BIOQUMICA

CICLO DE
KREBS
 

INTRODUCION
La célula es la unidad funcional y estructural de todos los organismos pluricelulares eso también
nos incluye a nosotros lo humanos que estamos compuestos por órganos y sistemas, y estos por
tejidos y los tejidos en células funcionales y de sostén.

La célula como nosotros los seres humanos también tienen necesidades que día a día cumplen al
igual que nosotros, estas se reproducen, nacen, crecen, se alimentan, respiran e incluso muere.

En este tema se abordará un tema muy importante a como es descarboxilación oxidativa del
piruvato que es una antesala al ciclo del ácido cítrico o mejor conocido como ciclo de Krebs, ya que
este último es la forma en la que la célula genera energía ya sea para ella, así como para el
organismo completo.

Es fundamental el abordaje de estos temas ya que brindan herramientas de conocimiento que

servirán para diagnosticar y tratar algunas enfermedades que entornan a este tema.

Así como brindarnos a nosotros los estudiantes de medina, un conocimiento amplio y detallado
del metabolismo de los carbohidratos y de cómo se llega a obtener energía desde estos por medio
del estudio de enzimas y los procesos enzimáticos que estos pasan hasta llegar a ser moléculas
energéticas dentro de cada una de las células desde el citosol hasta la mitocondria.

Objetivos:

 Ubicar los diferentes procesos de oxidación de los nutrientes dentro del contexto global de las
oxidaciones biológicas.  Indicar las funciones biológicas de estos procesos.  Explicar el sentido
biológico de los diferentes mecanismos de regulación de la DOP, Ciclo de Krebs.  Asociar el
contenido teórico de la DOP y Ciclo de Krebs. con el caso clínico de deficiencia del Complejo PDH.
Primeramente, antes de responder a las siguientes preguntas vamos a hablar un poco acerca del
lugar donde se lleva la descarboxilación oxidativa del piruvato (DOP), y el ciclo de Krebs además de
la respiración celular. La mitocondria es uno de los orgánulos citoplasmático que se encuentra en
casi todas las células eucariotas, tiene

Composición de la mitocondria:
 Membrana mitocondrial externa: la parte más externa ósea su pared externa.

 Membrana mitocondrial interna: hacia el interior encontramos la membrana interna de la

mitocondria ósea la mitocondria posee dos membranas.

 Espacio intermembrana: es el espacio comprendido entre la membrana interna y la membrana

externa de la mitocondria.

 Crestas mitocondriales: son invaginaciones de la membrana interna y dan apariencia a ser

crestas o una pared fenestrada.

 Matriz mitocondrial: en el interior de la mitocondria dentro de la membrana interna

encontramos la matriz mitocondrial.

 Ribosomas: están incluidos en la matriz mitocondrial

 ADN Circular: están incluidos en la matriz celular.

 ARN: están de los tres tipo de ARN, de transferencia, mensajeros y ribosomal.

 Enzimas: son enzimas que están asociadas a todos los procesos metabólicos que ocurren dentro
de la mitocondria

.  Sustratos: sustancias en la que actúa las enzimas para catabolizarlo a un producto.

 Productos: sustancia final de la actividad enzimática mitocondrial

Diga cómo penetra el Piruvato en la mitocondria para la

DOP.
Respuesta:

El piruvato se produce durante la glucólisis en el citoplasma, pero la oxidación del piruvato ocurre
en la matriz mitocondrial (en eucariontes). Por lo tanto, antes de que comiencen las reacciones
químicas, el piruvato debe entrar a la mitocondria atravesando su membrana para llegar a la
matriz.

El piruvato (que posee tres átomos de carbono) generado en la etapa de glucólisis sale del
citoplasma y atraviesa la membrana externa mitocondrial de forma pasiva debido a la alta
permeabilidad de esta.

Posteriormente, ingresa a la matriz mitocondrial mediante un mecanismo de simporte (conjunto

de mecanismos que regulan el paso de solutos, como iones y pequeñas moléculas, a través de
membranas plasmáticas) con protones que le permite atravesar la membrana interna de la
mitocondria (utilizando la fuerza protonmotriz generada por la cadena respiratoria).

Escriba la ecuación global de la DOP.

La reacción global es:

Ácido pirúvico + NAD+ + HSCoA -----------> Acetil-CoA + NADH + H+ + CO 2

Ósea Piruvato + nicotinamida adenina dinucleótido+ Coenzima A = luego de unos procesos

metabólicos dará lugar a= Acetil-CoA+ NADH+Hidrogeno+ Dióxido de carbono que es liberado.

Esquematice la regulación del complejo PDH.

El piruvato deshidrogenasa (PDH), es la principal enzima reguladora de la descarboxilación
oxidativa del piruvato. Está regulada por las enzimas PDH- Fosfatasa que la activa y la PDH-quinasa
que la inactiva por desfosforilación y fosforilación respectivamente.

Cuando hay deficiencia de la PDH se presenta un aumento

del Lactato y Alanina, así como serios daños neurológicos.
¿Justifique por qué?
Partiendo de que el PDH o la descarboxilación oxidativa del piruvato forma uno de los principales
sustratos del ciclo de Krebs (Acetil CoA), al presentarse una deficiencia de este, significaría que no
se podría iniciar el ciclo de Krebs así mismo significaría que no se puede oxidar el piruvato de
manera aeróbica, lo que se ve reflejado al aumentarse la presencia de lactato en sangre, orina y
sistema nervioso central en una manera anormal. Sabiendo que solo se producirá energía
anaeróbicamente, por lo tanto, abra menos cantidad de ATP, insuficiente para los requerimientos
básicos del cuerpo así mismo la acumulación de lactato provocará daños en el organismo,
especialmente en el cerebro quien es el órgano de mayor consumo energético de los seres
humanos y el que menos posee reserva. Existen tres formas clínicas principales en que se
manifiesta la deficiencia de PDH:  La forma neonatal grave, con acidemia láctica severa y
refractaria al tratamiento. La afectación neurológica es grave y el

pronóstico es muy reservado. Presentan a veces síndrome de Leigh y/o atrofia cerebral.  La forma
moderada muestra un menor retraso psicomotor y una academia láctica más leve.  La forma
tardía se caracteriza por ataxia o fatigabilidad y/o debilidad muscular. En ocasiones los pacientes
pueden presentar hemiparesia y/o distonía.

¿Cuál es la explicación del tratamiento con tiamina?

La tiamina (vitamina B 1 ) está presente en muchos alimentos. Es esencial para asimilar
(metabolizar) los hidratos de carbono (para producir energía) y para el funcionamiento normal de
los nervios y del corazón. No es una sustancia tóxica. La tiamina es esencial para el metabolismo
del piruvato. La tiamina es importante para el crecimiento, desarrollo y funcionamiento de las
células del organismo. La deficiencia en vitamina B1 ocasiona el beriberi y, durante el embarazo y
otras enfermedades, puede producir neuritis periférica. Además de utilizarse para prevenir
estados carenciales, la tiamina es beneficiosa en el tratamiento de algunos desórdenes
metabólicos asociados a la encefalomiopatía aguda necrotizante, la aminoacidopatía de
aminoácidos ramificados o la acidosis láctica asociada a la deficiencia de piruvato-carboxilasa.
Mecanismo de acción: la tiamina se combina con el adenosín-trifosfato (ATP) en el hígado, los
riñones y los leucocitos para formar el difosfato de tiamina. El bisfosfato de tiamina actúa com
coenzima en el metabolismo de los carbohidratos, en las reacciones de transmetalación y en la
utilización de las hexosas. Sin unas cantidades adecuadas de tiamina, el ácido pirúvico es incapaz
de convertirse en acetil-CoA y, por tanto, no puede entrar en el ciclo de Krebs. La acumulación de
ácido pirúvico en la sangre y su conversión a ácido láctico es la responsable de la acidosis láctica
que se desarrolla en la deficiencia de vitamina B1. La deficiencia de vitamina B1 se manifiesta
también como un síndrome inespecífico caracterizado por malestar general, cefaleas, mialgias y
nauseas, así como manifestaciones cardiológicas (vasodilatación periférica, edema e insuficiencia
ventricular) y neurológicas (neuropatía, ataxia, amnesia retrógrada, falta de concentración, etc.)

manifestaciones clínicas especialmente en algunos pacientes con actividad residual elevada y

debut tardío.

Lactato Neoglucogénesis, Piruvato, Oxalacetato, ATP Ciclo de Mitocondria Krebs OXPHOS PDH es
un complejo multienzimático formado por múltiples copias de tres proteínas catalíticas y otras
estructurales y reguladoras. Requiere, a su vez, diferentes coenzimas para su buen
funcionamiento. Dada su enorme importancia en un punto clave de la producción de energía, está
altamente regulada.

Importancia biológica del ciclo de Krebs

El ciclo de Krebs (también llamado ciclo del ácido cítrico o ciclo de los ácidos tricarboxílicos) es una
ruta metabólica, es decir, una sucesión de reacciones químicas, que forma parte de la respiración
celular en todas las células aeróbicas. En organismos aeróbicos, el ciclo de Krebs es parte de la vía
catabólica que realiza la oxidación de glúcidos, ácidos grasos y aminoácidos hasta producir CO2,
liberando energía en forma utilizable (poder reductor y GTP).

La importancia del ciclo de Krebs está medida por la realización de la respiración celular. Ahora
bien, la respiración celular son reacciones bioquímicas vitales que sufren los compuestos
orgánicosen forma cíclica para ser degradados por oxidación, convirtiéndose en sustancias
inorgánicas y posteriormente en energía celular aprovechable. Gracias a dichos procesos que se
dan con el ciclo de Krebs podemos obtener una respuesta correcta para nuestro sistema.

Describa las reacciones del Ciclo de Krebs.

Reacción 1: Citrato sintasa (De oxalacetato a citrato) El sitio activo de la enzima, activa el acetil-
CoA para hacerlo afín a un centro carbonoso del oxalacetato. Como consecuencia de la unión
entre las dos moléculas, el grupo tioéster (CoA) se hidroliza, formando así la molécula de citrato.

La reacción es sumamente exergónica (ΔG'°=-31.4 kJ/mol), motivo por el cual este paso es
irreversible. El citrato producido por la enzima, además, es capaz de inhibir competitivamente la
actividad de la enzima.
Incluso estando la reacción muy favorecida (porque es exergónica), la citrato sintasa puede ser
perfectamente regulada. Este aspecto tiene una notable importancia biológica, puesto que
permite una completa regulación del ciclo de

Krebs completo, convirtiendo a la enzima en una especie de marcapasos del ciclo.

Reacción 2: Aconitasa (De citrato a isocitrato)

La aconitasa cataliza la isomerización del citrato a isocitrato, por la formación de cis- aconitato. La
enzima cataliza también la reacción inversa, pero en el ciclo de Krebs tal reacción es unidireccional
a causa de la ley de acción de masa: las concentraciones (en condiciones estándar) de citrato
(91%), del intermediario cis- aconitato (3%) y de isocitrato (6%), empujan decididamente la
reacción hacia la producción de isocitrato.

En el sitio activo de la enzima está presente un clúster hierro-azufre que, junto a algunos residuos
de aminoácidos polares, liga el sustrato. En concreto, la unión al sustrato se asegura por la
presencia de un resto de serina, de arginina, de histidina y de aspartato, que permiten sólo la
unión esteroespecifidad del citrato 1R,2S, rechazando la forma opuesta.

Reacción 3: Isocitrato deshidrogenasa (De isocitrato a oxoglutarato)

La isocitrato deshidrogenasa mitocondrial es una enzima dependiente de la presencia de NAD+ y

de Mn2+ o Mg2+.

Inicialmente, la enzima cataliza la oxidación del isocitrato a oxalsuccinato, lo que genera una
molécula de NADH a partir de NAD+. Sucesivamente, la presencia de un ión bivalente, que forma
un complejo con los oxígenos del grupo carboxilo en posición alfa, aumenta la electronegatividad
de esa región molecular.

Esto genera una reorganización de los electrones en la molécula, con la consiguiente rotura de la
unión entre el carbono en posición gamma y el grupo carboxilo adyacente. De este modo se tiene
una descarboxilación, es decir, la salida de una molécula de CO 2 , que conduce a la formación de
α-cetoglutarato, caracterizado por dos carboxilos en las extremidades y una cetona en posición
alfa con respecto de uno de los dos grupos carboxilo.

Reacción 4: α-cetoglutarato deshidrogenasa (De oxoglutarato a Succinil-CoA)

Reacción 6: Succinato deshidrogenasa (De succinato a fumarato)

La parte final del ciclo consiste en la reorganización de moléculas a cuatro átomos de carbono
hasta la regeneración del oxalacetato. Para que eso sea posible, el grupo metilo presente en el
succinato tiene que convertirse en un carbonilo. Como ocurre en otras rutas, por ejemplo en la
beta oxidación de los ácidos grasos, tal conversión ocurre mediante tres pasos: una primera
oxidación, una hidratación y una segunda oxidación. Estos tres pasos, además de regenerar
oxalacetato, permiten la extracción ulterior de energía mediante la formación de FADH2 y NADH.

La primera reacción de oxidación es catalizada por el complejo enzimático de la succinato

deshidrogenasa, la única enzima del ciclo que tiene como aceptor de hidrógeno al FAD en vez de al
NAD+. El FAD es enlazado de modo covalente a la enzima por un residuo de histidina. La enzima se
vale del FAD ya que la energía asociada a la reacción no es suficiente para reducir el NAD+.
El complejo enzimático también es el único del ciclo que pasa dentro de la membrana
mitocondrial. Tal posición se debe a la implicación de la enzima en la cadena de transporte de los
electrones. Los electrones pasados sobre el FAD se introducen directamente en la cadena gracias a
la unión estable entre la enzima y el cofactor mismo.

Reacción 7: Fumarasa (De fumarato a L-malato)

La Fumarasa cataliza la adición en trans de un protón y un grupo OH- procedentes de una

molécula de agua. La hidratación del fumarato produce L-malato.

Reacción 8: Malato deshidrogenasa (De L-malato a oxalacetato)

La última reacción del ciclo de Krebs consiste en la oxidación del malato a oxalacetato. La reacción,
catalizada por la malato deshidrogenasa, utiliza otra molécula de NAD+ como aceptor de
hidrógeno, produciendo NADH.

La energía libre de Gibbs asociada con esta última reacción es decididamente positiva, a diferencia
de las otras del ciclo. La actividad de la enzima es remolcada por el consumo de oxalacetato por
parte de la citrato sintasa, y de NADH por parte de la cadena de transporte de electrones.

Las dos reacciones siguientes son catabólicas, en las que se pierde un grupo - COO en cada paso y
es producido ácido succínico.

12.Represente las reacciones anapleròticas del Ciclo de

Krebs.
Las reacciones anapleròticas o de relleno, constituyen un grupo de reacciones que reponen
metabolitos que han sido agotados en el ciclo de Krebs.

La reacción anapleròticas más importante es la carboxilación del piruvato para formar oxalacetato,
este proceso es catabolizado por la enzima piruvato carboxilasa (utiliza como cofactor a la biotina).
El oxalacetato formado se integra al ciclo para cumplir su papel. Piruvato Carboxilasa

Piruvato + HCO3- + ATP Oxalacetato + ADP

Otra reacción anapleròticas es catabolizada por la enzima málica.

Enzima málica

Piruvato + HCO3- + NADPH Malato + NADP+

Las reacciones de transaminación pueden originar intermediarios del ciclo a partir de los
aminoácidos aspartato y glutamato. Estas reacciones son catalizadas por la alanina transaminasa y
la aspartato transaminasa.

ALAT/GPT

Glutamato + piruvato α-cetoglutarato + Alanina

AST/GOT

Aspartato + Piruvato Oxalacetato + Alanina

Por lo Tanto, el α-cetoglutarato como el oxalacetato puede incorporarse al ciclo.

13.Elabore un esquema detallado del balance energético de

la combustión total de la glucosa, indicando las reacciones
implicadas.
En el ciclo de de Krebs, 2 moléculas de acetil-CoA se oxidan produciendo 2 ATP, 2 FADH y 6 NADH.
En total rendirán 24 ATP.

En la transformación de 2 moléculas de piruvato en 2 de Acetil-CoA se liberan 2 NADH que

rendirán 6 ATP.

Caso clínico: Deficiencia del Complejo PDH sensible a la Tiamina

Un niño varón, hijo de padres sin parentesco, nació a término después de una gestación y un parto
normales. A los 2 meses de edad fue trasladado al Hospital porque no ganaba peso se mostraba
hipotónico. Una muestra de sangre reveló acidosis láctica. La relación entre lactato (10,2 mM.) y
piruvato (0,79 mM.) en sangre era de aproximadamente13:1. El valor de alanina era muy elevado
(1, mM). Estos resultados sugerían un defecto genético en el metabolismo del piruvato. El
tratamiento con tiamina (100 mg/d; 25 mg/kg al día) redujo el valor de lactato en plasma a 5,9
mM. A los 5 meses de edad, el lactato en sangre había aumentado a 6,9 mM, de manera que se
incrementó la dosis diaria a 50 mg/kg. Después de unos meses el lactato en plasma aumentó de
nuevo a 9 mM y a los 9 meses se incrementó la dosis de tiamina (600 mg/d; 100 mg/kg y día), tras
lo cual el nivel de lactato cayó a 3 mM y la concentración de alanina a 0.33 mM.

Primeramente, abordaremos de que es esta patología

¿Qué es la deficiencia de piruvato deshidrogenasa?

Es una de las enfermedades mas comunes del metabolismo energético causada por un defecto de
las enzimas piruvato deshidrogenasa (PDH), que interfiere es un punto clave para la producción de
energía, la entrada al ciclo de Krebs.
¿Qué consecuencias tiene la deficiencia del PDH?
La deficiencia de PDH provoca un bloqueo de la vía de oxidación aeróbica de piruvato que impide
su transformación en Acetil-CoA para iniciar el ciclo de Krebs. Por ello produce una acumulación
de lactato en sangre, orina y sistema nervioso central, se acumula también la alanina en la sangre
y hay una disminución de energía.

Los niños con deficiencia de PDH a menudo experimentan un retraso en el desarrollo, retraso
mental y convulsiones, por esto el niño no ganaba peso.

Además, que la acumulación de piruvato contribuye a la producción de lactato en exceso y los

niveles en sangre a veces alto de amoniaco.

Para proporcionar a los tejidos con la energía las células deben de convertir los alimentos que
comemos en energía celular conocida como ATP, en este proceso requiere una serie coordinada
de las reacciones enzimáticas, y un defecto en una o mas de estas enzimas puede comprometer
seriamente la función celular, esta deficiencia afecta al metabolismo de la glucosa en los pacientes
y puede conducir a niveles tóxicos de acidez en la sangre y daño neurológicos.

¿Por qué eran anormalmente altas las concentraciones de

lactato y alanina?
Los niveles elevados de lactato en sangre indican que hay falta de oxigeno es decir hipoxia o la
presencia de otras enfermedades en las que el lactato se produce en exceso, en este caso el
oxigeno era insuficiente y la deficiencia de

PDH dio lugar a una acumulación de piruvato fuera de la mitocondria que se convierte en lactato,
el exceso de lactato y la producción de acido láctico aumentan la acidez de la sangre y pueden dar
lugar a acidosis metabólica.

La alanina normalmente se encuentra en niveles elevados en el hígado ya que esta le permite que
los nutrientes sean absorbidos y que se produzca la energía, pero existen casos en el que nos
niveles de alanina son elevados en el torrente sanguíneo, ya que en el hígado tiene una lesión o
inflamación y esta alanina va al torrente sanguíneo.

¿Cuál es la explicación del tratamiento con Tiamina?

Generalmente a como lo hemos dicho, los tratamientos apuntan a estimular la actividad
enzimática PDH, proporcionar cofactores de la enzima como la tiamina, y reducir la acidosis, la
administración de tiamina en altas dosis puede activar el piruvato deshidrogenasa y por esta vía
revertir el cuadro de acidosis láctica ya que la tiamina es cofactor de la reacción que convierte el
piruvato en Acetil CoA.

  Regulación del ciclo de Krebs

Muchas de las enzimas del ciclo de Krebs son reguladas por retroalimentación negativa (feedback),
por unión alostérica del ATP, que es un producto de la vía y un indicador del nivel energético de la
célula. Entre estas enzimas, se incluye el complejo de la piruvato deshidrogenasa que sintetiza el
acetil-CoA necesario para la primera reacción del ciclo a partir de piruvato (mediante una reacción
irreversible), procedente de la glucólisis o del catabolismo de aminoácidos gluncogénicos (es decir,
los 20 aminoácidos estándar exceptuando lisina y leucina). Esta enzima es regulada por inhibición
por producto por el NADH y acetil-CoA, y modificación covalente de la enzima por fosforilación.11
También las enzimas citrato sintasa, isocitrato deshidrogenasa y α-cetoglutarato deshidrogenasa,
que catalizan las tres primeras reacciones del ciclo de Krebs, son inhibidas por altas
concentraciones de ATP. Esta regulación frena este ciclo degradativo cuando el nivel energético de
la célula es bueno.

Algunas enzimas son también reguladas negativamente cuando el nivel de poder reductor de la
célula es elevado. El mecanismo que se realiza es una inhibición competitiva por producto (por
NADH) de las enzimas que emplean NAD+ como sustrato. Así se regulan, entre otros, los
complejos piruvato deshidrogenasa y citrato sintasa.