CDU: 644.61 AL 01.

06-323

Norma Técnica AGUAS. INEN 1 204

Ecuatoriana DETERMINACIÓN DEL NITROGENO ORGANICO
1985-04

1. INTRODUCCION
Instituto Ecuatoriano de Normalización, INEN – Casilla 17-01-3999 – Baquerizo Moreno E8-29 y Almagro – Quito-Ecuador – Prohibida la reproducción

1.1 La presencia de nitrógeno orgánico en el agua se debe en diverso grado a los aminoácidos, los
polipéptidos y las proteínas (todos aquellos productos de procesos biológicos) y, por lo tanto, incluye el
nitrógeno albuminóideo.

1.2 Una elevación en el contenido de nitrógeno orgánico se relaciona, con frecuencia, con la
contaminación de una fuente de agua por aguas negras o desechos industriales.

1.3 El nitrógeno orgánico se determina por el método Kjeldahl después de la eliminación del nitrógeno
amoniacal, digestión de la muestra, destilación y titulación del amoníaco en el destilado con ácido
valorado.

2. OBJETO

2.1 Establecer la norma para la determinación del nitrógeno orgánico en aguas por el método
Kjeldahl.

3. ALCANCE

3.1 El método definido en esta norma no considera el nitrógeno de los grupos considerados como:
azina, azida, azo, hidrazonas, nitratos, nitritos, nitrilos, nitro, nitroso, oximas y semicarbazonas.

3.2 Si el nitrógeno amoniacal no es eliminado en la fase inicial de la determinación, el resultado

obtenido es el nitrógeno Kjeldahl total.

3.3 El nitrógeno orgánico puede obtenerse por diferencia al determinar individualmente el nitrógeno
Kjeldahl total y el nitrógeno amoniacal.

4. TERMINOLOGIA

4.1 En aguas y aguas de desecho las formas del nitrógeno de mayor interés en orden decreciente a
su grado de oxidación son: nitrógeno de nitratos, nitrógeno de nitritos, nitrógeno amoniacal y nitrógeno
orgánico.

(Continúa)

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4. FUNDAMENTO

4.1.1 Nitrógeno de nitratos: representa la fase de mayor oxidación en el ciclo del nitrógeno y alcanza
en el agua importantes concentraciones en los estados finales de la oxidación biológica.

4.1.2 Nitrógeno de nitritos: es un estado intermedio en el ciclo del nitrógeno; puede ser el resultado
de la descomposición biológica de los materiales proteínicos en el agua; de la acción de los
microorganismos sobre el nitrógeno amoniacal.

4.1.3 Nitrógeno amoniacal: es un producto de la actividad microbiológica y es un índice de polución

en aguas superficiales.

4.1.4 Nitrógeno orgánico: constituido por el nitrógeno amino de los aminoácidos, polipéptidos, pro-
teínas y nitrógeno albuminóideo, productos todos ellos de procesos biológicos.

5. FUNDAMENTOS

5.1 En presencia de ácido sulfúrico, sulfato de potasio y catalizador sulfato mercúrico, el nitrógeno a-
mino de muchos compuestos orgánicos se transforma a bisulfato de amonio. Después de que el
complejo mercurio-amonio se descompone por digestión con tiosulfato de sodio, se destila el
amoníaco de un medio alcalino y se absorbe en ácido bórico. El amoniaco se denomina
colorimétricamente o por titulación con una solución valorada de ácido mineral.

6. CONSIDERACIONES GENERALES

6.1 Selección de la forma de cuantificación del nitrógeno.

6.1.1 La sensibilidad de la reacción de Nessler hace que el método colorimétrico sea útil para la
determinación del nitrógeno orgánico o concentraciones menores a 1 mg/l.

6.1.2 El método volumétrico por titulación del amoníaco en el destilado sirve para determinar un am-
plio rango de concentraciones, dependiendo del volumen de ácido bórico usado como absorbente y de
la concentración del ácido valorado usado en la titulación.

6.2 Almacenaje y preservación de la muestra. Los resultados más confiables se obtienen al analizar
muestras recién tomadas.

6.2.1 Si no es posible el análisis inmediato, deben tornarse las precauciones para retardar la actividad
biológica por almacenaje de la muestra a temperatura cercana a la congelación. Cuando no es
3
práctica esta medida, la adición de 0.8 cm . de H2SO4 concentrado por litro de muestra, puede servir
para mantener el balance de nitrógeno por un período de 7 días.

6.3 El método permite la determinación de concentraciones entre 0,05 a 1 mg/l usando el

procedimiento colorimétrico, y entre 1,0 a 25 mg/l usando el procedimiento volumétrico por titulación.

(Continua)

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7. EQUIPOS
3
7.1 Aparato de digestión. Balones Kjeldahi de una capacidad total de 800 cm . La digestión debe
3
realizarse en un equipo de calentamiento en el cual 250 cm de agua destilada hiervan en
aproximadamente 5 minutos, es decir, que provea una temperatura entre 344 a 371ºC.

7.2 Aparato de destilación. El equipo completo consiste de un balón Kjeldahl, una trampa o bulbo,
una refrigerante vertical; las conexiones entre estas unidades se deben hacer con tramos cortos de
tubo de hule. Aunque se puede usar el aparato de destilación calentando con gas, ofrecen una
operación más regular, sin ebullición tumultuosa las unidades de calentamiento eléctrico. Todo el
3
aparato se lavará a vapor antes de usarlo, destilando 500 cm de agua destilada (de bajo contenido de
amoníaco) hasta que el destilado se encuentre exento de amoníaco (ver Nota 1).

7.3 Equipo colorimétrico. Se requiere uno de los siguientes:

7.3.1 Espectrofotómetro: para usarse a 400 - 425 nm, con un trayecto de luz de 1 cm o mayor.

7.3.2 Fotómetro de filtro con un trayecto de luz de 1 cm o más, equipado con un filtro violeta que
tenga su trasmitancia máxima entre 400 - 425 nm.
3
7.3.3 Tubos de Nessler, pareados de 50 cm de forma alta.

7.4 Potenciómetro para medición del pH.

8. REACTIVOS

Método volumétrico de titulación.

8.1 Agua libre de amoníaco. Preparar por intercambio iónico o por destilación. Puesto que es
virtualmente imposible guardar agua libre de amoníaco en el laboratorio, sin que ésta se contamine
con los vapores de amoníaco, es mejor preparar agua fresca con cada grupo de muestras.

8.1.1 intercambio iónico. Remover el amoníaco con un intercambiador de cationes. Agitar 4 litros de
agua destilada con 10g de un intercambiador catiónico fuerte o pasar el agua destilada a través de
una columna con un intercambiador. Aunque las resinas pueden usarse repetidamente, se deben
examinar con frecuencia para percatarse del posible agotamiento de la resina.
3
8.1.2 Destilación. Para eliminar las trazas de arnoníaco en el agua destilada, añadir 0,1 cm de ácido
sulfúrico concentrado por cada litro y redestilar.
3 3
8.2 Solución tampón de borato. Adicionar 88 cm de solución 0,1 N de NaOH a 500 cm de solución
0,025 M de tetraborato de sodio. Na2B4O7 ( 5,0g Na2B4O7 ó 9,5g de Na2B4O7. 1O H2O/l ) y diluir a
3-
1 000 cm

8.3 Soluciones para neutralización. Prepararlas con agua libre de amoníaco.

8.3.1 Hidróxido de sodio, 1 N.

8.3.2 Acido sulfúrico, 1 N.

8.4 Solución absorbente. Disolver 20g de ácido bórico, H3 BO3 en agua libre de amoníaco y diluir
3
a 1000 cm

_______________________

NOTA 1. Este método esta descrito para el procedimiento macro Kjeldahl, sin embargo, se puede usar un
equipo micro Kjeldahi, de destilación.

(Continua)

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Método colorimétrico.

8.5 Hidróxido de sodio, 6N.

8.6 Reactivo Nessier. Disolver 100 g de yoduro mercúrico, Hg I2, y 70g de yoduro de potasio, Kl, en
una pequeña cantidad de agua añadir esta mezcla lentamente y con agitación a una solución fria de
3 3
160g de Na OH en 500 cm de agua. Diluir a 1 000 cm . Guardar el reactivo en un frasco de vidrio
pyrex con tapa de caucho y en la obscuridad para mantener la estabilidad por un periodo de hasta un
año, en las condiciones normales de laboratorio. Comprobar que el reactivo es bueno, si produce el
color característico con 100 mg/l de nitrógeno amoniacal después de 10 minutos de su adición. No
debe producir un precipitado con pequeñas cantidades de amoníaco dentro de las 2 horas.
(Precaución. Es un reactivo tóxico; se debe evitar la ingestión).

8.7 Solución de amoniaco. Disolver 3,819g de cloruro de amonio anhidro, NH4Cl, secado a 100ºC
3 3
y diluir con agua a 1 000 cm , 1,00 cm = 1 mg, N = 1,22 mg NH3.
3
8.8 Solución patrón de amonfaco. Diluir 10,00 cm de la solución madre de amoníaco a 1
3 3
000 cm con agua. 1, 00 cm = 10,0 µg de N = 12,2 µg NH3.
3
8.9 Reactivo de digestión. Disolver 134 g de sulfato de potasio, K2SO4 en 650 cm de agua
3
destilada libre de amoníaco y 200 cm de H2SO4 concentrado. Añadir con agitación una solución de 2g
3
de óxido rojo de mercurio, HgO en 25 cm de H2SO46N. Diluir la mezcla a 1 litro. Guardar la solución a
temperatura superior a 14ºC para evitar cristalización.

8.10 Reactivo trisulfato de sodio-hidróxido de sodio. Disolver 50Og de NaOH y 25g de

3
Na2S2O3.5HO2 en agua destilada libre de amoníaco y diluir a 1 000 cm .
3
8.11 Solución de Indicador fenolfthaleína. Disolver 5g de reactivo en 500 cm de alcohol etílico al
3
95% y añadir 500 cm de agua libre de amoníaco.
3
8.12 Solución de indicador mezclado. Disolver 200 mg de indicador rojo de mefilo en 100 cm de
3
alcohol etilico al 95%. Disolver 100 mg de azul de metileno en 50 cm de alcohol etilico al 95%.
Combinar las 2 soluciones. Preparar mensualmente.

8.13 Solución de ácido bórico con indicador. Disolver 20g de H3BO3 en agua destilada libre de
3 3
amoníaco, añadir 10 cm de solución de indicador mezclado y diluir a 1 000 cm . Preparar
mensualmente.

8.14 Solución valorada de ácido sulfúrico, 0,02 N. Para mayor exactitud, titular la solución con una
cantidad de carbonato de sodio anhidro, añadido a la solución de ácido bórico con el indicador, para
3
reproducir las condiciones de la muestra al titular. 1,00 cm de solución de H2SO4 0,0200 N
exactamente titulada equivalente a 280 µg N.

9. PROCEDIMIENTO

9.1 Selección del volumen de muestra. Determinar el tamaño de la alícuota según el cuadro 1 y
3
colocar la muestra en un balón Kjeldahl de 800 cm .

Cuadro 1

Nitrógeno orgánico Tamaño de alícuota

3
en la muestra mg/l para análisis – cm

0 - 1 500
1 - 10 250
10 - 20 100
20 - 50 50,0
50 - 100 25,0
3
Sí es necesario, diluir la alícuota a 300 cm y neutralizar a Ph 7.
(Continua)
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3
9.2 Eliminación del nitrógeno amoniacal, Añadir 25 cm de la solución tampón de borato e
hidróxido de sodio 6N hasta lograr el pH 9.5. Añadir unos pocos núcleos de ebullición y someter a
ebullición la solución hasta eliminar aproximadamente el 50% de su volumen.
3
9.3 Digestión. Enfriar y añadir cuidadosamente 50 cm del reactivo de digestión (se puede sustituir
3
por 10 cm3 de H2SO4 , 6, 7g K2SO4 y 1,5 cm de solución de sulfato mercúrico ). Si se tienen
presentes grandes cantidades de materia orgánica exenta de nitrógeno, se agrega un volumen
3
adicional de 50 cm de reactivo de digestión por cada gramo de sólidos insolubles en la muestra.
Después de mezclar, calentar bajo una campana o en el equipo para eliminar los vapores de la
digestión, continuar la ebullición hasta 20 o 30 minutos después de que se haya clarificado la solución.
3 3
Dejar enfriar, diluir el residuo con 300 cm de agua libre de amoníaco y añadir 0,5 cm de solución
3
indicadora de feriolfthaleina y, mezclar. Inclinar el balón y añadir cuidadosamente 60 cm de reactivo
3
tiosulfato-hidróxido por cada 50 cm de reactivo de digestión usado hasta formar una capa alcalina en
el fondo del balón, para evitar la pérdida de amoníaco inmediatamente conectar el balón en el equipo
de destilación, previamente preparado con agua en circulación y agitar el balón para asegurar la
mezcla completa.

9.4 Destilación. El extremo del refrigerante deberá estar bien sumergido en el matraz Erlenmeyer que
3 3
contendrá 50 cm de ácido bórico. Destilar y recoger 200 cm de destilado. Usar la solución de ácido
bórico sin indicador cuando la determinación se va a realizar colorimétricamente y usar la solución de
ácido bórico con el indicador mezclado para la determinación volumétrica por titulación. La
temperatura máxima del refrigerante debe ser de 29ºC.

9.5 Medición del contenido de amoníaco.

9.5.1 Titulación. Titular el amoníaco en el destilado con solución 0.02N de ácido sulfúrico hasta que
el indicador cambie a un color gris pálido.

9.5.2 Se hace un blanco con todos los reactivos, realizando todos los pasos del procedimiento y se
utiliza el resultado obtenido para aplicar las correcciones necesarias.
3
9.5.3 Colorimetría. Medir el volumen final del destilado, incluidos los 50 cm de ácido bórico, tomar
3
una porción de 50 cm y proceder como se describe a continuación.

9.5.3.1 Neutralizar el ácido bórico usado para absorber el amoníaco destilado, con NaOH y añadir 1
3
cm de reactivo Nessler. Mezclar las muestras tapando los tubos Nessier con tapones de caucho
limpios (lavados varias veces con agua libre de amoníaco) e invertir los tubos por lo menos seis
veces. Mantener las mismas condiciones de temperatura y tiempo de reacción, con el blanco,
muestras y patrones.

9.5.3.2 Permitir que el tiempo de reacción sea de 10 minutos y si el contenido de amoníaco es muy
bajo dejar 30 minutos para que la reacción sea completa.

9.5.3.3 Medir la intensidad de color en la muestra y en los patrones si se usa el método visual
directo.

9.5.4 Método fotométrico. Medir la absorbancia o trasmitancia en un espectrofotómetro o en un

fotómetro de filtro y obtener los valores de concentración correspondientes en la curva de calibración.
Realizar las lecturas de trasmitancia frente a un blanco y chequear frecuentemente con patrones de
nitrógeno de concentración similar a la de la muestra.

10. CURVA DECALIBRACION

Medición fotométrica.

10.1 Preparar la curva de calibración bajo las mismas condiciones que las muestras. Desfilar el blanco
3
y los patrones apropiados de la misma manera que las muestras. Llevar 300 cm de destilado y 50
3 3 3
cm de solución de ácido bórico a 500 cm . Tornar una alicuota de 50 cm de cada patrón y proceder
como se indica a partir de 9.5.3.1.

(Continua)

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10.2 Trazar la curva de calibración que relacione concentración de nitrógeno contra absorbancia.
Comparación visual.

10.3 Patrones temporales. Preparar una serie de patrones visuales en los tubos Nessler, por la
adición de los siguientes volumenes de solución patrón de cloruro de amonio, NH4CI y dilución a 50
3 3
cm con agua libre de amoniaco: 0;0,2;0,4; 0,7; 1,0; 1,4; 1,7; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0 y 6,0 cm .
3
Añadir a cada tubo 1 cm de reactivo de Nessler y mezclar bien.

11. CALCULOS

11.1 Método calorimétrico.

A x 1 000 B
mg/l N orgánico = 3
x
cm muestra C
Siendo:

A = mg N encontrados colorimétricamente por comparación en la curva.

3
B = cm volumen final del destilado incluyendo el ácido bórico.
3
C = cm de destilado tomados para el desarrollo del color.

11.2 Método volumétrico por titulación.

(D - E ) x 280
mg/l N orgánico =
cm 3 muestra
Siendo:
3
D = cm H2SO4 usados en la titulación de la muestra.
3
E = cm H2SO4 usados en la titulación del blanco.

12. ERROR ACEPTABLE

12.1 Para el rango entre 1-5 mg/l la diferencia entre los resultados de una determinación por
duplicado no debe exceder el 4% del promedio de los dos valores; en caso contrario, debe
repetirse el análisis.

13. INFORMES DE RESULTADOS

13.1 Como informe final debe reportarse la media aritmética de los resultados de la determinación en
mg/l de N orgánico.

13.2 Debe indicarse el método usado y el resultado obtenido. Debe mencionarse, además, cualquier
condición no especificada en esta norma o considerada como opcional, así como cualquier
circunstancia que pueda haber influido en el resultado.

13.3 Debe incluirse todos los datos necesarios para la completa identificación de la muestra.

(Continua)
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APENDICE Z

Z.1 NORMAS A CONSULTAR

Esta norma no requiere de otras para su aplicación.

Z.2 BASES DE ESTUDIO

Standard methods for the examination of water and wastewater. 421 Nitrogen (Organic) 14 Th
Edition,1975

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 INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA

Documento: TITULO: AGUAS. DETERMINACION DEL NITROGENO Código:

NTE INEN 1 204 ORGANICO. AL 01.06-323

ORIGINAL: REVISIÓN:
Fecha de iniciación del estudio: Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo
Oficialización con el Carácter de
por Acuerdo No. de
publicado en el Registro Oficial No. de

Fecha de iniciación del estudio:

Fechas de consulta pública: de 1981-08-24 a 1981-10-08

Subcomité Técnico: AL 01.06 AGUA POTABLE

Fecha de iniciación: Fecha de aprobación: 1983-05-06
Integrantes del Subcomité Técnico:

NOMBRES: INSTITUCIÓN REPRESENTADA:

Dr. José E. Marcos EMAP, GUAYAQUIL

Dr. Hernán Riofrío INERHI
Dra. Mercedes Reyes INSTITUTO NACIONAL LEOPOLDO
IZQUIETA PEREZ, GUAYAQUIL
Dra. Carlota Naranjo UNIVERSIDAD CATOLICA
Dra. Ligia de Arcentales INSTITUTO NACIONAL LEOPOLDO
IZQUIETA PEREZ- QUITO
Sra. Rita de Meneses CERVECERIA ANDINA
Dr. Gonzalo Sandoval EMAP- QUITO
Dr. Nicolas Brito CENTRO DE REHABILITACION DE
MANABI
Dra. Mónica Paz IEOS
Dr. Fabián Ordónez ETAPA, CUENCA
Dra. Rosa de León INSTITUTO NACIONAL LEOPOLDO
IZQUIETA PEREZ, QUITO
Dr. Nicolas Campaña EMAP, GUAYAQUIL
Lic. Pilar Villacrés CREA, CUENCA
Dra. Hipatia Navas INEN
Dr. Ramiro Gallegos INEN

Otros trámites: ♦4 Esta norma sin ningún cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de
OBLIGATORIA a VOLUNTARIA, según Resolución de Consejo Directivo de 1998-01-08 y oficializada
mediante Acuerdo Ministerial No. 235 de 1998-05-04 publicado en el Registro Oficial No. 321 del 1998-05-20
El Consejo Directivo del INEN aprobó este proyecto de norma en sesión de 1985-04-19

Oficializada como: OBLIGATORIA Por Acuerdo Ministerial No. 555 del 1985-07-31
Registro Oficial No. 263 del 1985-09-03
Instituto Ecuatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8- E8-29 y Av. 6 de Diciembre
Casilla 17-
17-01-
01-3999 - Telfs: (593 2)2 501885 al 2 501891 - Fax: (593
(593 2) 2 567815
Dirección General: E-
E-Mail: baguilera@inen.gov.ec
Área Técnica de Normalización: E- E-Mail: normalizacion@inen.gov.ec
Área Técnica de Certificación:
Certificación: E-
E-Mail: certificacion@inen.gov.ec
E-Mail: verificacion@inen.gov.ec
Área Técnica de Verificación: E-
Área Técnica de Servicios Tecnológicos: E- E-Mail: inencati@inen.gov.ec
Regional Guayas: E-E-Mail: inenguayas@inen.gov.ec
Regional Azuay: E-
E-Mail: inencuenca@inen.gov.ec
Regional Chimborazo: E-E-Mail: inenriobamba@inen.gov.ec
URL:www.inen.gov.ec