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Análisis Instrumental: Manual de Laboratorio
Análisis Instrumental: Manual de Laboratorio
Análisis Instrumental: Manual de Laboratorio
Manual de laboratorio
Carmen Gómez Benito
Sagrario Torres Cartas
EDITORIAL
UNIVERSITAT POLITÈCNICA DE VALÈNCIA
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EDITORIAL
UNIVERSITAT POLITÈCNICA DE VALÈNCIA
Colección Académica
Los contenidos de esta publicación han sido revisados por el Departamento de Química de la
Universitat Politècnica de València
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La Editorial UPV autoriza la reproducción, traducción y difusión parcial de la presente publicación con
fines científicos, educativos y de investigación que no sean comerciales ni de lucro, siempre que se
identifique y se reconozca debidamente a la Editorial UPV, la publicación y los autores. La autorización
para reproducir, difundir o traducir el presente estudio, o compilar o crear obras derivadas del mismo en
cualquier forma, con fines comerciales/lucrativos o sin ánimo de lucro, deberá solicitarse por escrito al
correo edicion@editorial.upv.es.
Presentación
Este libro nace con una intención muy concreta, ser un texto de apoyo al trabajo expe-
rimental de la asignatura Análisis Instrumental que se imparte en el Grado en Ciencias
Ambientales. Supone una revisión profunda del libro Técnicas Instrumentales. Ma-
nual de laboratorio publicado en esta editorial, que estaba pensado especialmente para
los estudiantes de la licenciatura, y ahora se ve enriquecido al recoger la experiencia
de las autoras en todo este tiempo.
Dada su naturaleza introductoria, el texto también será útil para cualquier estudiante
que realice análisis cuantitativos básicos por primera vez. En él, los estudiantes encon-
trarán un abanico de prácticas de laboratorio que les permitirá adquirir experiencia en
los análisis más habituales. Ello implica un conocimiento previo de los conceptos bási-
cos de análisis químico, así como de las técnicas instrumentales más utilizadas.
Cada una de las prácticas descritas en este libro está estructurada en seis apartados: en
primer lugar los objetivos que se pretenden alcanzar con el desarrollo del experimento.
Tras ellos se incluye un breve y conciso fundamento teórico de la técnica analítica
empleada y sus aplicaciones. A continuación, se enumera el material y los reactivos
necesarios para la realización de la práctica, incluyendo la forma de prepararlos en
determinados los casos. Por último, se detalla el procedimiento experimental, seguido
de un apartado de resultados en el que se pretende que el alumno anote los datos obte-
nidos en la experiencia y que le permitirán resolver las cuestiones planteadas. La idea
es que tanto los fundamentos teóricos básicos como los procedimientos experimenta-
les, queden reflejados en un mismo libro, de forma que éste pueda ser útil para una
mejor comprensión de la asignatura e incluso para aquellos alumnos que en el futuro
ejercicio de su profesión, necesiten realizar análisis de sencillas muestras ambientales.
Aquí hay que hacer una salvedad, y es el tema de la toma de muestras, etapa clave de
cualquier análisis y de la que no se hace mención debido a su alta especificidad. Como
primer apéndice se ha incluido información sobre seguridad en el laboratorio y proce-
III
dimientos de actuación en caso de accidente, información que es importante conocer
antes de iniciarse en el trabajo experimental.
En las etiquetas de los productos químicos viene la información sobre los peligros y
las precauciones a considerar en su manejo, en este sentido se incorpora información
relativa a la normativa europea 1272/2008 CLP (acrónimo de clasificación, etiquetado
y envasado de sus siglas en inglés)
Como segundo apéndice aparece un pequeño apartado dedicado a esbozar los pasos
iniciales en la gestión de residuos en un laboratorio. El estudiante será participante
activo en la gestión de los residuos producidos en el laboratorio y aprenderá también a
interpretar y usar las etiquetas de identificación de residuos peligrosos.
En el último, se explica cómo se realiza el ajuste de los datos experimentales a una
recta por mínimos cuadrados de una forma muy sencilla, haciendo uso de una hoja de
cálculo, en particular la hoja de cálculo del LibreOffice, una suite de oficina libre y de
código abierto.
Termina el texto con un capítulo de bibliografía que recoge las referencias consultadas
para preparar este libro y que, por tanto, pueden ayudar a profundizar en los distintos
aspectos aquí tratados.
20 de julio de 2017
Carmen Gómez Benito
Sagrario Torres Cartas
IV
Índice eneral
Presentación…………………………………………...…………………………………...…….. III
Índice General…………………………………………………………………………..……….… V
Capítulo 1. Determinación potenciométrica de un ácido poliprótico ............................. 1
1.1. Objetivos .......................................................................................................... 1
1.2. Introducción...................................................................................................... 1
1.3. Material ............................................................................................................ 5
1.4. Reactivos .......................................................................................................... 6
1.5. Procedimiento experimental ............................................................................. 6
1.6. Cuestiones y resultados .................................................................................... 7
Capítulo 2. Determinación conductimétrica de una mezcla de ácidos ............................ 9
2.1. Objetivos .......................................................................................................... 9
2.. Introducción...................................................................................................... 9
2.. Material .......................................................................................................... 13
2.. Reactivos ........................................................................................................ 13
2.. Procedimiento experimental ........................................................................... 13
2.. Corrección de la conductividad por el efecto de la dilución........................... 15
2.. Cuestiones y resultados .................................................................................. 16
Capítulo 3. Determinación de la humedad de un suelo ................................................. 17
3.1. Objetivos ........................................................................................................ 17
3.2. Introducción.................................................................................................... 17
3.3. Material .......................................................................................................... 17
3.4. Procedimiento experimental ........................................................................... 18
3.5. Cuestiones y resultados .................................................................................. 18
Capítulo 4. Introducción a los métodos de análisis instrumental .................................. 19
4.1. Introducción.................................................................................................... 19
4.2. Ajuste de los puntos experimentales a una recta por mínimos cuadrados ...... 21
4.3. Métodos de absorción de radiación UV-visible.............................................. 23
V
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
VI
Índice general
VII
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
VIII
Índice general
IX
Capítulo 1
Capítulo 1
Determinación
potenciométrica de un
ácido poliprótico
1.1. Objetivos
Valorar un ácido poliprótico, el ácido fosfórico (H3PO4), con NaOH utilizando como
indicador del punto final la medida del pH.
Usar la técnica potenciométrica (medida del pH a lo largo del proceso de valoración)
como un indicador del punto final.
Considerar las limitaciones del método: no se puede aplicar a bases o ácidos muy débi-
les o muy diluidos; tampoco permite diferenciar especies con constantes muy próxi-
mas.
1.2. Introducción
Los métodos potenciométricos se basan en la medida del potencial eléctrico de un elec-
trodo sumergido en una disolución. A partir de este potencial se puede establecer la
concentración de una especie electroactiva presente en la disolución.
1
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
2
potenciométrica de un ácido poliprótico
Figura 1.2. Curva de valoración del ácido clorhídrico con NaOH. El punto de inflexión de la curva se
corresponde con el punto final de la valoración.
3
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
Figura 1.3. Curva de valoración del ácido fosfórico con NaOH. Los dos puntos de inflexión
que aparecen corresponden a la neutralización del primer y del segundo protón del ácido
Puesto que el ácido fosfórico (H3PO4) es un ácido triprótico (pKa1= 2,12; pKa2= 7,22;
pKa3= 12,30) esperaríamos que la curva de valoración tuviera tres saltos, correspon-
dientes a la neutralización de cada uno de los protones. Sin embargo, en la figura 1.3
sólo aparecen 2 saltos en la curva de pH frente al volumen añadido del valorante, que
además están bien diferenciados. Estos dos saltos corresponden a la neutralización del
H3PO4 y del H2PO4-, cuyos valores de pKa1 y pKa2 difieren en más de cinco unidades.
Sin embargo, el tercer salto, que correspondería a la neutralización del monohidrógeno
fosfato (HPO42-), no se observa porque se trata de un ácido demasiado débil (Ka3 = 4.8·
10-13).
4
potenciométrica de un ácido poliprótico
Por otro lado, tal como se observa en la figura 1.3, a partir de los puntos de inflexión de
las curvas determinamos los volúmenes finales de la neutralización del primer y se-
gundo protón del fosfórico, V NaOH,1ºH+ y V NaOH,2ºH+, respectivamente.
Por otra parte, el volumen de patrón que hace falta para neutralizar el primer protón
(VNaOH,1ºH+ ) debe ser exactamente igual al necesario para el segundo (VNaOH,2ºH+), de
modo que el volumen de NaOH necesario para neutralizar un solo protón (VH+) se
obtiene a partir de la media de volúmenes experimentales:
ܸேைுǡଵ͑ு శ ܸேைுǡଶ͑ு శ
ܸு శ ൌ
ʹ
donde VNaOH,1ºH+ es el volumen de NaOH del primer punto de inflexión y VNaOH,2ºH+ es
el volumen consumido entre el 1º y 2º salto.
Si queremos conocer el volumen de NaOH necesario para la neutralización completa
del ácido, H3PO4:
H3PO4 + 3 NaOH → Na3PO4 + 3 H2O
Vemos que, puesto que el ácido fosfórico es un ácido triprótico, el volumen de NaOH
necesario para neutralizar el ácido fosfórico es el triple del necesario para un solo pro-
tón:
ܸேைுǡଵ͑ு శ ܸேைுǡଶ͑ு శ
ܸேைு ൌ ͵ ܸு శ ൌ ͵ ൬ ൰
ʹ
Además, como en toda valoración, en el punto de equivalencia se cumple que:
݊͑݁ ݁ݏܾܽݏ݁ݐ݈݊݁ܽݒ݅ݑݍൌ ݊͑݁݀݅ܿݏ݁ݐ݈݊݁ܽݒ݅ݑݍ
Por tanto, la normalidad (N) de ácido fosfórico será:
ܸேைு ܰேைு ൌ ܰௗ ܸௗ
ሺ͵ܸு శ ሻ ܰேைு ൌ ܰௗ ܸௗ
donde VÁcido es el volumen de muestra y NNaOH la concentración de NaOH (equivalen-
tes/L) y NÁcido la concentración de ácido fosfórico (equivalentes/L).
1.3. Material
Para la realización de la pontenciometría se necesita los siguientes materiales y reacti-
vos:
x pH-metro (calibrado)
x Pipeta 10 mL aforada
x Bureta 50 mL
5
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
1.4. Reactivos
x Muestra disolución de ácido fosfórico.
x Disolución de NaOH 0,10 N de concentración exactamente conocida, valorada
con hidrogenoftalato de potasio. Guardar la disolución en una botella de plás-
tico.
6
potenciométrica de un ácido poliprótico
bruscos, de modo que después se pueda dibujar la curva en esta zona de interés con
exactitud suficiente. El grado de agitación puede modificar algo la lectura, de modo
que debe mantenerse constante durante toda la valoración.
La disolución de NaOH no debe estar en la bureta más tiempo del necesario ya que el
compuesto ataca el vidrio de la bureta estropeando el material y variando su concentra-
ción.
Este proceso se debe realizar al menos dos veces. En la primera valoración se localizan
las zonas de cambios bruscos, y en la/s siguiente/s, se realizan adiciones más frecuentes
(por ejemplo 0,1 mL) alrededor de la zona donde se prevé que se produzcan los saltos.
Esto nos permitirá dibujar estos saltos con el detalle necesario y determinar, con exacti-
tud los volúmenes de neutralización.
Una vez obtenida las tablas de valores, se representa la curva [pH frente a VNaOH añadi-
do)] correspondiente a la serie de datos completa. En las zonas de los saltos se localizan
los puntos de inflexión (cambio de la curvatura de la curva), lo que permite determinar
los volúmenes de neutralización del primer y del segundo protón: V NaOH,1ºH+,
V NaOH,2ºH+, respectivamente.
Volumen pH
NaOH (mL)
0
0,5
7
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
3. Calcular la normalidad (N) y la molaridad (M) del ácido fosfórico con los vo-
lúmenes obtenidos.
8
Capítulo 2
Capítulo 2
Determinación
conductimétrica de una
mezcla de ácidos
Objetivos
Determinar la concentración de una mezcla problema de un ácido débil y otro fuerte
(CH3COOH y HCl) mediante una valoración conductimétrica con una base fuerte co-
mo valorante.
Apreciar las ventajas e inconvenientes que presenta la determinación del punto final de
una valoración mediante un conductímetro.
2..Introducción
La conductividad de una disolución o sustancia es la medida de su capacidad para dejar
pasar la corriente eléctrica a su través; y su unidad es el sistema internacional es el
siemens por metro (S/m). Su valor depende de la naturaleza y concentración de los
electrolitos presentes en la disolución; esta propiedad también variar con la temperatu-
ra. En la tabla 2.1 se muestra la conductividad específica molar de algunos de los iones
más habituales. En ella se ve que a igual concentración, la conductividad de cada ion es
9
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
Tabla 2.1. Conductividad molar específica (λ, S cm2 mol-1) para distintos iones a 25ºC
10
conducimétrica de una mezcla de ácidos
Figura 2.1. Curva de valoración de un ácido fuerte con NaOH. El punto final de la volumetría se
corresponde con el punto de intersección de las dos rectas.
Si se realiza la valoración con NaOH de una disolución que contiene una mezcla de un
ácido fuerte y un ácido débil, y se representa la variación de la conductividad a lo largo
del proceso, se obtiene la gráfica que aparece en la figura 2.2. El orden de neutraliza-
ción en cualquier valoración va siempre desde la especie más fuerte a la más débil. EN
primer lugar se observa una disminución de la conductividad debido a la neutralización
del ácido fuerte. Después podemos ver cómo la conductividad aumenta lentamente
durante la neutralización del ácido débil. El último tramo, cuando ya no hay ácido en la
disolución y sólo estamos añadiendo el NaOH, se produce un incremento notable la
conductividad.
11
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
También se observa en la figura 2.2 que los puntos alejados a cada intersección siguen
una tendencia lineal. Sin embargo, los puntos próximos a los puntos de corte no la
siguen. Por ello, sólo se tienen en cuenta para la obtención de las rectas los puntos
alejados de las zonas de corte.
El punto de intersección de las dos primeras rectas nos permiten determinar el punto
final de la primera neutralización (VNaOH,1) y el punto de intersección de la 2º y la 3º
recta el de la segunda neutralización (VNaOH,2).
Figura 2.2. Variación de la conductividad en la valoración con NaOH de una muestra que contiene
un mezcla de un ácido fuerte y un ácido débil.
12
conducimétrica de una mezcla de ácidos
2..Material
x Pipeta de 10 mL aforada
x Probeta de 100 mL
x Soporte con pinza
x Bureta
x Agitador magnético con imán
x Vaso de 250 mL (forma alta)
x Conductímetro
2..Reactivos
x Muestra: una mezcla de ácidos (HCl y CH3COOH) cuya concentración que-
remos conocer.
x Una disolución de hidróxido sódico 0,10 N (valorado con hidrogenoftalato de
potasio). Guardar la disolución en botella de plástico.
2..Procedimiento experimental
Pipetear 10 mL de la disolución de muestra en un vaso de precipitados y añadir 90 mL
de agua (es suficiente aproximación medir el volumen de agua con una probeta).
La disolución se valora conductimétricamente con una disolución de NaOH 0,10 N,
que se pone en la bureta. La temperatura debe permanecer constante en el transcurso de
la valoración, ya que la conductividad depende mucho de ésta.
El montaje es similar al de la valoración potenciométrica, pero usando el conductime-
tro (ver figura 2.3).
13
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
14
Valoración conducimétrica de una mezcla de ácidos
15
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
2.
.Cuestiones y resultados
1. Anotar los resultados experimentales de cada una de las conductimetrías realiza-
das en tablas similares a la tabla 2.1, en la que pongas el volumen de valorante
añadido, la conductividad leía tras cada adición, así como el factor de dilución y
la conductividad corregida que corresponda.
16
Capítulo 3
Capítulo 3
Determinación de la
humedad de un suelo
3.1. Objetivos
Valorar la cantidad de agua de un suelo y trabajar con una técnica de análisis cuantita-
tivo, la gravimetría.
3.2. Introducción
El contenido en agua de un producto se define convencionalmente por la pérdida de
masa que experimenta en condiciones determinadas. En este caso se aplica a una mues-
tra de suelo, introduciéndolo en estufa a 105 ± 1 ºC, hasta peso constante.
3.3. Material
x Vaso de precipitados de 50 mL secado previamente
x Balanza analítica
x Espátula
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Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
x Estufa a 105 ºC
x Desecador
x Pinzas
18
Capítulo 4
Capítulo 4
Introducción a los
métodos de análisis
instrumental
4.1. Introducción
Los métodos de análisis instrumental son métodos en los que se mide una propiedad de
la materia cuya magnitud está relacionada con el contenido de una sustancia en una
muestra, utilizando instrumentación específica.
Por tanto, es necesario encontrar la relación que existe entre la magnitud de la propie-
dad medida y la concentración (magnitud de la propiedad = f (concentración sustancia).
Esto se consigue frecuentemente realizando un calibrado, que se utiliza para convertir
la señal instrumental registrada en valores de concentración.
La realización de un calibrado comienza con la preparación de una serie de disolucio-
nes de concentraciones conocidas (xi) a partir de una disolución patrón. El siguiente
paso es medir la señal correspondiente (yi) en el instrumento de medida, para obtener
así una tabla de valores (xi, yi).
El instrumento tiene que ajustarse inicialmente con una disolución que denominamos
‘blanco’. Esta disolución contiene todos los reactivos a excepción del analito o com-
puesto de interés y nos servirá para indicarle al instrumento de medida que la señal
debe ser cero en estas condiciones, y crecer sólo con la presencia del compuesto de
interés.
19
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
Figura 4.1. Representación de unos datos experimentales en unos ejes x-y. En la gráfica, el dato
señalado es un valor experimental anómalo que no se ha tenido en cuenta en el ajuste de la recta.
Cuando se realice un calibrado hay que tener en cuenta que cuanto más elevada sea la
pendiente (b), más exactitud tendremos en la medida, ya que lecturas de concentracio-
nes cercanas van a ser más fácilmente diferenciables entre sí.
20
Introducción a los métodos de análisis instrumental
4.2. Ajuste de los puntos experimentales a una recta por mínimos cua-
drados
De forma resumida, se explica a continuación una forma de realizar el ajuste por míni-
mos cuadrados, así como la obtención de las desviaciones estándar de distintos paráme-
tros relacionados. Información complementaría sobre el uso de una hoja de cálculo
puede consultarse en el apéndice 3 del libro.
Por conveniencia, se definen തǡ തǡSxx, Syy y Sxy tal como sigue:
σ ୧ σ ୧
ത ൌ ത ൌ
siendo “n” el número de disoluciones del calibrado utilizadas en el ajuste.
୶୶ ൌ ሺ୧ െ തሻଶ ǡ୷୷ ൌ ሺ୧ െ തሻଶ ǡ ୶୷ ൌ ሺ୧ െ തሻ ሺ୧ െ തሻ
21
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
୶୷
ൌ
୶୶
2. La ordenada en el origen, a:
ൌ ത െ ത
୷୷ െ ଶ ୶୶
୰ ൌ ඨ
െʹ
5. La desviación estándar de la pendiente, ݏ :
୰ଶ
ୠ ൌ ඨ
୶୶
22
Introducción a los métodos de análisis instrumental
୫ୣୢ୧ୢୟ
୫୳ୣୱ୲୰ୟ ൌ ୫ୣୢ୧ୢୟ ൈ ൬ ൰
୫୳ୣୱ୲୰ୟ
23
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
Figura 4.2. Ejemplo de un ajuste por mínimos cuadrados de los datos experimentales en una espec-
trofotometría realizada para la determinación de hierro en una muestra.
24
Capítulo 5
Capítulo 5
Determinación
espectrofotométrica de
nitritos en agua
5.1. Objetivos
Aplicar la colorimetría para la determinación de nitritos en una muestra de agua reali-
zando un calibrado para su determinación.
5.2. Introducción
La colorimetría es una espectrofotometría en la que se mide la absorbancia en la zona
del visible, por lo que es necesario que los compuestos a determinar tengan color. Por
ello, puesto que los nitritos son incoloros, para poder determinarlos hay que transfor-
marlos en un compuesto coloreado.
El método utilizado para la obtención de color es una modificación del propuesto por
Griess. Básicamente consiste en hacer reaccionar el NO2- (incoloro) presente en una
muestra de agua con la sulfanilamida en medio ácido, produciéndose un diazocompues-
to que, posteriormente, mediante una reacción de copulación con la N(1-naftil)-
etilendiamina dará un compuesto coloreado.
Los niveles de nitrito que se encuentran en el agua varían mucho según la procedencia
de ésta.
25
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
5.3. Material
x 6 Matraces aforados de 50 mL
x 1 Matraces aforados de 50 mL
x Pipetas
x Vasos de precipitados
x Espectrofotómetro
x Balanza analítica
5.4. Reactivos
x Disolución patrón de nitrito (NO2-) 100 mg/L. Se parte de NaNO2 (Mr 69,00)
patrón, obtenido al secar la sal de calidad analítica durante 1 h a 110 ºC en la
estufa. Conservar en nevera.
x Disolución de trabajo. Preparar 100 mL de disolución de 5 mg/L de nitrito.
partir de la disolución patrón de 100 mg/L.. No conservar esta disolución para
los siguientes días.
x Disolución de Sulfanilamida. Pesar 5 g de sulfanilamida, añadirle 50 mL de
HCl y aforan a 500 mL con agua destilada. Se debe desechar cuando adquiere
color, normalmente tras varios meses.
x Disolución de N(1-naftil)-etilendiamina. Pesar 0,5 g del reactivo y llevarlo a
500 mL con agua destilada. Este reactivo se debe conservar en nevera y reem-
plazar cuando cambia de color.
26
Determinación espectrofotométrica de nitritos
27
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
୫ୣୢ୧ୢୟ
୫୳ୣୱ୲୰ୟ ൌ ୫ୣୢ୧ୢୟ ൈ ൬ ൰
୫୳ୣୱ୲୰ୟ
Y el resultado se dará de la siguiente forma:
Cmuestra ± smuestra
28
Determinación espectrofotométrica de nitritos
29
Capítulo 6
Capítulo 6
Parámetros de calidad
de un método
instrumental
6.1. Objetivos
Evaluar la calidad de un método de análisis mediante una serie de parámetros estadísti-
cos.
Aprender a utilizar la turbidimetría, un tipo especial de espectrofotometría basada en la
medición de la cantidad de luz dispersada por las partículas que permanecen en suspen-
sión.
Determinar el contenido de sulfatos (SO42-) en una muestra de agua mediante una tur-
bidimetría.
6.2. Introducción
6.2.1. Turbidimetría
La turbidimetría es un tipo de espectrofotometría basada en la cantidad de luz dispersa-
da por las partículas que permanecen en suspensión. Cuanto mayor sea la cantidad de
partículas que existan en disolución, menor cantidad de luz puede llegar al detector y,
aparentemente, es como si se la luz se absorbiera. Se puede utilizar cualquier espectro-
fotómetro UV-Visible y formalmente es como si se midiesen absorbancias.
31
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
6.2.2.1Precisión
En general entendemos que la precisión es una medida de la concordancia entre dos o
más valores experimentales obtenidos de forma idéntica y está íntimamente relacionada
con la presencia de errores indeterminados (o aleatorios).
Para caracterizar la reproducibilidad de un método de análisis, lo que se hace es evaluar
la precisión que se obtiene al aplicar el método a disoluciones patrón de distintas con-
centraciones que estén dentro del intervalo útil del método.
Describe la reproducibilidad de los datos experimentales y se puede expresar en térmi-
nos de desviación estándar (s), de varianza (s2), o desviación estándar relativa (%DSR).
32
Parámetros de calidad de un método
La desviación estándar es la raíz cuadrada del promedio de los cuadrados de las des-
viaciones de los datos respecto a su media:
s
¦ x x i
2
n 1
donde xi son cada uno de los valores obtenidos para la medida de una concentración, x
es el valor medio y n es número de réplicas o veces que se ha repetido una medida.
La desviación estándar de las concentraciones calculadas a partir de un calibrado tam-
bién se puede obtener con la ecuación ya presentada en el capítulo 4 (Introducción a
los métodos de análisis instrumentales):
s r 1 1 y c y 2
sc ·
b m n b 2S xx
s 2 ¦ x x i
2
n 1
6.2.2.2 Exactitud
La exactitud de un método analítico se puede determinar con muestras patrón o por
comparación con un método patrón. En esta práctica se va a utilizar la primera opción.
En general, la exactitud se expresa en términos de error absoluto y error relativo:
El error absoluto (ୟ) se define así:
(a x P
33
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
m m
t (a x patrónP
sx sx
34
Parámetros de calidad de un método
Tabla 6.1. Valores de t-Student para varios grados de libertad y niveles de probabilidad
6.2.2.3 Sensibilidad
Hace referencia a la capacidad de un método analítico para diferenciar concentraciones
próximas entre sí.
A menudo, en el lenguaje cotidiano, el término ‘método sensible’ se utiliza como sinó-
nimo de límite de detección bajo. Sin embargo, los conceptos sensibilidad y límite de
detección son distintos. La sensibilidad de una técnica se puede definir a partir de la
pendiente de la recta de calibrado y, siempre que la representación sea lineal, puede ser
medida en cualquier punto de la recta. Por el contrario, el límite de detección de un
35
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
método se calcula con los datos de la recta en la zona de calibrado próximo al origen
(cero) y para ello se utiliza tanto la pendiente como la ordenada en el origen.
La sensibilidad de un método a veces se mide como la pendiente de calibrado, pero
esta indicación es poco robusta y existen otras propuestas para acercarse a este paráme-
tro. En este sentido, se habla de sensibilidad normalizada (ϕ) como:
b
I
sb
donde ݕ es la señal del blanco y ݏ es la desviación estándar del blanco.
La concentración limite (LD) es la que corresponde a esta señal después de sustituirla
en la ecuación de la recta de calibrado. Es fácil demostrar que se puede calcular con la
siguiente ecuación.
3 s bl 3 sr
LD
b b
donde ‘b’ es la pendiente de la recta, ୠ୪ es la desviación estándar del blanco y es la
desviación estándar de la recta.
Así pues, para determinar el LD necesitamos, por un lado, conocer la pendiente de la
recta de calibrado (b), y por otro lado, la desviación estándar del blanco (ୠ୪ ) o la des-
viación estándar de recta (୰ ).(ver capítulo 4).
En ocasiones es posible medir varias veces el blanco y calcular la desviación que co-
rresponde a esa señal (ୠ୪ ). Sin embargo, otras veces no es posible seguir esa estrategia,
por ejemplo, si usamos el blanco para ajustar el cero del instrumento de medida, y en
esos casos hay que usar la desviación que corresponde al calibrado (୰ ).
36
Parámetros de calidad de un método
LC y bl 10 s r
a. Desviación de la linealidad
Existen distintos criterios para establecer cuál es la concentración a la que el calibrado
ya se desvía de la linealidad (límite de la linealidad, LL), desde la representación grá-
fica y la decisión personal del punto que ya no queda incluido en la línea recta, a crite-
rios más formales como el que se describe a continuación.
Supóngase que existe un patrón y se quiere probar si su concentración está incluida
o no en la línea recta. Para ello, en primer lugar se calcula la ecuación de la recta
sin incluir el punto cuya linealidad se está estudiando. A continuación, se compara la
señal obtenida al sustituir la concentración del patrón en la ecuación (ycalculada con la
señal experimental (yexperimental). Si ambas señales difieren en más de un 3% del valor
expe-rimental se considera que esa concentración ya no está dentro del intervalo
lineal del método.
37
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
brado sigue siendo lineal para la concentración 0,90 mg/L se ha de usar la ecuación
anterior:
0,81 0,97
100 16 ! 0,03
0,97
Puesto que se obtiene un valor superior al 3%, podemos decir que el calibrado ya no es
lineal para una concentración 0,90 mg/L, por lo que el LL de dicho método es 0,70
mg/L.
Figura 6.1. Estudio de la linealidad de la señal obtenida para la disolución 0,9 mg/L.
Para determinar la concentración a la cual se pierde la linealidad, se van ensayando
distintas concentraciones, tal como se ha explicado, hasta encontrar la concentración
más elevada que todavía se encuentra incluida en la recta de calibrado.
b. Intervalo útil
El intervalo útil, o intervalo de linealidad, de un método analítico es aquel en el que se
cumple la ecuación del calibrado con garantías. Se establece como el intervalo de con-
centraciones comprendido entre la concentración más pequeña a la que pueden reali-
zarse medidas cuantitativas (límite de cuantificación, LC) y la concentración a la que el
calibrado se desvía de la linealidad (límite de linealidad, LL):
Intervalo útil = [LC - LL]
38
Parámetros de calidad de un método
Figura 6.2. Representación del intervalo útil de un calibrado: entre el límite de cuantificación (LC) y
el último punto en le que la respuesta es lineal (LL). El límite de detección (LD) es menor que el LC.
39
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
6.3. Material
x 12 matraces de 50 mL
x 1 matraz de 100 mL
x 2 pipeta aforada de 10 mL
x Pipeta aforada de 1 mL
x 2 pipeta graduada de 10 mL
x Vasos de precipitado de 250mL
x 12 matraces de 50 mL
x 1 matraz de 100 mL
x 2 pipeta aforada de 10 mL
x Pipeta aforada de 1 mL
x 2 pipeta graduada de 10 mL
x Vasos de precipitado de 250mL
6.4. Reactivos
x Disolución patrón de sulfato (SO4 2-) de 1000 mg/L. Obtenido a partir de sulfa-
tos sódico.
x Disolución de trabajo de 100 mg/L. de sulfato (SO4 2-.) preparado a partir de la
disolución de 1000 mg/L, en un aforado de 100 mL.
x Disolución de sulfato potásico certificada de 50 mg/L de SO42-.
x Reactivo precipitante, de Bario. Se disuelven 20 g de acetato de bario en una
mezcla de 75 cm3 de ácido acético 10 M y 25 cm3 de solución de goma arábiga
al 5 %, filtrando la solución resultante. El pH amortiguado de esta solución es
de 3,70. Esta disolución, además de aportar el bario, para la formación de los
cristales, hace que estos se mantengan en suspensión durante un periodo de
tiempo suficiente.
40
Parámetros de calidad de un método
Todas las disoluciones, excepto el blanco, han de estar turbias tras la adición del bario.
41
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
Con estos datos se podrá evaluar la exactitud del método para una concentración de 10
mg /L de SO42-,a partir del cálculo del error absoluto y el error relativo cometido.
Además, se podrá establecer si este método turbidimétrico tiene o no error sistemático..
42
Parámetros de calidad de un método
CALIBRADO
Volumen de la disolución de trabajo [SO4-2]
Absorbancia
(mL) (mg/L)
4
8
14
14
14
16
20
[SO4-2]
MUESTRA Absorbancia
(mg/L)
Dilución 1
Dilución 2
Dilución 3
DISOLUCIÓN [SO4-2]
Absorbancia
CERTIFICADA (mg/L)
Dilución disolución certificada 1 10
Dilución disolución certificada 2 10
Dilución disolución certificada 1 10
[SO4-2]
LIMITE LINEALIDAD (LL) Absorbancia
(mg/L)
Disolución LL 1 40
Disolución LL 2 80
43
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
44
Capítulo 7
Capítulo 7
Determinación
simultinea de los
componentes de una
mezcla
7.1. Objetivos
Determinar la concentración de dos componentes coloreados, permanganato (MnO4-) y
dicromato (Cr2O72-), que se encuentran presentes en la misma disolución problema.
7.2. Introducción
Las disoluciones con compuestos coloreados tienen la propiedad de absorber luz a
determinadas longitudes de onda, características de estas sustancias.
En el capítulo 4.3 (Métodos de absorción de radiación UV-visible) se vio que un com-
puesto coloreado cumple la Ley de Beer: A = ε · l · c (A: absorbancia; ε: absortividad
molar, l: longitud de paso del haz de luz; c: concentración) a una determinada longitud
de onda.
Frecuentemente es preciso analizar mezclas de dos o más sustancias. A veces es posi-
ble analizar la mezcla haciendo determinaciones espectrofotométricas simultáneas, en
lugar de tener que separar los componentes de la mezcla para determinar espectrofoto-
métrica cada componente por separado.
45
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
Para poder determinar simultáneamente los componentes de una mezcla con el espec-
trofotómetro, se debe cumplir para cada componente que en su zona de máxima absor-
ción la absorción de los otros componentes de la mezcla sea lo más baja posible y pre-
feriblemente nula. El caso más favorable es que existan zonas de absorción máxima
para cada componente, en las que el otro componente no absorba.
Además, se considera que las absorbancias de cada uno de los componentes son aditi-
vas a cada longitud de onda. Uno de los problemas en la determinación de dos, tres o
más sustancias simultáneamente es que los pequeños errores experimentales se suman
rápidamente: un error en la lectura de absorbancia se superpone a las otras lecturas, con
lo que disminuye la precisión del resultado final.
Por lo anteriormente dicho, si queremos determinar las concentraciones de una mezcla
formada por permanganato (a la que pondremos el índice Mn) y dicromato (a la que
pondremos el índice Cr), debemos medir la absorbancia de la mezcla a dos longitudes
de onda, O1 y O2, que corresponden a las longitudes que absorben con facilidad uno de
los componentes y no el otro, y viceversa. En la figura 7.1 se muestra el espectro del
permanganato y del dicromato en la zona del visible (entre 400 nm y 700 nm). Se pue-
de observar, como el dicromato tiene un pequeño máximo de absorbancia en una zona
del espectro en la que el permanganato no absorbe, y viceversa, en la región en la que
el permanganato tiene un máximo de absorbancia, el dicromato apenas absorbe luz.
Figura 7.1. Espectros del dicromato (línea discontinua) y permanganato (línea continua).
46
Determinación simultánea de los componentes de una mezcla
Puesto que, como hemos dicho, las absorbancias son aditivas, a cada longitud de onda
(ߣଵ y ߣଶ) de medida se cumplirá que:
୳ୣୱ୲୰ୟ ሺɉଵ ሻ ൌ ୬ ሺɉଵ ሻ େ୰ ሺɉଵ ሻ
7.3. Material
x 2 aforados de 250 mL
x 10 aforados de 50 mL
x 2 vasos de precipitados 250 mL
x 1 pipeta graduada 10 mL
x 1 pipeta graduada 5 mL
x 1 cuentagotas
x 1 agitador
x 1 probeta 100 mL
7.4. Reactivos
x Disolución patrón de permanganato potásico (KMnO4) 0,50 M en ácido sulfú-
rico 0,01 M. Pesar la cantidad de permanganato necesaria según el volumen de
disolución que necesitamos preparar, e introducirlo en un vaso de precipitados,
47
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
añadir el volumen total de agua desionizada, cubrir el vaso con un vidrio de re-
loj y calentar, a ebullición suave 30 minutos. Se deja reposar 24 la disolución y
filtrar a través de un embudo de vidrio sinterizado. Colocar en un recipiente
topacio. Estandarizar la disolución con oxalato sódico.
x Disolución de trabajo de permanganato potásico 5,0·10-3 M. Preparada a partir
de la disolución de 0,50 M de KMnO4. Utilizar ácido sulfúrico 0,01 M para su
preparación.
x Disolución patrón de dicromato potásico (K2Cr2O7) 1,00 M en ácido sulfúrico
0,01 M.
x Disolución de trabajo de dicromato potásico 10,0·10-3 M. Preparada a partir de
la disolución de 0,50 M de K2Cr2O7. Utilizar ácido sulfúrico 0,01 M para su
preparación..
x Disolución de ácido sulfúrico (0,01 M). Se prepara a partir del ácido sulfúrico
concentrado. RECORDAD: el ácido sulfúrico concentrado se añade siempre
sobre el agua, nunca al revés.
48
Determinación simultánea de los componentes de una mezcla
ajustando el blanco con la disolución del ácido. Seleccionar para cada componente la
longitud de onda donde la absorción es máxima para un compuesto y mínima para el
otro, es decir O1 y O2
Absorbancia
O1=
Absorbancia
O2=
Absorbancia
O 1=
Absorbancia
O 2=
49
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
Absorbancia
O 1=
Absorbancia
O 2=
50
Capítulo 8
Capítulo 8
Determinación de
fósforo mediante
adición de patrón
8.1. Objetivos
Determinar la concentración de del fósforo (P) en una muestra de agua procedente de
un vertido industrial mediante colorimétrica.
Poner en práctica la estrategia de calibrado por adición de patrón como forma de sos-
layar el efecto matriz que provocan sustancias que están en la muestra e interfieren en
la determinación del compuesto que nos interesa.
8.2. Introducción
El fósforo se encuentra en las aguas naturales en varias formas: ortofosfatos, fosfatos
condensados y fosfatos ligados orgánicamente. En el caso de aguas naturales, la pre-
sencia de fosfatos disueltos puede estimular el crecimiento no recomendable de micro y
macroorganismos acuáticos fotosintéticos. El origen de los fosfatos presentes en aguas
naturales es diverso: restos de tratamientos en el suministro de aguas, residuos de ferti-
lizantes, restos de limpiezas con detergentes fosforados, etc.
51
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
52
Determinación patrón de fósforo mediante adición de patrón
CS
Figura 8.1. Ejemplo de calibrado de adición patrón
Pese a las ventajas que tiene el método de adición de patrón al corregir el efecto matriz,
su aplicación experimental es larga, al tener que realizar distintas adiciones de patrón
sobre cada una de las muestras que se han de procesar, de modo que se aplica exclusi-
vamente cuando es imprescindible.
Por otra parte, para calcular la desviación estándar de la concentración de analito que
se obtiene a partir de la recta de calibrado (sc), se puede utilizar la siguiente ecuación,
que es una modificación de la que aparece en el capítulo 4 (Introducción a los métodos
instrumentales) (consultar el significado de los símbolos en dicho capítulo):
2
sr 1 y
sc
b n b 2 S xx
8.3. Material
x 5 matraces aforados de 50 mL
x Papel de filtro exento de fósforo (si fuese necesario)
x Matraz aforado de 100 mL
x Pipetas graduadas de 1, 5 y 10 mL
53
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
8.4. Reactivos
x Disolución de vanadomolibdato. Disolver 20 gramos de molibdato amónico
tetrahidrato en 200 mL de agua caliente y dejar enfriar. A continuación, se di-
suelve 1 gramo de metavanadato amónico en 200 mL de agua caliente, se deja
enfriar y se le añaden 225 mL de ácido perclórico al 70%. Se adiciona gra-
dualmente y con agitación la disolución de molibdato amónico sobre la disolu-
ción de metavanadato amónico y se enrasa a 1 litro.
x Disolución madre de P de 100 mg/L. Disolver 0,4393 g de KH2PO4 (secado a
105ºC durante 1 hora) en 500 mL de agua destilada y enrasar a 1 litro. Añadir
5 gotas de tolueno para disminuir la actividad microbiana.
x Disolución de trabajo de 5 mg/L de fósforo en un aforado de 100 mL.
IMPORTANTE
Se ha de trabajar paralelamente con todos los aforados de forma que el desarrollo del
color ocurra en las mismas condiciones
En primer lugar hay que lavar todo el material que se vaya a utilizar con
detergente libre de fósforo.
Para cada muestra que se tenJDTXH determinar se procederá de la siguiente manera:
1. Colocar en cada uno de los cinco aforados 10 mL de la muestra. Si la muestra
presenta turbidez, filtrar la muestra previamente a través de papel de filtro li-
bre de fósforo.
2. A continuación, añadir a cada uno de los aforados 0, 2, 4, 6 y 8 mL de la diso-
lución de trabajo de fósforo (5 mg/L de P).
3. Para provocar el desarrollo del color, añadir 10 mL de la disolución de va-
nadomolibdato a cada aforado y agitar.
4. Enrasar con agua destilada y homogeneizar la disolución.
5. Preparar también una disolución blanco, para ajustar la absorbancia a ‘cero’ en
el colorímetro. Añadir en un aforado de 50 mL únicamente 10 mL de la diso-
lución de vanadomolibdato, enrasar y agitar.
6. Medir la absorbancia a 400 nm 15 minutos después de la adición de la disolu-
ción de vanadomolibdato.
54
Determinación patrón de fósforo mediante adición de patrón
55
Capítulo 9
Capítulo 9
Determinación de sodio
en agua por misión
tómica
9.1. Objetivos
Aplicar una técnica de emisión atómica, la fotometría de llama, para la determinación
de la concentración de sodio (Na) de una muestra de agua problema.
9.2. Introducción
La concentración de sodio se determinará mediante fotometría de emisión atómica o
fotometría de llama. Esta técnica se basa en la medida de la intensidad de la radiación
emitida por los átomos excitados de una muestra a la longitud de onda característica de
ese elemento. El instrumento utilizado para esta técnica es el fotómetro de llama (figura
9.1).
Los átomos son excitados por medio de una llama y la intensidad de la radiación emiti-
da es proporcional a la concentración de ese elemento en disoluciones diluidas. Este
método permite medir con exactitud concentraciones de Na (y de otros elementos como
K ó Ca) inferiores a 1 mg/L
La muestra debe estar perfectamente disuelta, ya que la más mínima turbidez puede
conducir a errores en las lecturas, además de provocar la obturación del sistema de
57
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
9.3. Material
x 1 matraz aforado de 100 mL
x 7 matraces aforados de 50 mL
x Pipetas de 1, 5 y 10 mL
x Vaso de precipitados de 100 mL
9.4. Reactivos
x Disolución patrón 4,0·10-2 M de Na, preparado a partir de reactivo NaCl.
58
Determinación de sodio
por emisión atómica
59
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
60
Capítulo 10
Capítulo 10
Determinación de
potasio en suelo por
misión tómica
10.1. Objetivos
Aplicar un método de extracción sólido-líquido para la extracción del potasio del suelo.
Determinar la concentración del potasio (K) asimilable de una muestra de suelo me-
diante la técnica de fotometría de llama.
10.2. Introducción
El potasio se encuentra en el suelo en forma orgánica e inorgánica. El K inorgánico
supone en torno al 1.5% en peso de suelo y se encuentra principalmente en los minera-
les silicatados. El K orgánico se encuentra en menor cantidad y procede de la descom-
posición de restos vegetales y animales.
El potasio es un elemento fundamental en la química del suelo. Las plantas lo absorben
en cantidades importantes y su papel es muy variado, ya que interviene en el metabo-
lismo glucídico y proteico, forma parte de un gran número de enzimas y contribuye a
mantener la turgencia celular.. Sin embargo, la mayor parte del potasio del suelo no
está disponible para las plantas. Por todo ello, la fracción de potasio que tiene interés
agronómico no es el potasio total sino el potasio asimilable por las plantas.
61
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
10.3. Material
x Tubo de centrífuga de 50 mL
x Matraz erlenmeyer de 250 mL
x Matraz aforado de 100 mL
x 7 matraces aforados de 50 mL
x Probeta de 50 mL
x Pipetas de 1, 5 y 10 mL
x Vaso de precipitado de 250 mL
x Embudo y papel de filtro.
x Imán agitador y agitador magnético.
10.4. Reactivos
x Disolución extractante de acetato amónico 1,0 M ajustada a pH 7. Diluir 57
mL de ácido acético en 600 mL de agua destilada, añadir 68 mL de hidróxido
amónico concentrado, ajustar el pH a 7.0 añadiendo hidróxido amónico o áci-
do acético y completar con agua hasta 1 litro.
x Disolución madre de 250 mg/L de K, en acetato amónico 1,0 M a pH 7. Disol-
ver 0,4766 g de cloruro potásico (KCl) desecado en 1 litro de acetato amónico
1 M a pH 7.
62
Disolución de potasio en suelo por emisión atómica
63
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
0
10
20
30
40
50
Muestra
64
Capítulo 11
Capítulo 11
Uso de electrodos
selectivos mediante
calibrado directo y
adición de patrón
11.1. Objetivos
Determinar la concentración de nitrato y amonio en una muestra de agua.
Familiarizarse con el manejo de un electrodo de ión selectivo.
Aplicar dos procedimientos para obtener la concentración de estos iones en muestras:
calibrado directo y adición estándar.
11.2. Introducción
Los electrodos selectivos de iones responden selectivamente a una especie presente en
la disolución. Estos electrodos tienen una delgada membrana que separa la muestra del
interior del electrodo. La parte interna del electrodo contiene una solución del ión de
interés con actividad constante y la parte externa está en contacto con una muestra de
composición variable. La diferencia de potencial a través de la membrana depende de
la diferencia de concentración de la especie entre la disolución interna y la muestra
problema.
65
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
66
Uso de electrodos selectivos
una sola disolución de muestra volúmenes conocidos de disolución patrón. Los volú-
menes agregados deben ser pequeños con el fin de no modificar la matriz de la muestra
en todo el proceso y, además, suponer que el volumen total apenas se modifica.
El electrodo se sumerge tras cada adición de patrón en la disolución y se mide el poten-
cial.
El método de adición estándar funciona mejor cuando la cantidad del analito agregado
está aproximadamente entre el 50 y el 200% de la cantidad original de amonio que
suponemos que existe en la disolución de la muestra.
El cálculo de la concentración de la muestra por el método de adición de patrón en el
caso de los electrodos selectivos se complica dado que la relación entre la señal (poten-
cial, E, mV) y la concentración es logarítmica.
Para simplificarlo, se establece a continuación la ecuación que permite determinar la
concentración en la dilución de la muestra utilizando dos lecturas: potencial leído con
la muestra y el correspondiente a la lectura tras la adición de un patrón.
Vamos a considerar que la adición de patrón, al ser dicho añadido muy pequeño, ape-
nas modifica el volumen de la muestra (100 mL)
Hay que realizar el siguiente desarrollo, en el que los términos se definen como sigue:
x CM: concentración de NH4+ en la disolución muestra.
x CP: concentración inicial de NH4+ en la disolución patrón añadida.
x VM: volumen disolución muestra (mL).
x VP: volumen añadido de la disolución patrón (mL).
x EM: potencial disolución muestra (mV).
x EMP: potencial disolución muestra a la que se ha añadido disolución patrón
(mV).
x k: constante del electrodo; se determina previamente.
Como hemos visto, existe una relación lineal entre el potencial de la disolución y la
concentración. Por tanto, para la disolución muestra se cumplirá que su potencial (EM)
y su concentración (CM) seguirán la siguiente ecuación:
EM k · logC M [11.1]
Tras cada adición de un volumen conocido de patrón (VP) sobre la disolución problema
se cumple que:
§ C V C V ·
E MP k · log¨¨ M M P P ¸¸
© VM VP VM VP ¹
67
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
§ § C V · ·
E MP E M k · ¨ log ¨¨ C M P P ¸¸ log C M ¸
¨ VM VP ¸
© © ¹ ¹
C P VP
CM
E MP E M VM VP
log
k CM
Por otro lado, si consideramos que VM + VP ≈ VM:
C P VP
CM
E MP E M VM
log
k CM
E MP E M § C V ·
log¨¨1 P P ¸¸
k © C M VM ¹
Finalmente, si eliminamos los logaritmos:
E MP E M
C P VP
10 k
1
C M VM
E MP E M
C P VP
10 k
1
C M VM
1 C M VM
E MP E M
C P VP
10 k
1
68
Como vemos, podemos llegar a una ecuación que relaciona la concentración de analito
en la muestra (CM) con el potencial inicial (EM) y con los potenciales medidos tras cada
adición de patrón sobre la muestra problema (EMP):
C P VP
VM
CM E MP E M
[11.3]
10 k
1
Esta es la ecuación que se utilizará para determinar la concentración de analito en la
muestra a partir de cada uno de los datos de potencial obtenidos tras cada adición de
patrón.
El valor de concentración que se asigna a la muestra es la media de los valores de con-
centración obtenidos.
11.3. Material
x pH-metro con electrodo selectivo y electrodo de referencia.
x 8 vasos de precipitados de100 mL (forma alta)
x 1 vaso de precipitados de 250 mL
x Pipetas graduadas de 5 mL
x 1 pipeta graduada de 1 mL
x 1 pipeta aforadada de 10 mL
x 1 pipeta aforada de 50 mL
x 8 aforados de 50 mL
x Propipeta
x Agitador magnético con imán
x Probeta de 100 mL
11.4. Reactivos
x Disolución ISA (Solución ajustadora de la fuerza iónica) 0,9 mol/L de
Al2(SO4)3·18 H2O. Pesar 300 gramos de Al2(SO4)3·18 H2O y disolver en unos
800 mL de agua caliente desionizada. Dejar enfriar y enrasar hasta 1000 mL
con agua desionizada a temperatura ambiente.
69
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
70
1,0·10-4
1,0·10-3
5,0·10-3
1,0·10-2
1,0·10-1
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
71
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
72
Capítulo 1
Apéndice 1
Seguridad en el
laboratorio
1.1. Objetivos
Conocer las normas de seguridad que se han de seguir en el laboratorio para que en el
trabajo no se corran riesgos innecesarios.
73
Análisis nstrumental. Manual de laboratorio
x Usar las gafas de seguridad cuando nosotros o los compañeros estén realizan-
do operaciones en que puedan producirse salpicaduras. No usar lentillas, ya
que en caso de accidente no pueden quitarse con rapidez.
x Todos los reactivos y aparatos deben manipularse atendiendo a las normas es-
pecíficas de seguridad, y manteniendo los alrededores perfectamente limpios y
secos. Si algún reactivo se derrama debe limpiarse inmediatamente de forma
adecuada.
x Cuando se necesario evitar el contacto de los productos químicos con la piel.
Usar guantes en función del producto y mantener el lugar de trabajo limpio.
x Nunca debe llevarse ningún material a la boca. Los líquidos se pipetean con la
propipeta.
x No hay que aspirar directamente los vapores de un líquido de la botella. El
movimiento de la mano sobre la boca de la botella, nos ayudará a acercar los
vapores a la nariz para percibir su olor.
x Sólo deben verterse a la pila disoluciones inocuas. Los líquidos peligrosos se
recogen en bidones adecuados para su posterior tratamiento, los vidrios en el
contenedor destinado a tal efecto y los reactivos sólidos no peligrosos en la
papelera.
x No mezclar nada cerca del rostro, ni en sitios donde las proyecciones de pro-
ductos que puedan producirse causen perjuicio.
x No usar material desportillado o con grietas.
x Hacer los montajes de cada práctica con el material adecuado. Evitar la utili-
zación de bases inestables y mantener la vigilancia necesaria.
x Las mesas y los aparatos han de estar siempre limpios y ordenados. Después
de cada operación hay que limpiar todos los utensilios El tiempo de limpieza
también debe considerarse necesario para el desarrollo de la experiencia.
x Cualquier operación en la que se desprendan vapores tóxicos o inflamables,
debe efectuarse en vitrina.
x Los disolventes inflamables y volátiles (éter, acetona, etanol, metanol, hexano,
sulfuro de carbono, benceno, etc) nunca deben calentar se a la llama directa o
cerca de ella. Para su calentamiento hay que emplear baños.
x No calentar recipientes cerrados de ningún tipo.
x Cualquier variación que por cuenta propia se haga en un experimento hay que
contrastarla por razones de seguridad y aprovechamiento.
74
Seguridad en el laboratorio
1.3.1. Salpicaduras
En caso de salpicadura en la piel, retirar la ropa contaminada y lavar la zona afectada
con agua abundante durante 15 minutos. Existen algunas a excepción, como por ejem-
plo, en el caso de salpicadura con ácido sulfúrico, en el que hay que evitar el uso de
agua.
Neutralizar las quemaduras de ácidos con bicarbonato sódico y las de bases con ácido
cítrico.
En el caso de salpicaduras de productos químicos en los ojos la rapidez de actuación es
esencial. Lavarlos con agua abundante durante 15 minutos sin frotar utilizando una
ducha lavaojos, abriendo bien los párpados y moviendo los ojos en todas direcciones.
No aplicar pomadas y colirios y acudir al oculista.
1.3.2. Quemaduras
Mantener la zona quemada bajo agua fría durante 10-15 minutos.
75
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
1.3.3. Cortes
Deben ser lavados con agua abundante durante al menos 10 minutos para asegurarse
que se han eliminado todos los productos químicos o pequeñas piezas de vidrio.
Si no se detiene la hemorragia, aplicar una compresa esterilizada sobre la herida, pre-
sionar fuertemente y recurrir a la atención médica.
1.3.5. Incendio
En caso de incendio, la mejor forma de proceder es mantener la serenidad.
Los incendios pequeños, se ahogan con trapos. Si el líquido se derrama por la mesa, no
hay que echar agua sino arena, para tenerlo localizado.
Cuando un incendio es de mayor envergadura, se apaga con una manta o mejor con un
extintor.
Si se inflama un recipiente, que se calentaba a la llama directa, se extingue apartando el
mechero y cubriendo la boca del recipiente con una placa de vidrio u otro material, o
con un trapo húmedo.
76
Seguridad en el laboratorio
En cuanto a la información sobre los riesgos propios del compuesto, hay que señalar el
uso de pictogramas y de frases tipo que nos advierten de riesgos, o nos dan consejos
sobre la forma de manipulación o de almacenaje.
El Reglamento (CE) 1272/2008 CLP (Clasificación, Etiquetado y Envasado) representa
la adaptación en la UE del SGA (Sistema Globalmente Armonizado, GHS en inglés),
que es una regulación aprobada a nivel mundial.
Este reglamento propone distintos cambios con respecto de las regulaciones anteriores.
Así, las indicaciones de peligro (equivalentes a las anteriores frases R), se remplazan
por las frases H (de Hazard, peligro en inglés), se agrupan según peligros físicos (tabla
A1.1), peligros para la salud humana (tabla A1.2) y peligros para el medio ambiente
(tabla A1.3).
Tabla A1.1. Frases H para los peligros físicos
77
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
H411 Tóxico para los organismos acuáticos, con efectos nocivos duraderos.
H412 Nocivo para los organismos acuáticos, con efectos nocivos duraderos.
H413 Puede ser nocivo para los organismos acuáticos, con efec- tos nocivos du-
raderos.
Las frases de prudencia P, que sustituyen a las anteriores frases S, describen las medi-
das recomendadas para minimizar o evitar los efectos adversos causados por la exposi-
ción a una sustancia o mezcla peligrosa durante su uso o eliminación (Tabla A1.4).
Los consejos de prudencia que aparecen en la etiqueta se seleccionan de entre los esta-
blecidos, debiendo figurar para cada clase de peligro, en principio, hasta un máximo de
seis. En el caso de productos que se suministran al público en general, deberá constar
un consejo de prudencia relativo a la eliminación del mismo, así como a la eliminación
del envase. Cuando esté claro que la eliminación de la sustancia, la mezcla o el envase
no presenta un peligro para la salud humana y para el medio ambiente, no será necesa-
rio el consejo.
78
Seguridad en el laboratorio
79
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
Tabla A1.5 Tabla con los símbolos de peligrosidad antiguos, los vigentes y su significado.
80
Seguridad en el laboratorio
81
Capítulo 2
Apéndice 2
Gestión de residuos
químicos
2.1. Objetivos
Conocer el procedimiento a seguir para el tratamiento de los residuos generados en un
laboratorio de química.
83
Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
x Ácidos y álcalis: si son muy diluidos, pueden verterse por el desagüe con el grifo
abierto, de manera que queden muy diluidos con agua.
x Disoluciones de iones: si se trata de productos inocuos o de pequeñas cantidades
de disoluciones diluidas de productos no especialmente peligrosos, pueden ver-
terse por los desagües, diluyéndolos con agua. En todos los demás casos (com-
puestos peligrosos como las sales de cromo, plomo o mercurio), es necesario
guardar los residuos en recipientes adecuados.
x Disolventes orgánicos: siempre deben guardarse en contenedores adecuados pa-
ra ellos. Como mínimo deben diferenciarse los clorados y los no clorados.
x Residuos sólidos: si son inocuos, se pueden arrojar a las papeleras. Si son peli-
grosos deben gestionarse almacenándolos, considerando que deben estar secos
para evitar que la propia humedad sea la que provoque reacciones no deseadas.
Al menos deben diferenciarse dos categorías: sólidos orgánicos y sólidos inor-
gánicos.
Como norma general, hay que tener presente que el mejor residuo es el que no se ge-
neral, hay que minimizar la producción de los mismos, e intentar usar los productos
menos contaminantes. También hay que considerar que la gestión de un residuo
genera un impacto ambiental y tiene un coste, en este sentido es importante procesar
solo aquello que interese atendiendo a estos criterios.
Cuando se plantea un trabajo en el laboratorio, hay que prever los residuos peligrosos
que se van a generar. A continuación hay que decidir cómo se van a ir separando en
distintos contenedores. Cada uno de ellos deberá llevar una etiqueta identificadora,
que marcará la actuación a seguir por el gestor de residuos tras su retirada del labora-
torio. En cada contenedor hay que indicar la fecha en que se inicia su uso, y avisar de
la necesidad de realizar su recogida bien cuando esté lleno, o antes de que pasen seis
meses desde el inicio.
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Gestión de residuos químicos
En primer lugar, se asigna un grupo a los distintos residuos que vamos a generar A
título de ejemplo se incluye la clasificación en distintos grupos que se utiliza en estos
momentos en la Universidad:
x Grupo 1: Reactivos laboratorio obsoletos
x Grupo 2: Disolventes no halogenados. (Etanol, Tolueno, Xileno, Dimetilfor-
mamida, Hexano, Acetona, Acetato de Etilo, Ciclohexanona, Eter, Metanol,
etc.)
x Grupo 3: Disolventes halogenados. (Cloroformo, Clorobenceno, Tricloroeti-
leno, etc.)
x Grupo 4: Ácidos inorgánicos y soluciones con metales. (Excepto Crómico y
Metales pesados)
x Grupo 5: Ácidos orgánicos, sales orgánicas y peróxidos. (Oxálico, Acético,
Acetatos, etc.)
x Grupo 6: Álcalis y sales inorgánicas. (Sosa, Potasa, Carbonatos, Sulfatos, Ni-
tratos, etc.)
x Grupo 7: Aceites, Grasas, hidrocarburos y combustibles
x Grupo 8: Organohalogenados y Organofosforados (Pesticidas, Plaguicidas,
Biocidas; etc.)
x Grupo 9: Fenoles y Compuestos fenólicos
x Grupo 10: Sales, Compuestos de Hg, Cr VI y metales pesados
x Grupo 11: Sustancias cianuradas
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Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
Una vez que se tiene la etiqueta y el envase donde se va a almacenar el residuo peligro-
so, se pone la fecha en la que se inicia el uso, y se avisa de la necesidad de realizar su
recogida bien cuando esté lleno o antes de que pasen seis meses desde el inicio.
La información actualizada y pormenorizada la encontramos en las distintas web, en
el caso que nos ocupa en el área de medio ambiente de la UPV.
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Capítulo 3
Apéndice 3
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Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
En este apéndice se explica cómo usar la hoja de cálculo de la suite de oficina LibreOf-
fice para la realización de un ajuste por mínimos cuadrados (si se trabaja con Excel o
Numbers el ajuste se realiza de forma muy similar).
Tabla A3.1 Datos de concentraciones y absorbancia, a 525 nm ,de 5 disoluciones patrón de perman-
ganato y 3 réplicas de una muestra.
Figura A3.1. Pantalla inicial del programa LibreOffice, en la que se elige el tipo de trabajo que se
desea realizar.
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Ajustes por mínimos cuadrados mediante una hoja de cálculo
Al entrar en el programa nos sale una hoja de cálculo en blanco como la de la figura
A3.2. Cada celda está situada en una columna y una fila. La barra de menús contiene
los típicos desplegables e iconos que aparecen en cualquier aplicación del entorno
Windows® y que nos permiten copiar, pegar, colorear el texto, etc.
Figura A3.2. Aspecto de la hoja de cálculo tras introducir los datos x-y de la tabla de datos expe-
rimentales (tabla 14.1) en columnas.
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Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
Figura A3.3. Ejemplo del método de obtención de un gráfico a partir de los datos seleccionados.
Cuando se abre el asistente para gráficos, se selecciona el tipo de gráfico (figura A3.4):
a nosotros nos interesa en este caso el gráfico del tipo XY (dispersión), en particular, la
opción en la que sólo nos muestre los puntos, tal como aparece en la figura A3.4.
Figura A3.4. Selección del tipo de gráfico XY (dispersión) con la opción en la que sólo aparecen los
puntos experimentales.
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Ajustes por mínimos cuadrados mediante una hoja de cálculo
Figura A3.5. Selección de los elementos de gráficos: títulos, información de los ejes X e Y, leyendas
y configuración de la cuadrícula.
La cuarta ventana que aparece está relacionada con los ‘Elementos de gráficos’ (ver
figura A3.5). En dicha figura se ve que se ha puesto un título al gráfico (‘Recta de Ca-
librado’), se ha configurado la ‘leyenda’, para que no aparezca, y la ‘cuadrícula’, para
que sólo aparezcan líneas en el eje de las Y. Por último, muy importante, se ha especi-
ficado qué parámetro corresponde para cada eje, y sus unidades: X es la ‘Concentra-
ción de Permanganato (M)’ e Y es la ‘Absorbancia’ (sin unidades). Por último, cuando
se da al botón ‘Finalizar’, aparece la gráfica que se muestra en la figura A3.6. El tama-
ño de la gráfica se puede adaptar a la hoja según nuestras necesidades.
El siguiente paso es hacer ajuste por mínimos cuadrados de los puntos sobre la misma
gráfica. Para ello, se sitúa el cursor sobre los puntos de la gráfica y se aprieta el botón
izquierdo del ratón para que todos los puntos queden seleccionados. Entonces, apreta-
mos el botón derecho del ratón y se despliega en la pantalla del ordenador una ventana
con varias opciones: la opción que nos interesa es ‘insertar línea de tendencia’ (ver
Figura A3.7).
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Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
Figura A3.7. Obtención del ajuste por mínimos cuadrados de los puntos.
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Ajustes por mínimos cuadrados mediante una hoja de cálculo
Cuando se hace clic en esta opción, aparece la ventana que se muestra en la figura
A3.8. En esta ventana se pueden seleccionar el tipo de regresión que se desea hacer y la
información que aparecerá en la gráfica. En nuestro caso se ha seleccionado el ‘ajuste
lineal’ y que aparezca en la gráfica la ecuación del ajuste y su coeficiente determinado
(o coeficiente de regresión). En la misma ventana, en la parte superior hay una pestaña
llamada ‘Línea’. Si se entra en esa ventana se puede elegir el color, grosor y tipo de
línea. Cuando se han seleccionado todas las características del ajuste se da al
botón ‘Aceptar’ y aparece la recta ajustada sobre la gráfica
Figura A3.8. Pantalla en la que seleccionamos el tipo regresión lineal y la información que deseamos
que aparezca en la gráfica (ecuación y R2)
En la figura A3.9 se puede ver en la gráfica aparece una línea recta que corresponde al
ajuste por mínimos cuadrados de los puntos (x,y), cuya ecuación es:
f(x) = y = 23336,4 x + 0,0024
Como la señal medida (y) es la absorbancia (A) y el término independiente (x) es la
concentración de permanganato, la ecuación se puede reescribir de la siguiente manera:
A= 2336· CMnO4- (mol/L)] + 0,0024
El factor de regresión de ajuste (R2) es 0.9999, lo que indica un muy buen comporta-
miento lineal de los puntos experimentales.
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Análisis Instrumental. Manual de laboratorio
Tabla A3.2. Datos de concentración de permanganato en las muestras obtenidos teniendo en cuenta la
recta de calibrado (A = 2336 CMnO4- + 0,0024).
Concentración MnO4-
Absorbancia
(mol/L)
Muestra 1 0,2018 8,54·10-5
Muestra 2 0,2025 8,57·10-5
Muestra 3 0,1998 8,45·10-5
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Bibliografía
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