COMPLEMENTO DE MÉTODOS DE ENSAYO

Elaborado por: TITULO:

Silvia Quevedo CODIGO:
AOCS Cd 18-90 –Valor p-Anisidina
Revisado por:
Diego Uribe
CME/026/LQ
Aprobado por: Fecha Efectiva: 09/feb/15 Revisión: 01 Página: 1 de 3
Eladio Muñoz

1.0 Objetivo:
1.1. Proporcionar instrucciones de soporte al personal analista en la ejecución del método de ensayo AOCS Cd
18-90 (*) Valor p-Anisidina.
2.0 Alcance:
2.1. Este método determina la cantidad de aldehídos (principalmente 2-alquenales y 2,4-dienales) en grasas y
aceites de origen animal y vegetal, por la reacción en una solución de ácido acético de los compuestos de
aldehído en un aceite y la p-anisidina (ver Notas, 1), y la medición de la absorbancia a 350 nm.
3.0 Definición:
3.1. El valor p-Anisidina (*) está definido por convención como 100 veces la densidad óptica medida a 350 nm en
una cubeta de 1 cm de una solución conteniendo 1,00 g de aceite en 100 mL de una mezcla de solvente y
reactivo de acuerdo al método descrito.
4.0 Equipos:
4.1. Tubos de ensayo- 10 ml min. ya sea con tapones de vidrio esmerilado o tapones de rosca recubiertos de
teflón.
4.2. Matraz Volumétrico-25 ml.
4.3. Pipeta automática o bureta automática.
Nota: Cualquier pipeta y/o bureta capaz de proporcionar exactamente 1 ml y 5 ml es satisfactorio.

4.4. Espectrofotómetro adecuado para observación a 350 nm.

4.5. Cubetas de vidrio-1,00 + 0,01 cm, las dos cubetas de cada par deben ser idénticos.
5.0 Reactivos:
5.1. Isooctano (2,2,4 trimetilpentano) óptimamente claro (ver Nota 2, y precaución).
5.2. Ácido acético glacial, para análisis (ver Notas 3, y precaución).
5.3. 3. p-Anisidina, para análisis (ver Nota 4, y Precaución) 0,25 g/100 ml de solución en ácido acético glacial (*)
(ver Nota, 5)
6.0 Procedimiento:
Nota: La muestra de ensayo debe ser perfectamente clara y seca (ver Notas, 3)
6.1. Peso 0,5 – 4,0 +/- 0,001 g de la muestra de ensayo en un matraz volumétrico de 25 mL. Disolver y diluir a
volumen con isooctano.
6.2. Medir la absorbancia (Ab) de la solución a 350 nm en una cubeta con el espectrofotómetro, usando
la cubeta de referencia llena con el solvente como blanco.
6.3. Pipetear exactamente 5 ml de la solución de grasa en un tubo de ensayo (*) y exactamente 5 ml
del solvente en un segundo tubo de ensayo. Por medio de una pipeta automática (*) adicionar exactamente 1
ml del reactivo p-Anisidina (*) a cada tubo, y agitar (ver Nota, 6).
6.4. Después de exactamente 10 min medir la absorbancia (As) del solvente en primer tubo de ensayo en una
cubeta (*) a 350 nm, usando la solución del segundo tubo de ensayo como blanco en la cubeta de
referencia.
Nota: Si la absorbancia de la muestra excede de 1, repetir el ensayo con un peso de muestra menor.

6.5. Cálculos
El valor p-Anisidina (p-A.V.) está dado por la fórmula

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AOCS Cd 18-90 –Valor p-Anisidina 2 de 3 01 CME/026/LQ

p-A.V. = 25 X (1,2As – Ab)

m
Donde:
As = Absorbancia de la solución de grasa después de la reacción con el reactivo de p-Anisidina
Ab = absorbancia de la solución de grasa.
m = masa de la muestra del ensayo (g)
6.6. Precisión
Aceite crudo de semilla de colza Aceite refinado de palma
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 1 Muestra 2
No. de laboratorios 20 20 20 20
Media 2,0 2,0 2,3 2,3
Repetibilidad, CV, % 4,0 5,8 4,8 4,6
Reproducibilidad, CV, % 35 37 30 31
6.7. Precauciones:
El isooctano es inflamable y con riesgo de incendio. Límite explosivo en el aire 1,1 – 6,0 %. Es tóxico al
ingerirlo o inhalarlo. Una campana de humos apropiada debe usarse cuando se trabaja con este solvente.
Ácido acético en el estado puro es moderadamente tóxico al ingerirlo o inhalarlo. Es un irritante fuerte a la piel
y tejidos. El valor máximo permitido en el aire es 10 ppm.
p-Anisidina es un irritante debe ser manipulado con cuidado, preferiblemente en una campana de humo. p-
Anisidina es una amina aromática, una clase de químico tóxico y posiblemente cancerígeno. o-Anisidina es un
cancerígeno en ratas y ratones, causando carcinomas urinarias o papilomas. El valor máximo permitido es 0,1
ppm.
Notas
1. En la presencia de ácido acético, p-anisidina reacciona con compuestos aldehídos en aceites o grasas. La intensidad del color de
los productos de la reacción amarillenta depende no solo de la cantidad de compuesto aldehído presente sino también de sus
estructuras. Se ha encontrado que un doble enlace en la cadena conjugada de carbono con el doble enlace carbonilo incrementa
la absorbancia molar de cuatro a cinco veces. Esto significa que los 2– alquenales y dienales, especialmente,
contribuirán sustancialmente al valor encontrado.
2. En muchos casos n-hexano puede ser substituido por isooctano como un solvente. Sin embargo, aceites que contienen una alta
cantidad alta de ácidos grasos oxidados no se disolverán completamente en n-hexano. Para estos aceites el isooctano debe ser
usado como solvente. La absorbancia del solvente usado (isooctano o n-hexano), medidos en una cubeta de 1,00 cm. entre 300 y
380 nm, debe ser nulo o casi nulo. El producto comercial puede ser liberado de material absorbente por filtración a través de una
columna de vidrio (3-5 cm. de diámetro interior, y 100 cm. de largo) llenada con sílica gel.
3. La reacción entre p-anisidina aldehídos implica la formación de agua. Por lo tanto, la presencia de humedad en cualquiera de los
reactivos o en la muestra de ensayo lleva a una reacción incompleta y, consecuentemente, valores bajos. Debido a que el ácido
acético es altamente higroscópico, es esencial revisar su humedad contenida por una determinación Kart Fischer. Si el contenido
excede 0,1 por ciento, el ácido acético debe ser desechado.
4. En almacenamiento, p-anisidina tiende a oscurecerse como resultado de la oxidación. Los cristales de p-anisidina, los cuales
deben ser cremas, deben ser almacenados a 0-4°C en una botella oscura. Los cristales no deben ser expuestos a luz intensa y
deben ser usados antes de que se observe algún cambio de color. Un reactivo decolorado puede ser reducido y (*)
de la siguiente manera. Disolver 4,0 g de p-anisidina en 100 ml de agua a 75°C. Adicionar 0,2 g de sulfito de sodio y 2,0 g de
carbón activado y agitar por 5 minutos. Luego filtrar a través de un doble papel filtro. Si el carbón pasa, repetir la filtración. Enfriar
la solución filtrada alrededor de 0°C, dejar reposar a esta temperatura por lo menos 4 h, o, preferiblemente, toda la noche. Filtrar
la p-anisidina cristalizada y lavar con una pequeña cantidad de agua a temperatura de 0 °C. Después secar en un desecador al
vacío, transferir los cristales en una botella de vidrio marrón. Si se almacena en la oscuridad y a baja temperatura, los cristales
obtenidos no deben oscurecerse considerablemente en un año.
5. Soluciones de reactivos que tienen una absorbancia mayor que 0,200 cuando se mide en una cubeta de 1,0 cm a 350 nm frente a
isooctano o n-hexano como un blanco; deben ser descartados.
6. La mezcla será completamente homogenizada con mínima agitación (*); luego dejar que reaccione por 10 minutos antes
de proceder con la medida de la absorbancia.

7.0 Archivos
PERIODO DE LUGAR DE
REGISTRO RESPONSABLE
RETENCIÓN ALMACENAMIENTO
FPER.024.LQ - RR - Métodos Supervisor de Laboratorio de
04 años Fisicoquímica
Espectrofotométricos Fisicoquímica

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8.0 Historial de cambios

CME Nº Revisión Fecha Efectiva Elaborado Revisado Aprobado

CME/026/LQ 00 17/Ene/12 Rosa Ureta Dudley Ramírez Fernando
Fossa
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