Informe de Laboratorio #3

Practica 3.
Preparación de medios de cultivos
Profesora - Candelaria Mercedes Madrid Miranda
Jhoel Andres Quiroz Ortega (1004991311)
Nathalia Sofía Otálora Marín (1000861362)
Curso Microbiología Veterinaria, Grupo A, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad

de Pamplona
1. RESUMEN de cultivo mientras se reconocer la
importancia de tener en cuenta los

Los microrganismos requieren ciertos
factores de humedad, fertilidad, pH y
nutrientes básicos como las fuentes de
transparencia, adicional a las
carbono y nitrógeno, materiales metálicos
características que presentan según la
o no metálicos, vitaminas, agua y energía
clasificación que tenga por su estado
junto con factores físicos adecuados para
físico (Sólidos, semisólidos, líquidos o
el desarrollo y mantenimiento de la vida
bifásico), su propósito (Medios
de los mismos, comprendiendo que las
enriquecidos, selectivos, diferenciales o
necesidades varían según el tipo de
para identificación), su naturaleza o
microorganismo. En el desarrollo del
composición (Naturales, sintéticos o
presente laboratorio se busca aplicar tales
vivos) por lo que su almacenamiento y
conocimientos en los diferentes medios
conservación será acorde a los mismos.
“Formando líderes para la construcción de un nuevo país en paz”

Universidad de Pamplona
Pamplona - Norte de Santander - Colombia 1
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La preparación de estos medios consiste 2. OBJETIVOS
en procesos como la disolución del medio - Reconocer los diferentes medios de
de cultivo deshidratado, la esterilización, cultivo existentes para el crecimiento
el vertido en placa y el posicionamiento de microorganismos aplicando y
de los tubos de agar inclinado y sin fortaleciendo los conceptos básicos
inclinación los cuales son procesos claves de nutrición por medio de la
en el trabajo de rutina e investigación preparación de pequeños grupos
bacteriológica para obtener óptimos teniendo en cuenta las instrucciones
resultados, sin embargo, pueden dadas en la etiqueta y el respectivo
presentarse defectos en la manipulación y almacenamiento que debe tener según
preparación por apelmazamiento de los el cultivo a realizar.
medios de cultivo deshidratados, - Identificar en que consiste el test de
desviación del pH, turbidez, esterilización ecométrico y reconocer
contaminación, entre otros por lo que es que características presentan todos
de gran importancia ser cautelosos, los diferentes medios de cultivos y
informarse y basarse instrucciones dadas aquellos que no deben ser
en las etiquetas. esterilizados con ayuda de una
exhaustiva consulta donde se
comprenda a la vez como se realizan
y que se hace con ellos.

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3. INTRODUCCIÓN microorganismos. Estos medios son
esenciales en el laboratorio ya que un

Los microorganismos son los seres
control en su fabricación,
más abundantes de la tierra (como el
preparación, conservación y uso,
suelo, agua y el aire), que participan
asegura la exactitud, confiabilidad y
de forma vital en los ecosistemas en
reproducibilidad de los resultados
interacción con plantas, animales y
obtenidos. En los laboratorios se
así mismo el hombre. Sandoval et al.,
utilizan diferentes tipos de medios de
(1). Estos microrganismos pueden
cultivo que pueden ser preparados en
llegar a vivir en condiciones extremas
forma líquida o en forma sólida en
de pH, temperatura y tensión de
donde usualmente para preparar un
oxígeno, logrando así colonizar una
medio sólido, se parte de un medio
amplia diversidad de nichos
líquido al que se le añade un agente
ecológicos.
solidificante como el agar. (2)
Los medios de cultivo son una mezcla
Los medios de cultivo pueden ser
de nutrientes los cuales en
clasificados de la siguiente manera:
concentraciones adecuadas y en
condiciones físicas óptimas, permiten -Según su estado físico como líquidos
el crecimiento de los (Usualmente se denominan caldos ya

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que contienen los nutrientes disueltos naturales o complejos (Constituidos
en agua), sólidos (Se pueden preparar por sustancias complejas de origen
a partir de medios líquidos a los animal o vegetal, algunos minerales y
cuales se les añaden agentes otras sustancias), medios sintéticos o
solidificantes como agar, gelatina o químicamente definidos (Se preparan
sílica gel), semisólidos o bifásicos a partir de ingredientes químicamente
(Contiene fase sólida y fase liquida). puros y por lo tanto se puede conocer
exactamente su composición
Nota: Los medios de cultivo, ya sean
cualitativa y cuantitativa) o vivos
preparaciones sólidas, semisólidas o
(Contienen células u organismos
líquidas, constituyen el micromundo
vivos).
de los microorganismos en
condiciones de laboratorio, - Según sus propósitos de uso pueden
intentando ser un reflejo de su hábitat ser medios de enriquecimiento (Son
natural en relación con la satisfacción cultivos en medio líquido que resulte
de sus más vitales y principales en un incremento en el número de un
necesidades como ser vivo (3). tipo dado de microorganismo en
relación con el número de otros tipos

- Según la naturaleza de sus
de microorganismos que puedan estar
constituyentes habrá medios

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en el inóculo), medios selectivos (Se microorganismos logrando así una
diferencian por ser medios sólidos y correcta investigación para alcanzar
están diseñados para el aislamiento de un propósito y uso. En el área
microorganismos específicos), industrial, el uso de estos medios
medios diferenciales (No contienen permite impulsar el crecimiento de
sustancias inhibidoras, permiten el algunos microorganismos que serán
crecimiento de muchos tipos de indispensables en la producción y
microorganismos y se utilizan para la conservación de alimentos.
identificación de los
Uno de los factores a tener en cuenta
microorganismos) o medios
para la conservación de cultivos
selectivos diferenciales (Combinan
microbianos es que se puede realizar
en un mismo medio las características
de dos maneras, congelándolos o
de ser selectivo y diferencial).
deshidratándolos.
La preparación de estos medios como,

Para conservar por el método de
la disolución del medio de cultivo
deshidratación consiste en la
deshidratado, el vertido en placa,
eliminación por vaporización o
entre otros, son procesos que
sublimación la mayor parte del agua
permitirán garantizar una
de un producto. (4)
diferenciación e identificación de los

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Para conservar el medio por 4. PROCEDIMIENTO
congelación resulta muy útil para la
conservación de fermentados.
La mayor tasa de destrucción
bacteriana se observa inmediatamente
tras la congelación, después se reduce
notablemente y llega a estabilizarse
durante largos períodos de tiempo.
Por eso, aunque el número de
supervivientes disminuya, la
congelación es un método efectivo
para mantener la viabilidad de las
bacterias.
Cuanto menor sea la temperatura de
almacenamiento, mayor será la
supervivencia de las bacterias. (4)

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5. RESULTADOS
medios artificiales de laboratorio, por lo
Video 1: Preparación de medios de cual, se usan animales vivos.
cultivo
Los medios de cultivo naturales son
Un medio de cultivo es un sistema natural aquellos que incluyen células vivas como
o artificial que permite el crecimiento de embriones de pollo o los medios con
los microorganismos, la composición bacterias parabacteriofagos
precisa dependerá de la especie a cultivar

los medios de cultivos artificiales son
debido a que las necesidades
también denominados sintéticos son los
nutricionales varían considerablemente.
medios elaborados en el laboratorio,
Hay microrganismos muy poco exigentes aunque los medios de cultivo artificiales
que crecen en medios normales en el se pueden preparar a partir de sus
laboratorio y hay microorganismos muy componentes individuales, estos se
exigentes, que necesitan determinadas pueden adquirir comercialmente como
sustancias como vitaminas, sueros o medios deshidratados a los que solo hay
sangre para crecer. que añadir la cantidad de agua necesaria,
el fabricante indica la composición, la

Existen microorganismos tales como
caducidad y la cantidad que debe pesarse
treponema pallidum o mycobacterium
por cada litro a preparar e incluso como
leprae, que no se pueden cultivar en
debe esterilizarse.

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Los medios líquidos no llevan agentes Si se trata de un medio comercial
solidificantes y sus componentes se deshidratado, solo hay que tener en
disuelven en agua generalmente cuenta la cantidad que el fabricante
destilada. recomienda, para obtener un litro de
medio en función al volumen que

Los medios solidos llevan un agente
vayamos a preparar se pesa la cantidad
solidificante siendo más utilizado el agar,
correspondiente y luego se añade el agua,
un polímero sulfatado extraído del alga
si preparamos el medio a partir de sus
gelidium, una vez que se funde en agua
componentes es conveniente ir añadiendo
hirviendo puede enfriarse hasta 40°C –
una pequeña cantidad de agua entre
45°C sin endurecerse y por debajo de esta
compuesto y compuesto y agitar hasta su
temperatura, suele solidificarse.
completa disolución, finalmente se añade
Una vez leída la composición del medio
el resto de agua y se ajusta el pH
y determinada la cantidad del mismo que
adecuado con soluciones tamponadas.
queremos preparar, seleccionamos un
En los medios deshidratados el pH ya
frasco o un matraz con capacidad
viene ajustado si el medio es sólido el
adecuada, siempre es recomendable usar
agar se añade de último lugar
recipientes con un volumen algo mayor
que la cantidad de medio que se pretende Los medios líquidos se reparten en tubos
elaborar. o matraces con ayuda de pipetas.

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Para preparar tubos con medios sólidos, 121 grados centígrados durante 20
primero hay que fundir el agar, hirviendo minutos, los autoclaves deben tener un
el medio, después repartir la cantidad termostato y un manómetro, así como una
adecuada a cada tubo con la ayuda de válvula de seguridad y un sistema de
pipetas, finalmente los tubos o matraces desconexión rápida.
se tapan con algodón graso y se recubren

Cuando en medios solidos se prepara en
de papel de aluminio para su
frascos con tapón de rosca hay que
esterilización en el autoclave. Para
dejarlo abierto, aproximadamente un
esterilizar los medios de cultivo
cuarto de vuelta para permitir la entrada
generalmente se usa el autoclave, un
del vapor, es importante no abrir jamás el
sistema cerrado de volumen constante
autoclave si el manómetro no está a 0.
donde se utiliza vapor de agua que se
Una vez que los medios han sido
somete a una presión elevada, una
esterilizados si se va a verter en cajas de
atmosfera lo que hace que el agua alcance
Petri se deben dejar enfriar, para ello es
una temperatura superior a los 100°C,
conveniente dejar los frascos o matraces
causando la desnaturalización de
en un baño a 50°C aproximadamente. Las
enzimas, lo que conlleva a la muerte de
placas están estériles por lo que la
los microorganismos y la destrucción de
operación de llenado hay que realizarlas
las esporas. Habitualmente se esteriliza a

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en condiciones asépticas, bien en una 2 Video: Preparación de medios
cabina de flujo laminar o bien, cerca de la

-En primer lugar, pesaremos la cantidad
llama de un mechero La cabina de flujo
necesaria correspondiente al volumen
laminar, es un sistema que utiliza filtros
medio que queremos elaborar siguiendo
de alta eficacia de retención de partículas
las instrucciones del fabricante.
del aire, filtros EPA capaces de eliminar
-Una vez pesado verteremos el medio
el 99,97% de las partículas de 0,3 micras
deshidratado en el matraz y a
de diámetro. Las cabinas fuerzan el aire a
continuación añadiremos el volumen de
través de estos filtros creando una cortina
agua destilada requerida.
vertical u horizontal de aire estéril
-Si estamos realizando un medio liquido

Los tubos de medio liquido se dejan
agitaremos hasta su completa disolución.
enfriar en una gravilla, los tubos con
Si es un medio solido que contiene agar,
agarre se dejan solidificar a temperatura
agitaremos y calentaremos la mezcla
ambiente en la posición requerida
hasta que el agar se funda.
horizontal o inclinada, una vez
solidificadas las placas se conservan en -Notaremos que la turbidez ira
posición invertida. resultados de Carmen desapareciendo conforme se vaya
Vargas, Rodriguez, Merchan, . . . (2012) calentando la mezcla, el calentamiento
del medio puede realizarse ayudándonos

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de un termoajitador magnético o usando manejado sin quemadura, quitaremos el
un trípode y un mechero bunsen. papel de plata y el tapón de algodón y
siempre cerca de la llama iremos

-Hay que tener cuidado de retirar el
vertiendo el contenido en las placas
medio cuando llegue a ebullición, una vez
fundido el agar colocaremos un tapón de -Pasado un tiempo las placas se habrán
algodón graso y lo recubriremos con enfriado y solidificado. (4)
papel de plata
-A continuación, lo llevaremos a la
autoclave para su esterilización, una vez
autoclavado el medio sólido,
procederemos al reparto en cajas de Petri
estériles, las placas están dispuestas
alrededor de la llama, de manera que
podamos acceder a ellas de forma
cómoda.
-Esperaremos que el medio se haya
enfriado lo suficiente para que
manteniéndose liquido pueda ser (5) (imagen 1 – Cultivos de bacterias
https://www.ugr.es)

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Ejemplos de medios de cultivo sulfuro de hierro negro. (6)
esterilizados:
En su preparación vemos que se debe
-Un medio de cultivo que realiza uso de suspender 65 g / litro para luego
autoclave es Agar Hierro Triple Azúcar dispensarlo en tubos de ensayo y
(TSI-Agar), este es un medio de cultivo esterilizarlo en autoclave (15 min a 121 °
propuesto por SULKIN y WILLETT C a 15 Libras de presión), se procede a
(1940) y modificado por HAJNA (1945) dejar que el medio se solidifique para dar
para identificar Enterobacteriaceae, su tubos de agar inclinados. El pH debe estar
mecanismo de acción es partir de la entre 7,4 ± 0,2 a 25 ° C y el medio
degradación del azúcar y la producción preparado debe ser transparente y rojo,
de ácido que lo acompaña ya que son además de esto la incubación es hasta 48
detectadas por el indicador de pH rojo horas a 35 ° C aeróbicamente. (6)
fenol, que cambia su color de rojo

-Otro ejemplo puede ser el medio de Agar
anaranjado a amarillo mientras que al
tributirina este fue propuesto por
alcalinizarse se vuelve rojo intenso. El
ANDERSON (1939) para la detección y
tiosulfato se reduce a sulfuro de
enumeración de microorganismos
hidrógeno por varias especies de
lipolíticos en alimentos y otros
bacterias, el sulfuro de hidrógeno
materiales, también se puede utilizar para
reacciona con una sal de hierro para dar
la detección de lipasa en diversas

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especies bacterianas como estafilococos finalizamos vertiendo en placas, dejando
(INNES 1956), clostridios (WILLIS que estas se solidifiquen rápidamente. El
1960), Pseudomonas, flavobacterias pH esta entre 7,5 ± 0,2 a 25 ° C y las
marinas (HAYES 1963), etc. Su modo de placas son turbias y amarillentas. Es
acción se da gracias a que el medio de importante aclarar que el medio de
cultivo contiene tributirina como reactivo cultivo debe contener una emulsión
y la degradación de este compuesto da uniformemente turbia. Si la emulsión se
lugar a zonas claras que rodean las separa, la eficacia del medio de cultivo se
colonias lipolíticas en el medio de ve afectada. (6)
cultivo, por lo demás turbio. (6)

Ejemplos de medios de cultivo no
En su preparación se suspende 20 g / litro, esterilizados:
se añade 10 ml de tributirina neutra / litro

-El medio de cultivo que escogimos es el
y mezclamos uniformemente, luego se
m-ENDO Agar LES el cual es usado para
esteriliza en autoclave (15 min a 121 ° C
el recuento de coliformes en donde se
a 15 Libras de presión). Se procede a
utiliza en el procedimiento estándar de
agitar con frecuencia (emulsificación de
filtro de membrana de coliformes totales
tributirina) mientras se enfría a al menos en los métodos estándar para el análisis
50 ° C (estabilización de la emulsión) y de agua y aguas residuales. Este sigue el

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procedimiento de filtración por una -Otro medio es el MSRV Medium Base
membrana de dos pasos que utiliza caldo modificado el cual es un medio
de sulfato de laurilo como semisólido utilizado para el aislamiento
enriquecimiento preliminar que da como de Salmonella de alimentos y otros
resultado recuentos de coliformes más materiales, nos dicen que el principio de
altos (6). detección se basa en la motilidad de
Salmonellae para migrar al medio

Encontramos que para su preparación se
semisólido formando halos de
debe: Suspender 51 g en 1 litro de agua
crecimiento opacos y que la motilidad de
destilada o desionizada que contenga 20
otros microorganismos es inhibida en
ml de etanol al 96% el cual se debe
gran medida por agentes selectivos
calentar a ebullición para disolver
(cloruro de magnesio, verde de malaquita
completamente, en lugar de llevar a la
y novobiocina) y la temperatura de
autoclave, se debe dejar enfriar a 45-50 °
incubación (6).
C, se dispensan cantidades de 4 ml en las
cajas de Petri y se dejan solidificar a 50 ° Respecto a su preparación se debe
C y finalmente se vierten en recipientes, suspender 15,8 g en 500 ml de agua
estando el pH: 7,2 ± 0,2 a 25 ° C y desmineralizada calentándola en un baño
obteniendo placas opalescentes y rojas de agua hirviendo o en vapor hasta que el
(6).

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medio se disuelva por completo, no se lugar sin flujo de aire 1 hora (sin tapa) a
debe esterilizar en autoclave ni no temperatura ambiente (6).
sobrecalentar, se procede a disolver el

6. ANALISIS DE RESULTADOS
liofilizado de 1 vial de Suplemento
Análisis de resultados realizados por
Selectivo MSRV agregando 1 ml de agua
Nathalia Sofía Otálora Marín
destilada estéril y se agrega la solución al
-Acorde a lo visto en los videos y lo
medio enfriado a 45-50 ° C, se debe
planteado en clase puedo decir que hay
mezclar suavemente y verter en platos. El
una evidente importancia respecto al
medio preparado debe ser transparente y
conocer cada factor que influye en el
de color azul brillante y puede
medio de cultivo ya sean características
conservarse en el frigorífico entre +2 ° C
propias del cultivo como el tipo, el estado
y +8 ° C durante un máximo de 2
físico en el que se desea, la especie y su
semanas. Las placas deben secarse bien
composición, adicional al manejo de la
antes de su uso (6).
preparación como el modo de realizarlo,
Para el secado de platos debe ser en un los sistemas a implementar, las
banco limpio con flujo de aire donde se cantidades e incluso implementos y
maquinarias a utilizar junto con los

retire las tapas y deje secar durante 15-20
factores ambientales ya sea pH,
minutos sin secar en exceso, luego en un

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temperatura, presión y demás, es claro la composición, los microorganismos a
que estos deben tener estas en cuenta ya tratar tal vez no son resistentes e incluso
que de no seguir las indicaciones, agregar podría provocar su eliminación o
las cantidades inadecuadas e ignorar la degradación y en este caso se desean
razón de ser de cada paso la eficacia del estudiar o evaluar por lo que no es apto
medio de cultivo se vería afectada, mientras que en el caso de los ejemplos
además en el caso de no conocer las de cultivos que se esterilizar veo que si
propiedades de los materiales y envases a necesitan degradar parte de sus
utilizar junto a las condiciones a las que componentes para obtener los resultados
se pueden exponer podrían causar deseados viendo por ejemplo que en el
grandes accidentes en el laboratorio. Agar Hierro Triple Azúcar (TSI-Agar)
-En cuanto a medios de cultivos a los azucares en el autoclavado provoca
esterilizar y aquellos que no se esterilizan hidrólisis por lo que podría afectar para la
puedo decir que hay varias solidificación pero en este caso se
consideraciones y diferencias a tener en contrarresta con la producción de ácido
cuenta, por ejemplo, considero que los que lo acompaña, cabe aclarar que en este
medios que no se esterilizan es muy caso no es tan estricto el evitar la
probablemente que se deba a que los presencia de otros microorganismos en el
efectos del calor húmedo puedan cambiar cultivo ya que en si presentan un

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indicador de pH rojo fenol, pero por la modo de enfriarlos por ejemplo en el
otra parte los cultivos sin esterilizar para Agar tributirina se debe agitar con
evitar contaminación pienso que frecuencia mientras se enfría, se podría
disminuyen esas posibilidades utilizando decir que influyen también el tiempo
los elementos esterilizados, el agua según el medio, el volumen e incluso los
desmineralizada o destilada ,procesos recipientes en los que se sirven estos.
como la ebullición, la filtración e incluso

Análisis de resultados por: Jhoel
en el caso del m-ENDO Agar LES se hace
Andres Quiroz Ortega
uso del etanol al 96% que podría influir
Según lo visualizado en los 2 videos de
en cuanto a la prevención del desarrollo o
preparación de medios de cultivos, un
inhibición de microorganismos no
medio de cultivo, es un sistema que
deseados , algo que logro identificar que
permite el crecimiento de los
tienen en común todos los cultivos
microorganismos, si su desarrollo es en
utilizados de ejemplo es que para lograr
un entorno artificial esto quiere decir que
estar en estado de solificacion el pH se
sus exigencias para reproducción son
debe ajustar o debe estar entre cierto
bajas o que estos se pueden adquirir o
rango además de que en todos los casos
preparar a partir de sus componentes
se deben dejar enfriar a temperaturas
individuales como el agar mientras que
entre los 45-50 ° C diferenciándose en el

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en uno natural son al momento de Añadiendo el hecho que poseen un
reproducción celular ya que requieren agente solidificante siendo más
factores específicos tales como carbono, utilizado el agar, que cuando se funde
energía, nitrógeno, fósforo, factores de a 40°C – 45°C permanece en estado
crecimiento, entre otros. líquido, pero si su temperatura
disminuye este se gelidifica o

Estos medios tanto naturales como
solidifica. (7)
artificiales se pueden sub clasificar en 2:
Según el video de la práctica se pudo

1. Medios Líquidos: los cuales se
observar que el medio se retiró cuando
utilizan para favorecer el desarrollo
llego a su punto de ebullición ya que el
bacteriano de células estresadas.
agar fue fundido completamente para
Además, que sus componentes
luego para ser llevado al autoclave para
generalmente se disuelven en agua
que este fuese esterilizado y vertido en las
destilada.
cajas de Petri para el reposo y
2. Medios Sólidos: Para obtener
visualización de resultado del medio.
bacterias aisladas por la formación de
mientras que en los medios de cultivos
colonias sobre la superficie del medio
esterilizados propuesto por los autores
de cultivo y para el estudio de la
SULKIN y WILLETT para identificar
morfología de las colonias.
Enterobacteriaceae su mecanismo de

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acción fue partir de la degradación del Según el documento Microbiology
azúcar y la producción de ácido que posee Manual 12th Edición por parte de m-
ya que son detectadas por el indicador de ENDO Agar LES usa el recuento de
pH rojo fenol, el cual cambia su color de coliformes donde dispone el
rojo anaranjado a amarillo, mientras que procedimiento de filtro de membrana en
al alcalinizarse se vuelve rojo intenso. En los métodos estándar para el análisis de
su preparación vemos que se debe agua y aguas residuales siguiendo el
suspender 65 g / litro para luego método de filtración por membrana de
dispensarlo en tubos de ensayo y dos pasos que utiliza caldo de sulfato de
esterilizarlo en autoclave (15 min a 121 ° laurilo como enriquecimiento preliminar
C a 15 Libras de presión), mientras que que da como resultado recuentos de
en los videos de referencia se usan coliformes más altos. Este suspende 51 g
generalmente una temperatura de 121°C en 1 litro de agua destilada que contenga
durante 20 minutos con 15 libras de 20 ml de etanol al 96% el cual se calentó
presión. a ebullición para que se disolviera
completamente y en vez de ser calentado

Al observar esta diferencia de 5 minutos
a 40°C -45°C en el autoclave, este se debe
no demarcamos diferencias en resultados
enfriar a la misma temperatura y se deja
“solidificados”
solidificar a 50°C siendo vertido el

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resultado a 25°C obteniendo un pH 7,2 ± 7. CONCLUSIONES
0,2 con placas opalescentes y rojas, pero, - Encontramos diferentes tipos de
si lo comparamos con el medio MSRV medios de cultivo, para algunos para
médium base utilizado para el microorganismos exigentes ya que, si
aislamiento de Salmonella de alimentos y no tienen las condiciones o medios
otros materiales, su preparación se adecuados, estos no se podrán
suspende en 15,8 g en 500 ml de agua reproducir y otros de exigencias
desmineralizada “no destilada en este bajas, que su reproducción es fácil de
caso” calentándola en un baño de agua controlar y/o Aumentar, además de
hirviendo o en vapor hasta que el medio conocer los 2 principales medios de
se disolviera por completo, disolviendo el conservación que son deshidratación
liofilizado de 1 vial de suplemento y congelación para futuras
selectivo MSRV agregando 1 ml de agua observaciones sin necesidad de
destilada esteril y agregando la solución preparar nuevamente otro cultivo.
al enfriado a 45° - 50°C mezclando - -Se logran identificar las
suevemente y virttiendo en plato con un características diferenciales entre los
resultado transparente y de color azul medios de cultivo esterilizados y no
brillante esterilizados comprendiendo que,
según la finalidad, composición y las

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favorecer el crecimiento y
- características propias de cada
desarrollo de un microorganismo,
especie a tratar son expuestos a
esta característica se determina a
respectivos condiciones y procesos
través de la comparación que se
con el fin de obtener los resultados
realiza entre el medio por evaluar
deseados, reconocemos a su vez en
y un medio control (Soler, 2006).
este caso como actúan
Otro aspecto es la Selectividad
contrarrestando aquellas diferencias
referida a la resistencia que
para lograr algo como la
genera el medio de cultivo a la
solidificación, la inhibición o
colonización por
contaminación de microorganismos
microorganismos interferentes o
no deseados y demás.
indeseados (Doyle, et al., 1997 ;
Villalobos et al.,2007), No
8. CUESTIONARIO
obstante, puede ser utilizado en la
a. Consultar en que consiste el test
valoración de desinfectantes
de esterilización ecométrico
como técnica semicuantitativa.
R/ El método ecométrico fue
(11)
descrito por Mosselt et al., 1983,
Este establece la eficiencia con la
y que permite medir la
cual un medio de cultivo sirve
Productividad que es la capacidad
para recuperar una cepa, mediante
de los medios de cultivo para
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la comparación que se realiza
entre el medio a evaluar y un
medio control. Esta técnica evalúa
tanto la sensibilidad de los medios
a la colonización por los

(imagen 2 – Método ecométrico de
microorganismos buscados
Mossel – PDF)
(productividad) como también la
resistencia a la colonización por para determinar mediante una forma
las cepas que interfieren. (7) (8) semi-cuantitativa la capacidad de un
medio de recuperar (promover el

Se realiza tomando un medio de
crecimiento) de una cepa u organismo
cultivo sólido y se divide en
de interés.
cuatro cuadrantes. Se realizan
A cada estría de cada cuadrante se le
cinco estrías en cada cuadrante y
da un valor de 0,2. A la estría central
una en el centro de los cuadrantes
se le da un valor de uno. No obstante,
puede ser utilizado en la valoración de
desinfectantes como técnica
semicuantitativa
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c. Complete la tabla
R/
Medios de cultivo Composición Preparación Uso Interpretación
1. Suspender 46 g / litro,
calentar brevemente hasta
que hierva y enfriar
rápidamente.
-No esterilice en autoclave.
2. Antes de usar, agregue

20 ml de solución de yodo /
yoduro de potasio / litro
-Peptona de caseína Para el enriquecimiento
2.5 3. Si se desea 10 ml de una selectivo de salmonelas a -El medio es turbio y
-Peptona de carne 2.5 solución verde brillante al partir de diversos verde con sedimento
-Mezcla de sales 0.1% / litro y si se requiere materiales. blanco (calcio
Caldo biliares 1.0 0.04 g de novobiocina / carbonato).
tetrationato -Carbonato de calcio litro. El tetrationato y el exceso
- Tetrathionate 10.0 -Evite cualquier de tiosulfato (PALUMBO -Los cultivos
Broth, Base -Tiosulfato de sodio calentamiento adicional. y ALFORD 1970) resultantes se someten
30.0 suprimen los luego a más pruebas.
(Merk, 2000) 3. Al dispensar el medio microorganismos
También para preparado, asegúrese de coliformes y otras -Inocular masivamente
agregar: que cualquier precipitado bacterias acompañantes, el medio de cultivo con
-Yoduro de potasio formado esté suspendido mientras que todas las el material de muestra
5.0 uniformemente. bacterias reductoras de (18-24 horas a 35-37 °
-Yodo 6.0 tetrationato pueden C o 43 ° C
4. Preparación de la multiplicarse más o respectivamente)
Si es necesario: verde solución de yodo / yoduro menos normalmente en (BÄNFFER,1971)
brillante 0.01. de potasio: Yodo 6 g; este medio.
yoduro de potasio 5 g; agua
destilada 20 ml.
5. El caldo listo para usar

debe prepararse y usarse el
mismo día.

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1. Después de la primera
apertura del frasco, el
contenido se puede utilizar
hasta la fecha de caducidad
si se almacena seco y bien
cerrado entre +15 y + 25 °
C.
-Proteger de la luz.
- Las colonias de
2. Suspenda 47,5 g / litro, Salmonella a menudo
mezcle el precipitado muestran un
resultante para obtener una ennegrecimiento
suspensión uniforme, vierta después de 18 horas de
placas para obtener capas incubación, el brillo
-Extracto de carne espesas (25 ml). metálico aparece varias
5.0 -No esterilizar en horas después,
-Peptona de carne autoclave. dependiendo de la edad
10.0 -pH: 7,6 ± 0,2 a 25 ° C. del medio.
Bismuto sulfito -D (+) glucosa 5.0
- -Fosfato de 3. El medio preparado es El verde brillante y el -Esto debido a la
Bismuth Sulfite hidrógeno disódico turbio y de color verde. bismuto inhiben en gran formación de sulfuro
Agar 4.0 medida la flora bacteriana de hierro. La reducción
-Sulfato de hierro 4. El medio recién acompañante. de iones de bismuto a
(Merk, 2000) (III) 0,3 preparado es fuertemente bismuto metálico
-Verde brillante inhibidor y, por lo tanto, es produce un brillo
0.025 especialmente adecuado metálico alrededor de
-Indicador de sulfito para muestras muy las colonias (McCOY
de bismuto 8.0 contaminadas. 1962).
-Agar-agar 15.0 El brillo metálico de las
colonias generalmente solo -Inocular esparciendo
aparece después de 48 finamente la muestra o
horas de incubación. el material de un
cultivo enriquecido en
5. Después de 4 días de la superficie del medio
almacenamiento a 4 ° C, la (hasta
acción inhibidora del aproximadamente 48
medio no es tan fuerte y horas a 35 ° C
entonces debe usarse para aeróbicamente).
muestras menos
contaminadas; en este caso,
el brillo metálico aparece
después de un período de
incubación más corto.
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1. Suspenda 37,5 g en 0,6
litros demin. agua, si es
necesario añadir 12 ml de - Crecimiento rápido
glicerol, mezclar, en forma de "césped"
esterilizar en autoclave (15 húmedo y bastante
min a 121 ° C). abundante.
2. Enfriar a unos 50 ° C, -Mycobacterium

añadir 1 litro de tuberculosis tipo
homogeneizado de huevo humanus (varianteR)
entero preparado a partir de En medio que contiene
Dihidrogenofosfato huevos de gallina frescos glicerol, el crecimiento
de potasio 2,5 en condiciones estériles; de la colonia es
-Sulfato de magnesio revuelva para obtener una "eugónico", es decir,
Medio Lowestein heptahidratado 0,24 mezcla homogénea abundante, elevado,
Jensen -Dicitrato de tri- evitando la formación de desmenuzable, seco,
- magnesio 14-hidrato burbujas. Medio propuesto por generalmente
TB Medium Base 0,6 LÖWENSTEIN (1931) y amarillento (forma de
acc. to -L-asparagina 3.6 3. Dispensar en tubos de modificado por JENSEN ombligo). Este patrón
LÖWENSTEIN- - Harina de papa 30.0 ensayo estériles y dejar (1932) para la detección y de crecimiento se
JENSEN -Verde malaquita 0.4 coagular en posición ensayo de resistencia de desarrolla mal en un
inclinada calentando bacilos tuberculosos. medio que no contiene
(Merk, 2000) También para durante 45 minutos a 85 ° glicerol.
agregar: C en un inspirador saturado
-Glicerol 12 ml con vapor de agua o con - Tipo bovinus
-Homogeneizado de vapor de agua libre. (variante S)
huevo entero 1 litro En medio que contiene
4. El medio de cultivo debe glicerol, crecimiento
calentarse nuevamente de escaso o nulo. En un
esta manera después de medio sin glicerol, el
aproximadamente 24 horas crecimiento es
para garantizar su "disgónico", es decir,
esterilidad. colonias confluentes
planas, húmedas,
-pH: 4,8 ± 0,2 a 25 ° C brillantes (a menudo en
(antes de añadir el forma de pezón) sin
homogeneizado). formación de
pigmento.
-El medio preparado es
verde y no transparente.

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La superficie del agar debe
estar lisa y húmeda, pero
sin humedad excesiva.
Separe la muestra lo antes
posible después de recibirla
en el laboratorio.
Alternativamente, si el
material se cultiva
directamente
de un hisopo, proceda de la
-Digestión siguiente manera: La morfología colonial
pancreática de típica del agar
caseína 7,5 g 1. Enrolle el hisopo selectivo Thayer-
-Cloruro de sodio 5,0 directamente sobre el Martin es la siguiente:
g medio en una “Z” grande El agar selectivo Thayer-
-Peptona de carne para proporcionar una Martin es un medio -Neisseria gonorrhoeae
seleccionada 7,5 g exposición adecuada del enriquecido para el Pequeño, de color
Medio Thayer -Agar 12,0 g hisopo al medio para la aislamiento selectivo que blanco grisáceo a
Martin -Midón de maíz 1,0 g transferencia de se utiliza para el incoloro, mucoide
-Hemoglobina 10,0 g organismos. aislamiento de Neisseria
(BD, 2007) -Fosfato de dipotasio patógena a partir de -Neisseria meningitidis
4.0 g 2. Haga una trama cruzada muestras que contienen Mediano a grande, azul
-Enriquecimiento del patrón en “Z” con un una flora mixta de grisáceo, mucoide
IsoVitaleX 10.0 mL lazo de alambre estéril, bacterias y hongos.
-Fosfato preferiblemente en la -Se pueden seleccionar
monopotásico 1,0 g clínica. Si no se ha colonias para tinción
V-C-N realizado previamente, el de Gram, subcultivo u
-Inhibidor 10.0 mL rayado cruzado debe otros procedimientos
realizarse en el laboratorio. de diagnóstico
3. Coloque el cultivo lo
antes posible en un
ambiente aeróbico
enriquecido con dióxido de
carbono al 3-5%.
4. Incubar a 35 ± 2 ° C y
examinar después de la
incubación durante la
noche y nuevamente
después de la aplicación.
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- Staphylococcus
aureus
Colonias negras,
brillantes y convexas
de 1-5 mm de diámetro
con un borde blanco
estrecho rodeado por
1. Suspenda 58 g en 0,95 una zona clara de 2-5
-Peptona de caseína litros, esterilice en mm de ancho.
10.0 autoclave (15 min a 121 ° Para el aislamiento y Los anillos opacos
-Extracto de carne C). enumeración de dentro de las zonas
5.0 Staphylococcus aureus en claras solo aparecen
-Extracto de levadura 2. Enfriar a 45-50 ° C, alimentos y materiales después de 48 horas de
Baird Parker 1.0 mezclar 50 ml de Emulsión farmacéuticos según incubación.
- -Piruvato de sodio de Telurito de Yema de BAIRD-PARKER (1962)
BAIRD-PARKER 10.0 Huevo y, si es necesario, - Staphylococcus
Agar -Glicina 12.0 50 mg de sulfametazina / Este medio contiene epidermis
-Cloruro de litio 5,0 litro. Vierta los platos. cloruro de litio y telurito Forma negra, brillante
(Merk, 2000) -Agar agar 15.0 - pH: 6,8 ± 0,2 a 25 ° C. para inhibir la e irregular.
el crecimiento de la flora La zona opaca se
También para 3. El medio de cultivo listo microbiana acompañante, desarrolla alrededor de
agregar: para usar se puede mientras que el piruvato y las colonias después de
-Emulsión de telurito almacenar en el la glicina estimulan 24 horas.
de yema de huevo refrigerador (aprox. 4 ° C) selectivamente el
50ml; si es necesario, hasta por 1 mes. crecimiento de - Micrococos
sulfametazina 0,05 g - Las placas son estafilococos. Crecimiento a veces:
/ l. opalescentes y de color zonas muy pequeñas,
marrón amarillento. de color marrón a
negro, ni claras
- Especies de Bacillus
A veces aparecen
zonas de color marrón
oscuro, opacas y claras
después de 48 horas.
- Levaduras
Blanco, sin zonas
claras

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Pruebas de alimentos: Coliformes totales: el
1. Suspenda 17 g color del caldo ha
(concentración única) en 1 cambiado a azul
-Triptosa 5.0 litro de agua purificada. verdoso.
-Cloruro de sodio 5,0 2. Caliente a ebullición
-Sorbitol 1.0 para que se disuelva por E. coli: color azul
-Triptófano 1.0 completo. verdoso del caldo y
-Hidrogenofosfato 3. Llene alícuotas de hasta fluorescencia azul
dipotásico 2,7 20 ml en tubos. usando
LMX /Fluorocult -Dihidrogenofosfato 4. Autoclave durante 15 Fluorocult LMX contiene fuente de luz
de potasio 2.0 min. a 121 ° C. tampón de fosfato para ultravioleta de onda
-Fluorocult® -Sal sódica de lauril garantiza una alta tasa de larga (366 nm).
LMX Broth sulfato 0,1 Prueba de agua: crecimiento de coliformes Superposición con
Modified -5-bromo-4-cloro3- 1. Si se van a analizar totales. El lauril sulfato reactivo de Kovacs
indolil-ß-D- muestras de agua de 100 inhibe en gran medida la para la reacción del
(Merk, 2000) galactopiranósido (X- ml, suspenda 34 g (doble flora grampositiva indol: un anillo rojo
GAL) 0,08 concentración) en 1 litro de acompañante. también confirma la
-4-metilumbeliferil- agua purificada. presencia de E. coli.
ß-D-glucurónido 2. Caliente a ebullición
(MUG) 0,05 para que se disuelva por Nota:
-1-isopropil-ß-D-1- completo. El reactivo de Kovacs
tiogalactopiranósido 3. Transfiera alícuotas de es una solución
(IPTG) 0,1 100 ml a botellas alcohólica que destruye
(capacidad de 250 ml). las condiciones de
4. Autoclave durante 15 crecimiento en el
min. a 121 ° C. caldo.

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1. Añada 50/100 ml de
muestra de agua en un
recipiente transparente
estéril. -Negativo: Sin cambio
Recipiente de 100/250 ml de color, el caldo
con tapón de rosca. permanece amarillento.
En caso de que la muestra -Coliformes totales:

deba almacenarse por Cualquier cambio de
debajo de +25 ° C, el color del caldo a azul
examen debe iniciarse verdoso, incluso solo
-Triptosa 0,25 dentro de las 6 horas, en la parte superior del
-Cloruro de sodio excepcionalmente la caldo, confirma la
0,25 muestra se puede presencia de
-Sorbitol 0,05 almacenar entre +2 y +8 ° coliformes (reacción
-Triptófano C (refrigeración) hasta 24 X-GAL).
Readycult 0,05 horas. Caldo de enriquecimiento
- -Hidrogenofosfato de selectivo para la detección -E. coli: compruebe la
Readycult® dipotasio 0,135 2. Tome un paquete simultánea de fluorescencia de los
Coliforms -Potasio instantáneo, toque coliformes totales y E. vasos de color azul
fosfato de brevemente para asegurarse coli dentro del agua verdoso utilizando una
(Merk, 2000) dihidrógeno 0,1 de que los gránulos estén bacteriológica lámpara UV delante
-Sal sódica de lauril en el fondo. examen del vaso. La
sulfato 0,005 fluorescencia azul clara
-X-GAL 0,004 3. Doble la parte superior indica la presencia de
-TAZA 0,0025 del paquete a presión hasta E. coli (reacción
-IPTG 0,005. que se abra. MUG).
-pH: 6,8 ± 0,2 a 25 ° Atención: ¡no toque la
C. apertura para evitar riesgo -Para confirmar E. coli
de contaminación! en el recipiente con
fluorescencia positiva,
4. Agregue el contenido a cubra el caldo con 2,5
la muestra de agua. ml de reactivo de
KOVAC.
5. Selle el recipiente y agite Un anillo rojo
para disolver confirma la presencia
completamente los de E. coli.
gránulos.
Incubación: 18-24 ha 35 °
C a 37 °C.
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1. Suspenda 26,5 g en 1
litro de agua Para confirmar E. coli,
desmineralizada calentando cubra las colonias de
en un baño de agua azul oscuro a violeta
hirviendo o en vapor que con una gota de
fluya libremente. reactivo indol de
KOVACS. Si el
2. Revuelva el contenido reactivo adquiere un
para ayudar a la disolución color rojo cereza
(aprox. 35 min). después de algunos
Puede producirse algo de segundos, una
-Peptonas 3.0 turbidez, ¡pero esto no La elección de sustratos formación de indol
-Cloruro de sodio 5.0 afecta el rendimiento! Las cromogénicos adecuados positiva confirma la
-Dihidrógeno de placas son de opalescentes permite presencia de E. coli.
Chromocult sodio a turbias y amarillentas. visualización de toda una
- fosfato 2.2 serie de diferentes -E. coli: colonias de
Chromocult® -Hidrogenofosfato ¡No esterilice en autoclave! actividades enzimáticas azul oscuro a violeta
Coliform Agar disódico 2,7 ¡No sobrecalentar! con diferentes colores en (reacción Salmon-GAL
-Piruvato de sodio - pH: 6,8 ± 0,2 a 25 ° C. un medio de cultivo. y X-glucurónido).
(Merk, 2000) 1.0
-Triptófano 1.0 3. Nota: Después de Combinación de dos -Coliformes totales:
-Agar-agar 10.0 esterilizar en autoclave, sustratos cromogénicos salmón a colonias rojas
-Sorbitol 1.0 agregue el suplemento de que permiten la detección (reacción Salmon-
-Tergitol® 7 0,15 E. coli / Coliform al medio simultánea de coliformes GAL)
-Mezcla cromogénica enfriado a 45-50 ° C si el totales y E. coli. y colonias de azul
0.4. material de muestra oscuro a violeta (E.
contiene bacterias coli).
grampositivas altas,
Pseudomonas o Aeromonas -Otros Gram-
spp. negativos: colonias
incoloras, excepto
4. Conservar en nevera y algunos organismos
proteger de la luz para que poseen actividad
evitar que los platos se ß-D-glucuronidasa.
sequen, sellar en bolsas o Estas colonias
bolsas de plástico. aparecen de color azul
Periodo de validez en estas claro a turquesa.
condiciones: 6 meses.

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-Para el cultivo de varios
microorganismos
patógenos exigentes.
-Sustrato de
nutrientes (extracto 1. Suspenda 52 g de agar Estos medios de cultivo se
Agar/ Caldo BHI de cerebro, extracto cerebro-corazón / litro, basan en el principio de
- de corazón y esterilice en autoclave (15 ROSENOW El agar es transparente
Brain Heart Agar peptonas) min a 121 ° C). caldo que contiene a veces ligeramente
27,5 - pH: 7,4 ± 0,2 a 25 ° C. pequeños trozos de tejido opalescente y marrón.
Merk, (2000) -D (+) glucosa 2.0 cerebral (ROSENOW
-Cloruro de sodio 5.0 2. El caldo es transparente 1919) y se puede utilizar
-hidrogenofosfato de y marrón. para cultivar muchas
di-sodio 2,5 bacterias exigentes como
-Agar-agar 15.0 estreptococos,
neumococos,
meningococos, etc.
9. REFERENCIAS - (3) Montaño, N., Sandoval, A., &

BIBLIOGRAFICAS Camargo, R. Sánchez. - (2010) - Los
microorganismos: Pequeños Gigantes
- (1) - Nápoles, María C., & Martínez, – redalyc.org -
J., & Costales, Daimy, & Gómez, https://www.redalyc.org/pdf/294/294
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EFECTO DE DIFERENTES - (4) - Miguel Ángel Caviedes, Cristina
MEDIOS DE CULTIVO EN LA Sanches-Porro, Ma Dolores Galán,
MULTIPLICACIÓN CELULAR DE Ma Teresa Garcia, Juan Manuel
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(2000) - Microbiology Manual 12th Mossel –
Edition – Germany -
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- (7) – A. Villalobos, L. Calderón, C. 20181029.pdf
Figueroa, J. Fierro, G. Otálora, 2 R. - (10) BD “BBL™ Thayer-Martin –
Álvarez, B. Quevedo-Hidalgo, M. 2007 - Selective Agar”, Becton,
Mercado-Reyes, M. Huertas-Valero, Dickinson and Company -
A. Trespalacios-Rangel – (sin año) - legacy.bd.com -
EVALUACIÓN POR MÉTODO https://legacy.bd.com/ds/technicalCe
ECOMÉTRICO DE AGAR nter/inserts/L007417(07)(0907).pdf
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Zumaque – 2010 - Productividad y
selectividad del medio de cultivo a
partir de guayaba agria (Psidium
araca) en el crecimiento de levaduras
nativas del género Candida sp. – PDF
-
file:///C:/Users/TEMP.DESKTOP8R
5O72I.002/Desktop/DialnetProductiv
idadYSelectividadDelMedioDeCultiv
oAPartir-3410798.pdf

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Practica 3.

Preparación de medios de cultivos

Profesora - Candelaria Mercedes Madrid Miranda

Jhoel Andres Quiroz Ortega (1004991311)

Nathalia Sofía Otálora Marín (1000861362)

Curso Microbiología Veterinaria, Grupo A, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad

1. RESUMEN de cultivo mientras se reconocer la

importancia de tener en cuenta los

“Formando líderes para la construcción de un nuevo país en paz”

en procesos como la disolución del medio - Reconocer los diferentes medios de

de cultivo deshidratado, la esterilización, cultivo existentes para el crecimiento

el vertido en placa y el posicionamiento de microorganismos aplicando y

de los tubos de agar inclinado y sin fortaleciendo los conceptos básicos

inclinación los cuales son procesos claves de nutrición por medio de la

en el trabajo de rutina e investigación preparación de pequeños grupos

bacteriológica para obtener óptimos teniendo en cuenta las instrucciones

resultados, sin embargo, pueden dadas en la etiqueta y el respectivo

presentarse defectos en la manipulación y almacenamiento que debe tener según

preparación por apelmazamiento de los el cultivo a realizar.

medios de cultivo deshidratados, - Identificar en que consiste el test de

desviación del pH, turbidez, esterilización ecométrico y reconocer

contaminación, entre otros por lo que es que características presentan todos

de gran importancia ser cautelosos, los diferentes medios de cultivos y

informarse y basarse instrucciones dadas aquellos que no deben ser

en las etiquetas. esterilizados con ayuda de una

exhaustiva consulta donde se

comprenda a la vez como se realizan

y que se hace con ellos.

“Formando líderes para la construcción de un nuevo país en paz”

esenciales en el laboratorio ya que un

condiciones físicas óptimas, permiten -Según su estado físico como líquidos

el crecimiento de los (Usualmente se denominan caldos ya

“Formando líderes para la construcción de un nuevo país en paz”

en agua), sólidos (Se pueden preparar por sustancias complejas de origen

a partir de medios líquidos a los animal o vegetal, algunos minerales y

cuales se les añaden agentes otras sustancias), medios sintéticos o

solidificantes como agar, gelatina o químicamente definidos (Se preparan

sílica gel), semisólidos o bifásicos a partir de ingredientes químicamente

condiciones de laboratorio, - Según sus propósitos de uso pueden

intentando ser un reflejo de su hábitat ser medios de enriquecimiento (Son

natural en relación con la satisfacción cultivos en medio líquido que resulte

de sus más vitales y principales en un incremento en el número de un

necesidades como ser vivo (3). tipo dado de microorganismo en

relación con el número de otros tipos

“Formando líderes para la construcción de un nuevo país en paz”

diferencian por ser medios sólidos y correcta investigación para alcanzar

están diseñados para el aislamiento de un propósito y uso. En el área

microorganismos específicos), industrial, el uso de estos medios

medios diferenciales (No contienen permite impulsar el crecimiento de

sustancias inhibidoras, permiten el algunos microorganismos que serán

crecimiento de muchos tipos de indispensables en la producción y

microorganismos y se utilizan para la conservación de alimentos.

La preparación de estos medios como,

“Formando líderes para la construcción de un nuevo país en paz”

congelación resulta muy útil para la

La mayor tasa de destrucción

bacteriana se observa inmediatamente

tras la congelación, después se reduce

notablemente y llega a estabilizarse

durante largos períodos de tiempo.

Por eso, aunque el número de

congelación es un método efectivo

para mantener la viabilidad de las