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Laboratorista Químico
1
Aprendizajes
esenciales
Carrera: Laboratorista Semestre: 3
Químico º
Módulo II: Ejecuta técnicas de análisis químicos cualitativos y microbiológicos
Módulo/Submódulo:
Submódulo3: Emplea técnicas de identificación de microorganismos
Aprendizajes y/o
Estrategias de Productos a Evaluar
Competencias
Aprendizaje
esenciales 1er parcial
El estudiante responde las preguntas del cuestionario de un examen Cuestionario resuelto en la
diagnóstico en su libreta, el cual se verificará de manera grupal, libreta del estudiante
dirigido por el docente para verificar los conocimientos previos del Lista de cotejo. Anexo 1
grupo con el que se trabaja. 1. Responde correctamente a
1. Definir Microbiología la pregunta planteada
2. ¿Qué es un microorganismo? Escribe 2 ejemplos: 2. No incurre en errores
3. Escribir el nombre de tres materiales o equipo usados en 3. Imagen (foto) del
el laboratorio de Microbiología: diagnóstico con datos de
4. Describe o ilustra la estructura celular de un identificación: nombre,
microorganismo: título, fecha
Aplica técnicas de 5. De acuerdo con su clasificación taxonómica, ¿A qué reinos Se entrega en tiempo y en
esterilización y pertenecen los microorganismos? forma
desinfección 6. ¿Consideras importante el estudio de los
microorganismos? Fundamenta tu respuesta:
7. Enuncia 4 métodos usados para el control de
los microorganismos:
*Enviar la evidencia del cuestionario resuelto por alguna vía de
comunicación acordada entre el estudiante y el docente para su
evaluación.
Cuadro Sinóptico: Introducción
2
El estudiante elabora un cuadro sinóptico después de realizar la
lectura “Introducción a la microbiología y el video Clasificación de a la Microbiología y
los microorganismos, los cuales se encuentran en los siguientes clasificación de
links: microorganismos
Lista de cotejo. Anexo 2
1. Ideas principales
3
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4
cual debe estar pegado en su libreta después de realizar la lectura de microorganismos
del texto “Factores que intervienen en el crecimiento microbiano”
en el Anexo 5
5
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6
El estudiante elabora una tabla ilustrativa digital o en su libreta del Tabla ilustrativa: Métodos de
tema Métodos de control de microorganismos después de ver los control de microorganismos
siguientes videos Lista de cotejo: Anexo 6
Esterilización por calor
https://www.youtube.com/watch?v=Hqxx2qCYleo
Control de microorganismos por agentes físicos
https://www.youtube.com/watch?v=qLfvoGKsFU4
Control de microorganismos por agentes químicos
https://www.youtube.com/watch?v=tOzYtcl6Ynk
Insertar el número de filas que sea necesario de acuerdo a
los métodos que existen.
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Físicos
Químico
s
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la de
transferencia de microorganismos”, y después de comprender microorganismos”
y
analizar el tema que debe incluir los siguientes puntos: Definición Lista de cotejo: Anexo 5
de
siembra en microbiología, descripción y aplicación de cultivos
en
medios sólidos (Tubos con agar inclinado y Siembra en placas),
cultivo
en medios semisólidos y cultivo en medio líquido. Como
información
complementaria se proporciona el siguiente link: Técnicas Básicas
de
Microbiología, Siembra y Aislamiento de
Bacterias:
https://www.youtube.com/watch?v=-TnHCd4sY24
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Aprendizajes y/o
Estrategias de Aprendizaje Productos a Evaluar
Competencias
esenciales 3er parcial
El estudiante elabora un cartel informativo en digital o a mano Cartel informativo: Métodos de
después de realizar la lectura “Métodos de identificación identificación microbiana
microbiana” (Anexo 1), para conocer los diferentes métodos y Lista de cotejo: Anexo 2
procedimientos que se realizan en el laboratorio en la identificación 1. Nombre de tema
de bacterias, donde ponga de manifiesto la información general principal perfectamente
presentando: las áreas donde se emplea la identificación de identificado
Aplica técnicas de microorganismos, clasificación de los métodos y técnicas, un 2. Subtítulos identificados,
identificación de ejemplo de cada uno de ellos. Revisar lista de cotejo que se pero no opacando al
microorganismos encuentra en el anexo 2 para cumplir con los parámetros solicitados tema principal
para la actividad. Puede complementar la información revisando el 3. Tener una
video que se encuentran en el siguiente link: adecuada relación
https://www.youtube.com/watch?v=pC5qJ1rama8 texto imagen
4. No copiar y pegar
información,
14
redactar
apropiadamente la
información
5. Ser creativa
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Nombre del estudiante: Grado
Entrega en tiempo y forma
Fecha:
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e) Oxidasa
10.
La morfología colonial característica de Escheria coli en
agar eosina azul de metileno es
a) Colonias rojas con brillo verde metálico
b) Colonias amarillas con brillo verde
metálico c) Colonias negras con brillo verde
metálico d) Colonias cafés con brillo verde
metálico
11.
La morfología colonial característica de Staphylococcus
aureus en agar sal manitol es
a) Colonias rojas con halo
rojo b) Colonias amarillas
c) Colonias naranjas
d) Colonias cafés con halo rojo
12.
La imagen presenta la prueba bioquímica denominada TSI
en la cual se identifica
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13.
La tinción de Gram pertenece a la categoría de tinciones
a) Simples
b) Complejas
c) Diferenciales
d) Especiales
14.
El método de identificación cuyas siglas son PCR que
significan
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a) Colonias verdes con brillo metálico b) Colonias marrón con brillo metálico
c) Colonias marrón-verde con brillo metálico d) Colonias negras con brillo metálico
La imagen representa un ejemplo de pruebas bioquímicas del tipo
Método tradicional
Determinación de catalasa
Determinación de citrato de Simmons
Método rápido, Kit multipruebas API
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Aprendizajes
esenciales
Carrera: Laboratorista Semestre: 5
Químico º
Módulo IV: Analiza fármacos, cosméticos, alimentos y bebidas con métodos físico-químicos
Módulo/Submódulo:
Submódulo 1: Analiza muestras de fármacos y cosméticos
Aprendizajes y/o
Competencias Estrategias de Productos a Evaluar
esenciales 1er parcial Aprendizaje
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vegetal, microbiológico, artificial o sintético), apoyándose en la Lista de cotejo para evaluar cuadro
lectura del Anexo 6. sinóptico de Química cosmética:
Anexo 7.
El estudiante realiza un cuadro comparativo en digital o a mano de 1. Contiene temas o ideas
las formas cosméticas más comunes: Suspensiones, Emulsiones, principales y secundarias.
Aerosoles, Espumas y Geles. Para su elaboración considerar los 2. El cuadro sinóptico está hecho con
siguientes puntos: Concepto, funciones y ejemplos de cada uno, limpieza, buena letra y con
apoyándose con la información proporcionada en el Anexo: 8. creatividad. 3.El contenido es claro y
está bien distribuido.
Tipos Concepto Funciones Ejemplos 4.Cumple con todas las
representativ características de forma solicitadas
os por el profesor. 5.El cuadro
Suspensiones contiene ejemplos lógicos y
secuenciales.
Emulsiones
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Cuadro comparativo
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3. ¿Qué información debe estar en las etiquetas de los productos Lista de cotejo para evaluar cuadro
cosméticos? comparativo de Formas cosméticas
4. ¿Cuáles son las buenas prácticas de la manufactura de más comunes. Anexo 9.
cosméticos según la NOM y las ISO? 1. Identifica claramenteel
5. ¿Qué es la NOM 141? elemento comparar.
6. ¿Qué es ISO 22716? 2. Incluye las características de cada
7. ¿A qué se refiere la NORMA Oficial Mexicana NOM-189- elemento.
SSA1/SCFI- 201? 3. Presenta la información
8. ¿Quién regula los productos cosméticos en México? organizada lógicamente.
9. ¿Cuál es la NOM que regula la fabricación de cosméticos? 4. Cumple con todas las
10. ¿Cómo se clasifican los productos cosméticos? características de forma solicitadas
11. ¿Qué debe contener una etiqueta de un producto cosmético? por el profesor.
12. ¿Cuáles son los elementos externos e internos que conforman
una etiqueta de cosméticos?
13. ¿Qué debe llevar una etiqueta de gel antibacterial?
14. ¿Qué es una leyenda precautoria?
15. ¿Cuáles son los pictogramas que deben figurar en una etiqueta
de cosméticos? Cuestionario resuelto
16. ¿Quién regula las empresas de cosméticos? Lista de cotejo para evaluar
17. ¿Cuáles son las regulaciones de los cosméticos? cuestionario elaborado en su
18. ¿Qué es? ¿Cuándo se generó? Y ¿Con qué finalidad se generó cuaderno de trabajo: Anexo 11.
el Código COSMEP? 1. Responde correctamente el total
19. ¿Qué es la Autorregulación? del cuestionario.
20. ¿Cuáles son las ventajas y beneficios que ofrece la 2. No incurre en errores ortográficos
autorregulación en productos cosméticos? ni gramaticales.
3.La redacción es clara y permite
El estudiante completa el cuadro comparativo de la Clasificación de la comprensión de la
productos cosméticos, en los que debe considerar: el grupo al que información.
pertenece, tipo de cosmético, principio activo y necesidad o función 4.Presentación en la fecha indicada.
que ejerce, apoyándose con la información proporcionada en el
Anexo 12.
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Cuadro comparativo
Grupo Cosmético Princi Necesid
Lista de cotejo para evaluar cuadro
pio ad o
comparativo de Clasificación de
activo función
Productos Cosméticos: Anexo 13
Shampoo 1.Identifica claramente los
elementos a comparar.
Crema 2. Incluye las características de
hidratan cada elemento.
te 3. Presenta la información
Desodorant organizada lógicamente.
e 4. Cumple con todas las
características de forma solicitadas
Perfume
por el profesor.
Protect
or Mapa mental
solar Lista de cotejo para evaluar mapa
mental de clasificación de
Maquillaje cosméticos según la zona de
aplicación. Anexo 15 1.La idea
Gel
central está representada con una
antibacter
imagen clara que sintetiza el tema
ial
general del mapa mental.
2. Cada rama del área
territorial presenta un color y
tamaño distinto.
3. Cada área territorial presenta una
imagen relacionada a la rama.
4. Contiene todas las ideas primarias
y secundarias relevantes.
5. Las ideas primarias y secundarias
están articuladas y jerarquizadas
según el sentido de las manecillas
32
del reloj.
Mapa conceptual
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El estudiante elabora un mapa conceptual en digital o a mano del Lista de cotejo para evaluar mapa
tema Clasificación de los cosméticos según su acción cosmética conceptual de Clasificación de los
(anexo 16), de los cuales debe considerar los siguientes puntos: 1. cosméticos según su acción
Cosméticos para la higiene, 2. Cosméticos de mantenimiento y cosmética: Anexo 17.
protección, 3. Cosméticos ungulares, 4. Cosméticos de maquillaje, 5. 1. Representa los conceptos
Cosméticos capilares o correctivos, 6. Cosméticos solares, 7. principales a través de un esquema.
Cosméticos decorativos, 8. Desodorantes. Utiliza palabras claves y las
muestras dentro de óvalos o
rectángulos y limpieza total.
2. El mapa conceptual se encuentra
presentado de manera original,
ordenada de manera jerárquica,
lógica y secuencial.
3. Clasificación de conceptos
presentados de manera lógica.
Estos se encuentran relacionados
unos con otros a través de las
palabras clave o conectores.
4. La presentación fue hecha en
tiempo y forma, además se entregó
de forma limpia en el formato pre
establecido (papel o digital).
5. No presenta errores ortográficos.
El estudiante realiza una exposición digital o presencial después de 2. Resumen bien organizado y
revisar el vídeo de Laboratorio cosmética natural en el link: claramente presentado, así como
https://www.youtube.com/watch?v=Y7_0FwZOVDw. Presenta una de fácil seguimiento.
Exposición de la Técnica de extracción de principios activos, 3. Resumen sobresaliente y
funciones, equipos y materiales de laboratorio utilizados y los análisis atractivo que cumple con los
fisicoquímicos de los productos terminados para la formulación de un criterios de diseño planteados, sin
cosmético natural. errores de ortografía. 4.Las ideas se
Así mismo en plenaria los alumnos participan en binas y exponen una relacionaron entre sí en un solo
breve reseña del vídeo, misma que se realizará en el aula de trabajo texto, fueron plasmadas las ideas
para retroalimentar el proceso. más importantes con conclusión
personal.
5.La presentación/exposición fue
hecha en tiempo y forma, además
se entregó
de forma limpia en el formato
pre establecido (cuaderno de
apuntes).
Exposición
Lista de cotejo para evaluar
El estudiante realiza la práctica de elaboración de cosméticos exposición de la Técnica de
caseros y realiza el informe correspondiente revisando el Anexo 20 extracción de principios activos:
Anexo 19.
1. Expresan sus ideas con
orden y análisis.
2. Presentan dominio del
tema a desarrollar.
3. Transmiten las ideas de forma
clara y precisa.
4. Mencionan ejemplos de cada
uno. 5.Elaboran preguntas para
que sus compañeros participen
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activamente.
6. Utilizan apoyos visuales.
Informe de práctica
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El estudiante elabora un cuadro comparativo que incluya imágenes Cuadro comparativo de las
de las operaciones fisicoquímicas en los procesos de elaboración de operaciones fisicoquímicas en los
fármacos: pulverización, tamizado, homogeneización, agitación, procesos de elaboración de
separación, extracción, desecación y esterilización. Ver lectura fármacos
“Pulverización y tamizado” en el anexo 1: Lista de cotejo: Anexo 2
1. Definición
2. Esquemas
3. Métodos
4. Equipo requerido
5. Utilidad
6. Conclusión
El estudiante realiza una lista de definición de conceptos en su libreta Lista de cotejo para evaluar los
de apuntes los siguientes conceptos: buenas prácticas de fabricación, Conceptos: Anexo 6
fabricación, materia prima, procedimiento. El estudiante da lectura
al
Anexo 5
Mapa conceptual
El estudiante elabora un mapa conceptual sobre la salud e higiene Lista de cotejo para evaluar mapa
del personal que elabora fármacos. El estudiante da lectura. Anexo conceptual sobre la salud e higiene
5 del personal que elabora
cosméticos: Anexo 7
Tabla de fármacos
El estudiante elabora una tabla con el nombre químico, genérico y Lista de cotejo
de patente de 10 distintos fármacos considerando el ejemplo que anexo 8
se
encuentra en el anexo 8
Cartel informativo
El estudiante realiza un cartel informativo sobre las partes que Lista de cotejo: Anexo 10
integran un fármaco o medicamento apoyándose para ello con la
lectura que se encuentra en el anexo 9 “Partes de un medicamento”
Protocolo de práctica y
El estudiante elabora un jarabe casero para la tos identificando los producto
principios activos que se encuentran en los componentes de las elaborado
plantas medicinales que emplea para la preparación de este. Para lo Lista de cotejo: Anexo 11
cual debe realizar el protocolo de la práctica y el procedimiento a 1. Portada con todos los
realizar, indicando cada uno de los pasos a realzar. Deberá identificar datos
el vehículo cbp, los principios activos, etc., que emplea en la 2. Marco teórico
elaboración de su jarabe. 3. Objetivo
4. Materiales
5. Procedimiento
6. Resultados y análisis
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7. Concusiones
8. Referencias
9. Producto terminado
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Aprendizajes y/o
Competencias Estrategias de Productos a Evaluar
esenciales 3er parcial Aprendizaje
Analiza muestras El estudiante realiza un listado de los análisis organolépticos, Listado de análisis organolépticos y
de cosméticos y fisicoquímicos y microbiológicos que se efectúan a los productos fisicoquímicos
fármacos cosméticos apoyándose con la Norma Oficial Mexicana PROY-NOM- Rubrica: Anexo 2
259- SSA1-2014, Productos y servicios. Buenas prácticas de
fabricación en productos
cosméticos:
https://www.dof.gob.mx/nota_detalle.php?
codigo=5378954&fecha=20
/01/2015 y los videos Análisis sensorial de cosméticos 1: Cuadro sinóptico de los estudios de
https://www.youtube.com/watch?v=-JAfGIGuUcw y Análisis sensorial estabilidad preliminar y acelerada.
de cosméticos 2 https://www.youtube.com/watch?v=8m0cxIJSIFw, Rubrica: Anexo 2
NOM-089-SSA1-1994:
http://www.ordenjuridico.gob.mx/Documentos/Federal/wo69530.pd Mapa conceptual de los temas
f, Riesgo microbiológico en la industria prueba de anaquel, compatibilidad y
cosmética: material de acondicionamiento y de
https://jornades.uab.cat/workshopmrama/sites/jornades.uab.cat.wo la prueba de transporte y
rk shopmrama/files/industria_cosmetica.pdf distribución
El estudiante elabora un cuadro sinóptico de los estudios de Rubrica: Anexo 2
estabilidad requeridos en un cosmético, estabilidad preliminar y
estabilidad acelerada. Anexo 1 Mapa mental Análisis fisicoquímicos
de fármacos
El estudiante elabora un mapa conceptual de las condiciones de la Rubrica: Anexo 6
prueba de anaquel en cosméticos, prueba de compatibilidad entre
formulación y material de acondicionamiento en cosméticos y la
prueba de transporte y distribución en cosméticos. Anexo 1
40
El estudiante un mapa mental de los análisis físicos y químicos de los
fármacos como: gravedad específica, disolución de una forma
farmacéutica, viscosidad, determinación de humedad, pH, dureza,
pérdida de peso por secado y volumen específico de polvos.
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Aprendizajes
esenciales
Carrera: Laboratorista Semestre: 5
Químico º
Módulo IV: Analiza fármacos, cosméticos, alimentos y bebidas con métodos físico-químicos
Módulo/Submódulo:
Submódulo 2: Analiza muestras de alimentos y bebidas
Aprendizajes y/o
Estrategias de Productos a Evaluar
Competencias
Aprendizaje
esenciales 1er parcial
El estudiante elabora un cuadro SQA en su cuaderno de apuntes, que consta Cuadro SQA con lo
de tres columnas, la primera “S” corresponde al encabezado “Lo que sé”; la aprendido de la
segunda columna “Q” corresponde al encabezado “Lo que quiero saber” y la lectura
tercera columna “A” llevará el encabezado “Lo que aprendí”, de la siguiente “Composición
forma:
PREGUNTAS S Q química de los
“LO “LO QUE “LO alimentos”
QUE QUIERO QUE Lista de cotejo Anexo
SÉ” SABER” APREN 8
DÍ”
¿Qué es la bromatología?
Analiza alimentos
¿Qué es un alimento?
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El estudiante realiza una infografía del Tema de “Carnes” (Anexo 5).
Diagrama de flujo
Lista de cotejo:
Anexo 12
Diagrama de flujo
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https://youtu.be/Osx19qfuQ
oc
https://youtu.be/8ZoLEivYGa
I
https://youtu.be/vQrKUzA9u
1k https://youtu.be/-
j62jrp44yY
El estudiante resuelve en su cuaderno el siguiente cuestionario.
1. Investigar y definir cuáles son los diferentes productos que se
elaboran a partir de las frutas.
2. ¿Qué información proporciona el valor de sólidos totales y sólidos Cuestionario
solubles sobre la calidad de los jugos de frutas? resuelto. Lista de
3. ¿Cuál es la función de la vitamina C en los vegetales? cotejo: Anexo 2
4. ¿Qué otras vitaminas están presentes en las frutas?
5.- Investigar las fórmulas utilizadas para las determinaciones solicitadas.
50
El estudiante elabora una infografía de los conceptos de bebidas alcohólicas
fermentadas, destiladas, licores y cremas, indicando tres ejemplos de cada
una de ellas.
Apoyándose en la NOM-199-SCFI-2017. Bebidas alcohólicas-denominación,
especificaciones fisicoquímicas, información comercial y métodos de prueba.
Complementando con el siguiente link.
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https://www.sag.gob.cl/sites/default/files/MANUAL_BEBIDAS_ALCOHOLICAS. Infografía
p df Lista de cotejo: Anexo
4
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El estudiante elabora un informe de investigación en digital o a mano
después de realizar una investigación documental de las pruebas
fisicoquímicas (5 como mínimo) para el control de calidad de la bebida
propuesta. APOYARSE DE LAS NORMAS OFICIALES MEXICANAS VIGENTES.
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Competencias
Aprendizaje
esenciales 3er parcial
El estudiante realiza una investigación documental del tema “ACEITES Y Informe de
GRASAS COMESTIBLES”, y elabora en su cuaderno el informe de la la
investigación de acuerdo con los criterios del instrumento de evaluación. El investigaci
informe o reporte de la investigación debe apegarse con la siguiente ón
estructura: document
1. Hoja de presentación. al.
2. Introducción. Lista de cotejo con
3. Composición escala
4. Propiedades físicas, químicas y nutritivas.
5. Tipos de grasas y aceites comestibles. estimativa: Anexo 1
6. Procedimiento de obtención.
7. Alteración y conservación.
8. Parámetros que les caracterizan.
9. Referencias bibliográficas.
Analiza grasas y Para la realización de la investigación las siguientes fuentes bibliográficas
aceites son obligatorias:
comestibles. Capítulo 5. GRASAS COMESTIBLES. Páginas 109 - 132 del libro Alimentos:
composición y propiedades (Segunda edición). Se puede leer en línea o
descargar de: http://datelobueno.com/wp-
content/uploads/2014/05/Alimentos- Composicion-y-Propiedades.pdf
Capítulo 4. LÍPIDOS. Páginas 245 - 271 del libro Química de los alimentos
(Cuarta edición). Se puede consultar en línea
o descargar de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Libro-Badui2006_26571.pdf
ACEITES Y GRASAS. Páginas 125 - 142 del libro La alimentación española.
Características nutricionales de los principales alimentos de nuestra dieta
(Segunda edición). Se puede consultar en línea
o descargar de:
54
http://www.fen.org.es/storage/app/media/imgPublicaciones/2018/libro-la-
alimentacionespanola.pdf
Guía Normas APA 7ma. Edición. Se puede consultar en línea o descargar de:
https://normas-apa.org/wp-content/uploads/Guia-Normas-APA-7ma-
edicion.pdf
55
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58
22,2 ml. Calcular el índice de iodo e indicar si el valor se corresponde al aceite
de oliva.
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Las normas a consultar para realizar la investigación solicitada son las Informe de
siguientes: NMX-F-114-SCFI-2011 disponible en el siguiente link: la
https://aniame.com/mx/wp-content/uploads/Normatividad/CTNNIAGS/NMX- investigaci
F- 114-SCFI-2011.pdf ón
document
NMX-F-075-SCFI-2012 disponible en el siguiente link: al.
https://aniame.com/mx/wp-content/uploads/Normatividad/CTNNIAGS/NMX- Lista de cotejo con
F- 075-SCFI-2012.pdf escala
estimativa: Anexo 8
NMX-F-074-SCFI-2011 disponible en el siguiente link:
https://aniame.com/mx/wp-content/uploads/Normatividad/CTNNIAGS/NMX-
F-
074-SCFI-2011.pdf
63
64
PRIMER PARCIAL
Aplica técnicas de esterilización y desinfección
Elaborado por Rebeca Arriaga Martínez
Anexo 1
Lista de cotejo examen diagnostico
INSTRUCCIONES: Marcar el rubro la presencia o ausencia a evaluar. ENVIAR UNA FOTO DEL EXAMEN AL DOCENTE
64
6.-El examen tiene orden y limpieza
Anexo 2
Lista de cotejo: Cuadro sinóptico “Introducción a la microbiología y clasificación de microorganismos”
SEP SEMS DGETI
65
6.-El cuadro es entregado en tiempo y forma
Anexo 3
Resumen
Los métodos utilizados para garantizar la seguridad contra organismos patógenos en un hospital, son la esterilización, la desinfección y la antisepsia; a la
primera se la considera como el proceso más letal de microorganismos en objetos utilizados en la práctica clínica diaria, a la segunda se la considera como un
método que tiene niveles de desinfección y que por lo tanto su letalidad no es tan garantizada, y por último a la antisepsia se la supone como un método
diferente para superficies cutáneas y mucosas.
Los diferentes métodos y técnicas existentes en estos tres tipos de procesos varían según la naturaleza del agente utilizado para eliminar a los patógenos, de
los cuales son más usados los físicos como: la autoclave, el horno Pasteur, las radiaciones ionizantes y los filtros microporos; entre los agentes químicos se
encuentran los de alta, mediano y bajo nivel de desinfección de modo tal que se encuentran: el óxido etileno, el glutaraldehído, el formaldehído, el alcohol,
etc. Cabe recalcar que existe mucha confusión entre los términos de esterilización y desinfección porque muchos de los desinfectantes de alto nivel funcionan
como esterilizadores químicos, del mismo modo, muchos de esos desinfectantes se utilizan como antisépticos en concentraciones diferentes.
Palabras clave
Esterilización. Desinfección. Antisépticos. Desinfectantes.
Abstract
66
The methods used to ensure safety against pathogens in a hospital, are sterilization, disinfection and antisepsis; the former is regarded as the most lethal
process microorganisms objects used in daily clinical practice, the second it is considered as a method that has levels of disinfection and therefore its
lethality is not so guaranteed, and Finally antisepsis is presumed as a different method for skin and mucosal surfaces.
The various existing methods and techniques in these three types of processes vary according to the nature of the agent used to eliminate pathogens, which
are used as physical: the autoclave, oven Pasteur, ionizing radiation and the micropores filters; among those chemicals are: high, medium and low level
disinfection so that include: ethylene oxide, glutaraldehyde, formaldehyde, alcohol, etc. It should be noted that there is much confusion between the terms of
sterilization and disinfection because many of the high-level disinfectants function as chemical sterilizers, likewise, many of these disinfectants are used as
antiseptics at different concentrations.
Keywords
Sterilization. Disinfection. Antiseptics. Disinfectants.
INTRODUCCIÓN
En la actividad diaria de un hospital ocurren una serie de procesos y técnicas realizados por el personal de salud que requieren de mucha seguridad contra
microorganismos patógenos para evitar enfermedades por contaminación, por ello se debe garantizar esta seguridad con métodos de esterilización,
desinfección y antisepsia, mismos que requieren de mucho conocimiento, pues los procesos son muchos y los materiales sometidos a ellos son innumerables.
En orden de mayor a menor letalidad microbiana, se hallan los procesos de esterilización y desinfección, mismos que ocurren en superficies y objetos
inanimados, y por otro lado se encuentra la antisepsia que es un proceso por el cual se garantiza la eliminación de patógenos en mucosas y piel para una
posterior intervención o recuperación cutánea-mucosa.
ESTERILIZACIÓN
La esterilización es definida por la O.M.S. como el proceso de saneamiento más alto de letalidad y seguridad cuya finalidad es la aniquilación de cualquier
microorganismo presente en un objeto, sea patógeno o no patógeno incluidas formas esporuladas, hongos, virus y priones, este término es absoluto ya que se
considera al objeto estéril o no estéril sin rangos intermedios.1-4
Preparación de materiales
Para librar a un objeto de cualquier microorganismo es necesario adecuarlo para tal fin, razón por el cual se lo limpiará, secará, inspeccionará, lubricará (si
precisa) y se preparará en un paquete apropiado, para después esterilizarse y almacenarse hasta su uso. 1,4 En el momento de llevar a cabo la esterilización se
deben tomar en cuenta la naturaleza del objeto y del material envolvente, es así que se toma en cuenta las siguientes clasificaciones:
a) Clasificación de materiales: Los objetos más comunes en el medio hospitalario están hechos de diversos materiales, los mismos varían desde
vidrio hasta tela, en el siguiente cuadro se detallan sus características:
b) Tipos de materiales para empaquetar: La finalidad de empaquetar los materiales u objetos es de manipularlos en condiciones de asepsia, para
ello se debe saber con exactitud la variedad de los mismos que se encuentran en el mercado: 1
67
Materiales de grado médico: Son materiales fabricados para el fin propuesto, entre ellos se encuentran: papel de fibra no tejida (papel crepado), papel
mixto (papel de grado médico y envoltorio de polietileno), polipropileno no tejido y Tyvek Mylar.1,4
Materiales de grado no médico: No son fabricados exclusivamente para la esterilización, por tanto, no tienen garantía para su uso, los mismos
son: muselina, papel Kraft, papel corriente.1,4
Contenedores rígidos: Son metálicos, de diferentes formas y tamaños, algunos tienen perforaciones para autoclaves y los que no las tienen para
usarlos en calor seco.1
Métodos de esterilización
Los métodos de esterilización se pueden clasificar en muchas formas, la clasificación más aceptada es según su naturaleza, misma que los divide en
físicos y químicos:
a) Físicos: Éstos pueden ser mediante calor seco, calor húmedo, radiaciones y filtros:
1. Flameado: Consiste en hacer pasar un objeto por un mechero tipo Bunsen hasta lograr su incandescencia, normalmente este
método se utiliza en los laboratorios de microbiología.1
2. Incineración: Se utiliza para destruir la carga microbiana en la eliminación de residuos biopeligrosos mediante su combustión en
hornos crematorios o incineradores de características especiales.1
3. Horno Pasteur o estufa Poupinel: Este método consiste en un recinto metálico de doble pared y una puerta, donde se emite
calor (con un mínimo de 200 °C) de fuente eléctrica, en su interior se coloca el material limpio y seco en unas bandejas a distintas
alturas.1 Los materiales esterilizables varían desde: Objetos de vidrio termoresistentes, porcelana e instrumental de acero
inoxidable, aceites, vaselina, petrolatos y polvos.1,2
4. Autoclave de vapor: Es un medio en el que se emplea vapor saturado, éste produce hidratación, coagulación e hidrólisis en
albúminas y proteínas de células microbianas. 1,3 El mecanismo consiste en calor húmedo de 121° a 132° C durante intervalos de
tiempo lo que significa una excelente alternativa en la esterilización de priones.1,2
5. Radiaciones ionizantes (radiación gamma): El efecto letal de este método se debe a la formación de radicales entre los
componentes celulares de gran reactividad, por lo que se convierte en un excelente germicida, sin embargo, debido a su alto coste
y complejidad no suele ser instalado en hospitales, pero sí en industrias de soluciones intravenosas, suturas quirúrgicas, material de
implantación (prótesis), instrumental quirúrgico, jeringas, agujas, catéteres, etc.1,3
6. Filtros microporos: Este tipo de esterilización se basa en la acción de criba o tamiz dada por el tamaño de los poros del filtro
(0,22 um el más utilizado), de manera que se pueden esterilizar fluidos, líquidos y gases. 1,2 Los tipos de filtros que están diseñados
para este fin son: de asbesto-celulosa, de vidrio, de cerámica y de ésteres de celulosa o membranas.5
b) Químicos: Los métodos de esterilización química constituyen una serie de soluciones líquidas, gaseosas y plasmas, que en
muchos casos también forman parte de la desinfección de alto nivel, los mismos son:
68
1. Óxido de etileno: Cuando los elementos a esterilizar son sensibles al calor, presión o humedad, se utiliza este gas que tiene la
facilidad de penetrar materiales de goma y plástico. Su mecanismo de función radica en su efecto aniquilante sobre distintos
radicales químicos, modificando la estructura molecular de las proteínas celulares.1,2,5,6
2. Glutaraldehído: Es una solución que actúa sobre los ácidos nucleicos y las proteínas de microorganismos, debido a que no
corroe los materiales se utiliza en endoscopios, laparoscopios, equipos de anestesia, etc., por lo que deben ser sumergidos en un
tiempo mínimo de 8-10 horas.2,4,5
3. Ácido peracético: Es un oxidante, soluble en agua, que no deja residuos tóxicos, en estado líquido es muy corrosivo para los
instrumentos, pero en estado plasma puede esterilizar endoscopios y material de microcirugías.1,4
4. Formaldehído: Puede venir en dos presentaciones: líquida y gaseosa, en su forma gaseosa sirve como desinfectantes de
ambientes, muebles y artículos termolábiles y en su estado líquido (formalina al 37%), se utiliza para conservar tejidos frescos y
para inactivar virus en la preparación de vacunas, ya que interfiere poco en la actividad antigénica microbiana.2,5
DESINFECCIÓN
La desinfección es un proceso por el cual se eliminan relativamente microorganismos patógenos de objetos inanimados, se confunde este término con el
proceso de esterilización porque existen varios niveles de desinfección desde una esterilización química a una mínima reducción del número de
microorganismos contaminantes.2-4
a) Desinfección de alto nivel (D.A.N.):
Elimina a todos los microorganismos, por lo que en condiciones especiales pueden esterilizar, entre ellos se encuentran: orthophthaldehído,
glutaraldehído, ácido peracético, dióxido de cloro, peróxido de hidrógeno, formaldehído, entre otros.4,7
b) Desinfección de nivel intermedio (D.N.I.): La capacidad de letalidad es sólo para bacterias vegetativas y algunas esporas
bacterianas, los más conocidos en este grupo son: fenoles e hipoclorito de sodio.4,6
c) Desinfección de bajo nivel (D.B.N.): Es realizado por agentes químicos que eliminan bacterias vegetativas, hongos y algunos virus
en un período de tiempo corto (menos de 10 minutos), como, por ejemplo, el grupo de amonios cuaternarios.4-7
Métodos de desinfección
La desinfección es uno de los procedimientos más antiguos en el medio hospitalario, inicialmente fue utilizada para eliminar microorganismos del ambiente
e higienizar las manos, actualmente existen los siguientes métodos:4
a) Métodos físicos: Entre los cuales se utilizan la pasteurización, el hervido, el chorro de agua y la radiación ultravioleta, métodos
que no son muy confiables ni habituales en centros hospitalarios.4
b) Métodos químicos: Para los mismos se utilizan desinfectantes, éstos son consideradas como sustancias químicas que se usan en
objetos inanimados y superficies inertes para eliminar microorganismo, excepto esporas.4,7
1. Ortolftalehido al 2%: Se utiliza en la desinfección de alto nivel, alquila los componentes celulares y actúa directamente sobre los
ácidos nucleicos de micobacterias y virus, es efectivo en desinfección de endoscopios, con tiempo de actuación de 12 min a 20°C.34
69
2. Parafolmaldehído: Su uso está restringido a la descontaminación, aunque se inactiva fácilmente en presencia de materia
orgánica, además de ser incompatible con otras soluciones desinfectantes como fenoles, agentes oxidantes, amoniaco y soluciones
alcalinas.3
3. Alcohol 70%: Es una solución que puede utilizarse como desinfectante y como antiséptico, su mecanismo de acción se basa en la
precipitación y desnaturalización de proteínas, por ello se utiliza en desinfección de laringoscopios, tapas de goma, lentes, ampollas,
goteros, etc.3
4. Solución detergente amonio cuaternario (Quik film): Son sustancias catiónicas que actúan a nivel de la membrana celular, por lo
que es útil en la limpieza de superficies de ambientes, limpieza de derrames con sangre, lavado de utensilios de aseo.5,7
5. Peróxido de hidrógeno: Puede utilizarse como desinfectante y antiséptico, soluciones al 10 y 25% sirven como agentes
esporicidas en la desinfección de materiales especiales (implantes de plástico, lentes de contacto y prótesis quirúrgicas).3
6. Hipoclorito: Es el desinfectante más utilizado de este grupo, por lo que se utiliza en desinfección de pavimentos, lavabos, aseos y
zonas de preparación de alimentos, así como en la desinfección de los aparatos de diálisis y tratamiento de aguas.3
ANTISEPSIA Y ANTISÉPTICOS
La antisepsia es un proceso que sirve para eliminar microorganismos presentes en superficies cutáneas y mucosas, para ello se requiere de sustancias
antisépticas que no son nada más que productos químicos usados para el fin mencionado, cabe resaltar que no tienen actividad selectiva pues eliminan todo
tipo de gérmenes por lo que se diferencian de los antibióticos.4,8 Dentro del grupo de los antisépticos existen:
1. Agua oxigenada: Su efecto en las heridas se debe a la efervescencia que produce desbridamiento de tejido necrótico y el aporte
de oxígeno en heridas anaerobias.8
2. Alcohol etílico e isopropílico al 70%: Como antiséptico es un bactericida, que se utiliza en piel antes de inyecciones o
extracciones de sangre, ya que en heridas es muy irritante y produce dolor local en los tejidos.8
3. Gluconato de clorhexidina: Es un bactericida de amplio espectro que tiene la ventaja de no irritar y así no producir reacciones
sistémicas. A menudo su actividad se ve poco interferida por la presencia de materia orgánica incluida la sangre, por lo que se
puede utilizar en embarazadas, neonatos (cordón umbilical) y lactantes.8
4. Povidona yodada: Bactericida que se inactiva en contacto con materia orgánica, puede ser citotóxica y en uso sistemático, se ha
descrito disfunción renal y tiroidea por su absorción sistémica de yodo.
Referencia
Hoyo Serrano Maddelainne et al (2014). Esterilización, desinfección, antisépticos y desinfectantes. Revista de Actualización clínica integral, v 49, La Paz, no.
2014. Recuperado de: http://www.revistasbolivianas.org.bo/scielo.php?pid=s2304-37682014001000010&script=sci_arttext
70
Anexo 4
Lista de cotejo: Tabla comparativa
71
Anexo 5
Factores que intervienen en el crecimiento microbiano.
Los microorganismos, al igual que el resto de los seres vivos, necesitan nutrientes y otros factores específicos para cumplir con su ciclo de vida; cada
organismo es distinto, por lo que los elementos para su desarrollo también dependen de esas variables. Dentro de la contaminación alimenticia por
microorganismo, los factores que intervienen en su reproducción son de dos tipos: intrínsecos (las características fisicoquímicas de los alimentos) y
extrínsecos (las condiciones de almacenamiento, transporte y manipulación). Un tercer factor corresponde a las características propias de los
microorganismos; sin embargo, todos estos elementos terminan por delimitar el medio más favorable para el crecimiento de hongos, bacterias y la presencia
de virus, así como el tipo de contaminación alimenticia que se generará y los efectos que habrá sobre el cuerpo humano. Los nutrientes que los alimentos
poseen son clave para el desarrollo de ciertos organismos, por ejemplo, los azúcares, vitaminas y aminoácidos son favorables para ciertas bacterias y
levaduras. El pH, empleado para medir la acidez de los alimentos, indica que entre más ácido sea un alimento (pH entre 1 y 6) más dificultades tiene para
producir microorganismo, con excepción de los hongos. El agua, o factor de humedad, también es un elemento esencial no sólo para la contaminación
alimenticia, sino para toda la vida en general; básicamente, el desarrollo de microorganismos está determinado por las cantidades de agua que dispongan
para su reproducción. Existen varias técnicas para la reducción de humedad en los alimentos, como el secado, el salado, adición de azúcar, etc. Los niveles
de oxígeno disponibles también influyen en la presencia de microorganismos, por ello dentro de la industria alimenticia se utilizan técnicas al vacío, con
la finalidad de disminuir las cantidades de este elemento, así como otros contaminantes que pueden encontrarse mezclados en el aire.
La temperatura es otro factor importante en el crecimiento microbiano, pues niveles inadecuados de calor potencializan la velocidad con que los alimentos se
contaminan. Los microorganismos termófilos son aquellos cuyas temperaturas óptimas para su crecimiento varían entre 40 y 65 °C, los mesófilos son los que
rondan entre 20 y 40 °C; los psicrófilos aquellos cuya presencia ronda entre los 15 °C y menos, mientras que los psicotróficos están entre 20 y 30°C.
Sin embargo, las altas temperaturas pueden destruir gran parte de los agentes biológicos contaminantes, por ejemplo, mediante la cocción de los alimentos;
en cuanto a las bajas temperaturas, los microorganismos no se destruyen, pero si se mantienen en estado inactivo, para evitar que los alimentos se pierdan
más rápidamente.
Referencia
Factores que intervienen en el crecimiento microbiano. (2018). Recuperado de :https://oa.ugto.mx/wp-content/uploads/2017/10/oa-rg- 0001345.pdf
72
Anexo 6
Lista de cotejo: Mapa Mental “Factores que afectan el proceso de control de microorganismos”
LISTA DE COTEJO: Mapa Mental “Factores que afectan el proceso de control de microorganismos”
73
Anexo 7
LISTA DE COTEJO: Tabla ilustrativa “Métodos de control de microorganismos”
74
SEGUNDO PARCIAL
Aplica técnicas de aislamiento de microorganismos
Elaborado por María Magdalena Arroyo López
Anexo 1
Lista de cotejo
Submódulo: Emplea Técnicas de identificación de microorganismos
Nombre del estudiante:
Grupo:
Fecha:
INSTRUCCIONES: Marcar el aspecto a evaluar la presencia o ausencia a evaluar.
Anexo 2
ANTECEDENTES DEL AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados, sino integrados en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos
microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de otros y trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos o puros. Un cultivo
axénico o puro es aquel que contiene un sólo tipo de microorganismo y que procede generalmente de una sola célula; el crecimiento de ésta origina, en medio
sólido, una masa de células fácilmente visible que recibe el nombre de colonia.
75
Para obtener cultivos puros a partir de una población microbiana mixta, se utilizan las denominadas técnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas
durante el siglo XIX. En un principio, Lister utilizó diluciones seriadas en medio líquido con esta finalidad, pero la presencia de contaminación, es decir, de
microorganismos no deseados, dificultó el aislamiento.
La escuela de Robert Koch introdujo los medios sólidos, complementados con agar, y las placas de Petri en Bacteriología, permitiendo así la separación física
de las colonias sobre la superficie del medio de cultivo o en el interior del mismo. El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies
microbianas.
En el manejo de muestras contaminadas o cultivos mixtos en los que se encuentran diversos microorganismos, el primer paso para proceder a su estudio es
el aislamiento, es decir la separación de cada uno de los posibles integrantes microbianos de la muestra.
Existen diversos métodos para conseguir esta separación, la mayoría de ellos basados en la inmovilización de las células microbianas en la superficie de los
medios de cultivo sólidos. Al depositar una célula bacteriana o una levadura en un punto del medio de cultivo, ésta quedará inmovilizada en ese punto y en él
se reproducirá por absorción de los nutrientes del medio.
Las nuevas células generadas permanecerán igualmente inmóviles y tras sucesivas generaciones conformarán lo que denominamos una "colonia" que no es
más que un montón de células derivadas de una sola célula madre inicial, es decir, un clon de la bacteria o levadura depositada al sembrar.
Esta colonia es visible al ojo humano y presenta diferentes características según el microorganismo que la genera. Esto nos permite distinguir las diferentes
poblaciones microbianas que se encuentran en la muestra sembrada y separarlas transfiriendo una colonia de cada tipo a un nuevo medio de cultivo estéril, a
estos cultivos los consideraremos "puros" por poseer un sólo tipo de microorganismo.
La preparación de un cultivo puro implica no solo el aislamiento de un determinado microorganismo, sino su mantenimiento y el de su descendencia. Es
importante determinar los diferentes medios de cultivo y condiciones de incubación óptimas para cada uno de ellos y así lograr la formación de colonias
visibles aisladas.
Medio de cultivo mixto Medio de cultivo puro
76
Es posible utilizar diferentes estrategias para el aislamiento e identificación de microorganismos: Separación física mediante diluciones seriadas y siembra
en; medios de cultivos selectivos y diferenciales y aprovechamiento de características particulares de los microorganismos. Para facilitar y mejorar el
proceso generalmente se combinan estas estrategias.
Importancia del aislamiento y estudio de los microorganismos
Los microorganismos son vitales gracias a sus funciones ecosistémicas, puesto que ayudan a la circulación de los nutrientes a través de la descomposición de
la materia orgánica o a la conversión de compuestos inorgánicos en compuestos orgánicos que sirven de alimento a muchas otras especies. De hecho, la
aparición del oxígeno a la atmósfera se debe a la actividad de cianobacterias que empezaron a generar oxígeno en los mares primitivos hasta que llegó al
aire, hace más de 2000 millones de años.
Para los humanos, no solo son muy importantes por su presencia indispensable en el sistema digestivo, favoreciendo la absorción de nutrientes y
protegiéndonos contra enfermedades, sino también porque ayudan a obtener alimento gracias a la fermentación. El pan, el vino, los quesos o los embutidos
son fruto de la actividad de diferentes microbios que se encuentran en las materias primeras de estos productos.
De manera que queda claro que tienen un papel muy destacado en el planeta y que no necesariamente todos son perjudiciales. El problema, sobre todo, viene
cuando se encuentran nuevos microbios contra los que no se está preparado, principalmente provenientes de especies animales con las que no se tenían
contacto cercano o que se encuentran en malas condiciones. En estos casos, el salto de los organismos microscópicos de unos animales a otros es mucho más
probable.
La deforestación y la destrucción de los hábitats y el tráfico de especies, legal e ilegal, son los causantes de que estemos más cerca de especies diferentes a las
habituales y que estén en mal estado. De manera que se evidencia, una vez más, que el impacto que causamos a la naturaleza termina teniendo efectos
perjudiciales hacia los humanos.
Referencia
FBIOyF (2020), Microbiología general, Siembra y aislamiento de microorganismos , documento científico, recuperado de:
https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/202403/mod_resource/content/1/2020%20TP2%20BIOQ%20Y%20LCTA.pdf
Anexo 3
Lista de cotejo para evaluar mapa mental del tema “Antecedentes e importancia de las técnicas de aislamiento”
Nombre del estudiante:
Grupo:
Fecha:
INSTRUCCIONES: Anote en cada casilla los puntos obtenidos por el alumno en cada criterio por evaluar.
77
Aspecto a Si No cumple
evaluar cumple
La idea general se ubica en la parte superior del esquema y a partir de ella se desarrollan los
demás conceptos.
Es elaborado de forma armoniosa creando un impacto visual que facilita la comprensión del contenido
Anexo 4
SIEMBRA Y FORMAS PARA REALIZAR LA TRANSFERENCIA DE MICROORGANISMOS
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. Para
sembrar en microbiología es necesario mantener la habitación sin corrientes de aire y estar al lado de la llama de un mechero (no más de 15 cm. de
distancia). También se puede trabajar bajo campana, o en flujo laminar, previa esterilización con luz UV.
La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando ansa, hilo, o bien hisopo o pipeta estéril. Se debe esterilizar en la llama (hasta
que todo el filamento se haya puesto al rojo vivo) el asa o el hilo y enfriar, antes y después de realizada la siembra (Observa figura 1).
78
Fig.1. Ilustra la forma de realizar la toma de muestra junto a la flama del mechero
79
Fig.2. Siembra en agar inclinado
» Siembra en placas: Puede ser en superficie (utilizando espátula de Drigalski, ansa o hisopo) o por mezcla (el inóculo con el medio de cultivo agarizado aún
fundido, a temperatura de unos 45ºC, se mezclan y se vierte en la placa de Petri. Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el
medio puede provocar condensación en la tapa de la misma durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento
confluente. En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar
microorganismos, sino además para contar y aislar. En general cuando se quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado, es necesario
diluir la muestra en tubos con suero fisiológico estéril.
80
CULTIVO EN MEDIO SEMISÓLIDO
Se utilizan tubos sin inclinación. Se siembra por picadura o punción utilizando un hilo. Este tipo de medio contiene una proporción menor de agar que los
medios sólidos. El medio queda inoculado al introducir el hilo en profundidad, pero sin tocar el fondo del tubo, retirándolo posteriormente por la misma
trayectoria utilizada al realizar la picadura. En medio semisólido se podrá comprobar si el microorganismo es o no móvil, ya que en el primer caso se
observará que el crecimiento difunde alrededor de la zona donde se hizo la picadura, detectándose turbidez (ver ejemplo tubo 1 de la figura 4).
Los microorganismos inmóviles crecerán únicamente a lo largo de la picadura (ver ejemplo tubo 2 de figura 4). Una siembra con ansa o con un cierto
movimiento de vaivén podría originar un patrón de crecimiento que se interpreta erróneamente como movilidad bacteriana. Este tipo de siembra en
picadura sirve, también, como otro método de conservación de microorganismos anaerobios facultativos.
Referencia
FBIOyF (2020), Microbiología general, Siembra y aislamiento de microorganismos parte 1, páginas 3, 4 y 5 documento científico recuperado de:
81
https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/202403/mod_resource/content/1/2020%20TP2%20BIOQ%20Y%20LCTA.pdf
Anexo 5
Lista de cotejo: Infografía del tema “Siembra y formas para realizar la transferencia de microorganismos”
82
Anexo 6
TÉCNICAS DE AISLAMIENTO
Aislar es separar un tipo de microorganismo a partir de una población heterogénea de microorganismos. En hábitats naturales raramente encontramos un
solo tipo de microorganismo en una muestra, por lo tanto, es necesario hacer algún procedimiento de aislamiento para separar e identificar los distintos
tipos de microorganismos presentes.
El objetivo del aislamiento es obtener colonias bien separadas (las colonias se forman a partir de una sola “unidad formadora de colonias”) de las que se
conseguirá un cultivo puro. Una vez obtenidos los cultivos puros se podrán estudiar las características macroscópicas, microscópicas, fisiológicas, etc. de un
microorganismo en particular.
Hay que tener en cuenta que siempre el aislamiento se da en un medio sólido. El medio líquido sirve para enriquecer, pero no para aislar. El aislamiento se
puede lograr directamente a partir de una muestra cuando el o los microorganismos están en una proporción adecuada. Cuando el microorganismo que se
desea aislar e identificar se encuentra en baja proporción en la muestra, o interesa un solo tipo de microorganismo, se lleva a cabo un procedimiento que
involucra una primera etapa de aumento del número de microorganismos del tipo que se desea aislar en relación al resto de la población (enriquecimiento).
Luego se aísla por el método de estrías o por dilución y se identifica. Para aislar se utiliza alguno de los siguientes procedimientos:
A) Métodos generales
1) Por diseminación en superficie
2) Por mezcla.
B) Métodos especiales.
MÉTODOS GENERALES
● Por diseminación en la superficie de un medio sólido en placa de Petri
Es la técnica más utilizada. Con un ansa de siembra, calentada al rojo vivo en el mechero y enfriada cerca del mismo, se toma una muestra del cultivo de
microorganismos y se extiende sobre la superficie de la placa con el medio agarizado, pero sin hacer presión para no dañar el agar. Se lleva la placa a incubar
a la temperatura adecuada, siempre en posición invertida lo que evitará que el agua de condensación se deposite sobre la superficie del medio, dificultando
la obtención de colonias aisladas.
Mediante estas técnicas se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un elevado número de bacterias. Existen distintos tipos de
trazados tendientes a lograr una buena separación entre los gérmenes sembrados. Se puede sembrar por:
» Agotamiento de asa: Se flamea el asa, se enfría y después de rozar la siembra realizada previamente, se realizan estrías en dos placas en forma
consecutiva sin recargar el asa.
83
» Depósito y posterior quemado: Se carga el asa con la muestra y las estrías se extienden sobre un área pequeña de la superficie de la placa. Se
retira el ansa, se quema a la llama, y luego de enfriarla en el interior de la placa se hacen nuevas estrías por otra zona tocando ligeramente
la muestra sembrada anteriormente. Este proceso puede repetirse sucesivamente, flameando y enfriando el ansa al comienzo de las
sucesivas siembras en estría, de acuerdo a la carga inicial de microorganismos. Tras la incubación, se observarán las colonias aisladas en
alguna región de la placa inoculada, donde se puede estudiar la morfología colonial.
» Dilución previa en solución fisiológica o caldo: Se toma la muestra para aislar y se la resuspende en solución fisiológica o caldo nutritivo,
preparando luego diluciones seriadas decimales en condiciones asépticas. Se toman las diluciones y se estría con ellas una placa para cada
una. En la dilución adecuada se obtendrán colonias aisladas.
» Extensión en superficie con espátula de Drigalski: Aquí también pueden prepararse diluciones decimales. Se deposita sobre la superficie de la
placa una gota o 0,1 ml de una determinada dilución del cultivo de microorganismos y se extiende con ayuda de la espátula, previamente
esterilizada por flameado, en todas las direcciones hasta que esté completamente seco.
Fig. 1. Siembra por depósito y posterior quemado (izquierda). Siembra por extensión en superficie con asa de Drigalsky (derecha)
Tras el período de incubación las colonias aparecen sobre la superficie, distribuidas uniformemente si la siembra se ha realizado de forma correcta
(Observar ilustración 1). Podrán diferenciarse las colonias de acuerdo a su tamaño, forma, color, textura, etc. Esta técnica de siembra, además de permitir el
aislamiento de colonias, permite el recuento de bacterias viables en la muestra, si se conoce exactamente el volumen de muestra sembrado.
● Por mezcla
84
Esta técnica tiene la ventaja de permitir el cálculo del número de bacterias presentes en la muestra, si se trabaja con exactitud. Se realizan diluciones seriadas
de la muestra y se coloca en tubos estériles, por separado, el mismo volumen de cada una. Luego se vierte en el tubo, medio de cultivo fundido y atemperado
aproximadamente a 45ºC. El contenido se homogeneiza por rotación, y luego se lo vierte sobre la superficie de una placa de Petri. Tras la homogeneización, se
dejan enfriar las placas hasta que se solidifique el medio y posteriormente se incuban a la temperatura adecuada (siempre en posición invertida).
Otra variación de esta técnica consiste en depositar en una placa de Petri vacía un pequeño volumen conocido de muestra y a continuación añadir el medio de
cultivo fundido y atemperado, mezclando por rotación suave de la placa (observar Figura 2). De esta forma los microorganismos se distribuirán
homogéneamente en el medio de cultivo, permitiendo el desarrollo de colonias separadas por todo el agar.
Las colonias aparecen distribuidas por toda la masa del agar. Aquellas que están en la superficie tendrán distintas características, dependiendo del tipo
microbiano, mientras que las colonias que se desarrollan en el interior, bajo la superficie del agar, tienen forma lenticular, aunque los microorganismos que
formen las distintas colonias sean de distinto tipo. Por tanto, las colonias que aparecen en la profundidad del agar son siempre biconvexas y no se diferencian
unas de otras por su morfología. Aunque con esta técnica se obtienen colonias aisladas, generalmente sólo se utiliza para determinar el número de
microorganismos viables en una muestra, cuando éstos son anaerobios facultativos o microaerófilos.
MÉTODOS ESPECIALES
Se basan en las características del germen que se quiere aislar. Hay que tener en cuenta que puede haber gérmenes que poseen idénticos comportamientos
frente a un mismo agente físico o químico.
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I) Calentamiento: se utiliza para el aislamiento de gérmenes esporulados de los no esporulados. Consiste en calentar la suspensión a 100ºC
durante 10 min. y 85ºC durante 15 o 30 min. Luego se siembra en medios sólidos.
II) Agregado de álcali o ácido: tratamiento de la muestra con algunos de estos agentes ya que existen microorganismos que los resisten y otros
que no.
III) Variaciones de la temperatura de incubación: incubando a dos temperaturas distintas
IV) Cambios en el pH: existen unos pocos gérmenes que pueden crecer en medios con pHs extremos.
V) Presencia de sales o colorantes: debido a la capacidad de distintos microorganismos de crecer o no en medios con sales, sustratos, colorantes
o antibióticos, se utilizan distintos medios de cultivo con el fin de lograr su aislamiento.
Referencia
FBIOyF (2020), Microbiología general, Siembra y aislamiento de microorganismos parte 1, páginas 5, 6 y 7 documento científico recuperado de:
https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/202403/mod_resource/content/1/2020%20TP2%20BIOQ%20Y%20LCTA.pdf
Anexo 7
Lista de cotejo: Diagrama de flujo representando el procedimiento que se lleva a cabo en el método general por diseminación en la superficie de un medio
sólido en placa de Petri por agotamiento de ansa.
Nombre del estudiante:
Grupo:
Fecha:
Instrucciones: Anote en cada casilla los puntos obtenidos por el alumno en cada criterio por evaluar.
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Tercer parcial
Aplica técnicas de identificación de microorganismos
Elaborado por Elda Pérez Ortiz
Anexo 1
Identificación microbiana
Se entiende por identificación microbiana al conjunto de técnicas y procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un microorganismo. Estas
técnicas se utilizan en diferentes áreas, por ejemplo:
Área clínica donde es de capital importancia conocer cuál es el agente causal de la infección que presenta un paciente, de manera de
poder tratarlo con agentes terapéuticos.
Industria farmacéutica, cosmética y de alimentos donde las normas de control de calidad exigen la ausencia de ciertos microorganismos.
Investigación básica donde se aísla un determinado microorganismo que debe identificarse para comprobar si se trata de un
microorganismo conocido o de uno nuevo para poder clasificarlo.
Es muy importante conocer el fundamento de los métodos existentes para la identificación microbiana.
En el área de producción de medicamentos y cosméticos, la fabricación de éstos debe realizarse en áreas controladas libres de microorganismos, para evitar
la contaminación del producto, y como consecuencia de ello, se produzca su deterioro, o lo que es más grave que el producto contaminado le cause una
infección a un consumidor, en la industria de medicamentos y/o cosméticos, deben conocerse las normas que rigen la calidad microbiológica del producto a
ser elaborado, los microorganismos objetables y el fundamento de los métodos oficiales para descartar la presencia de éstos. También en el caso de la
industria alimentaria, los alimentos son sometidos a una serie de controles microbiológicos para asegurar la ausencia de microorganismos que pueden
causar enfermedades y/o descartar la presencia de toxinas capaces de causar intoxicaciones alimentarias.
Por estas razones, es importante conocer los métodos en los cuales se basa la identificación microbiana. No todos los microorganismos se identifican por las
mismas técnicas. La mayor parte de los métodos se realizan en un laboratorio y se busca utilizar el menor número de procedimientos y ensayos posibles.
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elección; permite el aislamiento del microorganismo implicado, su identificación. En el cultivo es esencial la correcta elección del medio de
crecimiento y las condiciones de incubación.
En el proceso de identificación bacteriana tradicional, la experiencia del microbiólogo es fundamental para la elección de una prueba o una batería
de pruebas de forma secuencial en función de la fiabilidad de las mismas, del género o de la especie bacteriana que se pretende identificar, del
origen del aislado bacteriano.
En la mayoría de los casos la identificación no se realiza con base a un solo método, sino a la combinación de más de uno. Ejemplo: identificación de
bacterias con base a criterios morfológicos, tinción diferencial, pruebas bioquímicas y serológicas.
a) Métodos basados en criterios morfológicos:
● Características microscópicas. Revela la forma (cocos, bacilos y espirilos), la manera de agruparse, la estructura
de las células y su tamaño, y macroscópicas
● Características macroscópicas. La morfología de las colonias es fundamental en la identificación preliminar y para
la diferenciación de los microorganismos. Para la observación morfológica es preferible examinar colonias de
cultivos frescos crecidas en medios no selectivos. En este paso de la identificación es muy importante el
aislamiento de las bacterias en cultivo puro ya que esta debería estar compuesta por un solo tipo de
microorganismos y procedería de una única célula. Las colonias de una única especie, cuando crecen en medios
específicos y bajo condiciones idóneas se describen por sus características de tamaño, forma, consistencia, y a
veces por su color
b) Métodos basados en tinción diferencial:
Este método está basado específicamente en la tinción diferencial de Gram en el que las bacterias se clasifican en Gram positiva y Gram
negativas, de acuerdo a la estructura que conforma su pared celular.
c) Métodos basados en pruebas bioquímicas:
Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias objeto de identificación. Algunas de estas
pruebas son técnicas rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas
pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a 48h; a este
grupo pertenecen la mayoría de las pruebas que detectan componentes metabólicos o aquellas que determinan la sensibilidad de un
microorganismo a una
sustancia dada tras cultivo en medios de identificación que contienen el sustrato a
metabolizar.
2. Métodos basados en tipificación con fagos. La fagotipificación es un método utilizado para detectar cepas únicas de bacterias. Se utiliza
para rastrear la fuente de brotes de infecciones. Los virus que infectan a las bacterias se denominan bacteriófagos ("fagos" para
abreviar) y algunos de ellos solo pueden infectar una única cepa de bacterias. Estos fagos se utilizan para identificar diferentes cepas de
bacterias dentro de una sola especie.
88
Dependiendo del método de replicación, los fagos pueden clasificarse ampliamente como fagos virulentos (replicar por vía lítica) y fagos temperados
(replicar vía tanto lítica como lisogénica).
La fagotipificación es un método rápido y de bajo costo para la vigilancia epidemiológica y la investigación de brotes (identificación de la fuente de
infección).
La fagotipificación es el método de tipificación más ampliamente reconocido para Staphylococcus aureus y también se sigue utilizando
ampliamente para subdividir serotipos de Pseudomonas aeruginosa y Salmonella/Shigella spp.
3. Métodos basados en pruebas serológicas. Tienen como fundamento particular la reacción del antígeno presente en el agente
microbiano con su anticuerpo correspondiente. Los serotipos permiten realizar la diferenciación de microorganismos a nivel de
subespecie, algo de gran importancia en epidemiología.
4. Métodos basados en detección molecular. Dados los problemas inherentes que presentan los sistemas de identificación fenotípicos (no
todas las cepas de una misma especie muestran características homogéneas, una misma cepa puede generar diferentes patrones en
ensayos repetidos y también las limitaciones en las bases de datos, entre otros), los métodos moleculares se han erigido como
procedimientos complementarios, alternativos o incluso de referencia a los fenotípicos.
A través de procedimientos y reactivos, se pueden detectar determinadas secuencias de ADN que son propias de un determinado agente microbiano.
Para microorganismos que no pueden ser cultivados por métodos tradicionales o como un método de gran eficiencia y eficacia se emplea el PCR
(Reacción en Cadena de la Polimersa), que son un tipo de pruebas de diagnóstico que permite identificar un fragmento del material genético de un
microorganismo, es una manera rápida y sencilla de crear copias ilimitadas de ADN a partir de una sola hebra original. Se crean millones de copias
de una sección de ADN en tan solo unas horas. Así como esta prueba existen diferentes pruebas que se basan en la identificación de material
genético lo que las hace más exactas específicas
5. Métodos proteómicos. La proteómica es el estudio y caracterización del conjunto de proteínas expresadas por un genoma (proteoma).
Las técnicas de proteómica abordan el estudio de este conjunto de proteínas y las más usadas se basan en la electroforesis y en la
espectrometría de masas.
Referencias
Bou Germán et al (2011). Métodos de identificación bacteriana en el laboratorio de microbiología, ElSEVIER, Vol. 29. Núm. 8, paginas 601- 608.
Recuperado de: https://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-articulo-metodos- identificacion-
bacteriana-el-laboratorio-S0213005X11001571
Fernández Olmos Ana et al (2010). Métodos de identificación bacteriana en el laboratorio de microbiología, Procedimientos en microbiología
clínica, ed. Eimc. Recuperado de:
89
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimc- procedimientomicrobiologia37.pdf
Anexo 2
Lista de cotejo para evaluar cartel informativo
90
6 Jerarquizan la información empleando títulos,
. subtítulos
y cuidando la adecuada relación
7 Contiene toda la información del tema métodos
. de
identificación microbiana, así como los subtemas
correspondientes de manera concisa y completa
8 Presenta información actualizada del tema
.
9 Incluye la información del tema de forma precisa
. y
coherente
1 Tiene la referencia documental de donde se obtuvo
0 la
. información
Total
Anexo 3
Morfología microscópica y tinciones
La forma de las bacterias al microscopio está determinada por la rigidez de su pared celular. Básicamente, se diferencian según su forma en:
1. Cocos. Son bacterias con forma esférica u ovalada, su tamaño va de 0,6 a 1 micrómetro.
2. Bacilos. Son bacterias alargadas, rectas o curvas en forma de bastón o píldora, difieren entre especies por su anchura, longitud y la forma
de sus extremos.
3. Espirilos o espiroquetas. Son bacterias en forma de espiral, se agrupan en los de espira rígida llamados espirilos y los de espira flexible
denominados espiroquetas. Para efectos de su clasificación se tienen en cuenta la longitud de la vuelta, la presencia o ausencia de
envoltura externa, el ángulo formado por los extremos de la célula y la composición del filamento axial.
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Las bacterias pueden mantenerse unidas unas con otras después de la división celular, pero conservando siempre la independencia celular. Si el plano de
división es único, podemos encontrar diplococos o cocos en cadena (microorganismos del género Streptococcus). Si los planos de división son muchos, los
cocos pueden agruparse en tétradas o en racimos (Staphylococcus). Los bacilos pueden ser muy cortos (cocobacilos) o muy largos. Sus extremos pueden ser
redondeados o rectos; pueden estar aislados, en cadenas, en filamentos o formando letras chinas ( Corynebacterium). Los bacilos curvos pueden tener forma
de coma (Vibrio cholerae).
La morfología bacteriana debe ser observada con el microscopio óptico o el microscopio electrónico, dado el tamaño pequeño de estos microorganismos. El
más usado en el laboratorio es el microscopio óptico de campo claro, pero existen otros como el microscopio óptico de campo oscuro en los que los
organismos aparecen brillantes en fondo oscuro.
Preparaciones biológicas
Con el objeto de lograr mejor observación microscópica de los microorganismos, células o tejidos que se han teñido y aclarado es necesario montarlos
temporal o permanentemente durante períodos más o menos prolongados en medios especiales para evitar que se deformen o destruyan.
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Los montajes se efectúan normalmente en laminillas microscópicas (portaobjetos y cubreobjetos), formando en conjunto una preparación biológica
En toda preparación biológica el material por observar se coloca sobre el portaobjetos, se extiende o se acomoda convenientemente, se le agrega el medio de
montaje y sobre este se coloca el cubreobjetos, que es mucho más delgado que el primero, de manera que la distancia que lo separa del material biológico es
mínima y permite observaciones al microscopio a grandes aumentos
Las preparaciones para observar microorganismos se clasifican en:
1. Preparaciones en fresco
Las preparaciones en fresco se utilizan para observar microorganismos vivos o de tejidos biológicos que requieren ser hidratados. Las
preparaciones en fresco mantienen la hidratación durante un periodo de aproximadamente 30 minutos.
Si la muestra es líquida se colocan unas gotas de la muestra en el centro del portaobjetos con la ayuda de una pipeta.
Si la muestra es sólida se coloca primero unas gotas de agua destilada o de solución salina sobre el portaobjetos y a continuación un fragmento de la
muestra con la ayuda de unas pinzas o un asa bacteriológica.
Sujetando el cubreobjetos por dos de sus lados, se apoya otro de sus lados sobre el portaobjetos de modo que forme un ángulo de aproximadamente
45 grados.
A continuación, se suelta con cuidado el cubreobjetos de modo que quede colocado sobre el líquido que se depositó anteriormente. (Mediante este
procedimiento se evita la formación de burbujas dentro de la muestra. En caso de que hayan aparecido burbujas entre el portaobjetos y el
cubreobjetos será necesario repetir el procedimiento anterior.)
En caso de que haya un exceso de líquido alrededor del cubreobjetos eliminarlo mediante papel absorbente.
2. Preparación temporal
La preparación temporal es aquella que es utilizada en el momento de la observación, ya que requiere que el medio de montaje no se evapore tan
rápidamente, que sea posible que el material biológico se conserve por un tiempo en condiciones apropiadas para ser observado.
3. Preparación permanente
Las preparaciones permanentes son aquellas que duran para siempre, por lo que deben hacerse con material especial, para que el cubreobjetos
permanezca perfectamente adherido al portaobjetos durante años
Tinciones
En microbiología el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona importante información para la identificación temprana y definitiva de los
microorganismos.
Para aprovechar esta ventaja de los microscopios, se han desarrollado técnicas de tinción que destacan las características morfológicas de los
microorganismos. Existe una gran variedad de tinciones que pueden ser aplicadas dentro del campo de la microbiología.
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Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a células, tejidos, fibras, etcétera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes
naturales, los cuales son extraídos de plantas o animales, y colorantes artificiales, que son aquellos de minerales procesados y manipulados en el laboratorio.
Químicamente, el colorante está constituido de un componente cromóforo y un auxócromo.
Aunque los microorganismos vivos se pueden observar directamente en fresco al microscopio óptico, la mayoría de las veces es necesario teñirlos para que,
por medio del uso de colorantes, sea mucho más fácil su identificación; además, la presencia de ciertas estructuras, así como su reacción a determinadas
técnicas, nos permite clasificar a las bacterias. Así pues, los colorantes tienen las siguientes funciones:
1. Permiten hacer visibles a los objetos microscópicos y transparentes.
2. Revelan su forma y tamaño.
3. Muestran la presencia de estructuras internas y externas.
4. Producen reacciones químicas específicas
Las tinciones se pueden clasificar como:
a) Simples. Cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un solo colorante (azul de lactofenol, azul de metileno o tinta china)
b) Diferencial, cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen)
c) Específica, cuando se utilizan anticuerpos marcados con una molécula fluorescente para identificar una estructura celular en particular
(inmunocitoquímico).
Algunas técnicas de tinción como Gram o Ziehl Neelsen requieren antes de su proceso la fijación de las muestras, con la finalidad de preservar la arquitectura
estructural y química de las células.
Existen dos tipos de fijadores: físicos y químicos. Entre los procesos de fijación físicos se tienen los siguientes: desecación, calor seco, calor húmedo,
ultrasonido y microondas, mientras que los procesos de fijación químicos se pueden clasificar como oxidantes y reductores, de acuerdo con sus propiedades
químicas. Entre los agentes químicos oxidantes se encuentran: óxido crómico, ácido acético, ácido pícrico, acetona, dicromato de potasio. Los agentes
químicos reductores son: formaldehído, glutaraldehído, etanol, metanol, paraldehído, etcétera.
La técnica de tinción más comúnmente empleada en la identificación bacteriana en la industria alimenticia y farmacéutica-cosmética es la técnica de Gram
Tinción de Gram
La Tinción de Gram consiste en una técnica de laboratorio diseñada por Christian Gram en el año 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba con
la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas.
Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra.
Así, las bacterias que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están formadas por una pared más fina formada por menos capas de
peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al microscopio aparecen incoloras. El cristal violeta
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se une a la pared bacteriana y se estabiliza con el lugol. La mezcla alcohol-acetona disuelve la membrana externa de las bacterias Gram negativas (más fina que la de las Gram positivas) extrayéndose el cristal violeta.
Después se tiñen solo las Gram negativas con safranina (Fig.4).
Referencias
Identificación microbiana. Recuperado de:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_12_identificaci%C3%B3n.pdf
López-Jácome Luis Esaú et al (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Medigraphic, Vol 3, Núm 1, enero marzo 2014, pp 10
– 18. Recuperado de: https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
Padilla Heydy (2019) Montaje de preparaciones frescas, temporales y permanentes. ClubEnsayos. Recuperado de:
https://www.clubensayos.com/Ciencia/Montaje-de-preparaciones-frescas-temporales-y-permanentes/4899400.html
Anexo 4
Lista de cotejo para evaluar juego de mesa “Maratón Morfología microscópica y tinciones”
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Fecha de
entrega
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Anexo 5
Morfología colonial
La morfología colonial bacteriana son aquellas características descriptivas que ayudan a los microbiólogos a determinar y completar el “perfil” de una
especie bacteriana cultivable. Hay que tener en cuenta que muchos tipos de bacterias en un medio agarizado pueden ser fácilmente distinguibles por las
características de sus agregados celulares en forma de colonias.
Este atributo de las colonias bacterianas es fácilmente visible en medios de cultivo sólidos, bien se hayan “sembrado” o inoculado con cultivos puros (una sola
especie aislada) o con cultivos mixtos (una mezcla de especies desconocidas), en cuyo caso muchas veces se emplea como carácter para la identificación
taxonómica.
Características del crecimiento colonial
La mayor parte de las especies de bacterias que son cultivadas en un laboratorio y que se encuentran en los ambientes naturales tienen la capacidad de
crecer tanto en medios líquidos como en medios sólidos.
En medio líquido
El crecimiento en medios líquidos usualmente es “seguido” experimentalmente a través de mediciones de la densidad óptica del cultivo a través del tiempo.
Este proceso consiste en inocular un medio nutritivo estéril con la especie bacteriana de interés y hacer un seguimiento en el tiempo del aumento de
“turbidez”, que es determinado como un aumento de la densidad óptica, la cual se mide con un aparato electrónico denominado espectrofotómetro.
En medio sólido
El crecimiento bacteriano en medio sólido es un tanto diferente que, en medio líquido, pues las células no están dispersas en un fluido en movimiento, sino
que se agregan formando colonias bien definidas.
Normalmente, el crecimiento en medio sólido es más rápido hacia los extremos de la colonia o, en otras palabras, las células que se dividen más activamente
están en la periferia, entretanto las que están en la región central son más “antiguas”, son inactivas y sufren procesos de autólisis (muerte).
Algunos autores atribuyen estas diferencias de crecimiento en las colonias a la existencia de gradientes de oxígeno, de nutrientes e incluso de productos
tóxicos producidos por las bacterias en el interior de las colonias, afirmando que hacia los extremos existen mayores concentraciones de nutrientes y de
oxígeno que hacia el centro.
En vista de que los bordes de las colonias son de menor grosor que la porción central, el oxígeno y el material nutritivo difunden más fácilmente en dichas
zonas que en el centro, donde, por el contrario, los procesos de difusión son tan lentos que impiden una división celular eficiente.
Es importante comentar, además, que la definición de un patrón morfológico dado en una colonia bacteriana es un proceso sumamente controlado, no solo
metabólicamente, sino también en relación con la expresión de genes, con los procesos de comunicación intercelular, etc.
Además, la morfología de una colonia depende de numerosos factores ambientales como la composición del medio, la temperatura, porcentaje de humedad,
entre otros.
97
Tipos de formas de las colonias bacterianas
Fig. 5. Tipos de morfología que puede presentar una colonia bacteriana Recuperado de: https://www.lifeder.com/morfologia-colonial-bacteriana/
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● Circulares: son colonias muy uniformes, completamente redondas.
● Filamentosas: las colonias que crecen como filamentos que se proyectan desde una región central o núcleo.
● Irregulares: esas colonias que no tienen formas definidas y que son más bien amorfas.
● Rizoides: como su nombre lo indica, estas colonias crecen de forma semejante a las raíces de una planta.
● Fusiformes: aquellas colonias que presentan una forma alargada, como si se tratase de una elipse cuyos bordes han sido estirados
longitudinalmente.
Según los márgenes o bordes
Las colonias pueden presentar diferentes tipos de márgenes o bordes, entre los que destacan:
Entero.
Ondulado.
Lobulado.
Erosionado.
Filamentoso.
Rizado (aquellos que se ven como los anillos de un árbol).
Según su elevación
Finalmente, según la elevación que presenten estos agregados celulares bacterianos sobre un medio sólido, las colonias pueden ser:
Planas: las que tienen poca o ninguna elevación.
Elevadas: se proyectan ligeramente sobre la superficie, pero lo hacen de manera regular, es decir, la elevación es uniforme en todo el
diámetro de la colonia.
Convexas: las que se elevan más notoriamente en el centro, pero cuyos márgenes permanecen más bien adosados a la superficie.
Pulvinadas: las que se asemejan a un “domo” que sobresale de la superficie prominentemente.
Umbonadas: aquellas colonias que presentan bordes elevados, pero que se caracterizan por “proyectar” una mayor masa de células
hacia el centro, adquiriendo una forma similar a una mamá (“mamiliforme”).
Según textura
Además de las características mencionadas, las colonias bacterianas también pueden presentar texturas diferentes que pueden ser apreciadas a simple vista,
de modo tal que se han definido las colonias
Suaves y brillantes.
Rugosas.
Arrugadas.
99
Secas o con aspecto polvoriento.
Escherichia coli ATCC 25922 Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color negro azulado con brillo verde
metálico
Salmonella typhimurium ATCC Crecimiento de bueno a excelente; colonias de gris claro a ámbar
14028
Shigella flexneri ATCC 12022 Crecimiento de adecuado a excelente; colonias desde incoloras hasta ámbar claro
100
Shigella flexneri ATCC 12022 Escaso, Colonia marrón
Escherichia coli ATCC® 25922 Crecimiento entre nulo y moderado, colonias entre amarillas y amarillas verdosas, halo
amarillo
Salmonella abony DSM 4224 Entre 10 y 100 colonias, colonias blanquecinas, halo rojo
Salmonella typhimurium ATCC Crecimiento entre bueno y excelente, colonias blanquecinas, halo rojo
14028
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Crecimiento entre nulo y ligero, colonias amarillas con o sin halo amarillo
Agar Salmonella-Shigella
Medio sin inocular: Color Rojo anaranjado, tono rosado
Escherichia coli ATCC® 25922 Inhibición de parcial a completa; colonias de color rojo carmesí con precipitación
Shigella flexneri ATCC 12022 Crecimiento de adecuado a excelente; colonias de color de rosa claro a incoloras
Salmonella typhimurium ATCC Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color beige con centros blancos
14028
101
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Crecimiento entre nulo y ligero, colonias amarillas con o sin halo amarillo
Staphylococcus aureus ATCC 6538 Colonias amarillas de tamaño mediano, amarillo medio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Colonias amarillas de tamaño mediano, amarillo medio.
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Cepas Resultados del crecimiento
Salmonella Typhimurium ATCC Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas con centros de color negro
14028
Salmonella abony DSM 4224 Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas con centros de color negro
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibición de parcial a completa; colonias de amarillas a rojo amarillentas
Proteus mirabilis ATCC 12453 Crecimiento; colonias de color rojo carmesí con centros negros, proliferación inhibida
Referencias
Parada Puig, Raquel (2021). Morfología colonial bacteriana. Lifeder. Recuperado de https://www.lifeder.com/morfologia-colonial-bacteriana/
Anexo 6
Lista de cotejo para evaluar álbum fotográfico
103
Aspecto a evaluar Cumple Cumple No cumple
completamen parcialmente
te
General
1. Portada contiene todos los datos requeridos: Nombre
de la institución, del submódulo, del trabajo a entregar,
del alumno (apellido paterno, materno, nombre),
nombre del
docente, fecha
2. Incluye índice coherente y bien organizado
3. Entrega en tiempo acordado
Creatividad
4. Creativo, vistoso y ordenado
5. Incluye colores y tipografía apropiados para ser leídos
con
facilidad
6. La secuencia de la presentación de las fotografías
respeta
excelentemente bien el índice
Calidad de la información científica presentada
7. La información es coherente y aparece muy
ordenada.
Existe total coherencia entre el texto y la fotografía.
8. El texto de la fotografía resume perfectamente
la
información esencial
9. No existen errores ortográficos
10. Tiene la referencia documental de donde se obtuvo
la
información en formato APA
Total
Anexo 7
Pruebas Bioquímicas
Las reacciones bioquímicas pueden revelar la información vital necesaria para determinar los géneros de diversas bacterias dentro de una muestra. Por su
naturaleza, las bacterias producen volúmenes grandes de enzimas, y es estas enzimas que permiten su identificación vía métodos bioquímicos. El tipo de
enzimas producidas por una bacteria se puede utilizar generalmente para clasificar su especie dado que las bacterias tienen perfiles enzimáticos distintos.
104
Cada especie de bacterias tiene necesidades metabólicas específicas y confía en diversas enzimas para aprovisionar de combustible esas necesidades
únicas. La presencia de catalasa, gelatinasa, oxidasa, ureasa, por ejemplo, se puede utilizar para determinar la especie de bacterias. Las pruebas actuales para
la identificación microbiana se pueden partir en métodos tradicionales y métodos modernos.
Métodos tradicionales
Pruebas que se utilizan en la identificación preliminar, con lectura inmediata
1. Oxidasa. Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas
Fig. 1. Prueba negativa oxidasa (izquierda), prueba positiva oxidasa (derecha). Recuperado de: http://www.scielo.org.co/pdf/bsaa/v11nspe/v11nespa08.pdf
2. Catalasa. La catalasa es un enzima presente en la mayoría de los microorganismos que poseen citocromos. Las bacterias que sintetizan
catalasa hidrolizan el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno gaseoso que se libera en forma de burbujas.
Fig. 2. Prueba negativa catalasa (arriba), prueba positiva catalasa (abajo). Recuperada de: http://microbitosblog.com/2011/09/27/pruebas-bioquimicas-primarias/
105
Pruebas lentas, con lectura de 18 a 48h:
1. Oxido-Fermentación. Mediante esta prueba se va a determinar si la utilización de los hidratos de carbono por parte de un microorganismo se
realiza por vía oxidativa (proceso aeróbico, presencia de oxígeno) o por vía fermentativa (proceso anaeróbico, ausencia de oxígeno).
2. Rojo de metilo. El rojo de metilo es un indicador de pH. Actúa entre pH 4,2 y 6,3 variando desde rojo (pH 4,2) a amarillo (pH 6,3). Mediante
esta prueba se comprueba la capacidad de un microorganismo de producir y mantener estables los productos terminales ·ácidos de la
fermentación de la glucosa por la vía de la fermentación ácido mixta. Se utiliza como parte de la identificación a nivel de especie de los
bacilos entéricos gramnegativos.
3. Voges-Proskauer. Permite observar si el microorganismo fermenta la glucosa por la vía butanodiólica. Si es así, se forma un producto
intermedio (acetoína) que forma un complejo de color rojizo con el α-naftol. Se usa en la identificación a nivel de especie de bacilos entéricos
gramnegativos
Fig. 3. Pruebas positivas y negativas para rojo de metilo y Voges-Proskauer. Recuperado de: https://winksite.com/xhtml/ms_fo_pg_v?susid=52687&fid=51171&id=40267
4. Utilización de citrato. Esta prueba sirve para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y
compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio
106
5. Descarboxilasas. La descarboxilación es un proceso en el cual las descarboxilasas atacan el extremo carboxilo de los aminoácidos, formando
la correspondiente amina. Los tres aminoácidos que se ensayan en la identificación de enterobacterias son arginina, lisina y ornitina.
Fig. 5. Agar Lisina Hierro para observar prueba de descarboxilación. Recuperado de :http://identificacionbacterias.web16.top/pruebas-bacilos-g/agar-lisina-hierro
6. Fermentación de azucares y presencia de ácido sulfidrhíco en Hierro triple azúcar. Esta prueba se recomienda para la identificación de
patógenos entéricos Gram negativos. Se emplea para detectar la fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas, y
también para detectar producción de ácido sulfhídrico.
A Glucosa, lactosa y/o sacarosa fermentada
B Glucosa fermentada lactosa y sacarosa no fermentadas C
Glucosa fermentada con producción de ácido sulfhídrico D
Ninguno de los tres azúcares es fermentado
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Métodos modernos
Sistemas comerciales multipruebas
Sistemas comerciales manuales o galerías multipruebas. Se trata de celdillas aisladas con un sustrato liofilizado que se inoculan individualmente y que
permiten realizar simultáneamente entre 10 y 50 pruebas bioquímicas. Los resultados de las pruebas se expresan de forma numérica (los resultados de las
pruebas se agrupan de tres en tres, de manera que el resultado de cada trío de pruebas queda reducido a un dígito). Cada especie está definida por un código
numérico, resultado de la codificaciÛn de las reacciones a las pruebas que se hubieran utilizado. Para codificar el dígito de un trío de pruebas se establece el
siguiente sistema: - Si una prueba es negativa se asigna un valor 0 (cero) a la prueba. - Si la primera prueba es positiva se asigna un valor de 1. - Si la segunda
prueba es positiva se asigna un valor de 2. - Si la tercera prueba es positiva se asigna un valor de 4. El código numérico se obtiene sumando los valores de las
tres pruebas. Los límites inferior y superior del código son 0 y 7 respectivamente. Ante un microorganismo problema, se busca el código numérico y se
comprueba a qué bacteria pertenece. Algunos de los sistemas comerciales disponibles en el mercado son: API (bioMÈrieux) Fig. 7, Enterotube (BBL),
Oxi/Ferm Tube (BD), RapID systems y MicroID (Remel), Biochemical ID systems (Microgen), etc.
108
Anexo 8
Lista de cotejo para evaluar infografía
110