FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

EFP INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

MICROBIOLOGIA GENERAL

TEMARIO
Crecimiento Supervivencia y Muerte de
Microorganismos
Esterilización y desinfección
Agentes antibacterianos.

Blgo. Julio IBAÑEZ OJEDA

Docente D.E.N.
jibanezo@hotmail.com
Cel: 976799595 RPM: #976799595
 CRECIMIENTO BACTERIANO
Aumento (incremento) ordenado en todos los componentes
de un MO, Por lo que, el aumento de tamaño que resulta
cuando una célula capta agua, lipidos o polisacáridos no es
un aumento verdadero.
La multiplicación celular es una consecuencia del
crecimiento. En organismos unicelulares (bacterias), la
multiplicación conduce a un aumento en el número de
individuos dando lugar a una población o cultivo.

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 MEDICION DEL CRECIMIENTO
Puede medirse por:
A. Concentración Celular
Número de células viables por unidad de
volumen de cultivo. Se usa en estudios de
genética microbiana o en investigaciones de
células.

B. Concentración de la Biomasa
Peso seco de las células por
unidad de volumen de cultivo. Útil
en estudios de bioquímica o
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nutrición microbiana. 4
 CRECIMIENTO EXPONENCIAL

Log B1 = k (t1-to) = Densidad de Biomasa

Bo 2.3

t1 –to = 2.3 Log (N1/No) = Concentración Celular

K

n = Log N1 – Log No
Log 2
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 B1 = Biomasa en tiempo 1
Bo = Biomasa en tiempo 0
 B = Magnitud de crecimiento en un periodo determinado
n = Numero de generaciones
N1 = Número total de bacterias
No = Número de bacterias iniciales

Crecimiento Lento = K = 0.02h-1  Cada g. de células

produce 0.02 g. De celulas/h

Crecimiento Elevado = K = 4.3 h-1  Cada g. de célula

produce 4.3 g. De celulas/h.

Concentración Biomasa = Peso seco de células/unidad

de volumen de cultivo.
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 CICLO CELULAR

Proceso de desarrollo de una bacteria de

forma aislada. A lo largo del ciclo celular,
tiene lugar:
1. Replicación del material de la bacteria
2. Síntesis de sus componentes celulares
3. Crecimiento para alcanzar un tamaño
doble del inicial y
4. División por bipartición de la bacteria
para dar lugar a dos células hijas.
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PERIODOS DEL CICLO CELULAR PROCARIÓTICO
1. Fase C (€ a la S eucariótica): replicación del ADN
cromosómico;
2. Fase D (€ a G2 + M): se distingue porque su
terminación coincide con el final de división
celular;
3. Fase Innominada (€ a la G1 eucariótica): síntesis
activa de ARN y otros elementos citoplasmáticos.

La característica del C.C: las fases C y D son

relativamente constantes, y por lo tanto, cuando
disminuye el tiempo de generación (g), lo hace a
expensas de la fase “G1”.
Asi en Escherichia coli, C = unos 40’ y D = unos 20’.
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El tiempo que requiere una célula para
completar su ciclo es muy variable y
depende de factores nutricionales y
genéticos. El intervalo que transcurre en la
formación de dos células a partir de una
célula se llama generación y el tiempo
requerido para esto es el tiempo de
generación.

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 CICLO CELULAR EN FUNCIÓN DEL TIEMPO DE
GENERACIÓN

Ejemplo E. coli en distintos tiempos de generación.

A. Cuando g > C + D
Existe fase "G1" (intervalo que precede a la replicación). Se
observan periodos diferenciados entre sí (de síntesis de ADN
y de división celular).

B. Cuando g = C + D
Ya no existe G1, y cada ronda de replicación comienza
inmediatamente tras la precedente división celular (es decir,
cada célula hija recién nacida se embarca inmediatamente
en replicar el cromosoma, y una vez que ha terminado de
replicarlo, la célula inicia la división celular).
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C. Cuando g <C+D
Las rondas de replicación de un ciclo se inician antes
de que haya terminado la división celular del anterior
(superposición parcial entre fases C y D).

D. Cuando g <C
ya no se puede detectar fase D como tal. La síntesis
de ADN es continua durante todo el ciclo. Se
inician rondas de replicación cromosómica antes de
que haya terminado la anterior. Esto se traduce en
que los cromosomas muestran un típico patrón de
replicación dicotómica y en que dichos
cromosomas pasan a cada célula hija ya
embarcados en una nueva ronda de replicación.
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Una característica del ciclo celular es que,
cuanto más rico es un medio, y por lo tanto
menor es el tiempo de generación (g), mayor
es el tamaño medio de las células. Es decir,
los individuos de una cepa bacteriana que
esté en un medio rico son más grandes que
los individuos de esa misma cepa creciendo
en un medio pobre.

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 CURVA DE CRECIMIENTO DE
POBLACIONES

Es la representación gráfica del logaritmo del

número de células frente al tiempo. La curva
teórica sería una recta pues los
microorganismos estarían creciendo
constantemente pero en la práctica la curva
presenta distintas fases:

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FASE DE REZAGO o F. de ADAPTACION (Fase A o
LAG)
Representa a un periodo en el cual las células
empobrecidas en metabolitos y enzimas como
resultado de las condiciones desfavorables
producidas al final del cultivo previo, se adaptan al
nuevo ambiente.

FASE B
Se forman enzimas y metabolitos intermedios que se
acumulan hasta alcanzar concentraciones que
permiten que el crecimiento se reinicie. Es de gran
actividad fisiológica.
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FASE EXPONENCIA (C), SOSTENIDA o LOGARITMICA
Las células se encuentran en una fase sostenida, la
velocidad de crecimiento es mayor y constante. La masa
aumenta en forma exponencial hasta que sucede dos cosas:
•Que uno o más nutrientes se agoten
•Que se acumulen productos tóxicos e inhiban el crecimiento
(H2O2).

En ella la velocidad de crecimiento es máxima y el tiempo de

generación es mínimo. Durante esta fase las bacterias
consumen los nutrientes del medio a velocidad máxima. Esta
fase corresponde a la de infección y multiplicación dentro del
organismo del agente infeccioso. Aumento regular de la
población que se duplica a intervalos regulares de tiempo
(G).

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En MO aerobios el nutrimento que se vuelve
limitante y generalmente el O2. Así cuando
la concentración celular pasa de
aproximadamente 1 x 107 bacterias/ml., la
velocidad decrece al menos que se
incremente el O2 al medio por burbujeo.

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FASE ESTACIONARIA MAXIMA (E)
Ante la acumulación de productos tóxicos o agotamiento
de nutrimentos el crecimiento cesa por completo. Sin
embargo, en la mayoría de los casos existe un recambio
celular en esta fase, generando una pérdida lenta de
células por muerte, lo cual es compensado exactamente
por la formación de nuevas células a través del
crecimiento y división.

FASE DE DECLINACION O FASE DE MUERTE

Aquella donde el índice de muerte supera al de la división
celular. Frecuentemente, después que la mayoría de las
células han muerto, la velocidad de mortalidad disminuye
en forma drástica de tal manera que un pequeño número
de sobrevivientes pueden permitir en el cultivo pro meses
o aun años.
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 Factor
Area Volumen
Tipo de Cuadrado [1/Volumen
[cm2] [ml]
]
Cuadrado total 1.00 x 10-2 2.00 x 10-5 5.00 x 104
Cuadrado grande 4.00 x 10-4 8.00 x 10-7 1.25 x 106
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Cuadrado pequeño 2.50 x 10-5 5.00 x 10-8 2.00 x 107
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DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS:
Es una técnica que permite determinar indirectamente la masa de una
población bacteriana. Se determina la cantidad existente de un determinado
ácido nucleico (generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de
la población.

DETERMINACION DE NITROGENO:
Es una técnica que permite determinar indirectamente la masa de una
población bacteriana. Existen distintas técnicas para determinar la cantidad de
nitrógeno que contiene una muestra en relación al compuesto que se quiera
determinar. Puede analizarse el nitrógeno no proteico mediante el NO2-, NO3-,
NH4+, el nitrógeno proteico mediante absorción en UV, Reacción de Biuret,
Reacción de Lowry, o el nitrógeno total mediante la Digestión de Kjeldahl.

INCORPORACION DE PRECURSORES RADIACTIVOS:

Es una técnica que permite determinar indirectamente la masa de una
población bacteriana. En esta técnica se adiciona al medio un compuesto
marcado radiactivamente que puede ser incorporado a la célula, y luego se
determina la cantidad de marca incorporada por toda la población.
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 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN

ESTERILIZACION:
Eliminación o muerte de todos los microorganismos que contiene un
objeto o sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que
no pueden contaminarse nuevamente.
SANITIZANTE:
Agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es
seguro para la salud de la población. Sólo es aplicable sobre objetos
inanimados.
DESINFECTANTE:
Agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas
tales como habitaciones.
ANTISEPTICO:
Agente que controla y reduce la presencia de microorganismos
potencialmente patógenos sobre piel y/o mucosas (sólo pueden aplicarse
externamente sobre seres vivos).
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 AGENTES ANTIBACTERIANOS

Provocan pérdida de la viabilidad en los

microorganismos:
Físicos:
Calor, radiaciones.
Químicos:
Oxido de etileno, formaldehído, agentes
oxidantes, soluciones antisépticas.
Provocan una separación de los
microorganismos de la sustancia líquida:
Filtración:
Se eliminan los microorganismos presentes en
un fluido.
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 AGENTES FÍSICOS

Rojo incipiente
Acción directa de la llama Incineración
Calor Seco Acción directa de la llama
Acción directa de los generadores
Estufa de calor seco
de calor
Baño María hirviente
Acción del agua caliente Calentamiento repetido
Calor Húmedo
Ebullición directa
Acción del vapor de agua Autoclave
Ionizantes
Radiaciones
Ultravioletas

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EL AUTOCLAVE

Es el aparato más comúnmente utilizado en los laboratorios para

esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y
que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100°C. Una
temperatura de 121°C (una atmósfera de sobrepresión) con un tiempo
de exposición mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos
formadores de esporas.

Ventajas del calor húmedo:

Rápido calentamiento y penetración
Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo
No deja residuos tóxicos
Hay un bajo deterioro del material expuesto
Económico.

Desventajas del calor húmedo:

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua
Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos
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 LA ESTUFA DE ESTERILIZACIÓN

Es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco.

Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposición que el autoclave.

La temperatura varía entre 120° y 180°C, requiriéndose distintos tiempos

de exposición. A 140°C se necesitan por lo menos 5 horas de exposición,
mientras que a 160°C se requieren al menos 2 horas de exposición.
Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodón no pueden
ser esterilizados a más de 160°C.

Ventajas del calor seco:

No es corrosivo para metales e instrumentos.
Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de
sustancias viscosas no volátiles.

Desventajas:
Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido
a la baja penetración del calor.
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 INCINERACIÓN
Se utiliza para destruir material descartable contaminado.

ACCIÓN DIRECTA DE LA LLAMA

Se lleva al rojo el material de metal como hansas,
lancetas, agujas de disección.

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 RADIACIONES

Su acción depende de: El tipo de radiación, El tiempo de exposición y

La dosis.
Ionizantes:
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos
nucleicos, estructuras proteicas y lipídicas, y componentes esenciales
para la viabilidad de los microorganismos.
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales
termolábiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc.
Se utilizan a escala industrial por sus costos.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque
producen alteraciones de los componentes.

Ultravioletas:
Afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos debido a que
forman dímeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores en la
duplicación y por lo tanto la pérdida de la viabilidad de las células.
Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.
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 AGENTES ANTIMICROBIANOS

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 Inhibidores de la Síntesis de la Pared
Penicilinas
Cefalosporinas
Monobactamas
Carbapenemes
Peptídicos
Otros

Alteración de la permeabilidad de la Membrana Celular

Polienos
Polimixinas
Imidazoles

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 Inhibidores de la Síntesis de Acidos Nucleicos
Quinolonas
Ansamicinas
Sulfonamidas
Diaminopirimidinas
Otros.

Inhibidores de la Síntesis de Proteínas

Tetraciclinas
Aminoglucósidos
Anfenicoles
Lincosamidas
Macrólidos
Otros.
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