ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS PECUARIAS

INGENIERIA DE AGROINDUSTRIA
ANÁLISIS DE PRODUCTOS AGROINDUSTRIALES

Grupo: 12

INTEGRANTES: CODIGOS
Guairacaja Priscila 245
Morán Cristián 269
Malán Rosa 218

Docente
ING. Paola Arguello

Curso
5to “A”

Fecha de entrega
18/07/2021

Riobamba-Ecuador
Tema: Uso virtual de HPLC

Objetivo de la unidad: Analizar la función de los ingredientes usados en la elaboración

de balanceados relacionándolo con su composición química para determinar su uso en la
formación de balanceados.

Objetivo del trabajo: Analizar adecuadamente el impacto de los parámetros

cromatográficos (composición de la fase móvil, pH, y longitud de onda) sobre la calidad
de separación en HPLC a través del uso de un simulador, separando compuestos que
pueden estar presentes en productos agroindustriales.

1. Desarrollo:

Campo de aplicación de la HPLC

Los métodos que utilizan columnas con un tamaño pequeño de partícula, se conoce como
cromatografía liquida de alto desempeño HPLC, esta técnica es la más usada debido a su
alta sensibilidad su adaptación a las determinaciones cuantitativas, idónea para
separaciones de especies no volátiles o termolábiles porque trabaja a temperatura
ambiente. Es de interés para estudio de sustancias en ciencias, industria y sociedad como:
aminoácidos, carbohidratos, terpenoides, plaguicidas, esteroides, hidrocarburos, drogas,
proteínas, antibióticos, órganos metálicos, especies inorgánicas y otras. Para lograr la
separación identificación y cuantificación de estos analitos en muestras que los contienen,
la mayoría de las veces es necesario desarrollar método estandarizados de la literatura.
(Barquero, 2004)

Parabenos

Son unas moléculas utilizadas como conservantes en medicamentos, alimentos y

productos cosméticos. Su uso está en entredicho debido a la posibilidad de que produzca
efectos adversos como disruptor endocrino, lo que conlleva a otros como problemas
reproductivos y efectos carcinógenos, y también a nivel tópico, provocando dermatitis y
otros problemas.

Dependiendo de su estructura química, los parabenos van a tener distintas propiedades.

Una de las más importantes, sobre todo en cosmética, la determina la longitud de la
cadena hidrocarbonada del éster: cuanto más larga sea más liposoluble será el parabeno.
Teniendo en cuenta que la replicación microbiana ocurre, por norma general, en la fase
acuosa, su capacidad como conservante estará marcada por la cantidad de parabeno
disuelto en esta fase, por lo que los más utilizados son los de cadena corta. (Pérez & Ros,
2015)

Los parabenos son una familia de alquil-ésteres del ácido parahidroxibenzoico. El grupo
éster se localiza en la posición C-4 del ácido. Los ésteres más empleados son metil-, etil-
propil-, butil- y bencilparabeno5. Son ampliamente utilizados dadas sus óptimas
características, ya que son moléculas inoloras, incoloras, no volátiles, eficaces en un
amplio margen de pH y económicas. (Díaz, Heras, & Salazar, 2006)

Descripción de los resultados que se obtendrán al final de la práctica de laboratorio

Cuadro 1. Cromatograma
N Gráfico pH Fase móvil Composic Longit Evaluación del desempeño del sistema
B ión de la ud de
fase onda
móvil (nm)
(cantidad
de B)%
1

2.7 Metanol 10 230

2.7 Metanol 35 250

4.5 Metanol 60 220

4

7.0 Metanol 90 320

9.0 Metanol 80 280

4.5 Metanol 50 250

7

2.7 Acetonitrilo 20 250

4.5 Acetonitrilo 50 280

7.0 Acetonitrilo 80 230

10

220
9.0 Acetonitrilo 60

11

7.0 Acetonitrilo 90 270

12 1

7.0 Acetonitrilo 90 210

13

2.7 Metanol 50 200

14

4.5 Acetonitrilo 40 260

15

9.0 Metanol 30 200

16

7.0 Acetonitrilo 20 220

2. Resultados

Cuadro 2. Componentes del cromatograma

N Componente tr(min) k W (50%) N Asymmetry Rs Height Peak Noise S/N
(Mau) Area
1 Uracil 1.74 0.00 0.0078 2.763 1.35 - 5.1 230.9 -
Methylparaben 1.77 0.02 0.076 3.014 1.07 0.17 85.3 3513.3 -
Ethylparaben 1.79 0.02 0.076 3.046 1.05 1.05 97.1 3990.8 0.000 -
Propylparaben 1.83 0.05 0.077 3.175 1.11 1.11 105.2 4385.2 -
Butylparaben 1.89 0.08 0.077 3.319 1.04 1.04 106.9 4435.7 -
2 Uracil 1.75 0.00 0.080 2.637 1.35 - 100.2 69.3 -
Methylparaben 8.27 3.74 0.190 10.535 1.07 20.58 78.9 120.3 -
Ethylparaben 19.22 10.01 0.417 11.790 1.05 15.38 35.3 118.1 0.000 -
Propylparaben 48.44 26.76 1.038 12.064 1.11 17.10 13.1 109.9 -
Butylparaben 126.42 126.42 2.704 12.109 1.04 17.73 4.0 86.0 -
3 Uracil 1.75 0.00 0.079 2.670 1.34 - 0.0 0.0 -
Methylparaben 2.32 0.33 0.084 4.270 1.10 3.01 98.0 1068.6 -
Ethylparaben 3.03 0.74 0.093 5.894 1.09 3.42 97.5 1178.1 0.000 -
Propylparaben 4.52 1.59 0.116 87.383 1.11 6.06 83.1 1259.1 -
Butylparaben 7.85 3.50 0.177 10.891 1.09 9.65 55.0 1263.6 -
4 Uracil 1.75 0.00 0.078 2.777 1.38 - 0.0 -.1.4 0
Methylparaben 1.77 0.02 0.076 3.014 1.07 0.17 -0.3 -10.8 -3
Ethylparaben 1.79 0.02 0.076 3.046 1.08 0.06 0.0 0.0 0.028 0
Propylparaben 1.83 0.05 0.077 3.175 1.05 0.26 0.0 0.0 0
Butylparaben 1.89 0.08 0.077 3.319 1.03 0.29 0.0 0.0 0
5 Uracil 1.75 0.00 0.078 2.741 1.40 - 21.9 829.3 287
Methylparaben 1.87 0.07 0.077 3.238 1.06 0.70 46.8 1588.6 612
Ethylparaben 1.94 0.11 0.078 3.430 1.09 0.38 44.5 1525.9 0.028 581
Propylparaben 2.07 0.19 0.079 3.775 1.12 0.69 38.9 1361.9 508
Butylparaben 2.33 0.33 0.082 4.461 1.07 1.35 28.0 1006.4 367
6 Uracil 1.75 0.00 0.080 2.647 1.34 - 100.3 386.5 -
Methylparaben 3.28 0.88 0.098 6.263 1.10 7.37 151.0 663.2 -
Ethylparaben 5.43 2.11 0.134 9.090 1.09 7.90 108.7 654.3 0.000 -
7 Propylparaben 10.59 5.07 0.235 11.236 1.11 11.89 57.6 609.8 --
Butylparaben 22.72 12.02 0.488 12.029 1.09 14.28 22.0 480.6 -
7 Uracil 1.81 0.04 0.079 2.886 1.35 - 101.1 91.2 -
Methylparaben 10.10 4.79 0.211 12.654 1.07 24.26 71.1 157.8 -
Ethylparaben 22.06 11.64 0.441 13.892 1.05 15.62 33.4 154.4 0.000 -
Propylparaben 50.93 28.18 1.006 14.191 1.11 16.98 13.5 143.6 -
Butylparaben 96.76 54.45 1.908 14.242 1.04 13.38 5.6 112.3 -
8 Uracil 1.75 0.00 0.078 2.749 1.34 - 21.9 383.4 -
Methylparaben 1.95 0.11 0.078 3.439 1.10 1.08 46.5 755.9 -
Ethylparaben 2.32 0.33 0.082 4.450 1.09 1.98 42.6 722.5 0.000 -
Propylparaben 3.10 0.78 0.091 6.436 1.11 3.86 3401 645.7 -
Butylparaben 4.92 1.82 0.117 9.753 1.09 7.44 19.9 482.6 -
9 Uracil 1.75 0.00 0.078 2.777 1.38 - 5.1 237.6 17
Methylparaben 1.75 0.00 0.076 2.950 1.07 0.03 85.7 3581.1 280
Ethylparaben 1.76 0.01 0.076 2.985 1.08 0.06 97.5 4081.3 0.111 319
Propylparaben 1.78 0.02 0.076 3.045 1.05 0.12 105.9 4425.8 346
Butylparaben 1.85 0.06 0.077 3.235 1.03 0.38 107.4 4512.8 351
10 Uracil 1.74 0.00 0.078 2.745 1.40 - 0.0 0.0 0
Methylparaben 1.77 0.01 0.076 2.961 1.06 0.13 107.0 3438.8 233
Ethylparaben 1.85 0.06 0.077 3.203 1.09 0.46 113.7 3790.4 0.166 254
Propylparaben 2.03 0.16 0.079 3.698 1.12 0.98 121.1 4033.4 264
Butylparaben 2.42 0.39 0.083 4.773 1.07 2.08 115.5 4006.3 252
11 Uracil 1.75 0.00 0.078 2.780 1.38 - 82.9 4036.3 723
Methylparaben 1.75 0.00 03076 2.944 1.07 0.01 125.5 5450.0 1094
Ethylparaben 1.75 0.00 0.076 2.958 1.08 0.02 121.6 5286.4 0.041 1060
Propylparaben 1.76 0.01 0.076 2.977 1.05 0.04 109.9 4763.3 958
Butylparaben 1.78 0.02 0.076 3.040 1.03 0.13 83.5 3620.1 728
12 Uracil 1.75 0.00 0.078 2.780 1.38 - 32.0 1556.0 14
Methylparaben 1.75 0.00 0.076 2.944 1.07 0.01 199.5 8664.9 90
 Ethylparaben 1.75 0.00 0.076 2.958 1.08 0.02 191.7 8333.2 0.802 86
Propylparaben 1.76 0.01 0.076 2.977 1.05 0.04 175.3 7596.9 79
Butylparaben 1.78 0.02 0.076 3.040 1.03 0.13 139.7 6055.9 63
13 Uracil 1.75 0.00 0.080 2.640 1.35 - 57.4 236.7 -
Methylparaben 3.25 0.86 0.097 6.198 1.07 7.22 170.6 790.5 -
Ethylparaben 5.11 1.93 0.128 8.791 1.05 7.03 120.4 734.6 0.000 -
Propylparaben 10.19 4.84 0.227 11.161 1.11 12.18 57.4 624.5 -
Butylparaben 21.32 11.22 0.458 11.997 1.04 13.82 17.7 386.5 -
14 Uracil 1.75 0.00 0.079 2.748 1.34 - 124.5 924.8 -
Methylparaben 2.44 0.40 0.083 4.736 1.10 3.62 181.8 1337.4 0.000 -
Ethylparaben 3.62 1.08 0.098 7.498 1.09 5.54 150.9 1307.1 -
Propylparaben 6.23 2.57 0.140 11.007 1.11 9.31 98.0 1207.3 -
Butylparaben 11.60 5.65 0.237 13.261 1.09 12.13 44.8 932.8 -
15 Uracil 1.76 0.01 0.080 2.684 1.40 - 57.2 33.8 62
Methylparaben 7.58 3.34 0.175 10.349 1.06 19.38 95.9 114.4 104
Ethylparaben 18.76 9.75 0.405 11.894 1.09 16.40 38.5 106.5 0.332 42
Propylparaben 53.24 29.51 1.134 12.203 1.12 19.07 11.5 89.7 13
Butylparaben 149.25 84.53 3.175 12.242 1.07 18.96 2.6 55.4 3
16 Uracil 1.81 0.04 0.079 2.886 1.38 - 0.0 0.0 0
Methylparaben 10.10 4.79 0.211 12.654 1.07 24.26 39.8 88.4 87
Ethylparaben 22.06 11.64 0.441 13.892 1.08 15.62 21.0 97.3 0.166 46
Propylparaben 50.93 28.18 1.006 14.191 1.05 16.98 9.7 102.7 21
Butylparaben 96.76 54.45 1.908 14.242 1.03 13.38 5.1 102.5 11
 3. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

La fase móvil es uno de los factores más importantes para obtener una buena separación
de compuestos en este trabajo se tuvo que realizar con el acetonitrilo, ya que este eluyente
tiene una polaridad media disuelve una amplia gama de compuestos iónicos y no polares
y es útil como fase móvil en HPLC. “Se explica debido a que la trietilamina es capaz de
formar par iónico con la forma carboxilato de la CPT lo cual hace que la molécula
disminuya su polaridad y eluya en tiempo de retención más largo” (Largo, 2015)
El PH es uno de los parámetros que también se modificó en este simulador se bajó el pH
a un estado base que es de 7 según la investigación realizada por (Morales, 2018) nos
dice que “Por acción del pH de la fase móvil. Aquellos solutos que presentan carga
(ácidos, bases) dependiendo del pH de la disolución, pueden ser retenidos en su forma no
cargada, siempre que se desplace el equilibrio/base en el sentido de la forma no carga
mediante el pH de la fase móvil”. En este trabajo se puede decir que a pH básico el
equilibrio se desplaza hacia la especie no cargada.
En las condiciones del análisis isocrático aparece cuatro picos bien definidos que osilan
de 1,86 a 96,76 (tr/min) con 20% entre ellos se logra la resolución. “Idealmente, K’ debe
hallarse entre 1 y 20, mucho mejor entre 2 y 10. La retención puede predecirse en función
del factor de retención del analito en 100% de agua, una constante propia de cada analito
(que cada analito toma un valor cercano a 4 en moléculas pequeñas, de peso molecular
inferior a 1000) y de porcentaje del solvente B, en una ecuación binaria que puede
resolverse simplemente con dos inyecciones en modo isocratico, difiriendo solo en el
porcentaje del disolvente B, procedimiento que constituye la base (García & Yusá, 2016)
4. CONCLUSION

Para mantener un equilibrio químico dependerá de las concentraciones del soluto y de la

contracción en la fase móvil. La fase móvil juega un papel importante, por ser la variable
que más influye en la selectividad ya que esta contiene grandes proporciones de agua, que
es el eluyente principal, junto con el modificador orgánico en este caso el acetonitrilo que
completa la composición del eluyente. La presencia del agua permite la variación del pH
de la fase móvil o de la adición de otras substancias que permite modificar al soluto. El
agua es el disolvente menos fuerte para la elución, dando origen de retención muy elevada
por este motivo se utiliza el acetonitrilo.
 5. Bibliografía
Barquero, M. (2004). Mecanismo y aplicaciones de la cromatografía líquida de alyo
desmpeño. Costa Rica: SIEDIN.
Díaz, B., Heras, F., & Salazar, L. (2006). Parabenos: ¿mito o realidad? Madrid, España.
García, A., & Yusá, D. (2016). HPLC instrumental. Valencia .
Largo, M. (Febrero de 2015). Estudio Cromatográfico de los equilibrios que afectan a la
estabilidad de los farmacos antitumorales .
Morales, Y. (20 de abril de 2018). Cromatografía liquida de alta eficiencia .
Pérez, A., & Ros, I. (30 de junio de 2015). PARABENES ¿ ALARMA O REALIDAD?
.