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Prctica Separacin Cromatogrfica De pigmentos vegetales Parte I

Objetivo: Separar por cromatografa en papel y reconocer, los pigmentos vegetales. Introduccin: Explica brevemente en qu consiste la cromatografa en papel y qu es un eluyente orgnico. Investiga qu pigmentos vegetales pueden separarse de una planta como la espinaca. Utiliza la informacin que se te proporciona de la estructura de los pigmentos vegetales para elaborar una prediccin sobre cmo quedar tu tira cromatogrfica y poder interpretar los resultados. La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar unos anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase mvil en el fondo. Despus de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extremo se retira el papel y seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se vern las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado. Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la eleccin del disolvente y la del papel de filtro. El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es debido a la presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados llamados clorofila a y clorofila b. Asociados con las clorofilas, existen tambin en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y amarillo-anaranjados que son los xantofilas y carotenos.

Hiptesis: escribe tu hiptesis sobre la posicin que alcanzarn los siguientes pigmentos en la tira de papel: Carotenos, clorofila a, clorofila b, mezcla de xantofilas. Las clorofilas sern las de hasta abajo en la tira de papel seguidas por las xantofilas y al final los carotenos. Material: 2 Probetas de 100 ml (cmara) 2 Tiras de papel Whatman no. 1 de 2 cm x 23 cm 1 placa de vidrio Tubos capilares 1 agitador 1 pipeta de 10mL 1 pinzas finas Hilo 1 aguja 1 sacabocados Hoja de espinaca/ extracto de clorofila en acetona Reactivo: 20ml de eluyente (es muy inflamable) Se prepara con 85ml de ter de petrleo, 10ml de acetona y 5 ml de benceno. 1.- Colocar 10 ml de eluyente en cada cmara y tapar hermticamente, se deja saturar por lo menos 10 min. Antes de usarla. 2.- Trazar en las tiras de papel una lnea recta a 2 cm de la orilla del papel. En el extremo contrario se perfora con aguja para pasar el hilo con que van a quedar suspendidas. NOTA: No tocar con los dedos el papel por la parte donde va a correr la muestra de pigmentos 3.- Se prepara previamente un extracto de clorofila utilizando acetona para licuar las hojas de espinaca y as permitir al romperse las clulas que el pigmento salga. 4.- Con un tubo capilar se toma un poco del extracto de clorofila y se marca sobre la lnea de lpiz en la tira de papel whatman. Se deja secar la clorofila y se repite la operacin de 3 a 4 veces hasta que quede una banda verde bien definida en la tira de papel. Entre ms obscura es la banda, mejor sern los resultados. 5.- La tira de papel se coloca en la cmara, permitiendo que el eluyente moje el papel a una altura de 2 cm y cerciorndose que la tira no toca las paredes de la cmara. 6.- Dejar correr la muestra hasta que el frente del solvente ha llegado hasta unos 3 cm, antes de la orilla superior de la tira de papel. Hay que vigilar que no se corra ms de lo debido. 8.- Sacar la tira de la cmara y anotar y describir y esquematizar las observaciones. 9.- Distinguir en el cromatograma (la tira) a qu pigmento pertenece cada mancha. (clorofila a, clorofila b, carotenoides, xantofilas y quiz lutena)