INFORME DE COMPONENTE 1601-2021

Nombre del (de los) estudiante(s): Grupo

colaborativo:

Diana Isabel muñoz

Práctica 1. Determinación de la concentración de

carbohidratos y proteínas
Actividad 1. Determinación de la concentración de glucosa
por un método enzimático colorimétrico
Código del experimento
1. Registre los valores de absorbancia a 505nm medidos luego de
preparar cada una de las muestras

Tubo Absorbancia
505nm
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

2. Tabla de concentración de Glucosa en los tubos 0 a 5

Tubo Concentración
0
1
2
3
4
5

3. Gráfica de la curva Patrón

3. Concentración de glucosa en los tubos 6 a 11
Tubo Concentración
(mg/dL)
6
7
8
9
10
11

Registre los cálculos realizados

4. Concentración de glucosa en las muestras de partida A y B

Muestra Concentración
(mg/dL)
A
B
Registre los cálculos realizados

Actividad 2 Determinación de la glucemia (concentración de

 glucosa en sangre)
Código del experimento
1. Registre los valores de absorbancia a 505nm medidos luego de
preparar cada una de las muestras

Tubo Absorbancia
550nm
0
1
2
3
6
7
8
9
10
11

2. Concentración de glucosa en la muestra Patrón

Tubo Concentración
(mg/dL)
1
2
3

Promedio absorbancias
Tubos 1 a 3

Registre los cálculos realizados para hallar la concentración de

glucosa

3. Concentración de glucosa en los tubos 6 a 11 empleando la

ecuación de Lambert-beer
Tubo Concentración
(mg/dL)
6
7
8
 9
10
11
Registre los cálculos realizados

4. Concentración de glucosa en las muestras de partida A y B

Muestra Concentración
(mg/dL)
A
B

Registre los cálculos realizados

Actividad 3. Determinación de la concentración de proteínas

por un método colorimétrico: método de Lowry
Código del experimento 012
1. Registre los valores de la concentración y absorbancia a 580nm
medidos luego de preparar cada una de las muestras patrón de los
tubos 0 - 5

Tubo Absorbancia Concentración

580nm de proteína
0 0,154 0
1 0,263 0,023
2 0,455 0,046
3 0,658 0,069
4 0,802 0,092
5 0,845 0,115
Registre los cálculos realizados para hallar la concentración de la
proteína patrón

C1*v1 = c2*v2
C 2 = c 1 * v1
V2
C2 = 2 g/l * 30 ml
2600ml

C2 =0,0230 g/l del tubo 1

C2= 2 g/l *60 ml

2600 ml
C2 = 0,0461 g/l tubo 2

C2= 2g/l* 90 ml
2600 ml
C2 = 0,0692g/l tubo 3

C2 = 2 g/l * 120 ml
2600 ml
C2 = 0,0923 g/l tubo 4

C2 = 2 g/l * 150 ml
2600 ml
C2 = 0,115 g/l tubo 5

2. Gráfica de la curva Patrón (concentración vs absorbancia)

3. Concentración de proteína en los tubos 6 a 11
Tubo Concentración
(mg/dL)
6 0,023
7 0,047
8 0,035
9 0,063
10
11
Registre los cálculos realizados

X= (y – b / m )

X6 = 0,302 – 0,1527
6,55

X6 =0,023 tubo 6

X7= 0,460-0,1527
6,55
X7 = 0,047 tubo 7

x 8 = 0,384- 0,1527
6,55
X8= 0,035 tubo 8

X9 =0,565 – 0,1527
6,55
X9 = 0,063 tubo 9

4. Concentración de proteína en las muestras de partida A y B

Muestra Concentración
(mg/dL)
A 0,50
B 0,82
Registre los cálculos realizados

C1*v1 = c2*v2

C1 = c2*v2
V1

C1= 0,023 mg/dl *2600 ml

120 ml

C1= 0,50 mg/dl tubo 6 muestra A

C1= 0,063 mg/dl * 2600 ml

200 ml

C1= 0,82 mg/dl tubo 9 muestra B

Conclusiones

Práctica 2. Análisis de ADN

Código del experimento
 1. Tabla de absorbancias A260, A280 y A260/A280 para cada una de las
10 muestras problema

muestr % %
A260 A280 A260/A280
a proteínas ADN
1 8 92 0,569 0,339 1,68
2 87 13 0,349 0,442 0,79
3 99 1 0,315 0,458 0,69
4 44 56 0,468 0,386 1,21
5 79 21 0,371 0,432 0,86
6 3 97 0,583 0,332 1,75
7 67 33 0,404 0,416 0,97
8 52 48 0,446 0,396 1,13
9 14 86 0,552 0,386 1,59
10 29 71 0,510 0,366 1,39

Capturas de los espectros de las 10 muestras (individuales o

superpuestas)
Respuesta a los ítem del punto 6 de la guía.

Ítem
a. Analizar que sucede con las
absorbancias a medida que
incrementa el porcentaje de ADN en
las muestras.
b. Que indica la relación A260/A280 La pureza de la
muestra
c. Muestra desconocida 1, Muy contaminada
A260/A280=0,83
Muestra desconocida 2, Muestra pura
A260/A280=1,16
Muestra desconocida 3, Muy contaminada
A260/A280=1,00
Muestra desconocida 4, Muy contaminada
A260/A280=0,47
Muestra desconocida 5, Muestra pura
A260/A280=1,61

Conclusiones

Práctica 3. Separación electroforética de isoenzimas de LDH

sobre acetato de celulosa.
Código del experimento
Muestra Tira A
Muestra Tira B
2. Registra la imagen de la tinción de la tira y densitograma de
cada una de las tiras

Tinción y densitograma
Muestra Tira A
Tinción y densitograma
Muestra Tira B

A2. partir de que tejido se ha preparado la muestra

Tejido Tira A
Imagen de densitometría y tinción del tejido seleccionado

Tejido Tira B
Imagen de densitometría y tinción del tejido seleccionado

Conclusiones
 Práctica 4. Determinación del punto isoeléctrico y
electroforesis de proteínas.
Parte I. Determinación del punto isoeléctrico de la caseína
1. Gráficas de Absorbancia vs pH para los valores obtenidos
por cada grupo de (independientes o sobrepuestas)

2. Punto Isoeléctrico experimental obtenido por cada grupo

Grupo Punto Isoeléctrico experimental de la
Caseina
1
2

Parte II Separación de proteínas en gel de poliacrilamida

SDS
Ejercicio 1 Corrido electroforético simulado

Corrido electroforético 1
Muestra problema
seleccionada
Patrones 1
seleccionados 2
3
Datos de la curva de Pendiente:
calibración Ord. en origen:
r:
r2:
Movilidad relativa de
la proteína problema
Masa relativa (Mr)
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la
proteína problema
(Acon MW)
Datos de los patrones utilizados en el corrido 1
Patrón 1 2 3
Mr
Avance (mm)
Movilidad
relativa
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 1

Corrido electroforético 2
Muestra problema
seleccionada
Patrones 1
seleccionados 2
3
4
5
Datos de la curva de Pendiente:
calibración Ord. en origen:
r:
r2:
Movilidad relativa de
la proteína problema
Masa relativa (Mr)
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la
proteína problema
(Acon MW)
 Datos de los patrones utilizados en el corrido 2
Patrón 1 2 3 4 5
Mr
Avance (mm)
Movilidad
relativa
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 2

Corrido electroforético 3
Muestra problema
seleccionada
Patrones 1
seleccionados 2
3
4
5
6
7
Datos de la curva de Pendiente:
calibración Ord. en origen:
r:
r2:
Movilidad relativa de
la proteína problema
Masa relativa (Mr)
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la
proteína problema
(Acon MW)
Datos de los patrones utilizados en el corrido 3
Patrón 1 2 3 4 5 6 7
Mr
Avance
(mm)
Movilidad
relativa
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 3

De acuerdo con los resultados obtenidos en el ejercicio 1

Corrido electroforético simulado, compare:

Respuesta
a. Compare La masa relativa
de obtenida por usted con la
masa relativa teórica en cada
simulación.
b. Compare El valor de r y r2
en los tres corridos
electroforéticos.
c. Responda considera usted
que es mejor usar más o menos
muestras patrón, justifique su
respuesta.
Ejercicio 2. Efecto del porcentaje de la acrilamida en el
corrido electroforético

Corrido electroforético 1 - Acrilamida 7.5%

Muestra problema
seleccionada
Voltaje seleccionado
Datos de la curva de Pendiente:
calibración Ord. en origen:
r:
r2:
Movilidad relativa de
la proteína problema
Masa relativa (Mr)
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la
proteína problema
(Acon MW)
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 1
Acrilamida 7.5%

Corrido electroforético 2 - Acrilamida 12%

Muestra problema
seleccionada
Voltaje seleccionado
Datos de la curva de Pendiente:
calibración Ord. en origen:
r:
r2:
Movilidad relativa de
la proteína problema
Masa relativa (Mr)
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la
proteína problema
(Acon MW)
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 1
Acrilamida 7.5%
 Corrido electroforético 2 - Acrilamida 15%
Muestra problema
seleccionada
Voltaje seleccionado
Datos de la curva de Pendiente:
calibración Ord. en origen:
r:
r2:
Movilidad relativa de
la proteína problema
Masa relativa (Mr)
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la
proteína problema
(Acon MW)
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 1
Acrilamida 7.5%

De acuerdo con los resultados obtenidos en el ejercicio 2

Efecto del porcentaje de la acrilamida en el corrido
electroforético, responda

Respuesta
a. Obtuvo los mismos valores
de movilidad relativa, ¿por
qué?
b. Los cambios en la movilidad
relativa afectaron la
obtención de la masa
relativa, ¿Por qué sucede
esto?

c. Comparar los tres corridos

electroforéticos (bandas en
 el gel) qué diferencias
encuentra, explique.

Conclusiones

Práctica 5. Ensayo de Cinética enzimática: Determinación de

la actividad gamma-glutamiltranspeptidasa en una muestra
de orina
Actividad gammaGT.
Código del experimento
1. Medida del curso de la reacción enzimática cubeta 2

Tiempo Absorbancia 405nm

(min)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
2. Medida del curso de la reacción enzimática cubeta 3

Tiempo Absorbancia 405nm

(min)
1
2
3
4
5
6
 7
8
9
10
1. Gráfica de la absorbancia vs tiempo de reacción para cada
muestra ( cubeta 2 y Cubeta 3) y su regresión líneal

2. Concentración de la actividad enzimática de cada muestra

Cubeta Concentración de la actividad enzimática

2
3

Registre los cálculos realizados a partir de la fórmula de la

pendiente de la recta

Conclusiones
Referencias bibliográficas
Registre las referencias empleadas en el desarrollo de las 5 prácticas