Misión del programa: “La formación de profesionales químicos que lideren el desarrollo, potencien la

investigación y apoyen el aprovechamiento de los recursos naturales del entorno mediante procesos científicos
y tecnológicos”.

UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS, Escuela de Ciencias Químicas

Laboratorio de Bioquímica II
Compilador: Angélica María García T. PhD.

3. PROPIEDADES CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

Material a traer por parte del estudiante: cinta de enmascarar o marcador para rotular, papel
de aluminio, gotero (2), pinza o depilador, un porta y cubre objetos, un sobre de refresco en polvo
de guanabana, pera o cualquiera que no tenga una fuerte coloración, guantes, tapabocas, jabón,
toalla (2, una para uso personal y otra para el trabajo práctico).

INTRODUCCIÓN
Los carbohidratos están ampliamente distribuidos en vegetales y animales asumiendo participación
ya sea estructural, funcional y/o metabólica. Su clasificación depende del número de átomos de
carbono que poseen y su función aldehídica o cetónica, lo cual es la base para los diferentes
métodos de identificación y caracterización. De acuerdo con el número de moléculas monosacáridas
que conformen el carbohidrato, éstos pueden ser clasificados en mono, di, tri, oligo o polisacáridos.
Por otra parte, presentan propiedades características frente a la acción de acidos y/o bases así como
a reactivos específicos.

CONSULTA PREVIA A LA PRÁCTICA

a. Defina los siguientes términos: azúcares, enlace glucosídico, compuesto furfural, compuesto
ozasona, carbonos anoméricos de los carbohidratos, azúcares reductores y azúcares no
reductores, carbohidratos epímeros.
b. Indique el fundamento químico de cada una de las siguientes pruebas o test en carbohidratos:
Molish, Barfoed, Bial (o de orcinol-HCl), Seliwanoff, Lugol, Benedict y Nelson. PARA CADA TEST,
CONSULTE SUS CARACTERÍSTICAS CUALITATIVAS EN CASO DE REACCIÓN POSITIVA Y/O
NEGATIVA.
c. Cite las reglas necesarias para las representaciones de carbohidratos en las proyecciones de
Fisher (monosacáridos) y Haworth (mono, di y/o polisacáridos).
d. Dibuje las representaciones de Fisher y Haworth para los carbohidratos a emplear en la presente
práctica.
e. Realice un diagrama de flujo de la práctica a realizar y no olvide todas las indicaciones para un
preinforme.

MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales: 27 tubos de ensayo, 2 gradillas, 3 vasos de precipitados de 100 o 50 mL, vaso de
precipitados de 400 mL, vaso de precipitados 1L, 1 pipeta de 2 mL, 1 pipetas de 10 mL, pipeteador,
2 varillas de agitación, probeta, papel indicador, plancha de calentamiento, microscopio.
Reactivos: agua destilada, glucosa al 2% y 5%, fructosa al 2%, xilosa al 2%, sacarosa al 2%,
lactosa al 2% y 5%, galactosa al 2% y 5%, Almidón al 2% y 5%, reactivo de molish (α-naftol al 1%
en etanol), reactivo de Barfoed (66g de acetato de cobre, 10 mL ácido acético y llevar a 1L con agua
destilada, disolver y filtrar), reactivo de Bial (1,5 g orcinol en 500 mL de HCl concentrado, agregar 20
a 30 gotas de FeCl3 al 10% (mantener en oscuridad), reactivo de Seliwanoff (0,05 gr resorcinol
(mantener en oscuridad) en 100 mL HCl diluido en agua (1:2), reactivo de Nelson A (1,25 gr Na2CO3
anhidro, 1,25 gr tartrato Na y K, 1,0 gr NasSO4 anhidro, aforar a 50 mL), reactivo de Nelson B (1,5 gr
de CuSO4 5H2O en 10 mL añadir 1 gota de H2SO4 concentrado), reactivo de Benedict, H2SO4
concentrado, butanol, HCl concentrado y 1M, NaOH 10%, HNO3 concentrado, solución saturada de
Ba(OH)2, lugol. La solución para el test de Nelson se prepara de la siguiente manera: 12,5 mL de
Nelson A y 0,5 mL de Nelson B.
PROCEDIMIENTO

1. Propiedades químicas según clasificaciones generales de los carbohidratos

1.1. Realice el siguiente set de tubos con soluciones de carbohidratos al 2%.

mL Muestra
Agua Glucosa Fructosa Xilosa Sacarosa Lactosa Galactosa Almidón Fresco
(Blanco) 2 3 4 5 6 7 8 (sln), 9
Tubo 1
A 0,5
B 0,5
C 0,5
D 0,5
E 0,5
F 0,5
G 0,5
H 0,5
I 0,5
Test de Molish: a cada tubo, adicionar 2 gotas de reactivo de molish y homogenizar. Hacer
escurrir por la pared del tubo inclinado, 1,0 mL de H2SO4 concentrado (NO HOMOGENIZAR),
de modo que forme una capa bajo la solución acuosa. Después de unos minutos observe los
posibles cambios. Analice y discuta lo sucedido en cada tubo apoyándose en el fundamento
químico del test.

1.2. Repita el set de tubos del numeral 1.1 y para la realización del test de Barfoed, a cada
tubo adicione 0,5 mL del reactivo de barfoed y homogenizar. Caliente durante 5 minutos en
baño maría a ebullición. Después de unos minutos observe los posibles cambios. Analice y
discuta lo sucedido en cada tubo apoyándose en el fundamento químico del test.
1.3. test de Bial. Repita el set de tubos del numeral 1.1 con sólo 0.25 mL de muestra; a cada
tubo adicione 0,75 mL del reactivo de Bial y homogenizar. Calentar las soluciones
suavemente hasta que aparezcan las primeras burbujas. Diluir las muestras hasta 3 mL con
agua destilada y agitar con 0,5 mL de n-butanol. Si hay pentosa presente, aparece un color
azul verdoso en la capa alcohólica. Analice y discuta lo sucedido en cada tubo apoyándose en
el fundamento químico del test.
1.4. test de Seliwanoff. Repita el set de tubos del numeral 1.1 con sólo 0.25 mL de muestra; a
cada tubo adicione 1,5 mL del reactivo de seliwanoff y homogenizar. Caliente en baño maría
a ebullición. Después de 5-10 minutos observe los posibles cambios. Analice y discuta lo
sucedido en cada tubo apoyándose en el fundamento químico del test.
1.5. Repita el set de tubos del numeral 1.1 y para la realización del test de Nelson a cada tubo
adicione 0,5 mL del reactivo de Nelson y homogenizar. Caliente durante 20 minutos en baño
maría. Observe los posibles cambios. Analice y discuta lo sucedido en cada tubo apoyándose
en el fundamento químico del test. Para las muestras en que este test de negativo, repetir el
mismo ensayo después de la hidrólisis ácida.
1.6. Repita el set de tubos del numeral 1.1 y para la realización del test de Benedict a cada
tubo adicione 0,5 mL del reactivo de Benedict y homogenizar. Caliente durante 5 minutos en
baño maría a ebullición. Después de 5-10 minutos observe los posibles cambios. Analice y
discuta lo sucedido en cada tubo apoyándose en el fundamento químico del test. Para las
muestras en que este test de negativo, repetir el mismo ensayo después de la hidrólisis
ácida.
1.7. Hidrólisis Ácida: Tomar 1,0 mL de la muestra (aquellas en que dio resultado negativo tanto
la prueba de Nelson como la de benedict en 1.5 y 1.6, muestra nueva), acidificar con 0,5 mL
de HCl concentrado. Colocar el tubo en baño de agua hirviente por media hora. Neutralizar
en frío con NaOH (neutralización gota a gota).
1.8. Test de Nelson y Benedict en las muestras hidrolizadas: únicamente para las muestras
que dieron negativas las pruebas de Nelson y Benedict, repita dichos procedimientos una vez
las muestras hayan sido hidrolizadas y neutralizadas (finalizado numeral 1.7).
2. Propiedades químicas específicas de los carbohidratos.
2.1. Prueba del ácido Mucico. (realice esta sección al inicio del laboratorio, para con ello
tener el tiempo suficiente para la terminación de dicha prueba). Tome 3 vasos de
precipitados de 100 mL y prepare el siguiente set de muestras:
Homogenice y posteriormente evapore a baja temperatura y
Tubo 1 2 3
bajo el extractor de gases, hasta una evaporación casi
Reactivo (mL)
completa. Enfríe y transfiera el líquido a tubos de ensayo
Galactosa al 5% 5
rotulados. Tápelos y déjelos en un lugar seguro hasta el
Glucosa al 5% 5
próximo laboratorio. Observe la formación de cristales en el Lactosa al 5% 5
microscopio, analice y discuta lo sucedido en cada tubo HNO3 conc. 0,5 0,5 0,5
apoyándose de las correspondientes reacciones.

2.2. Epimerización (acción de bases débiles). Realice el siguiente set de tubos:

Homogenice cada tubo. Deje los tubos debidamente

Tubo 1 2 3 4
Reactivo (mL)
marcados en la gradilla hasta media hora antes de
Ba(OH)2 1,5 1,5 finalizar el laboratorio. Una vez transcurrido este tiempo,
Glucosa al 2% 2 2 acidifique ligeramente los tubos 1 y 2 con HCl 1M (gota a
Fructosa al 2% 2 2 gota y con ayuda de papel indicador). Agregue a cada
Agua 1,5 1,5 uno de los tubos 1 mL de R. seliwanoff y caliéntelos en
baño maría. Analice y discuta lo sucedido en cada tubo
apoyándose de las reacciones sucedidas en cada caso.

2.3. Prueba del Lugol. Realice el siguiente set de tubos:

Tubo 1 2 3
Reactivo (mL) Agregue a cada tubo 3 gotas de lugol y homogenice. Analice y
Glucosa al 5% 1 discuta lo sucedido en cada tubo apoyándose en el
Sacarosa al 5% 1 fundamento químico del test.
Almidón al 5% 1

RESULTADOS
Para cada uno de los tubos y test realizados, analice y discuta los resultados obtenidos incluyendo las
correspondientes observaciones cualitativas así como la o las reacciones químicas correspondientes.
Complemente su informe consultando otros métodos para la identificación de carbohidratos en
muestras problema. Presente sus resultados de la forma más clara posible apoyándose en el uso de
tablas, gráficos, etc.

NO OLVIDE ENTREGAR COPIA DE LA HOJA DE RESULTADOS AL PROFESOR.

BIBLIOGRAFÍA
La presente práctica fue diseñada tomando como pauta base:
EDWARDS, A.M., GARCÍA, A.M., SOTO, M., FUENTEALBA, D. 2010. Prácticas de Laboratorio de
Bioquímica. Pontificia Universidad Católica de Chile, Facultad de Química, Programas de Química y Química y
Farmacia, Santiago de Chile, Chile.
VARIOS AUTORES. 2010. Prácticas de Laboratorio de Bioquímica para Ingeniería Agronómica. Universidad
Pedagógica y Tecnológica de Colombia, Facultad de Ciencias, escuela de Química, Tunja, Colombia.
CANO, H. 2008. Manual de Laboratorio de Bioquímica. Universidad Industrial de Santander, Facultad de
Ciencias, Escuela de Química, Bucaramanga, Colombia.
MIGUEZ, J.B.1997. Prácticas de bioquímica. Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, Facultad de
Ciencias, escuela de Química, Tunja, Colombia.
Textos de apoyo:
LEHNINGER, A., NELSON; D.; COX, M. 2004. Lehninger Principles of Biochemistry. Macmillan Higher
Education, 4a ed.
VOET, D., VOET, J. 2002. Biochemistry. Wiley & Sons. 2ª ed. Canada.
BOHINSKI, R.C. 1991. Bioquímica. Addison-Wesley-Longman, 5ª ed. México D.F. México.
UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA
PROGRAMA DE QUÍMICA
LABORATORIO BIOQUÍMICA II
HOJA DE RESULTADOS

3. PROPIEDADES CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

Nombres:___________________________________________________________________

Sección/grupo: ________________

1. Propiedades químicas según clasificaciones generales de los carbohidratos. Indique si el test

es positivo o negativo (incluya posible coloración y/o formación de precipitado). B: blanco (agua)

Muestra B Glucosa Fructosa Xilosa Sacarosa Lactosa Galactosa Almidón Fresco

Test (sln)
Molish

Barfoed

Bial

Seliwanoff

Nelson, sin
hidrólisis
Nelson, con
hidrolisis
Benedict, sin
hidrólisis

Benedict, con
hidrólisis

2. Propiedades químicas específicas de los carbohidratos.

Prueba ácido múcico observaciones

Galactosa
Glucosa
Lactosa

Epimerización observaciones
Glucosa sin Ba(OH)2
Glucosa con Ba(OH)2
Fructosaq sin Ba(OH)2
Fructosa con Ba(OH)2

Lugol observaciones
Glucosa
Sacarosa
Almidón
Observaciones adicionales: