TECNOLOGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE

HUIXQUILUCAN
LICENCIATURA EN BIOLOGÍA
4TO SEMESTRE
GENETICA CLASICA
PRACTICA DE LABORATORIO: INDUCCIÓN DE
MUTACIONES POR LUZ UV
PROFESOR:
VAZQUEZ JOSE JUAN
ALUMNOS:
AGUILA SANTIAGO JORGE ALBERTO
MARTÍNEZ VIGI MARIANA
SALINAS BALDERAS AXEL RENE
VILLANUEVA ROJAS ALEJANDRA

CICLO ESCOLAR 2020-2021

.Objetivo:

Inducir mutantes en una bacteriana mediante luz UV.

Introducción

La luz solar es energía radiante electromagnética compuesta principalmente por el

espectro de luz ultravioleta (100 a 400 nm), luz visible (400 a 760 nm) e infrarroja
(760 a 1.800 nm), aunque también están presentes longitudes de onda corta
(ionizantes), y onda larga (microondas y radiofrecuencia). Estas radiaciones son
modificadas de manera importante por su paso a través de la atmósfera y solamente
dos tercios de esta energía penetra en la Tierra.

La radiación UV se divide en tres bandas: UVA (320 a 400 nm), UVB (280 a 320), y
la UVC (200 a 280 nm). La UVA no es filtrada por la capa de ozono en el mismo
grado que la UVB y la UVC, y cantidades suficientes de la misma penetran a través
de las nubes y de los vidrios. En un día de verano, la UVB comprende
aproximadamente el 5% de la radiación UV, y la UVA el 95% restante. Sin embargo,
la UVB es más responsable que la UVA en producir daño biológico, ya que
contribuye con cerca del 80% de los efectos dañinos que se asocian a la exposición
solar, la UVA sólo produce el 20% restante. La cantidad de radiación UV y luz visible
que alcanzan un cierto nivel de la piel varía con su longitud de onda. En general, las
longitudes de onda largas penetran más profundamente, lo cual se puede explicar
por las propiedades ópticas de la piel. Cuando la luz visible y la UV alcanzan la piel,
parte es reflejada, parte es absorbida, y parte es transmitida a diferentes capas de
células, hasta que la energía del rayo incidente se disipa. La porción de luz que es
absorbida por las moléculas en los tejidos es la más importante ya que se trata de
la energía que puede causar respuestas tisulares.

La radiación es absorbida por moléculas en la piel denominadas cromóforos, los

cuales pueden ser endógenos (por ejemplo, el DNA, la melanina, el ácido urocánico,
pequeños péptidos, y el colesterol) o exógenos (drogas fotosensibilizantes) capaces
de inducir una respuesta fotobiológica, como una quemadura solar o una
fotosensibilidad inducida por drogas16. Los niveles de penetración de los rayos UVB
y UVA a nivel de la piel son diferentes. El 70% de la radiación UVB es absorbida por
el estrato córneo de la epidermis, a diferencia de la radiación UVA que es absorbida
entre el 70-80% por células de la dermis y melanocitos de la epidermis basal.

Materiales y métodos

Método de Esterilización UV

Materiales: Mechero, encendedor, 2

placas de medio de cultivo, gradilla,
tubos de vidrio para muestra, punzón,
marcador, papel aluminio y sistema
con dos lámparas germicidas.

Pasos:

Primero se enciende el mechero y se

inoculan las dos placas de cultivo en
un mismo cultivo (tubos de muestra)
Luego en una placa se hace un agotamiento, se vuelve a tomar muestra y se hace
un agotamiento a la segunda placa

1 PlACA 2DA PlACA

Rotulamos las dos placas una con longitud

de onda de 254 y la otra de 366 longitud de
onda
 Con el papel aluminio cubrimos la
mitad de las placas y la otra mitad no
(su función del papel aluminio va hacer
que los rayos no impacten a la placa)

Ponemos una placa en el sistema de lámparas germicidas, ponemos protección y

se enciende la luz ultravioleta (la lámpara de 254 es más potente para acción
germicida absorben los ácidos nucleicos y se forman los niveles de timina y los
destruyen y la la luz de 366 hace que no se destruyan y haya mutaciones) se deja
durante 1 min

La segunda placa se pone a 254, se pone la protección y encendemos el sistema

se deja 1 minuto
Resultados:

Después del procedimiento de sembrado, el paso por las diferentes variaciones en la luz
UV y la incubación de los microorganismos. Los resultados nos dejan ver que en la zona
donde no se cubrió con el papel de plata y la cantidad de luz era germicida esta hizo que
los microrganismos no se incubaran en esas zonas y que la luz tiene que tener una
radiación fuerte y exacta para hacer que los microorganismos mueran, por eso los rayos
UV que llegan a la tierra no son suficiente mente fuertes para matar a los microorganismos
en el medio ambiente, pero si para que lleguen a mutar.

En este video se nos muestra más a detalle el resultado de como los

microorganismos en un ambiente sin exposición a luz UV se incuban con
pigmentación y al pasarlos por unos rayos UV a diferentes tiempos pueden mutar y
perder su coloración o ya matar al microorganismo como tal evitando el crecimiento
microbiano en la caja Petri.
Mutación causada por UV

El ADN se compone de dos cabos complementarios que se hieran en una doble

hélice. El mensaje hereditario químicamente se cifra y se compone de la adenina
de cuatro nucleótidos (a), del thymine (t), del (G) de la guanina y de la citosina (c).

La luz de UV interfiere directamente con la vinculación entre los nucleótidos en la

DNA. Las dos lesiones principales del ADN formadas por la exposición a UV son
dimeros de la pirimidina del cyclobutane (CPD) y 6-4 photoproducts del pyrimidone
de la pirimidina (6-4PPs), y sus isómeros del Dewar.

Se forma CPDs cuando dos bases adyacentes de la pirimidina (thymine - TT o

citosina - centímetro cúbico) covalente se conectan produciendo una estructura
cíclica del anillo. resultado 6-4PPs de una única ligazón covalente formada entre el
5' final de C6 y 3' final de C4 de pirimidinas adyacentes. Esto lleva a la formación
de un intermedio inestable del oxetano o del azetidine dependiendo de si el 3' base
del extremo es un thymine o una citosina.

El cambio espontáneo subsiguiente de estos intermedios da lugar a 6-4PP. Los

dimeros de la pirimidina causan un retorcimiento en la espina dorsal de la DNA, la
transcripción que para y la síntesis de la proteína. 6-4 aducciones del pyrimidone de
la pirimidina experimentan la isomerización a su forma del Dewar sobre la
exposición a otro fotón de la luz de la radiación de UVB o de UVA. La mutación más
común inducida por UV es transversión de C a de T. Las substituciones bajas dobles
(centímetro cúbico al TT) también ocurren, no obstante, menos con frecuencia.

Daño indirecto de la causa de la radiación de UV (y también UVB) del ADN vía la

amortiguación de fotones por los cromóforos no-DNA. Esto genera especie reactiva
del oxígeno como el oxígeno de la camiseta o el peróxido de hidrógeno que oxidan
las bases de la DNA que causan mutaciones. La mutación más común es la
transversión de GT en donde la guanina consigue oxidada en el dihydroguanine oxo
8 7,8 (8-oxoG) que obstaculiza su emparejar con citosina. Durante el proceso de la
réplica, 8-oxoG empareja con adenina. Cuando se sintetiza el segundo cabo, 8-
oxoG se reemplaza por un thymine que lleva a una transversión de GT.

Preguntas:

a) ¿Explique cómo se genera las mutaciones en las bacterias por luz UV?

La radiación UV (longitud de onda entre 250 y 320 nm), puede ocasionar

alteraciones químicas en las bases del ADN. Los fotoproductos de estas
reacciones originan los dímeros de pirimidinas ciclobutano (CPD), pirimidina
(6,4) y pirimidonina (6,4 PP) que causan efectos deletéreos como la inhibición
de la replicación y de la transcripción, el aumento en la aparición de
mutaciones, la detención del ciclo celular y la muerte celular. Las mutaciones
aparecen principalmente como consecuencia del mecanismo post-
replicativo de reparación propenso a error. Con menor frecuencia la luz UV
ocasiona hidratación de la C, lo que da origen a transiciones.

b) ¿Qué sistemas de reparación corrigen los daños por luz UV en las

bacterias?

 Mecanismo por sistemas de reparación INDIRECTA (Reparación por

escisión de nucleótidos - NER (Nucleotide Excision Repair))
o Es un mecanismo versátil que ha sido ampliamente estudiado
en los seres humanos. Repara daños en el ADN causado por
la radiación UV, agentes mutagénicos, quimioterapia, entre
otros (36). En este mecanismo de reparación participan
diferentes proteínas, 4 en procariotas (UvrA, UvrB, UvrC y UvrD
 Mecanismo por reparación inducida
o Todos los organismos pueden sufrir ataques masivos en su
material genético por diversos agentes que pueden alterar la
estructura química básica del ADN, como la luz ultravioleta,
metabolitos, especies reactivas de oxígeno, entre otras (6).
Este tipo de daños dispara mecanismos de respuesta
 inmediata en el ADN, que se caracterizan por tener niveles
superiores de proteínas implicadas en reparación y
recombinación
 Mecanismo por reversión de la lesión: reparación directa
o La reparación directa es realizada por la acción de una única
enzima capaz de reparar la lesión, sin necesidad de substituir
la base dañada. Así, la estructura original de la molécula del
ADN revierte la lesión. Existen tres mecanismos en la
reparación directa: fotorreactivación, alquiltransferencia y
desmetilación oxidativa

c) ¿Cuáles es la frecuencia de mutación en bacterias mediante luz UV?

La frecuencia de mutación varia de una cepa a otra, hay algunas más

resistentes a la luz UV que necesitan más tiempo expuestas a la luz UV
para presentar alguna mutación

Conclusiones

Dos conclusiones importantes que se derivan son que (1) el proceso de mutación
no es una adaptación sino la consecuencia de un error (un daño no reparado del
ADN) y (2) las mutaciones afectan solo rasgos pre-existentes.

En los últimos años se ha producido un incremento notable de la incidencia de

cáncer de piel. Existiendo una relación directa entre ese aumento y la exposición
reiterada al componente ultravioleta de la luz solar. Si bien en los tumores
nomelanoma esa asociación parece ser directa, no es tan aparente en el melanoma
maligno. La huella característica que presenta la muta génesis inducida por la radia.

La mutación es un proceso aleatorio (estocástico) en el sentido de que la ocurrencia

de una mutación particular no está determinada por la presencia o ausencia del
organismo que la sufre en un ambiente donde la mutación podría ser ventajosa; es
decir, cuando la mutación causa una sustitución de un aminoácido en una proteína
lo hace sin considerar si el cambio es ventajoso para la proteína. También es
aleatorio porque si bien podemos predecir la probabilidad de que ocurra una
mutación particular, no podemos predecir cual de un gran número de copias génicas
sufrirá la mutación. Que la mutación sea un proceso estocástico no significa que
todos los sitios en el ADN se alteren con igual frecuencia o que el ambiente no afecte
las tasas mutacionales; en efecto, sabemos que la exposición a varias clases de
radiación, a ciertas sustancias químicas o aún la desnutrición incrementan las tasas
de mutación.

Fuentes de consulta:

 Sinha RP, DP de Häder “Ultravioleta-indujo daño y la reparación de la DNA:

Una revista.” Photochem Photobiol Sci. El 2002 de abril; 1(4): 225-36. Revista
 MB y Sinha RP “mecanismos moleculares de Rastogi RP, de Richa, de
Kumar A, de Tyagi del daño inducido por radiación ultravioleta y de la
reparación de la DNA.” Ácidos nucléicos de J. 16 de diciembre 2010;
2010:592980. doi: 10.4061/2010/592980
 Efectos directos e indirectos de Ravanat JL, de Douki T y del cadete J “de la
radiación ULTRAVIOLETA sobre la DNA y sus componentes.” J Photochem
Photobiol B. el 2001 de oct; 63 (1-3): 88-102. Revista
 https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/16mutacion.htm#:~:text=Las%20
mutaciones%20aparecen%20principalmente%20como,que%20da%20orige
n%20a%20transiciones.
 http://www.scielo.org.co/pdf/biosa/v13n2/v13n2a08.pdf