BRUCELOSIS

UNA ZOONOSIS
DE IMPORTANCIA EN ECUADOR
 Qué es una zoonosis?

son aquellas enfermedades de los animales, cuyos agentes etiológicos pueden ser transmitidos al hombre
INTRODUCCION
 INTRODUCCION
• sinónimos:
– animales: aborto (contagioso o epizoótico)
enfermedad de Bang

– humanos: fiebre (ondulante, sudoralis,

del mediterráneo, de Malta)

• enfermedad infecciosa (Brucella spp.)

• puede ser transmitida al hombre (zoonosis)

• considerada como la zoonosis, más difundida en el

mundo (Gil & Samartino, 2000)
 PERDIDAS ECONOMICAS

Ecuador
México: 200 5 840 000 USD
(Torres; 2005)
millones USD
(Luna –
Colombia: Martínez;1999
46 millones
(Rivera et.al; 2003)

Argentina:
Centro América: 60 millones
25 millones (Samartino; 2002)
(Moreno 2002)
 INTRODUCCION
• importancia:
– por las consecuencias sobre la salud pública
• incidencia de 400 a 500 mil casos (Alvarez, 2001)

– Pérdidas económicas
• en América Latina, 600 millones de USD
(Acha & Pzyfres, 1986)
• en Ecuador, 3 millones de USD (MAG-SESA, 1999)

• opciones para el control:

– inmunización de bovinos
– identificación de reactores positivos y su correcta
eliminación
?
GENERALIDADES
 DATOS HISTORICOS
• 400 años AC. Hipócrates
• 1886 Bruce, aisla el Micrococcus melitensis
• 1897 Bang, aisla el Bacilo de Bang
• 1897 Wright & Smith, método de diagnóstico
Wright, contrae la infección
• 1905 Zammit & Horrocks, M. melitensis
en leche de cabras
• 1914 Traum, “Brucella suis” (cerda)
• 1920 Evans, relación entre:
fiebre de Malta y enfermedad de Bang
Introducción del término Brucella
 DATOS HISTORICOS

• 1923 Bruck, aisla B. abortus cepa-19

• 1924 Keefer, B. suis (humanos)
• 1929 Huddleson, medios para diferenciación
• 1930 Bruck, demuestra poder protector de la
vacuna cepa-19
• 1945 Elberg, obtiene vacuna
B. melitensis Rev-1
• 1950 Mc Farlane et al., aíslan B. ovis
• 1968 Carmichael & Bruner, aíslan B. canis
 SINONIMOS

• HUMANOS: • ANIMALES:
– fiebre ondulante – enfermedad de Bang
– septicemia de Bruce – aborto contagioso
– fiebre del mediterráneo – aborto epizoótico
– fiebre de Malta
– fiebre sudoralis
– fiebre caprina
– fiebre de Traum
EL GENERO
Brucella
 Brucella spp

• Cocobacilo, Gram
negativo

• Crecimiento lento a
37°C, en condiciones
anaerobias Fuente: Merchant & Parker (1970)

• Diferentes Clasificación Taxonómica

reservorios Dominio: Bacteria
animales Filo: Proteobacteria
Clase: Proteobacteria alfa
Orden: Rhizobiales
• Zoonosis
Familia: Brucellaceae
Género: Brucella
 Brucella spp.
Especie Biotipo Morfología Hospedador preferencial
B melitensis 1 lisa caprino, ovino, bovino
2 lisa caprino, ovino, bovino
3 lisa caprino, ovino, bovino
B abortus 1 lisa bovino, caprino
2 lisa liebre
3 lisa bovino
4 lisa bovino
5 lisa bovino
6 lisa bovino
9 lisa bovino
B suis 1 lisa porcino
2 lisa porcino, liebre
3 lisa porcino
4 lisa reno
B neotomae 1 lisa Rata del desierto
B ovis 1 rugosa ovino
B canis 1 rugosa canino
B. Cetacee & B. pinnipediae
VIAS DE TRANSMISION
Vías de transmisión
Formas de contagio

• Contacto directo

• Ingestión de material
contaminado
• Inhalación
(tipo aerosoles)
• Vía conjuntival
• Auto inoculación
Vías de ingreso

• Conjuntiva y piel
 Vías de ingreso

• Ingestión o inhalación
 Vectores mecánicos
• Animales
– Domésticos
– Silvestres

• Hombre

• Paso de animales por

lugares públicos

• Insectos
– (moscas, garrapatas)
GRUPOS DE RIESGO
 Grupos de riesgo
• Prevalencia está influenciada por condiciones
socio-culturales

• Países emergentes (población en general)

– Sistemas de manejo tradicional
– Sistemas sanitarios deficientes

• Países desarrollados (zoonosis profesional)

• Por actividad:
– Médicos veterinarios, Ingenieros agrónomos,
trabajadores agrícolas, y de camales, personal de
laboratorios y agroindustrias (queso – carnes)
Grupos de riesgo
Grupos de riesgo
SIGNOS Y
SINTOMAS
 Signos en animales

• Factores:
– edad del animal
– estado inmunitario del animal
– estado de gestación (hembras)
– dosis infectante
– estado inmunitario del hato

• No hay signo
patognomónico
– enfermedad, pasa
desapercibida (Ragan, 2002)
 Signos
HEMBRAS
– Aborto
– Retenciones placentarias
– Metritis y/o infertilidad
– Mastitis (frecuentemente
inaparente)
– Artritis y/o higroma

MACHOS
– Orquitis y/o epididimitis
– Infertilidad
– Artritis y/o higroma

TERNEROS
– Muerte intra-uterina
– Nacimiento de terneros débiles
 El Aborto en bovinos
• Afinidad de Brucella spp, por placenta a causa del
eritritol

• Eritritol esta ausente en placenta humana

• Primer aborto
– En la primera gestación, post infección
– Durante el último tercio de gestación

• Segundo aborto (a los 9 meses)

– Nacimiento de terneros débiles
Signos y síntomas en humanos

Fiebre
Sudoración nocturna
Decaimineto
Artralgia
Mialgia
Migraña
Dolor abdominal
3377 msnm
SITUACION OFICIAL DE LA
BRUCELOSIS EN EL
ECUADOR
 Brucelosis humana en Ecuador
(1990 - 2008)

30

25 24

20
Casos

15 13

10
10 9

6
5 5 5 3 5 5 5
3 2 1
5 4 4

1 1

Años

Eliminación de la lista EPI-1 MSP - Ecuador (2009)

(Notificación obligatoria)
10 años
Brucelosis: distribución mundial

Pappas, et al., (2006)

10 años
Brucelosis: distribución mundial

Pappas, et al., (2006)

10 años
Vías de transmisión

10 años
Prévalencia de brucelosis bovina (Ecuador 1978 – 1979)
Muestras
Resultados de laboratorio (*)
Provincia recolectadas
(+) (sosp) (-)
Carchi 1199 56 151 992
Imbabura 1051 16 35 1000
Pichincha 1585 77 168 1340
Cotopaxi 765 38 20 707
Tungurahua 964 44 60 856
Chimborazo 613 19 85 509
Bolivar 653 3 6 644
Cañar 825 13 17 795
Azuay 754 2 6 746
Loja 2050 18 80 1952
Esmeraldas 1427 52 63 1312
Manabi 970 46 32 892
Guayas 1001 47 93 861
Los Ríos 412 13 35 364
El Oro 1204 51 38 1115
TOTAL 15473 495 859 14087
(+) positivo, (-) negativo, (sosp) sospechoso; (*) Técnicas utilizadas,
serología rápida en placa PNSA-MAG (1979)
10 años
Caracterización epidemiológica

6% 10% 0%

4% 10% 1% 2%

1% 2%

MAG – PNSA (1979)

10 años
 Informe Sanidad Animal Mundial 2006 /Versión provisional 2007

1985

2007 1999

1998

2004
2006

Nunca señalada
2001
Fecha último foco 2006

Sospecha
1975
Presencia 1987

S/I
B. abortus B. melitensis B. suis

10 años
Estrategia oficial para la detección de
animales infectados
Ring Test (+)

(-)

90 días,
Ring Test Dos pruebas RB en
RB negativas bovinos
(-) adultos

90 días,
RB
Rebaño libre (+)
(-) de brucelosis identificación
eliminación
 Problemas en la estrategia oficial

Rebaño libre
de brucelosis

Ring Test VACUNACION RB

baja sensibilidad introducción baja sensibilidad
de bacterias

(+)

identificación
eliminación
5790 msnm
DIAGNOSTICO
 DIAGNOSTICO

• Directo
– aislamiento del agente causal
– Identificación de una parte del genoma

• Indirecto
– Inmunidad humoral (Ac)
– Inmunidad celular
DIAGNOSTICO • Diagnóstico confiable
• Laboratorio tipo “3”
DIRECTO
– alto costo
– difícil implementación
– alto riesgo en
manipulaciones
– personal entrenado

• Resultados Falsos
Negativos (RFN)
– muestras
contaminadas
– mal conservadas
IDENTIFICACION

Macroscopía Microscopía Catalasa Oxidasa

TIPIFICACION

Aglutinación Ureasa H2S Colorantes

PCR-AMOS
LABORATORIO “CERVA” Bélgica
 • Aislamiento de:
AISLAMIENTO
– placenta
– feto
• pulmones
• estómago
– secreciones vaginales

• Luego de la involución
uterina
– Brucella se acantona en la
ubre
• leche
• secreciones (en vacas
en periodo seco)
(Merck, 1993)
AISLAMIENTO Y TIPIFICACION DE
Brucella spp
 Diferenciación de biotipos (Brucella)
Aglutinación
Crecimiento en presencia de a
Exigencia Producción con sueros b
Especie Biovariedad
de CO2 de H2S Fucsina
Tionina Safranina A M
básica
B. melitensis 1 - - + + + - +
2 - - + + + + -
3 - - + + + + +
B. abortus 1 +c + - + + + -
2 +c + - - - + -
3 +c + + + + + -
4 +c + - +d + - +
5 - - + + + - +
6 - - + + + + -
9 +o- + + + + - +
B. suis 1 - + + -e - + -
2 - - + - - + -
3 - - + + - + -
4 - - + -f - + +
5 - - + - - - +
B. neotomae - + -g - - + -
B. ovis + - + -f - - -
B. canis - - + -f - - -
geafcb Crecimiento
Concentración
Algunas
d Negativo
Positivo
A=
Algunas cepas
para
sueropara alauna
de
la concentración
20 µg/ml
resistentes
mayoría
mayoría
monoespecífico
cepas aisladas ade
ende de
lalas
las
anti-A,
Canadá, deGran
Tionina
Fucsina
cepas
cepas
B= Tionina
suero 10
y Fuscina
básica, µg/ml
hanbásica,
ysido
monoespecífico
Bretaña y de 100
aisladas
EEUU, en
anti-B.
son µg/ml de
América
inhibidas
Safranina
del
porSur enelmedio
y en
la Fucsina básicasuero
sudeste dextrosa agar
asiático
LABORATORIO “CERVA” Bélgica
Observación macroscópica de las
colonias (Brucella spp)
Pruebas bioquímicas
catalasa
H2O2 O2 + H2O

(+)

(-)

Prueba de Catalasa
 Pruebas bioquímicas
•Citocromo C oxidasa
•Sustrato dihidro cloridrato de tetrametil-p-fenilenediamina indofenol
(azúl)

(+)

(-)

Prueba de Oxidasa
 Pruebas bioquímicas

Urea ureasa
NH3

Reactivo de Úrea.
5% úrea + Rojo fenol

+
(+)
1 ml H2O (d) esteril
(-)

Prueba de Ureasa
Crecimiento en presencia de
colorantes, y CO2
Aglutinación con sueros
monoespecíficos A y M
Producción de H2S

Papel de acetato de plomo

Precipitado

enzima
Diferenciación de biotipos (Brucella)

Aglutinación
Crecimiento en presencia de a
Exigencia Producción con sueros b
Especie Biovariedad
de CO2 de H2S Fucsina
Tionina Safranina A M
básica
¿? ¿? + + - + + - +
Diferenciación de biotipos (Brucella)
a Aglutinación
Aglutinación
Aglutinación
Exigencia Producción
Producción
Crecimiento
Crecimiento en
Crecimiento enpresencia de a con sueros bb b
presenciade
Especie Exigencia
Biovariedad Exigencia Producción con sueros
Especie Biovariedad
Biovariedad deCO
CO222 deHH222SS
de
de CO de Fucsina
Fucsina
Fucsina
Tionina Safranina AA
Tionina básica Safranina
Tionina MMM
básica
básica
B. melitensis 1 - - + + + - +
2 - - + + + + -
3 - - + + + + +
B.B.abortus
abortus 1 +c + - + + + -
2 +c + - - - + -
3 +c + + + + + -
c d
44 +++cc ++ --- ++dd ++ -- +++
5 - - + + + - +
6 - - + + + + -
99 ++ oo -- + ++ ++ ++ -- ++
B. suis 1 - + + -e - + -
2 - - + - - + -
3 - - + + - + -
4 - - + -f - + +
5 - - + - - - +
B. neotomae - + -g - - + -
B. ovis + - + -f - - -
B. canis - - + -f - - -
(+) (-) (+)
PRUEBAS DE BIOLOGÍA
MOLECULAR
Prueba de PCR

PCR - AMOS
PRUEBAS PARA DETECCION DE
INMUNIDAD HUMORAL
 ASPECTOS GENERALES
• Utilización de Brucella abostus en pruebas
serológicas
– Más sensible a la aglutinación
– Menos expuesta a disociaciones
(Ruiz-Castañeda, 1954)

• Ventajas:
– Relativa fácil implementación
– Costo aceptable

• Desventajas:
– Estado sanitario de la zona muestreada
– Correcta estandarización de las pruebas
– “Cut off”, hubral de positividad
 El LPS-S (liso)

Cadena
«O»

Yersinia enterocolítica O:9

 REACCIONES CRUZADAS

• Pruebas clásicas
– Basadas en la detección de Anticuerpos (Ac) contra el
Lipopolisacárido liso (LPS-L) (Garin-Bastuji, 1993)
– Reacción cruzada con bacterias Gram (-)
(Godfroid et al, 1994; Gerbier et al, 1997; Pouillot et al, 1997;
López-Merino, 2002; FAO & OMS, 1986)

• Inmunidad celular (Skin test)

– Sistema empleado para discriminar los RFP
(Pouillot et al, 1997)
 Pruebas diagnósticas
anticuerpos detectados
prueba sensibilidad especificidad
IgM IgA IgG1 IgG2
SAT 29.1 - 100 99.2 - 100 + ± - -
SAT-EDTA 60 99.8 + ± - -
SAT-DTT 60 99.8 - - + -
SAT-2ME 56.2 - 100 99.8 - 100 - - + +
RIV 50.5-100 21.9-100 - - + -
RB 21 - 98.3 68.8 - 100 ± - + -
BPA 75.4 - 99.9 90.6 - 100 ± - + -
CFT 23.0 - 91.7 36.0 - 100 ± - + -
iELISA 92.5 - 100 90.6 - 100 - - + +
MRT 56 98-100 + + ± ±
iELISA-L 98-100 99-100 - - + +
ST* 95 78-100 - - - -

SAT (Suero Aglutinación en Tubo); RIV (prueba de Rivanol); RB (Rosa de Bengala); BPA
(Prueba de Antígeno Tamponado en Placa); CFT (Fijación de Complemento); iELISA (Enzyme
Linked Immunosorbent Assay – indirecto); iELISA-L (Enzyme Linked Immunosorbent Assay –
indirecto en leche); MRT (Milk Ring Test); ST* (Skin Test) Detecta Inmunidad celular
 Respuesta inmunológica
(caso de brucelosis)

Resultados
falsos negativos
(RFN)

0 15
IgM IgG
 Respuesta inmunológica
(caso de vacunación en brucelosis)

6 – 8 meses Ac aglutinantes 12 – 18 meses

(máximo)
 Fundamento prueba de aglutinación
- Antígeno (Ag): responsable de producción de anticuerpos
 suspensión de bacteria muertas
• Brucella abortus
• (alta sensibilidad / difícil mutación)
 Fundamento prueba de aglutinación
- Anticuerpo o aglutinina (Ac): responsable de aglutinación
 suero sanguíneo
 suero lácteo
Fundamento prueba de aglutinación

No hay aglutinación Aglutinación

 Fundamento prueba de aglutinación
- Titulación: valorar la concentración de Ac en un suero
 título: dilución más alta del suero, en la que todavía hay
aglutinación
Diluciones 2 5 7
1era (1/12.5)
2da (1/25)
3era (1/50)
4ta (1/100)
5ta (1/200)
6ta (1/400)
7ma (1/800)
8va (1/1600)
9na (1/3200)
10ma (1/6400)
 Rose de Bengale (RB)
(Pruebas de aglutinación rápida en placa)

- Antígeno: suspensión concentrada (8% v/v) de Brucella

abortus, coloreadas con Rosa de Bengala

positivo negativo
Buffered Plate Agglutination Test (BPAT)
(Pruebas de aglutinación rápida en placa)

- Antígeno: suspensión concentrada (11% v/v) de Brucella

abortus, coloreadas con verde brillante y cristal violeta

positivo negativo
 Prueba de Wright (SAW o SAT)
(Prueba de aglutinación lenta en tubo)

- Antígeno: suspensión de Brucella abortus

positivo negativo

negativo positivo

macrométodo micrométodo
 Prueba de Wright (SAW)
(Prueba de aglutinación rápida en tubo)

- Antígeno: suspensión de Brucella abortus

- Variantes:
- SAW (EDTA)
- SAW (2 ME)
- SAW (DTT)
 Prueba de Wright (SAW-EDTA)
(Prueba de aglutinación rápida en tubo)

- Antígeno: suspensión de Brucella abortus

 Prueba de Wright (SAW-DTT/2ME)
(Prueba de aglutinación rápida en tubo)

- Antígeno: suspensión de Brucella abortus

 Prueba de anillo coloreado de leche o
“Ring Test” (MRT)
- Antígeno: suspensión de Brucella abortus

(+) (+) (+) (-)

 • Prueba i-ELISA
1 2 3 4 5 6 7 8 8 C(-) C(T)

positivo
 Fijación de Complemento (CFT)

negativo positivo Prueba de anticomplementaridad

PRUEBAS PARA DETECCION DE
INMUNIDAD CELULAR
Prueba cutánea o “Skin test” (ST)

Inoculación de brucelina Lectura de la prueba

(72 horas)
5898 msnm
CONTROL
 VACUNACION

• La vacunación no
erradica la brucelosis.

• Edad para la
vacunación de 3 a 6
meses.
 Cepa S19 vs RB51
Cepa S19 RB51

Cepa lisa Cepa rugosa mas

atenuada
Posee cadena O en No posee la cadena
su LPS O en su LPS
Genera anticuerpos Los anticuerpos que
que interfieren con genera no interfiere
las pruebas con las pruebas
Puede provocar No provoca abortos
abortos en 1.4%
REGISTROS
-Encuesta para UPA
- Registro para
* bovinos
 RECOLECCION DE DATOS

• Encuesta (transversal)
– Q#1 (ficha de la UPA)

– Q#2 (ficha de bovinos

muestreados)
 Encuesta para la UPA
• Identificación y localización
• Datos generales de la explotación
• Aspectos sanitarios
– Sistema de bioseguridad
– Manejo del estiercol
– Origen de agua de bebida y riego
– Manejo de potreros
– Sistema reproductivo
– Patología reproductiva
– Diagnóstico de brucelosis
– Calendario sanitario
– Control veterinario
– Sistema de ordeño
– Actividades complementarias de la explotación
SALA DE ORDEÑO
Registro de bovinos muestreados
• Identificación de la UPA
• Identificación del animal muestreado
• Identificación de la muestra
• Datos zootécnicos (sexo, edad, raza)
• Aspectos relacionados con la vacunación
– Fecha de vacunación/revacunación
– Cepa utilizada
• Datos reproductivos
– Intervalo inter-parto (IIP)
– Fecha de próximo parto
– Número y fecha de abortos
• Pruebas diagnósticas a realizar
Registro de bovinos muestreados
6310 msnm
CONTROL DE LA BRUCELOSIS
 PROGRAMA BRUCELOSIS -
TUBERCULOSIS

1.- Encuesta epidemiológica

– Identificación y localización de la explotación
– Información general de la explotación
– Aspectos sanitarios
– Información de trabajadores de la explotación

2.- Registros específicos

– brucelosis
– tuberculosis
 PROGRAMA BRUCELOSIS -
TUBERCULOSIS
3.- Diagnóstico de brucelosis
– ESTUDIO GENERAL (hatos lecheros)
– ESTUDIO INDIVIDUAL DEL HATO
• SCRINING
– Rosa de Bengala)
• iELISA (en animales sospechosos)
• “Skin Test”

4.- Diagnóstico de tuberculosis

– SCRINING (tuberculina bovina)
– CONFIRMACION (tuberculina aviar)
 PROGRAMA BRUCELOSIS -
TUBERCULOSIS

5.- Vacunación contra Brucelosis

– CEPA 19
• Una sola dosis
• Edad de vacunación (3 - 6 meses)
– RB- 51
• Edad de vacunación (3 - 6 meses)
• Dosis de refuerzo (15 meses)
• Revacunación anual
• Control de animales
 PROGRAMA BRUCELOSIS -
TUBERCULOSIS

6.- Capacitación
– Ganadero
– Propietario
– Veterinario
– Trabajadores

7.- Bioseguridad
– Control en la movilización de animales
– Estudio en otras especies animales
– Sacrificio controlado de animales positivos
 PROGRAMA BRUCELOSIS -
TUBERCULOSIS

8.- Investigación
– Presencia de anticuerpos
– Aislamiento d e agente causal
– Estudios de:
• Prevalencia
• Incidencia
gracias por su atención !