Taller Inmunohematología Teórica

Interferencias en pruebas inmunohematológicas asociadas anticuerpos Anti CD-38

Fecha de entrega 20/11/2020 24:00

Nombre: Diego Ramiro Oña Guaranda

De acuerdo a la lectura crítica de la bibliografía suministrada acerca de las interferencias

en pruebas inmunohematológicas asociadas a anticuerpos Anti CD-38 desarrolle el
siguiente taller:

1) De acuerdo con el artículo “Resolving the daratumumab interference with blood

compatibility testing” responda el siguiente cuestionario:

a) ¿Cuál o cuáles son los objetivos del artículo?

 En los primeros días, CD38 se reconoció como un marcador de
diferenciación y activación de linfocitos, más tarde se usó como
marcador fenotípico en la clasificación de neoplasias malignas de
células T y B, y se identificó como un objetivo prometedor para las
terapias basadas en anticuerpos. También se encontró que CD38
tiene múltiples funciones de receptor y enzimáticas. Aquí, reunimos
todos estos aspectos de CD38 y damos nuestra perspectiva sobre la
terapia dirigida a CD38
 apuntan a CD38 como un objetivo de anticuerpo terapéutico
atractivo, en particular para MM y NHL positivos para CD38.

b) ¿Cuál considera es la conclusión de los ensayos representados en la siguiente

grafica?

A) La evaluación citométrica de flujo de la expresión de CD38 en los glóbulos rojos del

paciente se realizó después de la activación de los glóbulos rojos GlyA1 usando un
anticuerpo conjugado anti-CD38 FITC (negro) o un control de isotipo (gris).
B) Evaluación de citometría de flujo de la expresión de la superficie de CD38 en células
HL60-CD38 transducidas de forma estable (negro) en comparación con células HL60 no
transducidas (gris). Se detectó CD38 humano usando anti-CD38 de ratón conjugado
directamente con aloficocianina.

c) ¿Cuál considera es la conclusión de los ensayos representados en la siguiente

grafica?

Evaluación de métodos para prevenir la unión de DARA a CD38 en células HL60

transducidas. (A) DARA (0,5 mg / ml) se une selectivamente a las células HL60-CD38
(negro) y no controla las células HL60-GFP (gris). El tratamiento de las células con
concentraciones crecientes de DTT (0-10 mg / ml) resultó en una reducción dependiente
de la dosis en la unión de DARA

d) Complete la siguiente tabla de acuerdo a la presencia o ausencia de interferencia

en las siguientes pruebas inmunohematológicas en paciente tratados con
anticuerpos Anti CD-38:

Prueba Con Sin Variable

interferencia Interferencia
Hemoclasificación ABO/RhD X
Coombs directo X
Autocontrol X
Rastreo e identificación de X
anticuerpos
Pruebas cruzadas en fase de AGH X

e) Explique por qué se produce la interferencia en las pruebas inmunohematológicas

 CD38 se expresa débilmente en glóbulos rojos. El anti-CD38 se une al

CD38 en los glóbulos rojos reactivos, lo que causa una pareactividad in
vitro.2,3 Las muestras de plasma de pacientes tratados con anti-CD38
 causan constantemente reacciones positivas en las pruebas de
antiglobulina indirecta (IAT), pruebas de detección de anticuerpos (cribado),
paneles de identificación de anticuerpos, y pruebas cruzadas de globulina
antihumana (AHG).
 La aglutinación debida a anti-CD38 puede ocurrir en todos los medios (p.
Ej., Solución salina, solución salina de baja fuerza iónica, polietilenglicol) y
con todos los métodos IAT (p. Ej., Gel, tubo, fase sólida). Las reacciones de
aglutinación causadas por antiCD38 suelen ser débiles (1+), pero se
pueden observar reacciones más fuertes (hasta 4+) en las pruebas en fase
sólida. Sin embargo, anti-CD38 NO interfiere con la tipificación ABO / RhD o
con las coincidencias cruzadas de giro inmediato.

2) De acuerdo al artículo “International validation of a dithiothreitol (DTT)-based method

to resolve the daratumumab interference with blood compatibility testing” responda los
siguientes puntos
a) ¿Cuál es mecanismo de acción por el cual el tratamiento con DTT elimina la
interferencia de Anticuerpos Anti CD-38 en pruebas inmunohematológicas?
 El tratamiento con DTT de RBC desnaturaliza la superficie celular CD38 al interrumpir
los enlaces disulfuro en el dominio extracelular de CD38 y, por lo tanto, previene la
unión de DARA. Dado que el tratamiento con DTT también desnaturaliza los antígenos
de Kell, se deben proporcionar unidades de K– a menos que se sepa que el paciente es
K+
 El tratamiento con DTT destruye todos los antígenos del sistema de grupos
sanguíneos de Kell. Como el anti-K común no se detectará usando células de
cribado tratadas con DTT, se deben proporcionar unidades K- a los pacientes a
menos que se sepa que son K+. Otros antígenos sensibles a DTT incluyen los
de los grupos sanguíneos DO, IN, JMH, LW, LU, RAPH, YT y CROM.
 PARAFRASEAR

b) Realice un diagrama de flujo donde represente el procedimiento para el

tratamiento con DTT de células reactivo empleadas para rastreo e
identificación de anticuerpos.
 DTT 0,2 mol/L: diluir 1 g de DTT en 32 ml de solución salina
tamponada con fosfato (PBS), pH 8,0.

Los eritrocitos K+ y E+ sirven de control para comprobar que

DTT desnaturaliza el antígeno K mientras conservaba el
antígeno E.

Lavar los eritrocitos reactivos y de control (100 ml de una

suspensión al 3% -5%) se lavaron cuatro veces con PBS (pH 7,3)
antes de añadir 400 ml de DTT 0,2 mol / L a cada tubo

Incubar los glóbulos rojos a 37 ° C por 30 minutos con

mezclado periódico por inversión (de tres a cuatro veces
durante la incubación).

Lavar los glogulos rojos cuatro veces con PBS (pH 7,3) y estos
pueden usarse para pruebas posteriores

c) ¿Cuáles son las limitaciones del tratamiento con DTT?

 El DTT desnaturaliza los antígenos de los glóbulos rojos distintos del CD38.
 Este tratamiento puede no ser práctico si se lo aplica para bancos de sangre de
hospitales comunitarios más pequeños

3) De acuerdo al boletín técnico de la AABB “Association Bulletin #16-02” cuáles

son las recomendaciones en las siguientes situaciones :

Situación
Antes de tratamiento con Anti CD-38
Pruebas cruzadas en pacientes con
RAI negativo
Conducta
--Se recomienda realizar un tipo de línea de base y una
pantalla de anticuerpos.
-- Realizar fenotipo o genotipo de referencia.
--Siempre y cuando se sepa que el paciente está siendo
tratado con DTT (células tratadas con ditiotreitol), se
recomienda realizar una prueba cruzada electrónica o de
giro inmediato con unidades compatibles con K-
compatible con ABO / RhD

Pruebas cruzadas con RAI positivo --Si el paciente tiene aloanticuerpos conocidos, se
pueden proporcionar unidades de glóbulos rojos con
compatibilidad fenotípica o genotípica.
 -- Realizar fenotipificación antes de recibir el tratamiento
con anti-CD38.
--La genotipificación se puede realizar antes o después
del tratamiento con anti-CD38

Transfusión en situación de urgencia --Se recomienda administrar glóbulos rojos compatibles

con ABO / RhD no cruzados según los procedimientos
del banco de sangre local