“IMPORTANCIA DE LA BACILOSCOPÍA EN EL DIAGNSOTICO, CONTROL Y

VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA DE LA TUBERCULOSIS”

LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL DE MICOBACTERIAS.

CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA – INSTITUTO NACIONAL DE SALUD.
 DIAGNÓSTICO
BACTERIOLÓGICO

Laboratorio de Referencia Nacional de Micobacterias

Instituto Nacional de Salud
AGENDA
• Pruebas recomendadas OMS e implementadas en Perú

• Métodos para el Diagnóstico de Tuberculosis multidrogo-resistente (TB-MDR)

• Métodos para el Diagnóstico de TB extensamente resistente (TB-XDR)

• Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública-componente TB

Diagnóstico de TB-MDR y TB-XDR en el Perú
Métodos para el diagnóstico de TB-MDR:
• Line Probe Assay (Genotype MTBDRplus)
• MODS
• Bactec MGIT 960 – SIRE
• GenXpert

Métodos para el diagnóstico de TB-XDR:

• Line Probe Assay (Genotype second line)
• Bactec MGIT 960 – Segunda Línea
• Método Proporciones Agar en Placa

Otras drogas: Bedaquiline, Linezolid, Clofazimina

Ensayo de Sonda en Línea ( Genotype MTBDRplus)
Características:
• Detecta simultáneamente M. tuberculosis y resistencia a RIF (gen rpoB) e
Isoniacida (genes katG y inhA)
• Puede realizarse a partir de un aislamiento (indirecto) o muestra pulmonar BK (+)
(directo).
• El tiempo de emisión de resultados es de 3 a 5 días.

Hoja de trabajo de
Genotype MTBDRplus del
LRNM-INS
Diagnóstico de TB MDR
MODS
Prueba rápida fenotípica
2
NETLAB: Mycobacterium tuberculosis [presencia] e isoniacida + rifampicina
[susceptibilidad] en esputo por método MODS ( Microscopic observation
Drug Susceptibility)
Susceptibilidad a drogas mediante observación
microscópica directa - MODS
Características
• Se basa en la observación de cordones característicos de
Mycobacterium tuberculosis cuando crece en medio líquido.
• Prueba rápida, detecta resistencia a isoniazida y rifampicina ( 7
– 14 días)
• Diagnostica tuberculosis y TB-MDR a partir de muestras de
esputo tanto con frotis positivo o negativo.
Diagnóstico fenotípico de TB MDR
Prueba de Susceptibilidad en cultivo líquido ( MGIT 960)
Pruebas de susceptibilidad para drogas de primera línea:
3
I : Isoniazida
R: Rifampicina
Z: Pirazinamida
Resultados como mínimo en 7 días.

NETLAB: Panel de susceptibilidad Micobacteriana por el Método para

Micobacterias de crecimiento lento.
GeneXpert MTB/RIF
•Es una PCR en tiempo Real que detecta la presencia de ADN de M. tuberculosis en
la muestra además que identifica cambios en el ADN que pueden producer
Resistencia a la RIF.
•Usado para el diagnóstico de TB extrapulmonar y Resistencia a Rifampicina
•No se puede utilizar para monitorear tratamiento

Resultado: 1 - 2 horas
Validación del BACTEC MGIT-960 para drogas de segunda línea
Pruebas de susceptibilidad para las
drogas de segunda línea:

• Capreomicina
• Amikacina
• Levofloxacina
• Moxifloxacina

Nuevas drogas:
Bedaquilina
Linezolid
Clofazimina
Delamanid*
 Método de proporciones Agar en placa para la
evaluación de drogas de primera y segunda línea
3
 RECEPCIÓN CONSERVACION Y
TRANSPORTE DE MUESTRAS

• LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL DE MICOBACTERIAS.

• CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA – INSTITUTO NACIONAL DE SALUD.
OBTENCION DE LAS MUESTRAS PARA EL
DIAGNOSTICO DE TB

• La muestra para el diagnostico de TB pulmonar (TBP) es el

esputo. La TBP es la mas contagiosa e infecciosa.
• En el Laboratorio de TB, es necesario que llegue una BUENA
MUESTRA entendiéndose esta:

-Que proviene del sitio de la lesión que se investiga

-Que fue obtenida en cantidad suficiente
-Que fue colocada en un envase adecuado y limpio
-Que se encuentra bien identificada
-Que fue adecuadamente conservada y transportada

Fotos: Manual de la Baciloscopia, INS. Actualizado, 2019-2020

OBTENCION DE LAS MUESTRAS PARA EL
DIAGNOSTICO DE TB

• Sin embargo, la enfermedad puede manifestarse también en

cualquier otro órgano, aunque con menor frecuencia

• Obtener muestras de origen extrapulmonar:

- Orina, líquido cefalorraquídeo (LCR), líquido pleural,
líquido ascítico, pus de cavidades abiertas, biopsias ...

• Estas muestras extrapulmonares deben procesarse por

cultivo y/o (para algunos tipos de muestras, especialmente
líquido cefalorraquídeo y biopsias) mediante una prueba
rápida molecular.
Fotos: Manual de la Baciloscopia, INS. Actualizado,2019-2020
 OBTENCION DE LAS MUESTRAS PARA
EL DIAGNOSTICO DE TB

Para la recolección de las muestras se deben tener en cuenta

las siguientes recomendaciones:
•Elegir un lugar bien ventilado y discreto para que el SR
produzca la expectoración. Puede ser un cuarto ventilado y con
acceso a luz natural, o algún lugar abierto no concurrido del
patio del Servicio de Salud.
-No utilizar lugares cerrados o muy concurridos tales como laboratorios,
consultorios médicos, salas de espera o baños, ya que son deriesgo….
 OBTENCION DE LAS MUESTRAS
PARA EL DIAGNSOTICO DE TB
: el esputo MP SA MU SAL

• Elpaciente SRdebe tener su envase ya rotulado por elEESS

•Solicitar una buena muestra de esputo, instruyendo al paciente

con lenguaje simpley sencillo como debe hacerlo (muestra que
provenga del árbol bronquial).
TIPOS DE MUESTRA DE ESPUTO
• No mancharse las manos, ni las paredes externas delfrasco
• repetir la expectoración por 2 o 3 veces y colocar en el mismo frasco
• limpiar el exterior del envase con un pañuelo de papel y luego lavarse las
manos con agua y jabón

Manual para el Diagnostico Bacteriologico de la Tuberculosis. Parte 1: Manuel de

actualización de Baciloscopia. Lima: ORAS - CONHU; 2018
 TRANSPORTE DE LAS
MUESTRAS DE TB
Al transportar las muestras de esputo se debe tener en cuenta:

• Proteger la muestra del calor y de la luz solar (se puede

tener refrigerantes o un pequeño congelador en el
transporte)

• Verificar el cierre hermético de la tapa de cada envase,

evitando derrames al trasportar. Por lo que cada muestra
debe ser colocada en una bolsa de plástico, anudarlas o
sellar las bolsas de ser posible.
 TRANSPORTE DE LAS
MUESTRAS DE TB
Al transportar las muestras de esputo sedebe tener en cuenta:
• muestras recolectadas en el nivel local de la (UTM), del CS
Las
o PS deben ser transportadas en cajas de acero inoxidable
desde la Estrategia de TB al Laboratorio del EESSmas cercano;
el mismo día de la recolección.

• Todas los establecimientos de salud del MINSA, cuentan con

estas cajas de acero inoxidable o cajas cooler, para el
transporte de las muestras de esputo.

Fotos: Manual de la Baciloscopia, INS. Actualizado, 2019-2020

 TRANSPORTE DE LAS
MUESTRAS DE TB
Al transportar las muestras de esputo debe tenerse en
cuenta:

• Que los envases de las muestras estén claramente

identificados en el recipiente y no en la tapa y que estén
cerrados herméticamente.
• Verificar que estén acompañados por el formulario de
solicitud bacteriológica. VCJ
LCV

• Observar la calidad de la muestra a través de las paredes

del envase, sin abrirlo.
 TRANSPORTE DE LAS
MUESTRAS DE TB
• Si se trata de saliva o secreción nasal es
conveniente recibirla, porque aunque no sea una
muestra de buena calidad, puede contener
bacilos.

• Registrar la saliva en el formulario y solicitar al

paciente que traiga otra muestra.
 TRANSPORTE DE LAS
MUESTRAS DE TB
• Normalmente, quien transporta las muestras debe
ser un personal asignado por el CS o PS para este
servicio, de manera que viajen seguras, así, estas
serán llevadas al Laboratorio del EESS donde se
realicen las baciloscopias.

• Se conocen casos que en el pasado, en que enviaron

las muestras con terceros o empresas, estas muestras
se perdieron o extraviaron. Lo que es sumamente
peligroso!!! por la bioseguridad de la muestra.
TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS
DE TB
• Estas muestras deben ser protegidas por
Bioseguridad, ya que son de alto riesgo. Pueden ser: -
-BK positivas y
-además resistentes medicamentos anti TB (MDR)…

• El personal que transporte las muestras debe ser

conducido de preferencia por un transporte seguro; si
el EESS tiene una movilidad será lo mejor (moto,
mototaxi, o automovil)
 TRANSPORTE DE LAS
MUESTRAS DE TB
• Muy importante: el vehiculo de transporte!
En el mejor de los casos el vehículo puede estar acondicionado para
conservar las muestras durante el transporte, (proteger del calor y de
golpes en zonas rurales), mas aun si son grandes distancias. Tal como
vemos en la foto.
 TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS AL
LABORATORIO REGIONAL y
NACIONAL

• Para transportar las muestras de esputo a largas

distancias, de centros o Puestos de salud; o si se
deben recoger muestras de más de 2 establecimientos
para llevar al Laboratorio Regional; contar con
movilidad propia será lo mejor para brindar la
PUESTO DE CENTRO DE
seguridad necesaria al material altamente infeccioso. SALUD 1 SALUD 2

Fotos brindadas por

Blga. Neyda Quispe, INS.
 TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS AL
LABORATORIO REGIONAL y
NACIONAL

• El transporte de las muestras de esputo BK positivas y de

tubos con cultivos positivos de TB, para realizar pruebas de
susceptibilidad (PS) bacteriológicas (MGIT) o moleculares
(GenotypeTBMDR), deben ser adecuadamente
acondicionados en contenedores de TRIPLE EMBALAJE
que consta de: envase primario (ep), envase secundario (es)
y envase externo (ee); para un transporte mas seguro
debido a la peligrosidad del material. Tal como indica las
fotos adjuntas.

Fotos: Manual de la Baciloscopia, INS. Actualizado, 2019-2020

Figura 1. Sistema de triple embalaje para el transporte de
Sustancias Infecciosas de la Categoría A

Fuente: WHO/WHE/CPI/2017.8. Guidance on regulations for the transport of infectious substance 2017 – 2018
 TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS AL LABORATORIO
REGIONAL y NACIONAL

4.2.6 Está prohibido transportar sustancias infecciosas en equipaje de mano,

equipaje facturado o con las personas. Esta deberá ser transportada en un
avión de carga o en la bodega de un avión de pasajeros. Debe ser un
transporte seguro.

4.2.8 Los documentos requeridos para el envío de las muestras deben

remitirse en un sobre o bolsa de plástico colocado o adherido al embalaje
externo (declaración de mercancías peligrosas, guía de transporte, detallados
en el capítulo V).
NTSN° MINSA/2019/INS. NORMATÉCNICADESALUDSOBREPREPARACIÓN,EMBALAJEYDOCUMENTACIÓNPARAEL
TRANSPORTESEGURODESUSTANCIASINFECCIOSAS
 CONSERVACION
DE LAS MUESTRAS DE TB
• Las muestras de esputo producidas por los SR deben ser
colectadas y entregadas en cualquier hora del día, o en el
momento mas adecuado que programe el laboratorio del
establecimiento de salud, mientras esté atendiendo al
público.
• Por lo que se recomienda que el personal del laboratorio de
TB, del establecimiento o Puesto de Salud debe recibir las
muestras durante el horario de trabajo o según lo
establecido.

Fotos: MANUAL PARA EL DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO DE LA TUBERCULOSIS. PARTE 1: MANUAL DE

ACTUALIZACION DE LA BACILOSCOPÍA, ORAS - CONHU; 2018.
 CONSERVACION
DE LAS MUESTRAS DE TB
• Ya en el Laboratorio, las muestras, debe organizarse el
momento del procesamiento de las muestras para las
baciloscopias o exámen de esputo. Al respecto, la Norma
Técnica del Control de la Tuberculosis indica que “el
resultado debe entregarse dentro de las 24 horas de recibida
la muestra”. Las muestras que aun no se trabajen o se
guarden para otros métodos, deben conservarse en
refrigeración de 2 a 8°C,

Fotos: MANUAL PARA EL DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO DE LA TUBERCULOSIS. PARTE 1: MANUAL

DE ACTUALIZACIÓN DE LA BACILOSCOPÍA, ORAS - CONHU; 2018.
 CONSERVACION
DE LAS MUESTRAS DE TB
• Si la muestra de esputo va a servir para procesamiento de
cultivo, esta muestra debe conservarse en refrigeración, no
mayor a cinco días, ya que a medida que pasan los días, baja la
carga bacilar, por lo tanto la sensibilidad de la muestra
(contendrá una menor cantidad de bacilos en la muestra).

• Si esta muestra de esputo es positiva y va servir para la prueba

molecular para la detección de la TB MDR…no debe
conservarse mas de 3 días, en refrigeración, ya que para
obtener ADN, esta debe estar bien conservada.
DIAGNÓSTICO BACTERIOLOGICO:
BACILOSCOPIA
BACILOSCOPIA
BACILOSCOPIA
• Técnica de elección para el diagnóstico rápido y el control del tratamiento de la
tuberculosis.

• Es un examen básico para el diagnóstico de la tuberculosis.

• Herramienta fundamental para un programa de control de la tuberculosis.

• Económica y eficiente para detectar los casos infecciosos de
tuberculosis.
En muchos países, la microscopía de esputo sigue siendo la principal herramienta
para el diagnóstico de laboratorio de la tuberculosis.

Se requiere instalaciones de laboratorio simples, y cuando se realiza

correctamente, tiene un papel en la rápida identificación de los casos infecciosos.

Se ha demostrado de manera concluyente que la microscopía de buena calidad

de las dos muestras de esputo consecutivos identificará la gran mayoría (95-98%)
de los pacientes con tuberculosis con frotis positivo **

* OMS informe mundial de la tuberculosis 2012 la OMS / HTM / TB / 2012.6

Si se considera el total de casos
con diagnóstico de tuberculosis
pulmonar confirmado
bacteriológicamente, la
baciloscopia detecta el 70-80%. Y
el cultivo 20-30% restante
 Desventajas de la Baciloscopía

Baja sensibilidad (80%), especialmente en muestras de pacientes con

VIH, muestras de pacientes infantiles, muestras extrapulmonares.
Tiempo de diagnóstico

Xpert Bacilosocpia Cultivo Liquido Cultivo Sólido

MGIT
2 horas 24 horas Hasta 42 días Hasta 60 días
 Microscopia del BAAR

MORFOLOGIA DE M. tuberculosis
• Forma bacilar.
• Longitud de 2 a 10 micras y
diámetro 0,2 a 0,6 micras.

Pared Celular.
•Lípidos (más del 60%)
•Glucolípidos.
•Proteínas.
 LA BACILOSCOPIA
Se Basa en la ácido-alcohol resistencia.
Propiedad que tienen las micobacterias
de unir en su pared Fucsina fenicada o
auramina y retenerlas frente a la acción
de decolorantes (alcohol ácido)

Pared Celular.
•Lípidos (más del 60%)
•Glucolípidos.
•Proteínas.
 TECNICA DE TINCION DE ZIEHL-NEELSEN

Fue descrita por

primera vez por
dos médicos
alemanes

Bacteriólogo Patólogo
Franz Ziehl Friedrich Neelsen
(1857-1926) (1854-1894)
Para que la baciloscopia sea
positiva es preciso que la
muestra tenga como mínimo,
entre 5 000 y 10 000 bacilos por
mililitro de muestra
Apariencia Física de la Muestra de Esputo

Salivoso Mucopurulento Hemoptisis mucoso

Tinción Ziehl Neelsen

1000X
 Colorantes

Colorantes preparados en Colorantes comerciales

laboratorio
PREPARACIÓN Y FIJACION DEL EXTENDIDO
COLORACIÓN
Numeración de las
láminas
Partir un aplicador en
dos, tratando de que las
puntas queden ásperas.
Tomar la parte
sospechosa
Extendido de Esputo

Tras de la flama del mechero.

Tamaño del extendido 3cm x 2 cm ‘o

2cm x 1 cm

Deja secar a T° ambiente (no a la

flama del mechero).
Fijación del extendido

No quemar
la lámina
Colocar las laminas separadas
en un espacio de 1 cm o un
dedo
Tinción con fucsina fenicada

Cubrir con el colorante de

fucsina básica fenicada
toda la superficie del
extendido
Calentamiento de la lámina

Calentar con la llama de

un mechero o un hisopo
de algodón hasta la
emanación de vapores.

No hervir

Dejar reposar mínimo

por 5 minutos
Lavado de la lámina

Lavar la lámina para

eliminar el exceso del
colorante con chorro
suave de agua
corriente
Eliminar la fucsina
tomando la lámina
por el extremo.
Decoloración

Cubrir toda la lámina con

alcohol ácido y dejar
reposar por 3 minutos
 lámina decolorada
(repetir si es necesario la decoloración)
Lavado de la lamina

Lavar la lámina para

eliminar el exceso del
alcohol ácido con
chorro suave de agua
corriente
Tinción de contraste

Cubrir toda la superficie de

la lámina con el colorante
Azul de metileno y dejar
reposar durante un minuto
Lavado de la lámina

Eliminar el azul de
metileno tomando la
lámina por el extremo.

Lavar la lámina con

un suave chorro de
agua corriente
 Secado de la lámina con el extendido
teñido

Dejar la lámina secar al

ambiente
OBSERVACION MICROSCÓPICA
 La aplicación del aceite de inmersión

Colocar una gota de

aceite de inmersión
en el extendido
teñido.

No tocar el extendido
con el gotero
Lectura del extendido teñido

100X
“Tamaño uniforme del extendido hace fácil la lectura

Si el extendido es de 2x3cm, Si el extendido es de 2x1cm,

Una línea horizontal equivale a Una línea horizontal equivale a 100
150 campos, y una línea vertical campos, y 2 línea verticales
equivale a 100 campos equivale a 100 campos
Forma agrupada Forma cocoide
 Escala de reporte
(-) No BAAR encontrados en al menos 100
campos observados.

Paucibacilar Se observan de 1-9 en 100 campos

observados.

(1+) 10-99 BAAR en 100 campos observados

(2+) 1-10 BAAR por campo en 50 campos

observados

(3+) Más de 10 bacilos por campo en 20 campos

observados.
Registro de muestras
para investigación
en tuberculosis

Deben estar completos

y contener información
confiable y consistente
Resultado de

730
Lectura de la
lámina

Transferir los resultados al

cuaderno de registro del
laboratorio y la ficha de
solicitud investigación
bacteriológica
 CAUSAS DE ERROR EN LA MICROSCOPIA
FALSOS POSITIVOS FALSOS NEGATIVOS
-No representativa de la lesión X
Inherentes a la -Recogida en momento inadecuado X
muestra -Insuficiente X
-Mal conservada (bacteriólisis) X
• Mala recolección de la partícula útil X
• Defectos en la realización del extendido:
-Extendidos finos, gruesos. X
-Uso de porta objetos rayados o sucios. X
-Fijación de extendidos húmedos o a
X
temperatura superiores a 60°C.
Inherentes al • Defectos en la realización de la coloración de ZN:
operador -Mantenimiento del extendido con la fucsina
X
menor a 5 min. En caliente.
-Fucsina de calidad deficiente. X
-Calentamiento deficiente o excesivo. X
-Decoloración insuficiente. X
-Precipitación de cristales por uso de reactivos
X
no filtrados o calentamiento excesivo.
-Decoloración excesiva. X
 FALSOS POSITIVOS FALSOS NEGATIVOS

• Defectos en la lectura:
-Uso de microscopio en el mal estado. X X
-Lectura de un número insuficientes de
X
campos.
Inherentes al -Poca capacidad para observar bacilos de
artificios de coloración. X
operador
• Transferencia de bacilos de un extendido a
otro, dispensador de inmersión X
contaminado.
• Confusión de muestras y/o extendidos X X
• Errores en transcripción de resultados X X
 PUNTOS DE EVALUACION DEL
EXTENDIDO TEÑIDO

1. Tamaño del extendido.

2. Extendido Homogéneo.

3. Espesor del extendido.

4. Extendido libre de impurezas.

5. Calidad del esputo.

6. Tinción.
 Punto de Causas Falso Falso
evaluación Negativo Positivo
(FN) (FP)
Tamaño del • Muy grande *
Extendido • Muy pequeño *

Tamaño 3 x 2 cm Tamaño 2 x 1 cm
 Punto de Causas Falso Falso
evaluación Negativo Positivo
(FN) (FP)
Extendido • No homogéneo *
Homogéneo • Desprendido *

Desprendido Desigual
 Punto de Causas Falso Falso
evaluación Negativo Positivo
(FN) (FP)
Espesor del • Muy grueso *
Extendido • Muy delgado *

Bueno Muy Grueso Muy Delgado

 Punto de Causas Falso Falso
evaluación Negativo Positivo
(FN) (FP)
Extendido • Precipitados * *
Limpio • Impurezas *

Bueno Mal decolorado

 Punto de Causas Falso Falso
evaluación Negativo Positivo
(FN) (FP)
Calidad del • Saliva *
esputo

La presencia de más de 25 leucocitos por campo (a 100X de aumento)

o presencia de células (macrófagos) indica esputo de buena calidad.

Leucocitos (100X) Células (100X)

Apariencia Física de la Muestra de Esputo

Salivoso Mucopurulento Hemoptisis mucoso

 Punto de Causas Falso Falso Positivo
evaluación Negativo (FN) (FP)
Tinción • Excesivo calentamiento * *
• Insuficiente *
calentamiento /Tiempo
• Mala decoloración *

Bueno Mal decolorado

Extendido Bueno Extendido Malo
Extendido Bueno Extendido Malo
Extendido Bueno Extendido Malo
 Una buena postura – Una mala postura –
apoyar los pies pies colgados
enderezar la espalda

Una buena postura- es elevar el Una mala postura – es

microscopio para enderezar la asiento demasiado alto o
espalda y los pies en el suelo bajo y pies no en el suelo
 LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL DE MICOBACTERIAS.
CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA – INSTITUTO NACIONAL DE SALUD.
 LLENADO CORRECTO DE LAS
SOLICITUDES BACTERIOLOGICAS

Blg. Alexis Medina Caller

Laboratorio de Referencia Nacional de Micobacterias
Instituto Nacional de Salud
¿?
C
¿?
¿?
“MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LA RECOLECCION DE
MUESTRAS – MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD DENTRO DEL
LABORATORIO”
LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL DE MICOBACTERIAS.
CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA – INSTITUTO NACIONAL DE SALUD.
 OBTENCION DE LAS MUESTRAS PARA
EL DIAGNOSTICO DE TB
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LA RECOLECCION DE
MUESTRAS

Para la recolección de las muestras se deben tener en cuenta

las siguientes recomendaciones:
•Elegir un lugar bien ventilado y discreto para que el SR
produzca la expectoración. Puede ser un cuarto ventilado y con
acceso a luz natural, o algún lugar abierto no concurrido del
patio del Servicio de Salud.
-No utilizar lugares cerrados o muy concurridos tales como laboratorios,
consultorios médicos, salas de espera o baños, ya que son deriesgo….
 OBTENCION DE LAS MUESTRAS
PARA EL DIAGNSOTICO DE TB

• No mancharse las manos, ni las paredes externas delfrasco

• limpiar el exterior del envase con un pañuelo de papel y luego lavarse las
manos con agua y jabón.

• El uso de EPP.

Manual para el Diagnostico Bacteriologico de la Tuberculosis. Parte 1: Manuel de

actualización de Baciloscopia. Lima: ORAS - CONHU; 2018
Bioseguridad en el laboratorio:
Es el conjunto de medidas preventivas de sentido común, para
proteger la salud y la seguridad del personal que trabaja en el
laboratorio así como a la comunidad, frente a microorganismos
potencialmente infecciosos.

manual de bioseguridad en el laboratorio de tuberculosis

www.who.int/iris/bitstream/10665/92661/1/9789243504636_spa.pdf
 ACTITUD DE LOS PROFESIONALES.
• Las personas y organizaciones necesitan estar
comprometidas con la seguridad
• Estar conscientes de los riesgos
• Actuar de forma que garantice la seguridad
• Estar abierto a los cambios
PATRONES DE SEGURIDAD

• Un proceso continuo de reconocimiento

del peligro
• Evaluación del riesgo
• Prácticas para disminución del riesgo
• Garantía de que los gestores y técnicos del
laboratorio están igualmente enterados
del problema y trabajan en conjunto para
mantener los altos patrones de seguridad
 CAPACITACIÓN
Encargado debe asegurar personal entrenado y evaluar competencias
técnicas.
• Capacitación en seguridad:
• Código de prácticas y manual de
seguridad;
• Prácticas seguras para evitar o
minimizar riesgo de inhalación,
ingestión e inoculación;
• Cómo descontaminar y desechar
material infeccioso.
DETERMINANDO RIESGOS
Riesgo es la combinación de
probabilidad de que exista
determinado peligro y las
consecuencias de un incidente
relacionado con ese peligro
concreto.

El análisis de los riesgo relacionado con los aerosoles ha llevado al desarrollo

de unos requisitos mínimos de bioseguridad necesarios para desarrollar
diferentes procesos en los laboratorios de TB.
 EVALUACIÓN DE RIESGO EN EL LAB. TB.
• La carga bacteriana y viabilidad de los bacilos.
• Vía de transmisión de la TB.
• Número de maniobras que generarían aerosoles.
• La carga de trabajo del laboratorio y el personal.
• La epidemiologia de la enfermedad.
• Experiencia y competencia del personal.
• El estado de salud de los trabajadores.
IDENTIFICACIÓN DE PELIGROS:

Todo aquello que tenga potencial para causar daño.

• físico (incendio, explosión)
• actividad (pipetear)
• material (aerosoles con bacilos).
PRINCIPAL RIESGO PARA EL PERSONAL DE LABORATORIO.

Puede incluir gotas que contienen 1-3 bacilos vivos que

permanecen suspendidos en el aire – daño real para el personal.
 MANIOBRAS QUE PRODUCEN AEROSOLES
• Pipetear
• Mezclar
• Agitar
• Centrifugar
• Moler
• « Vortexear »
• Vaciar
• “flamear” asas de siembra o láminas
húmedas
• Abrir tubos a temperatura y presión
diferente a las ambientales
 COMO MINIMIZAR AEROSOLES?
❖Siempre abrir y manipular muestras y
cultivos en CBS certificada.
❖Usar asas descartables.
❖Trabajar sobre papel absorbente
humedecido con desinfectante.
❖Usar cubetas de seguridad para
centrífuga, cargar y descargar en CBS.
❖Nunca descargar todo el líquido de
pipeta (dejar pequeño volumen en tip).
❖Eliminar burbujas de tubos de cultivo
líquido con precaución.
 CÓDIGO DE PRÁCTICAS

Conceptos que incluyen:

• Acceso al laboratorio
• Responsabilidad del encargado del lab;
• Equipos de protección personal;
• Procedimientos.

Describe las prácticas y los procedimientos indispensables para

aplicar técnicas microbiológicas.
 BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO
• No comer, beber o fumar
• No usar telefónos celulares
• No pipetear con la boca
• No llevarse a la boca lápices o lapiceros
• No llevarse las manos a los ojos o cara
• Siempre lavarse las manos al salir del lab
 PROCEDIMIENTOS DE DESCARTE DE MATERIALES
• Material no contaminado
(no infeccioso) reusar,
reciclar o descartar como
• desechos comunes;
Contaminados (infecciosos)
elementos cortantes, e.g.
vidrio roto, jeringas, láminas
•
de vidrio;
Enterrar, incinerar o
autoclavar material
infeccioso
MANEJO DE DESECHOS
Preguntas antes de descartar cualquier material del
laboratorio:
• Los materiales se han • El desecho de material
decontaminado o decontaminado involucra
desinfectado siguiendo riesgos adicionales,
procedimientos adecuados? biológicos/no, personal que
entre en contacto fuera del
lab.?
• Si no, se han empacado en
un recipiente cerrado o bolsa
para incineración o
autoclavado inmediato en el
laboratorio?
 AUTOCLAVE
Materiales para autoclavar:
• Instrumentos, vidrio, medio o soluciones
para uso estéril
• Cultivos de micobacterias que se vayan a
descartar
• Todos los materiales infecciosos del TB lab

Registrar tiempo, T° y presión en cada uso para monitorear funcionamiento

adecuado. Usar indicadores biológicos periódicamente para validar capacidad
de esterilización.
 DESINFECCIÓN
Desinfectantes recomendados:

❑Fenol: 5% en agua;
❑Lejía: Hipoclorito de sodio 1 ó 5 g/l;
❑Alcohol: etanol (etanol denaturalizado,
alcoholes metilados) o isopropanol al 70%.

Seleccionar de acuerdo al material a desinfectar.

1. Las puertas del laboratorio deben permanecer cerradas
cuando se realicen procedimientos.

2. El personal que está en riesgo de adquirir una infección,

no le será permitido entrar al laboratorio.

3. Solo las personas que cumplan todos los requisitos de

ingreso (inmunización), y que satisfagan los
procedimientos de entrada y salida tendrán acceso al
laboratorio.

4. Los procedimientos de bioseguridad deben incorporarse a

los POE o en un manual de preparado específicamente
para ese laboratorio.
5. Las superficies de trabajo deben descontaminarse
rutinariamente, después de terminar el trabajo y
especialmente cuando hay derrames de material infeccioso.

6. Los residuos contaminados deben ser colocados en

contenedores a prueba de escurrimientos.

7. Todos los residuos del laboratorio con material

potencialmente infeccioso (guantes, batas, etc.), deben ser
descontaminados antes de disponer de ellos o volverlos a
utilizar.
 BIOSEGURIOAD EN
LABORATORIO

Barreras de Protección Primaria

'IIIKll•I• 11,1, 11111

 Equipos de Protección Personal (EPP)
❖El EPP sirve de barrera física para minimizar el riesgo.
❖EPP debe ser usado en todo momento dentro del laboratorio.
❖Un EPP mal ajustado, inapropiado o usado incorrectamente
reducirá su efectividad.
❖La elección del EPP depende del tipo de trabajo realizado.
❖Todos los EPP deben ser suministrados por el laboratorio.
❖El personal no debe llevar a casa ningún EPP para lavarlo,
desecharlo o usarlo fuera del laboratorio.
 Batas y delantales de laboratorios

❖ Las batas deben cambiarse semanalmente o después

de que ocurra un derrame evidente
❖ Las batas deben estar disponibles en tallas pequeñas,
medianas y grandes.
❖ Las batas no deben usarse fuera del laboratorio.
❖ Las batas no deben almacenarse en el mismo lugar
que la ropa de calle.
❖ Deben ser preferentemente de material no
absorbente
❖ Puños elásticos de al menos 30 mm
 Guantes
❖Deben usarse guantes para todos los
procedimientos que impliquen contacto
con muestras o laboratorio.
❖Pueden utilizarse de látex o de nitrilo
❖No llevar guantes fuera del laboratorio.
❖NO VUELVA A USAR GUANTES UTILIZADOS
❖Guantes mal ajustados reducir la destreza
de los dedos y aumentar el riesgo de
contaminación del guante y accidentes
 Respiradores
• Los respiradores son máscaras ajustadas,
diseñados para crear un sello facial.
• Los respiradores sin válvula brindan una
protección adecuada en dos direcciones, pues
filtran tanto el aire que entra como el aire que sale.
• Los respiradores están diseñados para proteger al
usuario (cuando se utiliza correctamente), según la
clasificación de filtrado que posea.
• El N95 es uno de los respiradores más conocidos.
Se constituye como un estándar estadounidense
administrado por el NIOSH -CDC. Capacidad de
filtrado al menos del 95%.
 Errores comunes
Las correas no están colocadas correctamente

Colocar el respirador alrededor Colocar el respirador en la frente

Ambas correas Ambas correas Correas cruzadas del cuello causará daños causará daños
por encima de las por debajo de las
orejas orejas

La pieza nasal no tiene la

forma correcta: espacio en la
pieza nasal
 Cómo debe reusarse y almacenarse un respirador
Puede reutilizarse varias veces durante dos o tres
semanas.
Antes de usar, siempre verifique
cuidadosamente que:
- No tenga agujeros
- La conexión de la correa no está dañada.
- La superficie del respirador está limpia y no
tiene fibras sueltas.
- Las correas no se han estirado demasiado
Un respirador debe almacenarse en un lugar bien Guarde los respiradores en No cuelgues por las
bolsas de papel con agujeros
ventilado cuando no esté en uso para que el de aire.
correas

respirador pueda secarse NO ALMACENE UN RESPIRADOR EN UN

BOLSILLO, APLASTARÁ LA FORMA PRE-
FORMADA
Protección para los ojos y la cara
• Opciones de equipamiento
❖Las gafas protectoras están hechas de plástico
inastillable y curvadas a los lados. Algunos
protectores están diseñados para ajustarse Las gafas de seguridad están hechas de
sobreprotectores
❖Los anteojos recetados
facialesestándar.
están hechos de
plástico inastillable y están curvadas
alrededor de los lados.

plástico inastillable, cubren el frente y los

lados de la cara, y se mantienen en su lugar
mediante una correa para la cabeza.
❖Los anteojos recetados y las lentes de
contacto no brindan protección.

El escudo protector cubre los anteojos recetados,

está hecho de plástico inastillable y cubre el
frente y los lados de la cara
Calzado
• El uso correcto de EPP proporciona una
barrera importante contra los aerosoles y la
contaminación.
Calzado adecuado

• Sin embargo, usar EPP no protege al usuario

de prácticas laborales inseguras

Calzado inadecuado
 Uso de la cabina de seguridad biológica
❖ Principal dispositivo de contención a aerosoles o
gotas infecciosas generados por procedimientos
microbiológicos.

❖ Formado por:
– Filtros HEPA
– Sistema electrónico y electromecánico con 1 o
2 moto ventiladores para dar movimiento
controlado al aire a través de los filtros.

BUENAS PRÁCTICAS DE TRABAJO SEGURAS ES SU MEJOR PROTECCIÓN

Cómo protege un CSB
Clase II
• Los BSC de clase 2 extraen alrededor del 70%
del aire purificado del filtro HEPA sobre el
área de trabajo y alrededor del 30% de aire a
través de la rejilla frontal
• La clase II proporciona protección para el
usuario, el medio ambiente y el área de
trabajo. Hay cuatro tipos de BSC Clase II: A1,
A2, B1 y B2. El más adecuado para todos El
trabajo de TB es del tipo A2. La CSB de clase 2
protegen tanto al técnico
como al área de trabajo.
 No trabaje ni coloque artículos
Ambas rejillas deben mantenerse en la rejilla
completamente libres en todo
momento
 Separación de las áreas de trabajo

Un CSB no es un almacen:
elimine los elementos no
necesarios para la tarea

Espacio limpio Principal área de Espacio sucio

trabajo
Fuente:www.fiocruz.br/biosseguranca/ BIS/virtualtour/lab_virtual
 LABORATORIO DE BAJO RIESGO
• Bajo riesgo de generar aerosoles infecciosos; baja concentración de
partículas infecciosas
• Situaciones que aumentan el riesgo :
✓Uso inadecuado de las zonas de trabajo.
✓Fugas y derrames de los recipientes de muestras.
✓Falta de cuidado en la manipulación de muestras, lo que puede generar
aerosoles
✓Agitación enérgica de las muestras.
✓Insuficiente ventilación o iluminación.
 Procedimientos en un Lab. Bajo Riesgo
• El carácter viscoso del esputo no favorece la generación de aerosoles
cuando se utilizan buenas técnicas microbiológicas.
• Los Labs. de bajo riesgo pueden:
-Manipular muestras de esputo para la baciloscopia directa
-Manipular muestras de esputo para el ensayo Xpert MTB/RIF®
Medidas mínimas de bioseguridad
 LABORATORIO RIESGO MODERADO

Procedimientos en labs de riesgo moderado:

• Inoculación de cultivo primario en medio sólido;

• PS directa (GenoType, MODS, Nitrato reductasa).
 LABORATORIO DE RIESGO ALTO
Diseñados para trabajar altos volúmenes y concentraciones de
M. tuberculosis

Procedimientos :
• Manipulación de cultivo para
identificación de M.
tuberculosis;
• Manipulación de cultivo o
suspensiones para PS
indirecta y pruebas
moleculares.
 Procedimientos de respuesta a emergencias en
laboratorios de TB
Derrame infeccioso (fuera de CBS)
• Evacuar inmediatamente área afectada
• Informar al encargado del laboratorio
• No re-ingresar antes de 1h
• Colocar señales para evitar ingreso durante
limpieza
• Usar implementos de protección personal
adecuados.
 Seguir con el procedimiento de limpieza:

• Guantes, bata y mascarilla

• Re-ingresar al área afectada
• Cubrir el derrame con tela o papel toalla.
• Vaciar desinfectante sobre área contigua y
después sobre papel toalla
concéntricamente (lejía 5%)
• Dejar actuar tiempo suficiente antes de
descartar materiales
• Colocar materiales contaminados en bolsa y
descartar.
 Derrame en la CBS – qué hacer

• Cubrir el derrame con papel toalla absorbente.

• Verter desinfectante y dejar actuar al menos 45 min (1 hora).
• Descartar el papel absorbente y todo el material utilizado en la
limpieza en una bolsa autoclavable y autoclavar.
 KIT DE LIMPIEZA DE DERRAME
Preparar 2 kits de derrame (fuera y
dentro de lab.)
• Lejía, respiradores, guantes
• Batas de lab. (4-6 descartables)
• Cepillo y recogedor (para descartar si
fuera necesario)
• Tabletas de cloro (10 tabletas), papel
toalla
• Envase para objetos cortantes, bolsas
de bioseguridad, gafas de protección.
SEGÚN LA MODIFICATORIA DE LA NORMA TECNICA N° 104 EXAMENES
REALIZADOS A PACIENTES NON TBC
Preguntas y Comentarios.

Gracias