICA Nº 10
Técnicas de observación de hongos y levaduras 56
OBJETIVO
INFORMACION GENERAL
PROCEDIMIENTO
MATERIAL
Cajas de Petri, tubos de ensayo con tapón de rosca, probetas, matraces, morteros,
pipetas, matraces volumétricos, matraces erlenmeyer, embudos, frascos de
dilución, cajeros, pipeteros, frascos, goteros, etc.
EQUIPO
EQUIPO PERSONAL
1. AZUL DE METILENO
Azul de metileno = 0.3 g
Alcohol etílico al 95% = 10 ml
Agua destilada = 90 ml
2. CRISTAL VIOLETA
Cristal violeta = 0.25 g
Alcohol etílico al 95% = 10 ml
Agua destilada = 90 ml
3. SAFRANINA
Safranina = 0.25 g
Alcohol etílico al 95% = 10 ml
Agua destilada = 90 ml
4. CARBOL-FUCSINA
Fucsina básica = 1 g
Alcohol etílico al 95% = 10 ml
Fenol al 5% = 90 ml
Disolver la Fucsina en el alcohol, agregar la solución de fenol y dejar reposar por
18 horas y filtrar.
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5. FENOL AL 5%
Fenol = 25 g
Agua destilada = aforar a 500 ml
6. ALCOHOL-ACETONA
Alcohol al 95% = 75 ml
Acetona = 25 ml
7. ALCOHOL-ACIDO
Acido nítrico = 2.5 ml
Alcohol etílico al 95% = 97.5 ml
8. LUGOL (I-KI)
Yodo = 1 g
Yoduro de potasio = 2 g
Agua destilada = 300 ml
CUESTIONARIO
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REPORTE
PRACTICA Nº 1
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
11
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
12
PRACTICA Nº 2
OBJETIVO
INFORMACION GENERAL
Los microscopios son de dos tipos diferentes: el óptico y el electrónico, según sea
el principio en el cual se basa la amplificación.
En el microscopio óptico se obtiene la amplificación por medio de un sistema de
lentes mientras que en el microscopio electrónico se usa un haz de electrones en
lugar de ondas luminosas para obtener la imagen amplificada.
Para obtener un buen frotis, debe "extenderse" el material, con objeto de formar
una película delgada, y obtener así una sola capa de bacterias, perfectamente
separadas sobre el portaobjetos. Con esta preparación previa pueden observarse
perfectamente células aisladas, ya que de otra forma, los microorganismos se
aglomeran en masas sólidas impenetrables a la luz.
Las células toman la tinción total o parcialmente de acuerdo con una relación
química entre alguna sustancia celular y el colorante o bien, su superficie queda
teñida por un mecanismo de atracción. En otras palabras las propiedades tintoriales
de una célula dependen de su composición química y las diferencias en sus
reacciones de coloración, constituyen índices importantes para distinguir unas
bacterias de otras.
Existen dos grandes métodos de tinción para diferenciar a las bacterias: la tinción
al GRAM que separa a las bacterias en GRAM positivas y GRAM negativas,
dependiendo esto de la coloración que tome la célula. La otra tinción es la de
ZIEHL-NEELSEN o de ácido-resistencia que se emplea para identificar algunos
grupos de bacterias con alto contenido de lípidos.
PROCEDIMIENTO
14
a) Parte mecánica consta de:
Pie o base del microscopio
brazo
platina
tornillo macrométrico
tornillo micrométrico
revólver de objetivos
objetivos
GENERALIDADES
FUENTE DE LUZ
La mejor fuente de luz se obtiene de la luz indirecta del sol, pero debido a la
variabilidad de estas condiciones se emplea luz artificial.
La luz del espejo es enfocada por el condensador que se encuentra bajo la platina,
el objeto de estudio es colocado en el portaobjeto que se pone en la platina, la
imagen producida por el objeto es amplificada por el ocular.
ENFOQUE
Ajustar la fuente de luz usando el objetivo seco débil, mirando a través del tubo de
ajuste del espejo hasta que la fuente de luz esté en el centro del tambo; el tambo
debe quedar iluminado uniformemente. El diafragma debe estar completamente
abierto, el condensador totalmente arriba. Para enfocar el objeto que se va a
observar, sin mirar por el ocular (viendo el portaobjeto) mueva el tubo hacia abajo
con el tornillo de ajuste macrométrico hasta que el lente esté a cierta distancia de la
preparación. Ahora mire el ocular, con el tornillo de ajuste macrométrico haga que
el objeto sea visible, si es necesario use el tornillo de ajuste micrométrico para
enfocar mejor. Estos movimientos se hacen lentamente.
Una vez utilizado el microscopio se deberá apagar la fuente de la luz artificial, acto
seguido, hacer la limpieza con papel de seda, de los objetivos (en especial el de
inmersión), de los oculares y de la platina.
MATERIAL
COLORANTES Y REACTIVOS
Azul de metileno, safranina, cristal violeta, carbol fucsina, Lugol, alcohol ácido,
alcohol acetona.
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OBSERVACION DE PREPARACIONES EN FRESCO
PROCEDIMIENTO
a) Flamear hasta el rojo el asa de inocular
b) Quitar el tapón de uno de los cultivos de microorganismo proporcionado y
flamear el borde del tubo.
c) Recoger una asada del cultivo y colocarla en el centro del portaobjeto
limpio (en caso de que el cultivo sea sólido suspenderlo en una gota de agua
estéril)
d) Flamear de nuevo el borde del tubo y volver a taparlo
e) Esterilizar el asa de inocular
f) Colocar un cubreobjeto sobre la suspensión del cultivo y presionar
suavemente
g) Observar la preparación con el objetivo seco débil y después con el seco
fuerte
TINCION SIMPLE
COLORACION DE GRAM
COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN
CUESTIONARIO
18
4. ¿Cuál es la función del aceite de inmersión en la observación microscópica?
19
REPORTE
PRACTICA Nº 2
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
20
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
21
PRACTICA Nº 3
OBJETIVO
Conocer el tipo de material requerido para llevar a cabo las prácticas del
laboratorio de microbiología, así como las diversas técnicas y aparatos utilizados
para la esterilización del mismo.
INFORMACION GENERAL
CALOR AL ROJO
Se utiliza para las asas de platino empleadas en la siembra o inoculación, para las
bocas de los tubos de cultivo y frascos, portaobjetos y cubreobjetos. Se esteriliza
suspendiéndolos en la flama del mechero.
EBULLICION
Consiste en una doble cámara que puede saturarse de vapor y mantenerse a una
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determinada presión y temperatura durante un tiempo largo. Es importante que el
aire de la cámara sea reemplazado por completo por vapor saturado. Si hay aire
presente se alcanzará una temperatura inferior.
El calor seco, a diferencia del calor húmedo, deshidrata las células y oxida sus
proteínas. Es recomendable exponer el material por lo menos una hora 30 minutos
a una temperatura de 180 a 220°C, que se controla por medio de un termostato.
RADIACIONES
La luz solar tiene un poderoso efecto germicida. Esta propiedad se debe a los rayos
muy cortos de alta frecuencia llamados ultravioleta, que matan a las bacterias
cuando su intensidad es fuerte.
MATERIAL
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Los objetos de vidrio, podrán permanecer en esta mezcla un tiempo largo
proporcional a la cantidad de materia orgánica que contengan, luego se lavan con
agua acidificada con HCl y a continuación con agua alcalina con KOH. Un lavado
abundante con agua corriente y destilada al final de la operación.
3. Proceda a tapar con algodón las bocas de los tubos, matraces y pipetas teniendo
especial cuidado de que los tapones de algodón no formen arrugas ni queden
flojos.
Envuelva las cajas petri, pipetas, matraces y demás material que le proporcionen de
acuerdo con la técnica indicada, cubrir con capuchones de papel los tapones de
algodón de los tubos y matraces.
CUESTIONARIO
24
REPORTE
PRACTICA Nº 3
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
25
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
26
PRACTICA Nº 4
OBJETIVO
INFORMACION GENERAL
Todas las células requieren para su crecimiento normal de: agua, una fuente de
carbono, de nitrógeno, azufre, fósforo, energía y sales minerales en pequeñas
cantidades como: sodio, potasio, calcio, magnesio.
Tanto los microorganismos como las plantas requieren que estos nutrientes estén
en solución para poderlos asimilar. Por ello se debe seleccionar el medio de cultivo
de tal manera que contenga los elementos necesarios para el adecuado crecimiento
de la cepa que se desea.
PROCEDIMIENTO
1. Según las instrucciones de cada uno de los medios de cultivo, tomar la parte
proporcional de éste y disolverlos en agua destilada, mezclar hasta obtener una
suspensión uniforme, calentar agitando frecuentemente, hervir durante un minuto.
Tapar el recipiente con algodón de tal manera que quede firme, cubrirlo con papel
aluminio.
2. Medio en tubo inclinado: Una parte del medio preparado en las instrucciones
anteriores y después de que hierva, pasarlo a los tubos de cultivo y taparlos con
algodón, o en su caso con tapón de rosca; colóquelos en posición vertical en un
recipiente y esterilice en el autoclave. Después de la esterilización, colóquelos en
la posición inclinada levantando la parte donde se encuentra el tapón. Dejando el
"botón" lo suficientemente grande par que se conserve mayor tiempo el medio.
3. Medios de cultivo para picadura: Siga el mismo procedimiento anterior, sólo que
28
en lugar de inclinar los tubos, déjelos en posición vertical.
5. Una vez que salga el vapor por la válvula, se espera al menos 5 minutos para
expulsar todo el aire y cerrar la válvula
CUESTIONARIO
2. Diga a qué se llama medio sintético y a qué medio no sintético. Dar cinco
ejemplos de cada uno
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4. Cite algunas propiedades de Agar-Agar y la gelatina
7. ¿Cuáles son los ingredientes del Agar nutritivo y qué tipo de nutrientes
proporcionan para el desarrollo de los microorganismos?
30
REPORTE
PRACTICA Nº 4
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
31
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
32
PRACTICA Nº 5
OBJETIVO
INFORMACION GENERAL
Esta práctica está destinada a que el estudiante se familiarice con las técnicas
fundamentales de siembra empleadas para aislar y desarrollar cultivos microbianos;
además de observar las diferentes características de crecimiento como son:
turbidez, formación de sedimento, crecimiento en la superficie en el caso de
medios líquidos. En medios sólidos se observa la formación de colonias en su
extensión, color, opacidad, consistencia y modificación que sufre el medio por el
metabolismo bacteriano.
33
PROCEDIMIENTO
MATERIAL
TECNICA
El instructor demostrará por primera vez algunas técnicas de siembra, luego cada
estudiante hará personalmente lo siguiente:
CUESTIONARIO
35
REPORTE
PRACTICA Nº 5
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
36
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
37
PRACTICA Nº 6
OBJETIVO
INFORMACION GENERAL
PROCEDIMIENTO
MATERIAL
Agua contaminada, placas con Agar nutritivo, pipetas de 1 ml estériles, tubos con
tapón de rosca estériles, agua destilada estéril.
Tome resultados. Aislar por el método de estrías, colonias típicas de: bacterias,
levaduras y hongos, para conservarlos como cultivos puros.
CUESTIONARIO
2. Indique usted cuando se debe emplear cada uno de los métodos anteriores.
7. ¿Qué es un cepario?
PRACTICA Nº 6
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
40
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
41
PRACTICA Nº 7 Y 8
OBJETIVO
INFORMACION GENERAL
PROCEDIMIENTO
MATERIAL
Medios de cultivo, tubos con Agar Kligler, tubos con medios SIM, tubos con caldo
urea, tubos con caldo RM-VP, tubos con Agar citrato de Simmons, tubos con caldo
lactosado, tubos con gelatina, tubos con caldo bilis verde brillante, placas con Agar
endo, placas con Agar SS.
42
TECNICAS
4. Prueba de Voges-Proskauer
43
8. Caldo bilis verde brillante (medio selectivo)
9. Medio de gelatina
Siembra por estría. Medio selectivo en el cual se determina bacilos gram (-),
enterobacterias, color característico de la colonia (verde brillante metálico, para E.
Coli)
CUESTIONARIO
44
REPORTE
PRACTICA Nº 7 y 8
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
45
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
46
PRACTICA Nº 9
OBJETIVO
Conocer algunos efectos del medio ambiente sobre el desarrollo de las bacterias
INFORMACION GENERAL
Las bacterias están casi por completo a merced de su medio ambiente. Como
sabemos, algunos microorganismos poseen mecanismos limitados para regular el
pH de su alrededor y algunos otros móviles pueden rechazar sustancias nocivas o
bien pueden ser atraídos por mecanismos quimiotácticos a una fuente de alimentos.
Con las radiaciones directas en los cultivos se ha encontrado que tienen dos efectos
en los microorganismos. El primero de ellos es la muerte y el otro es la producción
de mutantes en la población superviviente.
PROCEDIMIENTO
I. Efecto de la temperatura
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Técnica:
a) Inocule cuatro tubos con caldo nutriente (dos asadas)
b) Numérelos del I al IV e incúbelos a las siguientes temperaturas, durante 24-48
horas.
Material: Termómetro, baño maría, cajas de petri con Agar nutritivo, cultivos en
caldo de 24 horas.
Técnica:
a) Haga frotis con cada uno de los cultivos que se le proporcionen y tíñalos
al Gram para determinar su pureza
b) Marque sus cajas con cada una de las temperaturas que se indicarán
c) Caliente el agua del baño maría a una temperatura de 45°C
d) Después de sembrar una caja de Agar nutritivo que servirá de control,
coloque sus tubos de cultivo en baño maría y déjelos ahí durante 11 minutos
e) Al final de este período, siembre en cajas de petri (después de enfriados
los cultivos)
f) Eleve ahora la temperatura del agua del baño maría a 70°C y repita la
operación
g) Incube invirtiendo las cajas a 37°C durante 48 horas y anote los resultados
obtenidos
48
Técnica:
a) Inocule sus cajas con Agar nutritivo con los microorganismos
proporcionados (inoculando por toda el área de la caja)
b) Coloque un papel negro que cubra la mitad de la caja (quita previamente
las tapas)
c) Exponga las cajas a la acción directa de los rayos ultravioleta durante 5
minutos, tape la caja de petri e inviértala.
d) Incube a 37°C durante 48 horas y anote los resultados
Material: Tubos con caldo nutritivo con las siguientes concentraciones de NaCl
(5%, 10%, 20%, 40%), cultivos bacterianos
Técnica:
- Inocule sus tubos con los microorganismos proporcionados
- Incube durante 5 días a 37°C
- Observar cada 24 horas
- Hacer frotis y teñir al Gram al quinto día
CUESTIONARIO
4. ¿Qué es el pH?
49
REPORTE
PRACTICA Nº 9
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
50
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
51
PRACTICA Nº 10
OBJETIVO
INFORMACION GENERAL
LEVADURAS
Las levaduras se pueden teñir con colorantes sencillos como el azul de metileno o
safranina. La tinción hace más fácil la observación de las células microscópicas,
debido a esto se ha creado una tinción especial para levaduras "TINCION
GÜSTEIN" que ayuda al microbiólogo a cuantificar el porcentaje de viabilidad de
los cultivos de levaduras, que es de gran utilidad en los procesos fermentativos.
HONGOS
Los hongos son plantas que carecen de clorofila, el pigmento verde que efectúa la
fotosíntesis. El grupo Eumicetos incluye también hongos voluminosos, comestibles
y similares, así como también hongos y levaduras microscópicas.
PROCEDIMIENTO
1. Coloque una gota por separado de NaOH 10%, azul de metileno, Lugol,
safranina, sobre un portaobjetos. Tome una muestra de la colonia del medio de
cultivo conteniendo desarrollo de colonia de hongos con una asa en forma de
gancho y deposítelo sobre las gotas.
Reactivos
CUESTIONARIO
2. Dibuje los diferentes tipos de esporas que son comunes en los hongos.
54
REPORTE
PRACTICA Nº 10
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
55
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
56
PRACTICA Nº 11
OBJETIVO
INFORMACION GENERAL
PROCEDIMIENTO
Técnica:
1. Agitar vigorosamente el frasco que contenga la muestra unas 25 veces y tomar 1
ml para hacer las diluciones convenientes.
A. Prueba presuntiva
Técnica:
3. Incubar a 35 °C. Examinar a las 24 horas para ver si hay presencia de gas. En
caso negativo continuar la incubación 24 horas más.
Interpretación:
B. Prueba confirmativa
1. Tomar del tubo positivo y transferir 1 asada al tubo con caldo bilis-lactosado
verde brillante. Incubar a 35 °C durante 48 horas.
2. Tomar de alguno de los tubos que dieron la prueba positiva una cantidad muy
pequeña con el asa. Sembrar sobre la caja de petri con Endo, utilizando alguna de
las técnicas de aislamiento. Incubar a 35 °C durante 24 horas invirtiendo la caja.
Interpretación:
En las cajas de petri con endo se consideran colonias típicas todas aquellas que son
nucleadas tengan o no brillo metálico, como atípicas las opacas, no nucledas,
mucoides después de 24 horas de incubación y de color rosa y negativas todas las
demás.
C. Prueba completa
59
Técnica:
1. Utilizar los tubos con caldo verde brillante, para proseguir la prueba, siémbrese
entonces sobre placas con Endo-o-eosina-azul de metileno, del tubo en cuanto
aparezca gas, sin esperar a que pasen las 48 horas.
2. En el caso de preferir las cajas de petri, escójase una colonia que sea típica o
atípica y siémbrese en un tubo de fermentación y en el tubo con Agar inclinado,
usando el alambre recto para evitar tocar otra colonia.
Interpretación:
Material:
Tubos con medio SIM, tubos positivos de la prueba anterior a las cajas de petri,
reactivo de Kovac, alambre recto para siembra, pipetas graduadas de 1 ml.
Técnica:
b) Agregue 0.2 a 0.3 ml del reactivo de Kovac y agite. Deje reposar durante
10 minutos y observe el resultado.
Interpretación:
El color rojo que aparece en la capa superficial del alcohol amílico constituye una
60
prueba positiva. Si se observa. Una coloración anaranjada puede ser indicativa de
la presencia del escatol y la reacción se considera como ±. Si persiste el color
original del reactivo (amarillo) la prueba se considera como negativa.
Material:
Técnica:
Interpretación:
3. Prueba de Voges-Proskauer
Material:
Técnica:
a) Inocular el tubo con caldo MR-VP con alguna de las colonias típicas
seleccionadas en las cajas de Endo o eosina-azul de metileno, utilizando el alambre
recto.
b) Incubar a 35 °C durante 48 horas.
c) Tomar 1 ml de cultivo y añadirle 0.6 ml de solución de alfa-naftol y 0.2
ml de solución de KOH.
61
Interpretación
Si aparece una coloración rosa o rojiza en los tubos al cabo de 2 a 4 horas la prueba
se considera positiva. La lectura debe hacerse precisamente a este lapso, pues los
resultados leídos después de las 4 horas no tiene validez.
Material:
Cajas de petri con colonias típicas o atípicas en los medios de Endo o eosina-azul
de metileno; tubos con medio citrato de Simmons, alambre recto para siembras.
Técnica:
Interpretación:
62
E. Tablas
¡Error! Marcador no definido.Núm. de tubos Núm. más probables Límites del NMP
que dieron reacción positiva en 100 ml
5 de 10 ml 1 de 1 ml 1 de 0.1 ml Inferior Superior
0 0 0 0 0 5.9
0 0 0 2 0.05 13
1 0 0 2.2 0.05 13
1 1 0 4.4 0.52 14
2 0 0 5 0.54 19
2 1 0 7.6 1.5 19
3 0 0 8.8 1.6 29
3 1 0 12 3.1 30
4 0 1 15 3.3 46
4 0 0 20 5.9 48
4 1 0 21 6.0 53
5 0 0 38 6.4 330
5 0 1 96 12 370
5 1 0 240 12 3,700
OBJETIVO
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
1. Inocular por cada tubo positivo uno con caldo EC, utilizando una asa
2. Incubar a 44.5 °C durante 24 horas. No dejar pasar más de media hora entre la
inoculación y la incubación.
INTERPRETACION
Se considera una reacción positiva, que indica origen fecal, la producción de gas en
el tubo de fermentación a las 24 horas o antes de ese lapso.
RESULTADOS
64
CUESTIONARIO
65
REPORTE
PRACTICA Nº 11
MODIFICACIONES A LA PRACTICA
RESULTADOS OBTENIDOS
66
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
67
BIBLIOGRAFIA
68
Instituto Tecnológico de Sonora Dirección de Investigación y
5 de febrero No. 818 sur Estudios de Posgrado
Teléfono (64) 17-04-91 Apdo. 541 Tel/Fax (64) 17-03-76/17-50-45
85000 Ciudad Obregón, Sonora, México
COORDINACION DE LABORATORIOS
17 de junio de 1996
Sin otro particular por el momento, quedo a sus órdenes y aprovecho la ocasión
para enviarle un cordial saludo.
A t e n t a m e n t e,