TÉCNICAS GENERALES DE LABORATORIO

TEMA 3: OPERACIONES BÁSICAS EN EL LABORATORIO Y LIMPIEZA DE

MATERIAL
3.3.1 BALANZAS
Es un instrumento que se utiliza para realizar una pesada. Se compara la masa que se
quiere medir con un patrón de referencia de valor conocido
Propiedades que las caracterizan:
a) Exactitud: Indica en qué medida se aproxima el valor medido al valor real. Si la
exactitud es alta, el error es pequeño.
b) Precisión:Capacidad de dar un mismo resultado para una misma medición repetida
en diversas ocasiones.
c) Sensibilidad: Informa de la cantidad más pequeña que es capaz de medir.
d) Capacidad de carga: Cantidad máxima que es capaz de pesar la balanza.
Capacidad mínima: es la cantidad mínima que es capaz de pesar

3.3.2 DESCRIPCIÓN DE BALANZAS ELECTRÓNICAS

Constan de un platillo donde se coloca lo que se va a pesar, un botón de encendido y
apagado, un nivel burbuja, un botón de calibración, otro e tara y una pantalla donde se ve el
valor de la pesada
A) BALANZAS ELECTRONICAS DE PRECISION O GRANATARIOS
Tienen - sensibilidad. Son muy útiles y versátiles, tienen gran capacidad y son
rapidas y faciles de usar

B) BALANZAS ELECTRONICAS ANALITICAS

El plato se encuentra dentro de una vitrina para evitar las interferencias del aire.
↑ precisión. Capacidad de carga = 150g y mínima = 0,005g y su sensibilidad =
0,0001g
 1) Uso de las balanzas
Deben estar conectadas a la red eléctrica todo el día después de conectarla
hay que esperar a que se estabilice. Se debe comprobar que la cámara de
medida y el plato están limpios y el recipiente donde se efectúa la pesada
debe estar seco limpio y ser lo + ligero posible
2) Calibración de la balanza
Para una correcta pesada la balanza debe estar bien calibrada. Para calibrar
se deben seguir el manual de la balanza
La calibración puede hacerse mediante una pesa facilitada junto con la
balanza o con patrones internos que tienen algunas balanzas
Se debe calibrar cuando: cuando la utilices por primera vez, se realice un
mantenimiento, se cambie de sitio o se hayan producidos grandes cambios
de temperaturas humedad o presión
3) Procedimiento para efectuar una pesada
Se coloca el recipiente que se va a pesar sobre el centro del plato de la
balanza. Se debe utilizar un recipiente lo + pequeño posible. Se tara con la
tecla adecuada, en el monitor aparece el 0 para que la lectura del peso no
incluya el del recipiente. Se va añadiendo con una cucharilla o espátula poco
a poco la sustancia hasta alcanzar la cantidad deseada. Hay que esperar a
que la balanza no varíe para añadir más. Si tiene compartimiento hay que
cerrarlo cada vez que se pesa. Al finalizar hay que limpiar la balanza y los
utensilios
4) Precauciones
● Evitar tocar con los dedos el recipiente
● No contaminar las cucharillas
● Identificar cada uno de los reactivos pesados
● Si se pesan varios reactivos, pesarse por separado y limpiar bien la
espátula
5) Mantenimiento de las balanzas
● Con la balanza desconectada de la red pasar un pincel para limpiar
los restos
● Extraer el platillo y limpiar la superficie, secarla bien y poner otra vez
el platillo
● Cerrar y poner su funda

Clasificación del material volumétrico en función de su exactitud

Exactitud Límite de incertidumbre Ejemplos

Baja Vasos, matraces de

Erlenmeyer

Moderada 2% Probetas

Buena < 1% Buretas, pipetas graduadas

Elevada < 0,5% Matraces aforados y pipetas

aforadas
A) MATERIAL VOLUMÉTRICO GRADUADO Y AFORADO
1. Material volumétrico graduado:
❖ Dispone de una serie de marcas que indica el volumen del contenido
❖ Material calibrado para ser usado de una forma determinada y una
temperatura estándar
❖ Ej: Pipetas graduadas, buretas y probetas
2. Material volumétrico aforado:
❖ Fabricado para contener o dispensar un volumen concreto
❖ Poseen una línea horizontal que indica → Enrasado o aforo
❖ Ej: Matraces aforados y pipetas aforadas

B) ENRASE DE LOS INSTRUMENTOS VOLUMÉTRICOS

Se debe ajustar la parte inferior de la curvatura que forma la superficie del líquido
contra la del cristal (menisco) para que coincida con la marca del aforo o graduación
del instrumento

Esta medición debe llevarse con el instrumento en posición vertical, y la base del
menisco a la altura de los ojos

C) MATERIAL VOLUMÉTRICO PARA MEDIR CON EXACTITUD EL VOLUMEN DEL

CONTENIDO
Tienen grabadas las indicaciones TC,ln o cont. El volumen que tiene impresos
corresponde a la cantidad exacta de líquido que contienen cuando se llenan hasta la
marca correspondiente
 1. Probetas
Permiten medir volúmenes superiores y más rápido que las pipetas, pero
tienen menos precisión
a) Se debe elegir la probeta que más se ajuste al volumen que se va a
medir
b) Se debe verter el líquido en el instrumento por debajo del volumen
buscado
c) Para hacer el enrasado correcto, se sitúan los ojos a la altura de la
línea y se va añadiendo gota a gota
2. Tubos de sección uniforme
Miden un volumen variable hasta su capacidad máxima, - exactos que las
pipetas aforadas, pero + que las probetas graduadas
3. Matraces de aforado
Están calibrados y contienen el volumen señalado hasta la línea de enrase.
Se usa para la preparación de disoluciones valoradas o de concentración
conocida o para diluir muestras hasta un volumen fijo.
D) MATERIAL VOLUMÉTRICO PARA MEDIR CON EXACTITUD EL VOLUMEN DEL
VERTIDO
Tiene grabadas las indicaciones TD o Ex. El volumen impreso en estos materiales
indica la cantidad exacta de líquido que se va a verter, ya que tiene en cuenta el
líquido que se va a quedar en el instrumento
1. Buretas
Valoración de disoluciones de concentración desconocida

2. Pipetas volumétricas
Se utilizan para trasvasar líquidos
 ● Pipetas aforadas
Mayor exactitud. Presentan un ensanchamiento central solo miden un
volumen fijo
❖ De aforo simple: Tienen solo una línea de aforo
❖ De doble aforo: Tiene 2 líneas de aforo. Se enrasa hasta la línea
superior y se vacía hasta enrasar con la línea inferior

● Pipetas graduadas
Están calibradas en pequeñas divisiones de manera que se pueden medir
diferentes cantidades. - precisas que las pipetas aforadas.
❖ Vertido o vaciado total con el punto 0 arriba: Se ajusta una vez el
menisco y solo hacemos un rase y vaciamos
❖ Vertido o vaciado parcial con el punto 0 arriba: Se hace un doble
enrase y no se vacía la pipeta y ajustamos 2 veces el menisco.

E) PREPIPETAS
Es un dispositivo de aspiración que crea un vacío que permite succionar el líquido y
posteriormente expulsarlo
 1. Prepipeta modelo de cremallera
Dispone de una rueda de carga que al girarla dispensa o aspira el líquido y
una palanca lateral que permite el vaciado rapido y automatico

2. Prepipeta modelo triple válvula

● Válvula A: Para expulsar el aire y hacer vacío
● Válvula S: Para aspirar o succionar el líquido, comunica el vacío con
la pipeta
● Valvula E: Para descarga o expulsión del líquido (entrada de aire )
● Válvula I: Para insertar la pipeta

F) MANEJO DE LAS PIPETAS

● Seleccionar la pipeta adecuada
● Ajustar en la boquilla de pipeta la prepipeta
● No meter la pipeta directamente en la botella del reactivo
● Se introduce la punta de la pipeta en vertical dentro el líquido y se succiona
con la prepipeta y se ajusta el menisco a la graduación deseada
● Tocar con la punta de la pipeta el interior del recipiente de partida
● Cuando se ajusta el volumen se pone el líquido en otro recipiente
● Para vaciarla se mantiene la pipeta en posición vertical y se apoya la punta
en la pared del recipiente
● Cuando se dispensa el líquido se retira la pipeta y se deja en vertical en el
portapipetas
● Si hay que utilizarla otra vez se deja en horizontal en la mesa

3.4.2 DISPENSADORES DE VOLUMEN

● Dispensación rápida y cómoda
● Disminuye la posibilidad de contaminación
● Precisión menos que en las pipetas
 ● Diferentes acopladores para acoplarlas a diferentes botellas de reactivos

3.4.3 PIPETAS AUTOMÁTICAS O MICROPIPETAS

● Gran precisión y exactitud en cantidades muy pequeñas ( 1µ a 1 ml o +)
● Usan puntas desechables hechas de propileno puro para minimizar los riesgos de
contaminación

● Para pipetear soluciones estériles se utiliza puntas con filtro

● Utilizar la micropipeta que abarque el menor intervalo posible

A) TIPOS DE MICROPIPETAS
1. Micropipetas de volumen fijo y de volumen variable
❖ Micropipetas de volumen fijo: Miden un único volumen que
corresponde al que aparece impreso en ella
❖ Micropipetas de volumen variable: Seleccionar un volumen dentro de
un rango de valores determinado. No se debe ajustar a volúmenes
superiores o inferiores
2. Micropipetas analogicas y electronicas
❖ Micropipetas analogicas: El volumen a aspirar se fija con una rueda
➢ p20: Los 2 superiores indican la decena y la unidad en µl y el
tercer número es la primera cifra después de la coma
➢ p200 Los tres números indican la centena, decena y unidad en
µl y el cuarto número la primera cifra después de la coma
➢ p1000 la primera cifra corresponde al 1000µl y las demás a las
centenas, decenas y unidad
❖ Micropipetas electrónicas: El volumen a aspirar aparece en una
pantalla y se ajusta con unas flechas
Estas pipetas permiten:
➢ Velocidad de aspiración y dispensación
➢ Dispensacion multiple
➢ Dispensar secuencia de volúmenes
➢ + caras
3. Micropipetas simples y micropipetas multicanal
❖ Micropipetas simples: Solo acogen una punta cada vez
❖ Micropipetas multicanal: Permiten incorporar diversas puntas (8 o 12)
con solo una operación
 B) PARTES DE MICROPIPETAS

C) PRECAUCIONES AL PIPETEAR
● Uniformidad al pipetear: ritmo, velocidad y técnica adecuada al mover el
émbolo. Lentamente y con suavidad
● Ángulo de inmersión vertical: La pipeta debe estar siempre en vertical, en
cambio, al dispensar el líquido debe mantener un ligero ángulo
● Profundidad de la inmersión de la punta en el líquido que se va a succionar:
➢ 2-3 mm punta amarilla
➢ 2-5 mm punta azul
Si se sumerge demasiado, aumenta la presión y entra liquido de mas
Si se sumerge poco al aspirar entra aire y se forman burbujas

3.5 LIMPIEZA DEL MATERIAL DEL LABORATORIO

Otras operaciones básicas del laboratorio son la limpieza y el mantenimiento apropiados del
material. Para facilitar la limpieza del material se deben seguir las siguientes
recomendaciones:
a) No dejar que el material sucio se seque
b) Quitar con alcohol las marcas de rotulador del material de vidrio
c) Si el material tiene sustancias contaminantes, se deben aplicar medidas de
desinfección o esterilización
d) Una vez limpio el material se guarda en armarios y de forma invertida con orificios
tapados para que no entre polvo
e) Se debe utilizar delantal plastificado y guantes de goma
f) Leer las etiquetas de los detergentes
Para controlar la calidad del lavado debe quedar una película uniforme y se enjuaga con
bromosulfotaleina sódica, la aparición de una coloración rosada indica presencia de
detergente
3.5.1 LIMPIEZA MANUAL
A) LIMPIEZA POR FROTADO

B) LIMPIEZA MANUAL POR INMERSIÓN

● Cuando no hay restos adheridos, puede optarse por realizar una limpieza por
inmersión total
● Para ello se sumerge el material 30 minutos en una solución de limpieza
(agua del grifo + detergente) inmediatamente después de haberlo usado.

C) LAVAPIPETAS
● Recipientes cilíndricos de mediano tamaño que contienen una gradilla en la
que se pueden introducir numerosas pipetas
● El lavapipetas está conectado a un grifo de agua corriente y a un desagüe lo
que permite aclarar las pipetas varias veces
Los pasos a seguir:
❖ Hacer pasar solución detergente por el interior de la pipeta
❖ Introducirla en el lavapipetas para aclararlas con agua corriente
❖ Sacarlas del lavapipetas y enjuagar con agua destilada
❖ Secar en estufa y almacenar

D) LIMPIEZA DE PORTAOBJETOS
1) Sumergir en solución jabonosa
2) Si tienen restos biológicos sumergir en soluciones cromicas o germicida
3) Lavar a mano por frotada
4) Aclarar con agua
5) Conservar sumergidas en alcohol hasta su uso
6) Cuando se vuelva a utilizar pasar por agua destilada y dejar secar
7) Frotar con tela de algodón y colocar en cajas protegidas del polvo

3.5.2 LIMPIEZA A MÁQUINA

Lavavajillas, pero con el último enjuague con agua destilada
3.5.3 LIMPIEZA CON BAÑO DE ULTRASONIDO
Permite eliminar suciedad en zonas de material de difícil acceso.
Es un tanque de acero inoxidable que contiene un líquido capaz de transmitir ondas
ultrasónicas y un generador de ultrasonidos

3.5.4 LIMPIEZA ANALITICA DE TRAZAS

● Procedimiento de eliminación de trazas de metales. consiste en sumergir en ácido
nítrico durante una hora y a continuación enjuagar con agua destilada secar y
almacenar
● Procedimiento de eliminación de trazas orgánicas: consiste en sumergir en lejía o
disolventes como el alcohol y luego sumergir en solución de ácido clorhídrico
enjuagar con agua destilada secar y almacenar
● procedimiento de eliminación de trazas de grasa: se trata el material con una
mezcla cromica Luego se aclara con agua destilada se seca y almacena
● Procedimiento de eliminación de restos de colorantes: consiste en sumergir la
mezcla en alcohol etílico y ácido clorhídrico y esperar luego se aclara con agua
destilada se seca y almacena

3.5.5 SECADO DEL MATERIAL DE LABORATORIO

Se puede hacer de varias formas;
● Temperatura ambiente
● Secado en el horno Poupinel
● Horno de secado 80ºC 30 min

3.5.6 DESINFECCION Y ESTERILIZACION

Consiste en aplicar un método físico o químico para anular los posibles microorganismos
patógenos pero no elimina las esporas
A) DESINFECCIÓN
1. Metodos de desinfeccion
A. Desinfección en calor: Se sumergen en agua a 100 grados durante 20
minutos en ebullición
B. Desinfección con rayos UV- UVA: Permite desinfectar el ambiente ya
que tiene una capacidad de afectar al ADN de las células de forma
que impide el desarrollo de microorganismos
C. Uso de antisépticos : Sustancias químicas que impiden el desarrollo y
la multiplicación de los organismos patógenos
D. Uso de desinfectantes: Sustancias químicas capaces de destruir los
gérmenes patógenos sobre materiales inertes

B) ESTERILIZACIÓN O ASEPSIA
Destrucción total de microorganismos patógenos y no patógenos, Realizar sobre
objetos inertes
1. Esterilización por métodos físicos
a) Tecnicas de esterilizacion por calor seco: Con esta técnica se
destruyen tanto el microorganismo como el sustrato sobre el que se
encontraba
❖ Incineración: Se utilizan hornos crematorios para materiales
desechables
 ❖ Flameado: Pasar repetidas veces el objeto sobre una llama
(mínimo 20s) asas de siembra…
❖ Horno de pasteur: Material de porcelana, vidrio, de cirugía
(180ºC 1h)
b) Técnicas de esterilización por calor húmedo: El autoclave calienta el
agua destilada de su interior para que se convierta en vapor. Este
vapor de agua produce un aumento de presión en el interior del
autoclave, hasta los niveles que hayamos marcado. El aumento de
presión hace que aumente la temperatura de ebullición del agua y, por
tanto, que el vapor de agua tenga una temperatura más elevada que
si la presión fuera la atmosférica, llegando hasta unos 121 °C. Para
conseguir esta temperatura suele ajustarse el autoclave a 103 kPa de
presión interior. El proceso de esterilización, a 121ºC y 103 kPa suele
durar unos 15-20 minutos, aunque el ciclo completo es mucho más
largo, ya que primero hay que conseguir las condiciones interiores
adecuadas y posteriormente eliminar el vapor y esperar a que la
temperatura baje lo suficiente.
En el autoclave se pueden esterilizar objetos de goma, caucho, tejido,
cristal, metal, líquidos, etc.
Nunca debemos introducir recipientes herméticamente cerrados en el
autoclave

c) Otros métodos de esterilización con calor

❖ Pasteurización: Consiste en calentar un líquido a 62ºC durante
30 min o 72ºC durante 15s, no desnaturalizan las proteínas
❖ Tindalización: Someter productos a calentamiento entre 60ºC
y 80ºC durante 3 días manteniendo intervalos de 37ºC para
germinar las esporas y se destruyan
d) Esterilización mediante filtración: Para la esterilización de líquidos
biológicos, se pasan por membranas con poros de diámetro muy fino

2. Esterilización por métodos químicos

a) Esterilización con óxido de etileno: Mediante cámaras se introduce el
material (40ºC 4/8 horas) Que el óxido de etileno destruya
microorganismos y esporas
Poder de penetración → esteriliza material empaquetado
posteriormente realizar una aireación de los materiales
Para: Materiales de plástico termolábiles no resisten al autoclave
b) Esterilización de glutaraldehido: Es necesario un lavado previo y
posterior con agua estéril
Para: Desinfección de grandes superficies y objetos delicados

C) CONTROL DE EFICACIA DEL PROCESO DE LA ESTERILIZACIÓN

1. Indicadores físicos: Ellos los medidores de presión y los termómetros que
permiten constatar las condiciones físicas dentro de la cámara de
esterilización también termosfera es que registra la temperatura alcanzada
en el proceso y durante cuánto tiempo
 2. Indicadores químicos: Cintas adhesivas que se colocan en los paquetes
que contienen el material a esterilizar tienen una sustancia química que
cambia de color cuando el material ya ha sido sometido al proceso de
esterilización
3. Indicadores biológicos:
● Preparaciones de una población específica después de
microorganismo
● colocar los indicadores junto a la carga de esterilización sitio más
difícil que llegue el vapor
● después del proceso incubar 24 horas en condiciones adecuadas
● Se utiliza para verificar el número de lote, medio de cultivo, tipo de
microorganismos...

3.5.7 ALMACENAMIENTO DEL MATERIAL ESTERIL

Los materiales una vez esterilizados pueden mantener su esterilidad de forma indefinida si
se mantienen en las condiciones adecuadas. Pierden la esterilidad cuando se rompe o se
humedece el material que lo recubre
● Rotular fecha de esterilización
● Esperar que vuelvan a temperatura ambiente
● Conservar cerrados
● Controlar temperatura y humedad
● Mantener limpieza del almacén
3.6 PROCEDIMIENTOS NORMALIZADOS DE TRABAJO
Los procedimientos normalizados de trabajo son documentos que elabora en laboratorio y
contienen la información necesaria para realizar el proceso al que hacen referencia
Deben ser redactados y aprobados por un comité de laboratorio o empresa y forman parte
de la documentación del sistema de calidad de laboratorio.
Los PNT deben estar siempre a disposición del personal que los va a aplicar y su lectura es
obligatoria
Se revisará y actualizará de forma periódica debe ser aprobada y firmada por la Comisión
que elaboró el pene PNT
Apartados del PNT:
1. Objetivo
2. Responsabilidad de aplicación y alcance
3. Definiciones
4. Requisitos de material y equipos
5. Descripción
6. Registros
7. Control de cambios
8. Anexos

3.7 USO EFICIENTE DE RECURSOS

Se consigue mediante la aplicación de una buenas prácticas en la utilización de los equipos
materiales y productos Para ellos hay que:
1. Conocer los procedimientos de trabajo y el correcto funcionamiento de los equipos
para evitar repeticiones
2. Comprobar que los productos están correctamente etiquetados con instrucciones
claras de manejo
3. Aplicar prácticas de trabajo que tenga el menor impacto negativo para el medio
ambiente por ejemplo:
❖ Utilizar pilas recargables o pilas sin Mercurio ni cadmio
❖ Utilizar productos con envases fabricados con materiales biodegradables
reutilizables o retornables a los proveedores
❖ Aprovechar al máximo la luz natural
❖ Cerrar bien las puertas
❖ Desenchufar los aparatos cuando no se estén utilizando
❖ Reducir al máximo el gasto de papel
❖ Cerrar bien los grifos