Procedimientos y Directrices en El Laboratorio de Microbiología.

Traducción técnica inglés-español
del manual
Procedimientos
y directrices
en el laboratorio
de microbiología.
Integrantes:
Águila López Román.
Primo Málaga Irene
Contreras Olivares América
Profesora: Lic. Margarita de Jesús Pucheta Rosario

Lic. en Idioma Inglés
Universidad Popular Autónoma de Veracruz
Octavo Cuatrimestre
Traducción técnica 8° Cuatrimestre- Lic. en Idioma Inglés- UPAV
ÍNDICE DE TRADUCCIÓN POR INTEGRANTE
Nombre Número de Página
Águila López Román ……………………………………………………... 1-25
Primo Málaga Irene ………………………………………………………. 26-50
Contreras Olivares América………………………………………………. 51-70
Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 2

Colegio de Médicos y Cirujanos de Saskatchewan.

Programa de control de calidad del laboratorio.
Procedimientos
y directrices
del laboratorio
de microbiología.
Enero de 2010.
Contenidos


CONTROL DE CALIDAD EN LOS LABORATORIOS DE MICROBIOLOGÍA
Los laboratorios de microbiología deberán utilizar procedimientos de control de calidad

para garantizar la precisión, fiabilidad y reproductibilidad de las distintas pruebas
utilizadas en el aislamiento, la identificación y la susceptibilidad antimicrobiana de los
microorganismos, así como en la realización de pruebas serológicas.
El alcance de las pruebas de control de calidad realizadas estará determinado por el

alcance de las pruebas clínicas realizadas en cada laboratorio.
Todos los laboratorios que realicen pruebas microbiológicas deberán contar con
procedimientos adecuados de control de calidad interno utilizando las directrices del
CLSI para las pruebas de susceptibilidad a los antibióticos y el control de calidad.
a) Debe seguirse la actualización más reciente de los siguientes documentos del CLSI:
(i) M22, correspondiente al control de calidad de medios de cultivo

microbiológicos preparados comercialmente
(ii) M100 de estándares de desempeño para pruebas de susceptibilidad

antimicrobiana.
(iii) M2 de estándares de desempeño para pruebas de disco en susceptibilidad

antimicrobiana.
(iv) M7 Métodos de dilución para la realización de pruebas de susceptibilidad

antimicrobiana a bacterias anaeróbicas.
v) M11 Métodos de pruebas de susceptibilidad antimicrobiana de bacterias

anaerobias.
b) Los paneles de identificación deben ser sometidos a un control de calidad de

acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
c) Se utilizarán organismos ATCC para el control de calidad adecuado de los medios y

de las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana.
CLSI: Instituto de Normas Clínicas y de Laboratorio.
ATCC: Recolección Americana de Tipos de Cultivos.
Todos los laboratorios que efectúen microbiología deberán demostrar y documentar sus
esfuerzos por cumplir las normas establecidas por las directrices del CLSI y el control
de calidad, utilizando los organismos adecuados.

Directrices para la interpretación cuantitativa de las tinciones de Gram.
Antecedentes:
El examen microscópico sigue siendo la prueba diagnóstica inicial en el procesamiento

de muestras en el laboratorio de microbiología clínica. El informe oportuno del resultado
de la tinción de Gram proporciona al médico información importante sobre la presencia
y la causa de la infección. La tinción de Gram tiene un amplio espectro de coloración y
clasifica las bacterias como Gram-positivas o Gram-negativas. A pesar de la
importancia clínica de la tinción de Gram, hay pocos estándares disponibles para la
lectura e interpretación de esta prueba. La asignación de valores semicuantitativos y
cuantitativos al número de células y bacterias observadas es claramente arbitraria, ya
que los criterios publicados de uso general varían drásticamente(1-5). Aunque los
laboratorios pueden informar sólo de los criterios semicuantitativos de la tinción de
Gram es importante desde el punto de vista clínico disponer de un esquema
estandarizado para asignar cantidades de células y bacterias a las puntuaciones
semicuantitativas individuales. Dado que varios estudios clínicos han demostrado que
la presencia de cantidades moderadas o abundantes de pus y/o la presencia de
bacterias en las tinciones de Gram se correlaciona con la presencia de infección(6-8),
la información de las tinciones de Gram de las muestras debe ser precisa.
Principio:
Revisar la práctica actual en Canadá y la evidencia de la literatura para establecer un

enfoque de la mejor práctica actual para la interpretación cuantitativa de las tinciones
de Gram para todos los tipos de especímenes clínicos.
Recomendaciones:
Aunque existen varios criterios publicados para la notificación de tinciones de Gram, la

Coalición Canadiense para la Calidad de la Medicina de Laboratorio recomienda que
los laboratorios utilicen:
-Un conjunto de criterios de interpretación para todos los tipos de especímenes

clínicos, excepto para los esputos y los frotis vaginales para la vaginosis bacteriana.
-Criterios de rechazo de muestras publicados por separado para los esputos..
-Criterios estándar para el diagnóstico de la vaginosis bacteriana (9, 10).
Los laboratorios especifican los criterios utilizados al comunicar los resultados de la

tinción de Gram para facilitar facilitar la interpretación por parte de los médicos.

Criterios de cuantificación para la Tinción de Gram:
1) Sistema de clasificación para evaluar la calidad del esputo*:
i) Puntuación Q1:
Tipo de célula y #/campo de baja Rango

potencia (x100)
Neutrófilos: 0
<10 +1
10 - 25 +2
>25
Mucosa presente +1
Células epiteliales escamosas: 1

10-25 2
>25
Criterios de rechazo: Rechazar las muestras con una puntuación media de 0 o menos.
Para determinar la puntuación media, cuente el número de neutrófilos y células

epiteliales en hasta hasta 20 campos y asigne el grado positivo o negativo apropiado
para cada tipo de célula en cada campo. Sume las calificaciones individuales y
divídalas entre el número de campos examinados para obtener la puntuación media.
*El sistema de clasificación sólo es aplicable a los esputos de adultos (>14 años)12, 13.
Los pacientes neutropénicos pueden no demostrar purulencia y se debe proporcionar
una historia clínica al laboratorio clínica para que las muestras de esputo no sean
rechazadas.
ii) Número de células epiteliales escamosas (SEC)11.
Examinar 20-40 campos a baja potencia. Promediar el número de células en campos

representativos que contengan células.
Criterio de rechazo: ³10 SEC / LPF
Aceptable: <10 SEC / LPF
NOTA: si el número de PMN es 10 veces superior al número de SEC y hay 3-4+ de un

solo de un solo morfotipo, acepte la muestra para su cultivo.

2) Todos los demás tipos de muestras:
Células Epiteliales o Microorganismos (bacterias,

Polimorfonucleares (PMN) levaduras/hongos)
Descripción Número/LPF Descripción Número/LPF
1+ Escasas <1 1+ Escasas <1
2+ Pocas 1-10 2+ Pocas 1-10
3+ Moderadas 11-25 3+ Moderadas 11-25
4+ Excedentes >25 4+ Excedentes >25
Campo de baja potencia (LPF) ('100); campo de inmersión en
aceite de alta potencia (OIF) ('1000).
Las cifras se basan en una media de 10 campos.
El examen minucioso de todas las zonas del frotis Tinción de Gram debe realizarse
microscópicamente primero bajo LPF ('100) para observar cualquier célula inflamatoria
y luego bajo OIF ('1000) para observar las bacterias.
NOTA: En el caso de las muestras de fluidos en las que se utilizan preparaciones de

cytospin o similares, no se aplican las no se aplican las directrices de cuantificación.
3) Criterios de control de calidad para la interpretación de la tinción de Gram:
Para calificar las tinciones de Gram se recomienda un esquema de clasificación de

errores estándar como siguiente:
FALLA MENOR:
- Informar de la presencia de polimorfos cuando no están presentes.
FALLA IMPORTANTE: :
- Informar de la presencia de un organismo no presente o;

- No informar de la presencia de 1+ a 2+ polimorfos ERROR MUY GRAVE:
- No informar de la presencia de un microorganismo.
- No informar de la presencia de 3+ a 4+ polimorfos.
UN ERROR MUY IMPORTANTE:
- No informar de la presencia de un microorganismo

- No informar de la presencia de un polimorfo 3+ a 4+

Fuentes de consulta
1. Bartlett, JG, KJ Ryan, TF Smith and WR Wilson. 1987. Cumitech 7B, Lower respiratory tract infections.
Coordinating ed., J.A. Washington II. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
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Coordinating ed., C. Abramson. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
3. Kruczak-Filipov P and RG Shively. 1992. Gram stain procedure. In: Clinical Microbiology Procedures
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4. Martin RS, RK Sumarah and EM Robart. 1978. Assessment of expectorated sputum for bacteriological
analysis based on polymorphs and squamous epithelial cells: six-month study. J. Clin. Microbiol.
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5. Murray PR, and JA Washington. 1975. Microscopic and bacteriologic analysis of sputum. Mayo Clin.
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6. Thompson Jr RB, Miller JM. Specimen Collection, Transport, and Processing : Bacteriology. In: Murray
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7. Chuard C, CM Antley and LB Reller. 1998. Clinical utility of cardiac valve Gram stain and culture in
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8. Ketai L, T Washington, T Allen and J Rael. 2000. Is the stat Gram stain helpful during percutaneous
image-guided fluid drainage? Acad. Radiol. 7:228-231.
9. Nugent RP, MA Krohn and SL Hillier. 1991. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by
a standardized method of Gram stain interpretation. J. Clin. Microbiol. 29:297-301.
10. Schreckenberger PC. 1992. Diagnosis of bacterial vaginosis by Gram-stained smears. Clin. Micro
News. 14(16): 121-128
11. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Ed 2007 Isenberg HD (ed) p 3.2.1.20
12. Zaidi A.K., and L.B.R.eller. 1996. Rejection criteria for endotracheal aspirates from pediatric patients.
J Clin. Microbiol. 34: 352-354
13. Thakker JC, Splaingard M, Zhu J, Babe lK, Bresnahan J , Havens PL. Crit Care Med 1997 Aug; 25(8):
1997 . Survival and functional outcome of children requiring endotracheal intubation during therapy for
severe traumatic brain injury

Esquema de identificación de estafilococos
1. Algunas colonias de SARM y S. intermedios son negativas al factor de aglutinación.
2. Se pueden obtener "falsos" positivos de Staph aureus con S. saprophyticus.
3. Recuerde hacer una placa de oxacilina para descartar el SARM.
4. Remitir para la identificación completa del estafilococo.

CEPAS DE ESTAFILOCOCOS COAGULASAS NEGATIVOS (ECN)
Antecedentes:
Tradicionalmente, a los estudiantes de tecnología médica se les enseñaba que había

dos tipos de estafilococos. El primer grupo era el de los estafilococos coagulasa
positivos (es decir, S. Aureus) y causaba infecciones. El segundo grupo era el de los
estafilococos coagulasa negativos (S. Aureus) y, a excepción de S. saprophyticus y S.
epidermidis, no causaban infección.
Como ocurre con todas las tradiciones, el tiempo trae cambios. Los avances en la
tecnología médica han dado lugar a técnicas más invasivas. Los pacientes pueden
tener uno o varios dispositivos médicos, como catéteres e implantes de prótesis. La
quimioterapia y las enfermedades inmunodeficientes han provocado un aumento del
número de pacientes inmunocomprometidos. Los consumidores de drogas por vía
intravenosa corren un mayor riesgo de infección debido al SNC. Estos y otros factores
han permitido que el SNC adquiera un nuevo papel como importante patógeno
nosocomial.
La mayoría de los aislamientos de SNC se encuentran en pacientes hospitalizados y

suelen ser resistentes a los antibióticos. Los SNC resistentes a la meticilina se aíslan
con más frecuencia que el SARM en una instalación. El SNC es una parte
predominante de la flora cutánea normal, y puede estar presente en una muestra como
contaminante o como patógeno. Algunas especies de SNC producen una capa de
baba, que les permite adherirse a dispositivos médicos como catéteres, derivaciones,
válvulas cardíacas, material de injerto, implantes y articulaciones artificiales. material de
injerto, implantes y articulaciones artificiales. Estos factores también hacen que el
organismo sea más más difícil de tratar, y dificultan la determinación de la importancia
clínica cuando se aísla en una muestra.
S. epidermidis es la infección nosocomial más común del SNC. Las infecciones

incluyen bacteriemia, Estos y otros factores han permitido que el SNC adquiera un
nuevo papel como importante patógeno nosocomial.
La mayoría de los antibióticos. Los SNC resistentes a la meticilina se aíslan con más
frecuencia que el SARM en una instalación. El SNC es una parte predominante de la
flora cutánea normal, y puede estar presente en una puede estar presente en una
muestra como contaminante o como patógeno. Algunas especies de SNC producen
una capa de baba, que les permite adherirse a dispositivos médicos como catéteres,
derivaciones, válvulas cardíacas, material de injerto, implantes y articulaciones
artificiales. material de injerto, implantes y articulaciones artificiales. Estos factores
también hacen que el organismo sea más más difícil de tratar, y dificultan la
determinación de la importancia clínica cuando se aísla en una muestra.
S. epidermidis es la infección nosocomial más común del SNC. Las infecciones

incluyen la bacteriemia, infecciones cardíacas postoperatorias, e infecciones de
derivaciones, dispositivos ortopédicos e implantes protésicos. Se ha aislado en

pacientes sometidos a Diálisis Peritoneal Ambulatoria Continua. Diálisis Peritoneal

Ambulatoria Continua. No parece haber una norma clara sobre la presentación de
informes de S. epidermidis en la orina. Es un patógeno reconocido en pacientes con
infección prostática,
prótesis o después de un trasplante. Rara vez causa infecciones del tracto urinario en
mujeres.
S. saprophyticus es un importante patógeno urinario, especialmente en mujeres

jóvenes y sexualmente activas. Los hombres también pueden desarrollar una uretritis
inespecífica. Por lo general, puede diferenciarse rápidamente de otras SNC utilizando
un disco de novobiocina. S. saprophyticus es resistente, mientras que otras SNC son
sensibles. S. lugdunensis se describió por primera vez en 1988 en Francia. Es un SNC
que puede ser identificado erróneamente como S. aureus si la prueba de la coagulasa
en el portaobjetos es la única utilizada. El organismo es positivo a la coagulasa en
portaobjetos, negativo a la coagulasa en tubo, positivo a la PYR y positivo a la ornitina
descarboxilasa. También es muy sensible a las penicilinas. Se parece mucho a S.
aureus, en el sentido de que tiene factores de virulencia similares y produce tipos de
infecciones similares.
La mayoría de las infecciones notificadas son infecciones de la piel y de los tejidos

blandos, así como infecciones de la sangre y de los catéteres vasculares de sangre y
catéteres vasculares. El organismo forma parte de la flora cutánea normal.
S. schleiferi también puede ser identificado erróneamente como S. aureus si sólo se

utiliza la prueba de coagulasa en portaobjetos.
La prueba de coagulasa en portaobjetos es positiva, la de coagulasa en tubo es

negativa, la de PYR es positiva y la de ornitina descarboxilasa negativa. También
parece ser un importante patógeno oportunista asociado con el empiema, las
infecciones de heridas y catéteres intravenosos y la bacteriemia. Al igual que con S.
lugdunensis, muchos pacientes afectados tienen un sistema inmunitario defectuoso
debido a una enfermedad subyacente.
S. haemolyticus es el segundo patógeno más comúnmente aislado en el SNC y ha sido

aislado en endocarditis, septicemia, UTI, infecciones óseas, de heridas y de
articulaciones.
Éste se ha aislado en endocarditis, septicemia, UTI, infecciones óseas, de heridas y de

articulaciones. Otros SNC aislados con menor frecuencia son S. hominis, S. warneri, S.
Capitis S. cohnii, S. xylosus y S. saccharolyticus.

Procedimiento:
Una revisión de la documentación sugiere que el SNC se identifique con precisión de

especie:
-Cuando se aísla de sitios normalmente estériles: sangre, LCR y fluidos articulares y

otros.
En cuanto a los hemocultivos, un SNC aislado de un solo frasco se considera un

contaminante. No es necesario identificar ni informar de los resultados de
susceptibilidad. Los laboratorios pueden almacenar el producto aislado en caso de que
se soliciten más pruebas. Los productos aislados de varios frascos se identifican a nivel
de especie. Si se aísla la misma especie, se trata de un hallazgo significativo y deben
realizarse pruebas de susceptibilidad. Si se identifican especies diferentes, es probable
que se trate de un conjunto de cultivos contaminados y no deben realizarse pruebas de
susceptibilidad. El SNC puede ser contaminante en el LCR y otros fluidos estériles, por
lo que siempre se debe correlacionar con la información clínica y los resultados del
frotis de Gram directo para determinar la importancia del aislado.
-Cuando se aísla repetidamente de muestras de heridas con un buen frotis de Gram

(que muestra la presencia de GPC y WBC).
-Cuando se aísla de derivaciones, catéteres o dispositivos protésicos.
-Para diferenciar CNS de S. Saprophyticus en orinas de la corriente media.
-Cuando se aísla de muestras de orina de catéteres o cistoscopia.
No es apropiado ni rentable realizar pruebas de identificación y susceptibilidad en cada

SNC aislado. Cada laboratorio debe analizar su situación particular y establecer
políticas específicas para sus necesidades. Si el SNC se aísla como parte de la flora
normal, entonces debe informarse como tal: flora normal. Aunque una revisión de la
documentación y la práctica de laboratorio muestra que hay consenso en que no
siempre se requiere una identificación completa y una prueba de susceptibilidad no
siempre es necesario, no existe un consenso absoluto sobre cuándo deben realizarse
las pruebas de identificación y susceptibilidad. Sigue siendo responsabilidad del
laboratorio examinar la demografía de los pacientes, el tipo de servicio, etc. y decidir
sus políticas. Es aconsejable consultar con un médico microbiólogo o un especialista
en enfermedades infecciosas para desarrollar estas políticas.

Fuentes de consulta
1. Identification of Commonly Isolated Aerobic Gram-Positive Bacteria pg 1.20.1-1.20.3

in Handbook of Clinical Microbiology Procedures 1992. ASM Washington DC
2. Patrick R. Murray, Ellen Jo Baron, James H. Jorgensen, Marie Louise Landry,

Michael A. Pfaller, Manual of Clinical Microbiology, 9th ed., 2007 American Society for
Microbiology.
3. von Eiff C, Proctor, RA, Peters G. 2001. Coagulase-negative staphylococci in Post

Graduate Medicine online Vol 110 No 4 October 2001. www.postgradmed.com
4. Laboratory Detection of Oxacillin-resistant Coagulase-negative Staphylococcus spp.

1999. Fact Sheet Issues in Healthcare Settings. CDC Atlanta GA.
5. Dowell EB, James. JF. Speciation of Coagulase Negative Staphylococci 2001 in

Contagious Comments, Vol XVI Number 2. The Children’s Hospital, Department of
Epidemiology, Denver CO.
6. Baron, EJ. Staphylococcus lugdenensis: Not your Father’s (or Mother’s)

Coagulase-Negative Staphylococcus. 2003. www.antibiotic-consult.com
7. Ling, ML. Staphylococcus lugdenensis: Report of first case of skin and soft tissue
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8. Canadian Paediatric Society. Coagulase negative staphylococci as pathogens:

Believe it or not? Canadian Journal of Paediatrics 1994: 1(2):61-3 Reaffirmed April
2002.
9. CMPT Critique. M93-1 Urine Sample: Coagulase Negative Staphylococcus (S.

epidermidis) November 1999.
10. CMPT Critique M94-1 Deep Wound: Coagulase Negative Staphylococcus species
(Staphylococcus epidermidis) Feb 2000.

PROCEDIMIENTOS DE SIEMBRA DE CULTIVOS BACTERIOLÓGICOS
Uso de medios:
La mayoría de los medios utilizados en los laboratorios de bacteriología clínica están

disponibles comercialmente, ya sea completamente preparados o como polvo
deshidratado. El número y los tipos utilizados varían de un laboratorio a otro en función
de los presupuestos, el personal y las preferencias personales. La selección de los
medios se rige por la fuente de la muestra. Los medios que permiten el crecimiento de
la mayoría de los medios que permiten el crecimiento de la mayoría de los patógenos
potenciales de una fuente particular se utilizan para recuperar el o los patógenos.
Técnicas de inoculación y aislamiento:
Los métodos tradicionales de identificación dependen de la obtención de colonias

aisladas. Muchas muestras clínicas contienen una mezcla de bacterias; por lo tanto, las
muestras se filtran para producir colonias individuales de cada tipo de organismo
presente. Las técnicas de aislamiento incluyen el rayado del inóculo con un bucle de
alambre o extendiéndose con una varilla de vidrio, o bien inoculando placas de vaciado.
La elección depende del material a cultivar, el resultado deseado y la preferencia del
laboratorio.
Placa de rayas:
El método de la placa de rayas es práctico y rápido. Todos los métodos de placa de

rayas están diseñados para proporcionar una dilución continua de la muestra con el fin
de obtener colonias aisladas. Se puede utilizar una placa de acero inoxidable o de
níquel y cromo (Nichrome) o un bucle bacteriológico de plástico es aceptable, aunque
el Nichrome no debe utilizarse para las bacterias anaerobias. En el método más común
se deposita una porción de la muestra en un cuadrante de una placa de agar, libre de
humedad.
El método de transferencia del inóculo a la placa depende del tipo de espécimen.
Las muestras líquidas suelen inocularse por transferencia con una pipeta o jeringa
estéril y aguja. Se colocan una o dos gotas en el primer cuadrante de la placa. La orina
es una excepción y debe ser chapada cuantitativamente. (ver más abajo)
Las muestras recibidas en hisopos pueden ser sembradas directamente haciendo rodar
el hisopo sobre un área de unos 2 cm de diámetro en el primer cuadrante de la placa.
Las heces y el esputo se inoculan más fácilmente sumergiendo un hisopo en el
espécimen en lugar de intentar usar un bucle al intentar utilizar un bucle para inocular
las placas.
Tras la implantación del inóculo, se flamea y se enfría un asa de alambre, o se

selecciona un asa de plástico estéril desechable estéril. El bucle se sujeta entre los
dedos pulgar e índice y se pasa en un ángulo de 90 grados varias veces a través del
inóculo inicial en el segundo cuadrante de la placa, como se ilustra en la figura 1 (zona

de estrías 1). La placa es girada 90 grados, y se repite el proceso, pasando por el

tercer cuadrante (área de rayas 2), y finalmente, tras otro giro de 90 grados, en el
cuarto cuadrante (zona de vetas 3). El bucle se flamea entre cuadrantes a menos que
el inóculo sea ligero o el medio sea selectivo o inhibidor. Cuando se utilizan placas de
rayas, el laboratorio puede informar del número relativo de bacterias presentes, lo que
puede ser útil para el clínico, sobre todo si están presentes diferentes tipos de
organismos.
Se utilizan varios métodos de semicuantificación (Figura 2a y b). Algunos laboratorios

utilizan muy pocos, pocos, moderados o muchos; otros utilizan de 1+ a 4+, basándose
en los siguientes criterios:
Cantidad de colectivos en área designada

Rango 1 2 3
1+ <10
2+ <10 <5
3+ >10 <5 >5
4+ >10 <5 >5
Métodos cuantitativos para la orina:
Para determinar la infección del tracto urinario, es necesario el recuento real de

colonias de una muestra de orina (una colonia equivale a una unidad formadora de
colonias, o UFC). Para el recuento de las colonias se utiliza un asa calibrada de 1 o 10
ml. Ésta se sumerge verticalmente en una muestra bien mezclada. Un bucle se
extiende por el centro de la placa. Sin flamear, se hacen rayas cruzadas en un ángulo
de 90 grados perpendicularmente a la raya original. Las rayas cruzadas deben estar
muy juntas y extenderse hacia el borde de la placa. En el laboratorio de microbiología
clínica se suele utilizar un asa de 1 ml para el cultivo de orina. En algunas situaciones,
como en las orinas obtenidas durante la cistoscopia, o mediante el cultivo del aspirado
suprapúbico.
(SPA) se necesitará un cultivo con un asa de 10 ml para identificar un recuento menor

de bacterias. El número de colonias que crecen en la placa de agar multiplicado por el
factor de dilución (103 si se utiliza un asa de 1 ml y 102 para el asa de 10 ml) es igual
al número de UFC por milímetro en la muestra original.
Incubación del cultivo:
Las placas inoculadas se incuban invertidas para evitar que el agua de condensación
caiga sobre la superficie del agar, lo que puede provocar la coalescencia de las
colonias siendo un peligro para la seguridad.

La temperatura óptima de crecimiento para la mayoría de los patógenos bacterianos es

de 35°C. La mayoría de las bacterias producen colonias visibles en unas 18 horas,
aunque algunas necesitan entre 48 y 72 horas.
Por lo general, las bacterias requieren una humedad relativa del 70 al 80%. La mayoría
de las incubadoras nuevas tienen un depósito de agua. Si una incubadora no tiene un
mecanismo para regular la humedad, se puede colocar una bandeja con agua
mantenida a un nivel constante en el estante más bajo de la incubadora. Muchas
bacterias crecen bien en el aire, pero algunas necesitan un aumento de CO2 (del 5 al
10%) (capnofílicas), disminución de O2 y aumento de CO2 (microaerófilas), o
condiciones anaeróbicas.
El dióxido de carbono puede ser suministrado por una incubadora de CO2, un frasco de
velas o un contenedor con un dispositivo generador de CO2. Un frasco de velas es
simplemente un recipiente de boca ancha de boca ancha con una tapa bien ajustada.
Los medios inoculados se colocan en el frasco. Una vela encendida se coloca encima
de los medios y se vuelve a colocar la tapa.
Referencia:
Microbiología Clínica y Patógena


PROCESAMIENTO DE MUESTRAS DE ORINA
Antecedentes:
Las infecciones del tracto urinario (UTI) son causadas por una serie de bacterias
comunes, a menudo derivadas de la flora entérica o de la piel. El diagnóstico de las UTI
se realiza mediante el cultivo semicuantitativo de la orina y las pruebas de
susceptibilidad antimicrobiana de los posibles patógenos presentes en números
significativos. Este procedimiento describe la recogida de muestras apropiadas y su
transporte al laboratorio.
Recogida y transporte de muestras:
Preparación del paciente: Indique al paciente que recoja una muestra de orina a mitad
del chorro en el en el recipiente para muestras que se le ha proporcionado. Se utiliza la
orina a mitad del chorro porque los primeros ml de orina de orina contendrán flora de la
piel del orificio uretral y darán resultados potencialmente resultados engañosos. No se
recomienda la limpieza previa de la zona del orificio periuretral (Manual de
Microbiología Clínica 9ª Ed.). El momento óptimo para la recogida de muestras es la
primera primera micción de la mañana.
Recogida, manipulación y almacenamiento: La orina se recoge en recipientes estériles.

Estos pueden ser frascos estériles simples o frascos estériles con ácido bórico, que es
bacteriostático y limita el sobrecrecimiento durante el transporte. Las muestras deben
ser transportadas inmediatamente al laboratorio. Si el retraso entre la recogida y el
cultivo es superior a 2 horas, las muestras que no estén en conservante deben ser
refrigeradas.
Muestras aceptables: Orinas de flujo medio, orinas cateterizadas, aspirados de vejiga

suprapúbica aspirados de vejiga y muestras de cistoscopia, debidamente etiquetadas y
recibidas dentro de las 24 horas de la recolección
Rechace los siguientes especímenes, que no son aptos para el cultivo:
1. Orina de la bacinilla
2. Orinas de preservativo/sonda de Texas
3. Muestras recibidas en un recipiente no estéril
4. Orina en bolsa
5. Muestras sin etiquetar o mal etiquetadas
6. Especímenes que se han salido del recipiente
Informar a la sala o a la clínica cuando se rechacen especímenes.

Procedimiento/medios:
Procedimiento de colocación de medios:
1. Mezclar bien la orina.
2. Mantenga el bucle calibrado en posición vertical y sumerja el bucle justo por debajo
de la superficie de la orina.
3. Extienda la orina sobre la superficie de la placa de agar como se describe en

Procedimiento de siembra de cultivos bacteriológicos. Los medios generalmente
utilizados son el agar sangre y el agar MacConkey o un medio único que soporte el
crecimiento de los uropatógenos.
4. Incubar las placas aeróbicamente durante la noche a 35ºC.
Tipo de muestra Bucle calibrado Medio Incubación

MSU 1 _ 1 Bucle Agar sangre (BA) O₂ 35°C x 24 horas
Orina cateterizada 1 _ 1 Bucle Agar MacConkey
(MAC) O₂ 35°C x 24 horas
Orina de vejiga,
suprapúbica o 10 _ 1 Bucle
cistoscopia
Procedimiento de inmersión y recuento:
1. Mezclar bien la orina.
2. Retire la tapa con la paleta de agar del laminocultivo. No toque las superficies del
agar.
3. Sumerja inmediatamente (durante una hora) la paleta de agar en la orina, de modo

que ambos lados de la paleta de agar queden sumergidos (totalmente cubiertos). Vierta
alternativamente la orina sobre ambos lados de la paleta de agar para cubrir ambas
superficies de agar.
4. Drenar el exceso de orina de la paleta de agar tocando el borde de la paleta contra el

borde del recipiente de recogida o escurrir tocando un filtro/papel secante.
NOTA: El agar de la paleta no debe tocar ninguna otra superficie. NO ponga orina en
el recipiente de recogida. El exceso de orina en el recipiente puede volver a inocular el
laminocultivo, causando un falso aumento de los recuentos bacterianos.
5. Vuelva a colocar la tapa y la paleta en el recipiente de la tira reactiva. Etiquete el

recipiente.
6. Enviar el laminocultivo al laboratorio tan pronto como sea posible.

Interpretación de los cultivos:
1.Inspeccionar las placas y los portaobjetos para comprobar el crecimiento y determinar

el recuento de colonias (véase estandarización del recuento de colonias para cultivos
de orina).
2. Identificar los aislamientos de patógenos potenciales presentes en números

significativos según el protocolo de identificación del laboratorio.
3. Realizar pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos de acuerdo con la de

antibióticos y el protocolo del laboratorio.
Patógenos potenciales en muestras de orina:

Enterobacteriaceae tales como E. coli, P. mirabilis. Klebsiella sp.
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Staphylococcus saprophyticus
Staphylococcus coagulasa negativo
Estreptococos b-hemolíticos
Streptococcus pneumoniae
Enterococcus spp.
Listeria monocytogenes
Especies de levadura Cándida
Estos organismos normalmente se consideran contaminantes, pero pueden ser

importantes tras el aislamiento repetido:
Lactobacillus spp.
_-Estreptococos hemolíticos
La mayoría de los bacilos Gram positivos como los difteroides
NOTA: TODA MUJER CON BACTERIURIA GBS EN CUALQUIER CONCENTRACIÓN

DURANTE SU EMBARAZO DEBE RECIBIR ANTIBIÓTICOS INTRAPARTO.
(SOGC Clinical Practice Guideline No. 149, J. Obstet. Gynaecol. Can. 2004; 26:826-
832)
Fuentes de consulta
● Patrick R. Murray, Ellen Jo Baron, James H. Jorgensen, Marie Louise Landry,

Michael A. Pfaller, Manual of Clinical Microbiology, 9th ed.: American Society for
Microbiology, 2007.

Para estandarizar la interpretación del recuento de colonias, el comité de Garantía de

Calidad de Microbiología recomienda la adopción de los siguientes criterios, como
lineamientos básicos. Éstos se basan en la información recopilada en el proceso de
encuesta, y de las referencias proporcionadas.
Estandarización recomendada del recuento de colonias:
Crecimiento Catéter permanente Catéter de entrada y Suprapúbica o

detectado de orina de flujo salida cistoscopia de orina
medio Bucle de 1 ml de vejiga
Bucle de 1 ml Bucle de 10 ml
1 organismo aislado <10⁷ ufc / L
Sin crecimiento ID & Sens cualquier ID & Sens cualquier
significativo** cantidad de cantidad de
≥10⁷ ufc / L crecimiento crecimiento
ID y Sens
2 organismo aislado ≥10⁷ ufc / L
2 patógenos ≥10⁷ ufc / L ID & Sens cualquier
probables en ID & Sens ambos cantidad de
cantidades iguales patógenos probables crecimiento
ID y Sens ambos
2 organismos con un Organización 1 organización >10⁷ ID & Sens cualquier

organismo predominante ID & ufc / L cantidad de
predominante Sens solo 2ª org <10⁷ ufc / L crecimiento
1 organización >10⁷
ufc / L
2ª org <10⁷ ufc / L
>2 organismos Crecimiento mixto - Crecimiento mixto - ID & Sens cualquier
probable probable cantidad de
contaminación contaminación crecimiento
**Las excepciones incluyen a los hombres sintomáticos, las mujeres adultas con
uretritis, los pacientes con antibióticos, pacientes con infección crónica o recurrente y
niños menores de 12 años. años de edad. Los aislados de muestras con leucocitos y/o
nitritos positivos se trabajarán cuando se proporcionen los valores de las tiras de orina.
Cálculo para la interpretación del recuento de colonias:
El recuento de colonias se multiplica por 1000 (cuando se utiliza un asa calibrada de 1

ml) o por 100 (cuando se utiliza un asa calibrada de 10 ml) para obtener una estimación
del número de colonias por ml.
Este número se multiplica por 1000 para igualar el número de unidades formadoras de
colonias por litro.

Fuentes de consulta
1. College of Physicians & Surgeons of Alberta, Microbiology Laboratory Inspection

Form, (Edmonton: Laboratory Accreditation Program, 1995), criteria M.38.001, 002,
page 12.
2. A Joint Accreditation Program of the College of Physicians & Surgeons of B.C. and
the B.C. Medical Association, Accreditation Protocol Microbiology, (Vancouver:
Diagnostic Accreditation Program), criteria 30, 34, page 7.
3. Baron Ellen, Peterson Lance, Finegold Sydney, Bailey & Scott’s Diagnostic
Microbiology, (Toronto: Mosby,1994), 252.
4. Kunan, White, Hua Hua, A Reassessment of the Importance of ‘Low-Count’

Bacteriuria, (American College of Physicians, 1993), 459.
5. College of Physicians & Surgeons of Manitoba, (Winnipeg: Executive Assistant, April

1998).
6. National Pathology Accreditation Advisory Council of Australia, Laboratory

Assessment Checklist Microbiology Section, (Canberra: Commonwealth Government
Printer, 1987), criteria 6.4.3, page 12.
7. Nicolle, Harding, Kennedy, McIntyre, Aoki, & Murray, Bacteriuria in Males, (American
Society for Microbiology, 1988), 1118.
8. Shapiro Eugene, Infections of the Urinary Tract, (Yale University of Medicine, 1992),
165.
9. Henry Isenberg, Clinical Microbiology Procedures Handbook, (American Society for

Microbiology/Washington, D. C., 1992), 1.17. 7

EXUDADO FARÍNGEO
Antecedentes:
Las muestras de hisopado faríngeo se recogen con mayor frecuencia para diagnosticar
infecciones causadas por S. pyogenes (estreptococo hemolítico del grupo A) y
ocasionalmente producir secuelas, las cuales deben ser notificadas.
Los exudados faríngeos también pueden producir colonias grandes (no precisas) de
estreptococos beta-hemolíticos que albergan el antígeno del grupo C o del grupo G de
Lancefield, pertenecientes a Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis. Se asocian
a infecciones del tracto respiratorio superior similares a las de S. pyogenes. Los casos
de glomerulonefritis y fiebre reumática aguda. En el trabajo de los exudados de la
garganta por faringitis aguda, es necesario informar sobre los grupos C y G.
Cultivo de cualquier otro agente sospechoso de la enfermedad como: Arcanobacterium

hemolyticum, N. gonorrhoeae, C. diphtheriae se realizará sólo a petición del médico
solicitante.
Recogida de muestras:
Se utiliza un hisopo estéril para recoger la muestra de garganta de la faringe posterior,

amígdalas y/o zonas inflamadas. El hisopo se coloca en el medio de transporte
apropiado, para uso de C & S Amies modificado.
Requisitos de almacenamiento: Colocar las muestras a temperatura ambiente si se van

a procesar en 2 horas, si el procesamiento se retrasa, colóquese en la nevera a 4ºC.
Procedimiento:
A. Procesamiento de las muestras:
Cultivo: En los siguientes medios e incubar la placa como se indica:
Medio Incubación
Sangre Agar (BA) o medios selectivos CO² 35°C x 48 horas
como Agar beta estreptocócico
AnO₂ 35°C x 48 horas o/
AnO₂ 35°C x 24 horas y luego
CO₂ 35°C x 24 horas
* Algunas instituciones tienen mejor recuperación incubando anaeróbicamente.

También existen kits comerciales para el estreptococo del grupo A (pruebas

rápidas directas). Si un laboratorio realiza la prueba rápida directa, deben recogerse
dos muestras de garganta. Si la prueba rápida es positiva, el segundo frotado puede
ser descartado; pero si la prueba rápida es negativa el segundo hisopo debe ser
cultivado, ya que la sensibilidad de estas pruebas directas es generalmente <100%.
B. Interpretación de los cultivos:
El medio utilizado para aislar S.pyogenes y otros estreptococos beta-hemolíticos es el

agar sangre de oveja con un 5% de sangre, o agar selectivo que contenga agentes que
supriman la flora normal de la garganta. La incubación anaeróbica de las placas puede
potenciar la beta hemólisis, haciendo así que las colonias sean más fácilmente
detectables. Si no hay colonias que demuestren la beta hemólisis después de 24 horas
de incubación, vuelva a incubar las placas durante otras 24 horas. Si la beta-hemólisis
está presente, realice la prueba de catalasa y, si es negativa, realice la prueba de
aglutinación de PYR y aglutinación de látex.
C. Prueba de susceptibilidad:
La prueba de susceptibilidad antimicrobiana de estos aislados no es necesaria a menos

que el paciente sea alérgico a la penicilina. Realice las pruebas de susceptibilidad
antimicrobiana de acuerdo con la Guía de notificación de antibióticos y el protocolo del
laboratorio.
Reporte de resultados:
Cultivo: Cuantificar todos los aislamientos significativos.
i. Si el cultivo es negativo, informe como "No se han aislado estreptococos del grupo A,
C o G aislado".
ii. Si el cultivo es positivo para el estreptococo del grupo A, informe "Estreptococo del
grupo A, aislado'.
iii. Si el cultivo es positivo para el estreptococo del grupo C o del grupo G, informe
como Grupo C" o "Estreptococo del grupo G aislado".
Fuentes de consulta
1. Isenberg et al, eds. Clinical Microbiology Procedures Handbook, ASM Press

Michael A. Pfaller, Manual of Clinical Microbiology, 9th ed.: American Society for
Microbiology, 2007.

HISOPOS CONJUNTIVOS
Antecedentes:
Se recogen frotis conjuntivales para el diagnóstico de conjuntivitis. Los hisopos deben

enviarse tanto del ojo infectado como del no infectado. Esto permite la comparación de
la flora y ayuda a determinar la patogenicidad de cualquier organismo aislado.
Recolección y transporte de muestras:
Se deben recolectar hisopos antes de la administración de medicamentos como

anestésicos tópicos o antibióticos. El hisopo debe enviarse en medio de transporte
Amies.
Procedimiento / Medios:
A. Procesamiento de muestras:
a) Examen directo del frotis Tinción de Gram - Observe la presencia de organismos y

células polimorfonucleares. Cuantifique según la Directriz para la Interpretación
Cuantitativa de Tinciones de Gram.
b) Cultivar en los siguientes medios e incubar las placas como se indica.
Medio
Incubación
Agar sangre (BA) CO², 35°C por 48 horas
Agar chocolate (CHOC) CO², 35°C por 48 horas
G. C. Agar selectivo (neonatos) CO², 35°C por 72 horas

Interpretación de cultivos:
Examine las placas AS y AC después de 24 horas y 48 horas de incubación y la placa

G.C. después de 48 y 72 horas de incubación. Compare el crecimiento de cultivos de
ojos infectados y no infectados. Esta comparación a menudo proporciona indicios de
qué organismos son patógenos. Patógenos potenciales: S. aureus. H. influenzae, M,
catarrhalis, N. gonorrhoeae, S. pyogenes, S. pneumoniae, especies de Moraxella y P.
aeruginosa. Para otros organismos, un resultado significativo se determina mediante el
aislamiento de un crecimiento moderado o intenso de un organismo que se ve como el
organismo predominante en la Tinción de Gram. Debe haber >1+ células
polimorfonucleares en el frotis de Gram. Se requiere una identificación completa a nivel
de especie para todos los organismos importantes.
B. Prueba de susceptibilidad:
Realice pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos de acuerdo con la Directriz de

Notificación de Antibióticos y el Protocolo de Laboratorio.
NOTA: No existe un método para probar los agentes tópicos.
Informe de resultados:
a) Frotis Tinción de Gram: Informe con cuantificación de la presencia de

polimorfonucleares y organismos.
b) Cultivo: Cuantifique todos los aislamientos significativos e informe con

susceptibilidades antimicrobianas. Si también hay flora normal, informe con
cuantificación.
Referencias:
1. Cumitech BA. Sep 1994. ASM Press, Laboratory Diagnosis of Ocular Infections
2. Bailey and Scott's Diagnostic Microbiology, 11th Edition 2002. Mosby Inc.

ESPUTO / CULTIVO RESPIRATORIO INFERIOR
Antecedentes:
Las muestras de las vías respiratorias inferiores se envían principalmente para la

detección del agente causante de la neumonía. El tipo de muestra más común es el
esputo expectorado o inducido. También se pueden recibir lavados bronquiales,
lavados, cepillados y aspirados transtraqueales, pero requieren procedimientos de
manipulación adicionales. Los agentes causales más comunes de neumonía bacteriana
son: S. pneumoniae, H. influenzae, S. aureus, M. catarrhalis, K. pneumoniae, E. coli y
P. aeruginosa.
Recoger el esputo expectorado o inducido en un recipiente de esputo estéril (las

muestras de madrugada generalmente son más adecuadas).
Requisitos de almacenamiento: las muestras deben entregarse de inmediato (en un

plazo de 2 horas) al laboratorio. Si es inevitable un retraso en el procesamiento, la
muestra debe refrigerarse a 4 ° C.
a. Evalúe la calidad de la muestra según la Directriz para la Interpretación Cuantitativa

de Tinciones de Gram para determinar la aceptabilidad para el cultivo.
b. Cultivar en los siguientes medios e incubar la placa como se indica.
Medios Incubación
Agar Sangre (BA) CO₂, 35°C por 48 horas
Agar MacConkey (MAC) O₂/CO₂, 35°C por 48 horas
Agar chocolate (CHOC) CO₂, 35°C por 48 horas

Con un hisopo o gasa estéril, introduzca el recipiente de la muestra y obtenga una

porción purulenta de la muestra. Plantee cada placa con la muestra siguiendo los
Procedimientos de Plantación de Cultivos Bacteriológicos.
B. Interpretación de cultivos:
Después de 24 horas de incubación, se examinan las placas y, si es necesario, se

realizan pruebas para determinar los organismos presentes. Cualquier placa con un
crecimiento significativo de un patógeno potencial debe cuantificarse, identificarse y
someterse a pruebas de susceptibilidad. Las placas que muestran solo la flora normal
se vuelven a incubar durante otras 24 horas y se vuelven a leer al día siguiente. Si se
observa algún cambio, realice las pruebas necesarias para identificar los organismos y
realice las pruebas de sensibilidad.
C. Pruebas de susceptibilidad:

notificación de antibióticos y el protocolo de laboratorio.
Informe de resultados
a) Frotis con Tinción de Gram: si la muestra es apta para cultivo, informe el resultado
del frotis de tinción de Gram. Informar con cuantificación la presencia de
polimorfonucleares, células epiteliales escamosas y organismos.
Si la muestra no es apta para cultivo de acuerdo con la Q-Score, informe el resultado

del frotis de Gram y también comente: “El frotis de Gram indica que la muestra de
esputo no es apta para cultivo. Vuelva a enviar”. (consulte: Directrices para
cuantitativos Interpretación de tinciones de Gram)
b) Cultivo: Cuantifique todos los patógenos importantes e informe con las

susceptibilidades antimicrobianas adecuadas. Si solo está presente la flora oral
normal, informe con la cuantificación: "Crecimiento de la flora orofaríngea".
Limitaciones del procedimiento:
1) No se cultivarán muestras de mala calidad.
2) El procedimiento no permite el aislamiento de otros agentes como Legionella sp.

Envíe una muestra de orina para la detección de antígenos al Laboratorio de Control de
Enfermedades de Saskatchewan (LCES). LCES cultivará Legionella sp. y / o lavado
broncoalveolar (LBA).
Referencias:

Patrick R. Murray, Ellen Jo Baron, James H. Jorgensen, Marie Louise Landry, Michael
A. Pfaller, Manual of Clinical Microbiology, 9th ed., 2007: American Society of
Microbiology
HISOPOS PARA OREJAS
Antecedentes:
Se recogen hisopos para el diagnóstico de otitis externa. La otitis externa es una

infección bacteriana del conducto auditivo externo causada generalmente por P.
aeruginosa, S. aureus, estreptococo del grupo A, Haemophilus influenzae,
Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis u hongos / levaduras. Se requiere
líquido de timpanocentesis para el diagnóstico de otitis media, que se cultiva como una
herida profunda.
El hisopo debe recogerse con un hisopo estéril y enviarse en medio de transporte

Amies.
a. Examen directo: frotis Tinción de Gram - observe la presencia de organismos de

células polimorfonucleares. Cuantifique según la Directriz para la Interpretación
Cuantitativa de Tinciones de Gram.
b. Cultivar en los siguientes medios e incubar la placa como se indica.
Medio Incubación
Agar Sangre (BA) CO₂, 35°C x 48 horas
Agar MacConkey (MAC) O₂/CO₂, 35°C x 48 horas

Placa de hongos (es decir: Sabouraud O₂, 30°C x 48 horas opcional hasta
Dextrosa Agar, agar selectivo fúngico, 4 semanas
fitona)
Agar chocolate (CHOC) CO₂, 35°C x 48 horas
Examine las placas de cultivo después de 24 y 48 horas de incubación. Los patógenos

potenciales son S. aureus, P. aeruginosa, streptococcus del grupo A, Haemophilus
influenzae, Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis o levaduras. Solo para
muestras de recién nacidos, identifique y notifique la Gp. B. Estreptococo. Para otros
organismos, un resultado significativo viene determinado por la presencia de un
crecimiento de moderado a intenso de un organismo que se considera el organismo
predominante en el frotis de Gram. El frotis de Gram también debe mostrar más de 31
células polimorfonucleares. Las placas para hongos se pueden incubar a 30 ° durante 4
semanas.
Realizar pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos de acuerdo con la Directriz

de Notificación de Antibióticos y Protocolo de Laboratorio.
a) Frotis Tinción de Gram: Informe con cuantificación de la presencia de

polimorfonucleares y organismos.
b) Cultivo: Cuantifique todos los aislamientos significativos e informe con las

susceptibilidades antimicrobianas adecuadas. Si también hay una flora cutánea normal,
notifíquese como normal.
Referencias:
1. Cumitech 10. Dec 1979. ASM. Press, Laboratory Diagnosis of Upper Respiratory
Tract Infection
2. Bailey and Scott's Diagnostic Microbiology, 11th Edition 2002. Mosby Inc.
3. see Antibiotic Reporting Guideline - www.quadrant.net/cpss

MUESTRAS DEL TRACTO GENITAL
Antecedentes:
Por lo general, se toman muestras genitales para diagnosticar una infección o para
descartar enfermedades de transmisión sexual específicas. Se sabe que ciertos
patógenos están asociados con tipos específicos de infecciones genitales. El médico
basará la selección de las solicitudes de cultivo en el tipo y la ubicación de la infección.
Hisopos cervicales:
Las muestras para N. gonorrhoeae se recogen del canal endocervical con un hisopo
estéril y se transportan en Medio de Transporte Carbón de Amies.
Hisopos uretrales:
El exudado de la uretra debe recogerse al menos una hora Carbón de Amies.
Hisopos vaginales:
Los hisopos de la bóveda vaginal posterior o del orificio vaginal se recogen y se

transportan en medio de transporte Amies. Los hisopos vaginales no se recomiendan
para el aislamiento de N. gonorrhoeae de adultos, pero están indicados para la
detección de Vaginosis Bacteriana e infecciones por Cándida.
Detección de estreptococo del grupo B (Streptococcus agalactiae) para mujeres

embarazadas:
Un hisopo obtenido de las áreas combinadas vaginal y anorrectal debe recolectarse en

medio de transporte Amies. No se recomiendan los hisopos cervicales para el
aislamiento de este organismo.
Examen Directo de Frotis (Tinción de Gram):
La Tinción de Gram de un hisopo vaginal es el método más confiable para la detección

de vaginosis bacteriana y también es sensible para la detección de hongos. Siga la
Directriz para el Procesamiento e Interpretación del Laboratorio de Muestras Vaginales
en el Diagnóstico de Vaginosis Bacteriana y observe la presencia o ausencia de años.
Otras muestras de frotis vaginales (postoperatorio, postparto, recurrente, sin levadura):

observe la presencia de organismos y células polimorfonucleares. Cuantifique según

las Directrices para la Interpretación Cuantitativa de Tinciones de Gram. Tenga en

cuenta la presencia o ausencia de levadura.
Uretral: Confiable para la detección de Neisseria gonorrhoeae. Nótese la presencia de

células polimorfonucleares y diplococos gramnegativos intracelulares. Cuantifique
según las Directrices para la Interpretación Cuantitativa de Tinciones de Gram.
Cuello uterino: Tinción de Gram no indicada para Neisseria gonorrhoeae debido a la

presencia de flora normal.
Tipo de muestra Medio Incubación
Vaginal - VB y No cultivado: tinción directa

levadura
Vaginal Agar sangre (BA) CO₂, 35°C x 48

horas
Agar de Sabouraud con
cloranfenicol O₂, 30°C x 48 horas
(Phytone)
Otros medios (CHOC, MML)

agregados según la
información clínica - postparto,

postoperatorio, vaginitis
recurrente.
Genitales pequeños Agar sangre CO₂, 35°C x 48

horas
Agar Sabouraud
O₂, 30°C x 48 horas
Agar chocolate (CHOC)
CO₂, 35°C x 72
Martin Lewis modificado (MML) horas
CO₂, 35°C x 72
horas

Cuello uterino Agar chocolate (CHOC) CO₂, 35°C x 72

horas
Uretral Martin Lewis Modificado (MML)
CO₂, 35°C x 72
Rectal horas
Garganta
Conjunto Caldo de estreptococo del CO₂, 35°C x 24

grupo B horas
Vaginal / anorrectal
para Subcultivo de agar sangre (BA) CO₂, 35°C x 48
a partir de caldo horas
Estreptococo del grupo
B
Cultivos vaginales:
Las placas AS se examinan a las 24 y 48 horas: El crecimiento de N. gonorrhoeae en

cualquier número es significativo. La importancia de otros organismos está determinada
por el crecimiento puro o denso correlacionado con su presencia como organismos
predominantes en el frotis de Gram. El frotis de Gram también debe mostrar la
presencia de células polimorfonucleares.
Cultivos cervicales y uretrales:
Las placas de AC y MLM se examinan a las 48 horas y 72 horas en busca de colonias

de N. gonorrhoeae. El crecimiento de N. gonorrhoeae en cualquier número es
significativo.
Detección de Estreptococos del Grupo B:
El hisopo se inocula en el caldo EGB y se incuba durante 24 horas. Los subcultivos se

hacen desde el caldo hasta la placa AS y la placa se incuba durante 24 horas. Las

placas de AS se examinan en busca de colonias de tipo estreptococo a las 24 y 48

horas y se identifica el organismo utilizando el protocolo de laboratorio.
No se realizan pruebas de susceptibilidad para N. gonorrhoeae, estreptococos del

grupo B y levaduras. Para otros organismos, siga las pruebas de susceptibilidad a los
antimicrobianos de acuerdo con la Directriz de Notificación de Antibióticos y el
protocolo de laboratorio, cuando corresponda.
Todos los aislamientos de N. gonorrhoeae se remiten al Laboratorio de Control de

Enfermedades de Saskatchewan para pruebas de susceptibilidad.
Los Aislados de Estreptococos del Grupo B. de pacientes con antecedentes de alergia

a la penicilina deberán analizarse para determinar la susceptibilidad a la eritromicina.
a. Frotis con Tinción de Gram - informe con cuantificación de organismos y células

polimorfonucleares.
b. Cultivo - Informe de patógenos y flora normal con cuantificación. Informe las

susceptibilidades cuando sea apropiado.
c. Todos los aislamientos de N. gonorrhoeae deben confirmarse mediante dos

métodos.
Referencias:
1. Bailey and Scott Diagnostic Microbiology, 11th Ed., Mosby Inc.

Michael A. Pfaller, Manual of Clinical Microbiology, 9th ed., 2007: American Society of
Microbiology

DIRECTRIZ PARA EL PROCESAMIENTO DE LABORATORIO E INTERPRETACIÓN

DE MUESTRAS VAGINALES EN EL DIAGNÓSTICO DE VAGINOSIS BACTERIANA.
Antecedentes:
La vaginosis bacteriana (VB) como una entidad clínica específica ha sido reconocida
desde la década de 1950 y se caracteriza por un aumento de la secreción vaginal
maloliente. Se asocia con cambios marcados en la flora microbiana que a menudo se
describen como un cambio en la ecología vaginal local y una ausencia notable de
inflamación. Una reducción de Lactobacillus spp. y un aumento de Gardnerella
vaginalis, varias especies anaeróbicas que incluyen Mobiluncus spp., Prevotella bivia,
Peptostreptococcus spp. y se han descrito otros como Mycoplasma hominis. Los
estímulos para estos cambios son muy poco conocidos. Si bien la VB a menudo tiene
una consecuencia clínica menor para las mujeres afectadas, es común y el trabajo
reciente ha aumentado la importancia de su reconocimiento. Está claramente asociado
con varias afecciones obstétricas y ginecológicas, sobre todo el parto prematuro, y a
menudo responde a la terapia antimicrobiana.
El diagnóstico clínico de la VB sigue siendo difícil a pesar del uso de criterios clínicos
formalizados propuestos por primera vez por Gardner y Dukes y formalizados por
Amsell.
Los criterios incluyen cambio visual en la descarga, aumentó (> 4,5) en el pH,
presencia de "células clave" (células epiteliales recubiertas de bacterias) en una
preparación microscópica húmeda y olor a pescado cuando la descarga se mezcla con
KOH al 10%. La diferencia entre la descarga "homogénea, adherente de color
gris-blanco" y la descarga "normal" es a menudo sutil y la microscopía para detectar
células clave rara vez se realiza en entornos de atención primaria canadienses.

El diagnóstico de laboratorio es fundamental y en los últimos años se ha centrado en

las características morfológicas distinguibles en la Tinción de Gram simple de las
secreciones vaginales. El Cultivo de Gardnerella vaginalis se defendió durante muchos
años, pero se ha encontrado que es poco predictivo de la VB clínica y el cultivo de
organismos anaerobios y Mycoplasma spp. no es práctico en el laboratorio de
diagnóstico de rutina.
Objetivo:
Aceptabilidad de la muestra:
· Que se informe la presencia o ausencia de células epiteliales (pistas) para evaluar

la aceptabilidad de la muestra. Si no hay células epiteliales, la muestra debe
considerarse inadecuada o inapropiada para su uso.
Sistema de puntuación:
· Que se utilice el sistema de puntuación numérica de Nugent en frotis de

secreciones vaginales de la Tinción de Gram.
· Que exista un corte de edad de >12 años y <55 años para la aplicación de los
criterios interpretativos de Vaginosis Bacteriana por Q-score.
Aunque la Q-score en las categorías de edad "pre-púberes" y "posmenopáusicas" tiene

menos valor, si la imagen microscópica es consistente con la VB, pero la muestra
especificada como obtenida de una persona prepúber, se justifica una mayor
investigación y los resultados no deben ignorarse ni discutirse con el médico.
NOTA: El sistema Nugent se validó mediante frotis hechos con una Tinción de Gram
modificada. Este método de tinción modificado recomendado por Spiegel utiliza una
contratinción de fucsina básica para minimizar la decoloración excesiva de bacterias
Gram positivas y para mejorar la detección de bacterias Gram negativas. Sin embargo,
se reconoce que el uso de esta tinción de Gram modificada no es una práctica común
en Canadá.
NOTA: Nugent sugirió la redacción de las interpretaciones de la partitura y

posteriormente la aprobó.
Sistema de Puntuación de Nugent:
Los portaobjetos de la Tinción de Gram se examinan bajo inmersión en aceite (x1000).

Los frotis se observan y cuantifican para detectar la presencia de los siguientes
morfotipos:
· Grandes bacilos grampositivos (morfotipos de Lactobacillus)
· Pequeños bacilos gram-variables (morfotipos de Gardnerella)

· Bacilos gramnegativos o gram variables curvos (morfotipos de Mobiluncus)
El número de organismos observados se cuantifica según la siguiente escala:
· 1 + = <1 organismo por campo
· 2 + = 1–4 organismos por campo
· 3 + = 5–30 organismos por campo
· 4 + => 30 organismos por campo
Una puntuación numérica total se calcula sumando las puntuaciones de los tres
componentes como se indica en la siguiente tabla:
Lactobac Puntua Gardne Puntua Mobilu Puntua

illus ción rella ción ncus ción
4+ 0 4+ 4 4+ 2
3+ 1 3+ 3 3+ 2
2+ 2 2+ 2 2+ 1
1+ 3 1+ 1 1+ 1
0 4 0 0 0 0

+ + =Puntuaci
ón total
La puntuación total se interpreta y se informa de la siguiente manera:
0 - 3 “La Tinción de Gram indica una flora vaginal bacteriana normal”.
4 - 6 “La Tinción de Gram revela una flora vaginal alterada que no es compatible con la
vaginosis bacteriana. Con frecuencia, esto representa una etapa de transición. Si los
signos y / o síntomas persisten, se justifica repetir la prueba”.
7 - 10 “Tinción de Gram compatible con vaginosis bacteriana”.
Referencias:
1. Gardner HL, Dukes CD. Haemophilus vaginalis vaginitis. A newly defined specific
infection previously classified "nonspecific" vaginitis. Am J Obstet Gynecol
1955;69:962-976.
2. Amsel R, Totten PA, Spiegel CA, Chen KC, Eschenbach D, Holmes KK. Nonspecific
vaginitis: diagnostic criteria and microbial and epidemiologic associations. Am J Med
1983;74(1):14-22.
3. Nugent RP, Krohn MA, Hillier SL. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is
improved by a standardized method of gram stain interpretation. J Clin Microbiol
1991;29(2):297-301.
4. Spiegel CA, Amsel R, Holmes KK. Diagnosis of bacterial vaginosis by direct gram
stain of vaginal fluid. J Clin Microbiol 1983;18(1):170-7.
5. Spiegel CA. Bacterial vaginosis. Clin Microbiol Rev 1991;4(4):485-502.
6. Spiegel CA. Bacterial vaginosis: changes in laboratory practice. Clin Microbiol

Newsletter 1999;21:33-37.

CULTIVO DE HECES
Antecedentes:
Los patógenos entéricos incluyen Salmonella y Shigella sp., Campylobacter, E. coli

0157: H7, Yersinia enterocolitica, Clostridium difficile, Aeromonas y Plesiomonas. Vibrio
(cholerae y parahaemolyticus) son una causa importante de diarrea en otras partes del
mundo. S. aureus y Candida albicans pueden encontrarse en cultivos puros de
pacientes en tratamiento con antibióticos de amplio espectro.
En pacientes adultos que desarrollan diarrea 3 días después de la hospitalización, C.

difficile es el patógeno más común. Las heces de estos pacientes se analizan
únicamente para detectar la presencia de toxina C. difficile.
Las muestras de brotes, según la definición de Salud Pública, deben enviarse al

Laboratorio de Control de Enfermedades de Saskatchewan con el número de brote.
Al investigar a pacientes sospechosos de estar en un estado de portador, consulte el

Laboratorio de Control de Enfermedades de Saskatchewan.
Las muestras de heces recién excretadas deben transportarse al laboratorio dentro de

los 30 minutos posteriores a la recolección y procesarse en 2 horas. Si hay un retraso
en el transporte y / o procesamiento, la muestra debe transferirse a un contenedor de

transporte con medio Cary-Blair. Las muestras deben llegar hasta la "línea de llenado"
en el contenedor de transporte. Los hisopos rectales pueden ser adecuados para la
detección de patógenos en infecciones agudas, pero NO son las muestras preferidas.
Asegúrese de que los hisopos rectales sean para C & S, y no para el aislamiento de N.
gonorrhoeae. Envíe una muestra por muestra de heces, hasta un máximo de 2
muestras de heces, idealmente en días separados.
Las heces para la prueba de toxina de C. difficile deben enviarse en un recipiente

estéril sin medio de transporte.
Muestras inaceptables:
1. Muestras en recipientes con contaminación externa.
2. Muestras con contaminantes como orina o papel tisú.
3. Las muestras no identificadas correctamente serán rechazadas si la discrepancia no

puede subsanarse.
4. Taburete en SAF.
En todos los casos, se notificará a la sala o al médico y se solicitará una nueva

muestra.
Cultivar en los siguientes medios e incubar las placas como se indica.
Medio Incubación
Agar MacConkey (MAC) O₂, 35°C x 24 horas

Desoxicolato de xilosa lisina (XLD), O₂, 35°C x 24 horas
Hektoen, Salmonella-Shigella (SS) o
Agar desoxicolato (DCA) - selectivo

para
Salmonella
Sorbitol MacConkey (SMA) O₂, 35°C x 24 horas
Agar Campylobacter Microaerophilic, 42°C x 48-72 horas
Cuando se solicite o se indique cultivo clínicamente para:
Media Incubación
Agar sangre (BA) o Aeromonas O₂, 35°C x 24 horas

selectiva
Citrato de tiosulfato - Sales biliares - O₂, 35°C x 48 horas

Sacarosa (TCBS)
- selectivo para Vibrio
Agar Yersinia (CIN) O₂, 30°C x 72 horas
Las colonias sospechosas de patógenos entéricos deben subcultivarse e identificarse

utilizando el sistema de identificación del laboratorio, es decir, métodos convencionales
o automatizados según corresponda.
El aislamiento de Salmonella, Shigella, Campylobacter, E. coli 0157: H7, Yersinia

enterocolitica, Plesiomonas, Aeromonas y Vibrio se considera significativo. Debe

proporcionarse un informe negativo específico de patógeno para cada patógeno

descartado.
Las pruebas de susceptibilidad a los antibióticos no se realizan en E. coli 0157: H7 ya

que su tratamiento está asociado con un mayor riesgo de SUH y es una enfermedad
autolimitada. Tampoco se realiza en Campylobacter y Yersinia sp, Aeromonas,
Plesiomonas y Vibrio sp. Para Salmonella sp, la enfermedad también es autolimitada y
el antibiograma se realiza y libera solo en circunstancias específicas (ancianos,
inmunosuprimidos, lactantes (<2 años), enfermedad grave, presencia de S. typhi).
Si hay un aislado concomitante de un hemocultivo, se deben informar las

susceptibilidades a los antimicrobianos en el aislado de sangre.
* Consulte las Directrices de Antibióticos para obtener más información.
Referencias:
1. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, 11th Edition., Mosby Inc.
2. Cumitech 12A Diagnosis of Bacterial Diarrhoea. 1992. ASM Press.
INVESTIGACIÓN DE LA DIARREA INFECCIOSA
La enfermedad diarreica es un problema de salud importante. Las Directrices para

analizar muestras de heces en la investigación de la diarrea infecciosa se basan en la
literatura actual y en las Directrices de otras provincias (Ontario, Alberta y Columbia
Británica, más recientemente).
La Directriz más común requiere:
· La historia clínica que indique síntomas;
· Su duración;
· Viajes recientes;
· Uso de antimicrobianos y;
· Cualquier condición médica subyacente.

Infecciones bacterianas
a) Heces para C&S
Inicialmente, se debe solicitar una única deposición en pacientes con síntomas de <5
días de duración y donde no se sospecha diarrea asociada a antibióticos. Las heces
para C&S detectarán Shigella sp, Salmonella sp, Campylobacter sp, Aeromonas y E.
coli 0157. Si se sospecha de otros patógenos, por ejemplo, Vibrio sp o Yersinia
enterocolitica, se debe informar al laboratorio. Si el primer cultivo de heces es negativo
y los síntomas persisten, se puede enviar una segunda muestra. Se pueden recolectar
hasta dos muestras en días consecutivos. Las heces para C & S deben enviarse en un
medio de transporte entérico o en un medio de transporte Cary Blair.
b) Se debe solicitar la prueba de toxina C. difficile en pacientes que tienen diarrea

secundaria al uso de antimicrobianos. La diarrea asociada a antibióticos puede
ocurrir hasta 8 semanas después de que se hayan suspendido los antibióticos. Las
pruebas deben realizarse en pacientes ambulatorios que hayan estado tomando
antibióticos recientemente. Debe enviarse una sola muestra. Si los resultados son
negativos pero los síntomas persisten, se puede enviar una segunda muestra 5-7
días después de la primera.
C. difficile es la causa más común de diarrea infecciosa en pacientes hospitalizados

que desarrollan diarrea >3 días después del ingreso. C. difficile debe considerarse en
otros casos de diarrea persistente, en los que no se ha identificado ningún otro agente
causal. Las heces para las pruebas de toxina de C. difficile deben transportarse en un
recipiente estéril sin conservantes.
C. difficile no es una causa de enfermedad en niños menores de un año; por lo tanto,

no se deben realizar pruebas.
La prueba de la toxina C. difficile no debe realizarse como prueba de curación.
c) El cultivo de heces de rutina y el examen de O&P no están indicados en pacientes

que desarrollan diarrea> 3 días después del ingreso al hospital.
Investigación de óvulos y parásitos
a) Se recomienda una muestra de heces para el examen inicial de óvulos y parásitos.

Las muestras deben transportarse en el conservante SAF.
b) Se pueden examinar muestras adicionales, si es clínicamente necesario, después

de que se conozcan los resultados del primer examen. En circunstancias
especiales, p. Ej. pacientes con antecedentes de viajes al trópico, pacientes
inmunodeprimidos, etc., consultar con el laboratorio.
Solo se podrán solicitar dos muestras de heces en los siguientes casos de alto riesgo:

· Pacientes con diarrea crónica.
· Viajeros que regresan con diarrea.
· Otras categorías de pacientes de alto riesgo (por ejemplo, pacientes

inmunosuprimidos, pacientes con esteroides, homosexuales masculinos).
Exclusiones
Es posible que estas Directrices no se apliquen a lo siguiente:
· Para evaluar los brotes de diarrea transmitidos por los alimentos, es necesario
consultar al laboratorio provincial para cubrir agentes como Bacillus cereus,
Staphylococcus aureus y Clostridium perfringens. La muestra inicial debe ser una
muestra de heces, tomada lo antes posible. Este resultado se utiliza para
determinar el procesamiento de muestras de alimentos.
· Donde no se considere una etiología infecciosa.
Si un laboratorio no puede realizar estas pruebas como parte del estudio, las heces
deben remitirse a un laboratorio de referencia para realizar este nivel de pruebas.
Referencias:
J. CLIN MICRO: Aug ’93
Application of Rejection Criteria for Stool Cultures for Bacterial Enteric Pathogens. Fan
et al. Pages 2233-2235.
JAMA Feb 16, 1990 Vol: 263 #7
Inappropriate Testing for Diarrhoeal Diseases in the Hospital.
Siegel D.K., Edelstein P.M.
Am. J. of INFECTION CONTROL: Dec 88 Vol 16 #16
Yield of Stool Culture, Ova and Parasite tests and C. difficile determinations in
nosocomial diarrhoeas. Yanelli et at. Pages 246-249.

MUESTRAS DE HERIDA PROFUNDA, ABSCESO Y PUS
Antecedentes
Las infecciones en heridas profundas y abscesos a menudo son causadas por una
mezcla de organismos aeróbicos y anaeróbicos.
Recolección y Transporte de muestras:
El pus de un absceso o una herida profunda debe enviarse en un recipiente limpio y

estéril y / o en un recipiente de transporte anaeróbico.
Examen directo del frotis Tinción de Gram: observe la presencia de células

polimorfonucleares, células epiteliales escamosas y organismos. Cuantifique según las
Directrices para la Interpretación Cuantitativa de Tinciones de Gram.
Si Actinomyces sp. o Nocardia sp. solicita o sugiere la Tinción de Gram (organismos

Gram positivos ramificados o con perlas), se debe realizar la tinción Acid Fast. Si la
Tinción Ácido Rápido modificado no se realiza en su laboratorio, consulte a un
laboratorio de referencia capaz de aislar estos organismos.
Cultivar en los siguientes medios e incubar las placas como se indica.
Medio Incubación
Agar sangre (BA) CO₂, 35°C x 48 horas
Agar MacConkey (MAC) O₂/CO₂, 35°C x 48 horas

Agar chocolate (CHOC) CO₂, 35°C x 48 horas
Agar anaerobio (BRUC) AnO₂, 35°C x 72-96 horas
Otros agares anaeróbicos según protocolo de laboratorio
Si Actinomyces sp. solicitado o cuestionado en frotis directo, incubar medios

anaeróbicos durante 7 días.
B. Interpretación de culturas:
Examine las placas aeróbicas diariamente para ver el tiempo total de incubación; y las
placas anaeróbicas a las 48 horas y 4 días. Los patógenos potenciales incluyen
organismos como S. aureus, estreptococos beta hemolíticos, Pasteurella sp.,
Capnocytophaga sp. (mordeduras de animales).
Eikenella sp. (mordeduras humanas), Enterobacteriaceae, P. aeruginosa, anaerobios.

Correlacionar con los resultados del frotis de Gram directo.


Patógenos potenciales: * Organismos enumerados:
S. aureus S. aureus - descartar MRSA
Estreptococos beta hemolíticos estreptococos beta-hemolíticos

(grupos A,
Pasteurella sp.
B, C, F y G)
Capnocytophaga sp. (mordeduras de
animales) Levadura solo cuando se aísla en
Eikenella sp. (mordeduras humanas) cantidades abundantes (consultar con

MOC o supervisor antes de informar)
Enterobacteriaceae,
Especies de Pseudomonas
P. aeruginosa
Especies de Enterococcus - descartar
Anaerobios ERV
Grupo Bacteroides fragilis
Actinomyces israelii
Clostridium perfringens - si predomina

Frotis Tinción de Gram: Informe con cuantificación de la presencia de

Cultivo:
a. Informe negativo: sin crecimiento, flora aeróbica mixta, flora anaeróbica mixta, flora
anaeróbica y aeróbica mixta, incluidos los "organismos incluidos en la lista" o el tipo
de flora, según el lugar

b. Informe positivo: Informe los posibles patógenos y sensibilidades (según lo

determine el organismo). Cuantificar. Los aislados únicos de anaerobios pueden
requerir pruebas de susceptibilidad.
c. Si los organismos observados en el frotis directo no aparecen en el cultivo y no se

envió la muestra anaeróbica, podría sugerir que los organismos observados no
crecieron, lo que indica la presencia de organismos exigentes o anaeróbicos.
También podría indicar que la tinción de Gram se interpretó incorrectamente. Es útil
volver a verificar el frotis directo. Si la tinción de Gram es correcta, el comentario
"Los organismos observados en el frotis directo no crecieron en el cultivo aeróbico,
lo que sugiere la presencia de organismos anaeróbicos u otros organismos
exigentes o una terapia antibiótica previa".
Referencias:
1. Isenberg, H. 1992. Clinical Microbiology Procedures Handbook. American Society for

Microbiology. Washington DC.
2. Miller, J.M. 1996. A Guide to Specimen Management in Clinical Microbiology.

American Society for Microbiology. Washington DC.
3. Murray, P.R. 1996. ASM Pocket Guide to Clinical Microbiology. American Society for

Michael A. Pfaller, Manual of Clinical Microbiology, 9th ed., 2007: American Society of
Microbiology Washington, DC.

CULTIVOS DE HERIDAS SUPERFICIALES
Antecedentes: Se recogen hisopos superficiales de las lesiones de la piel, heridas

abiertas, abscesos abiertos, erupciones cutáneas. La flora cutánea habitual puede
contaminar la muestra si no se tiene el cuidado de recoger correctamente la muestra
con los hisopos Los hisopos superficiales no son adecuados para la recuperación de
anaerobios.
Colección y Transporte de Muestras: Las muestras deben recogerse después de la

descontaminación adecuada de la piel para reducir la presencia de organismos
contaminantes. Las muestras deben recogerse con un hisopo limpio y estetil, y
enviarse a median un transporte a Aimes.
Procedimiento/ Materiales:
A. Procesamiento de Especimen:
Análisis Directo: Frotis Tinción de Gram: observe la presencia de células

polimorfonucleares, células epiteliales escamosas y organismos. Cuantifique según las
pautas para la interpretación cuantitativa de tinciones de Gram.
Adjunte valores Q a cantidades de células escamosas y neutrófilos. Suma los dos

valores Q juntos. Es más probable que las muestras con valores Q positivos contengan
un mayor número de patógenos potenciales y un menor número de contaminantes
potenciales. Es probable que las muestras con valores Q negativos (o un valor Q de
cero) estén contaminadas con la flora local. Las muestras sin células escamosas o
neutrófilos se puntúan como 1, lo que permite que los pacientes neutropénicos o
aquellos con secreciones necróticas o serosas se procesen como aceptables.
NOTA: La primera fila de números en la tabla es el valor Q para células epiteliales

escamosas únicamente. Las siguientes cuatro filas son los valores Q para la suma de
los neutrófilos y las células epiteliales escamosas.

Cultivo: En los siguientes medios e incube la placa como se indica:
Examine las placas después de 24 y 48 horas de incubación. Los patógenos

potenciales incluyen S. aureus, especies de Streptococcus beta hemolítico, P.
aeruginosa. Un crecimiento denso y puro de otros organismos que es consistente con
el organismo predominante observado en el frotis directo es significativo si se observan
≥1+ células polimorfonucleares.
Realice pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos de acuerdo con la Guía de

A. Frotis teñido de Gram: Informe con cuantificación de la presencia de células

Si Q-score tiene un valor negativo, agregue un comentario de informe como: "La

microscopía de un frotis teñido con Gram indica una posible contaminación con
la flora de la piel".
B. Cultura:
a. Informe negativo: "Sin crecimiento" u otro tipo normal de flora dependiente del
sitio, según el protocolo del laboratorio.
b. Informe positivo: Cuantifique todos los aislamientos significativos e informe con

las susceptibilidades antimicrobianas adecuadas. Si también hay flora cutánea
normal, informar con cuantificación. O, si hay otra flora normal, informar con
cuantificación.
Referencias:
1. Isenberg, H. 1992. Clinical Microbiology Procedures Handbook, American Society for

2. Miller, J.M. 1996. A Guide to Specimen Management in Clinical Microbiology,

American
Society for Microbiology. Washington DC.
3. Murray, P.R. 1996. ASM Pocket Guide to Clinical Microbiology, American Society for
Michael A.
Pfaller, Manual of Clinical Microbiology, 9th ed., 2007: American Society of
Microbiology;
Washington, DC.

PROCEDIMIENTO DE CULTIVO DE SANGRE
Antecedentes: La detección de microorganismos en la sangre de un paciente tiene

importancia diagnóstica y pronóstica. Cuando las bacterias se multiplican a un ritmo
que excede la capacidad del sistema reticuloendotelial para eliminarlas, se produce una
bacteriemia. Las bacterias ingresan a la sangre desde sitios extravasculares a través
de los vasos linfáticos. Los hemocultivos son esenciales en el diagnóstico y tratamiento
del agente etiológico de la sepsis.
Colección de especímenes:
1. Las muestras deben recolectarse asépticamente siguiendo el protocolo de

venopunción del laboratorio.
2. Un “conjunto” es el número total de frascos de hemocultivo extraídos de dos sitios,
con dos frascos tomados del sitio 1 y un frasco tomado del sitio 2. Los tres frascos se
toman durante la misma visita al paciente.
3. La tabla ilustra el horario óptimo.
NOTA: * FUO - Fiebre de origen desconocido (es decir, 3 semanas de fiebre por encima
de 38 ° C) ** En casos severos, es posible que sea necesario iniciar los antibióticos
inmediatamente.
.
Se recomienda recolectar la sangre justo antes de la administración de antibióticos.

La sangre extraída a través de un catéter intravenoso o intraarterial es aceptable solo si

no se puede extraer sangre de una venopunción periférica.
Cantidad:
1. El volumen de sangre extraído depende del sistema de hemocultivo utilizado.
Existe mucha evidencia publicada de que un volumen total de 30 ml por febril
proporciona una recuperación óptima de los pacientes adultos.
2. El volumen de sangre es crítico porque la concentración de microorganismos en

la mayoría de las bacteriemias es baja. En bebés y niños, la concentración de
microorganismos durante la bacteriemia es mayor que en los adultos; por lo
tanto, se requiere menos sangre para el cultivo.
3. La proporción de sangre a caldo recomendada es de 1: 5 a 1:10. Pueden

producirse diluciones superiores a 1:10 en hemocultivos de lactantes y niños
pequeños.
4. Recolecte un máximo de 30 ml para adultos, un máximo de 5 ml para niños y

cualquier cantidad obtenible para bebés.
Muestras inaceptables:
1. Botellas con contaminación externa.
2. Muestras incorrectamente identificadas. En estos casos, se debe notificar

inmediatamente a la sala o al médico y solicitar una nueva muestra.
Incubación:
Para los pacientes que presentan fiebre desconocida y si se sospecha endocarditis, se
puede requerir hasta 3 semanas de incubación.
Materiales, equipos y reactivos: según el procedimiento de su laboratorio.
Procedimiento:
A. Recolección de espécimen
1. Retire las tapas de los viales de hemocultivo y limpie las tapas de los viales con
un hisopo con alcohol.
2. Seleccione la vena y prepare el brazo con una doble aplicación de alcohol al

70% comenzando en el centro del sitio y frotando concéntricamente durante 1
minuto.

3. Deje que se seque el sitio de la venopunción.
4. No toque el sitio de la venopunción después de la preparación o antes de la

flebotomía.
5. Realizar venopunción.
6. Transporte directamente al laboratorio.
En el laboratorio
Proceda con la incubación y el subcultivo de las botellas según las instrucciones del
fabricante para el sistema involucrado.
B. Detección y elaboración de cultivos positivos
Tinción de Gram:
Todas las botellas marcadas como "positivas" por el sistema automático, o detectadas
como positivas por medios visuales como la turbidez, deben examinarse mediante la
preparación de un frotis de Gram.
NOTA: Los resultados del tinción de gram se deben llamar al estado de la sala /
médico.
Subcultura:
Identifique los aislamientos y realice pruebas de susceptibilidad según el protocolo de

su laboratorio.
Informes:
Negativo: no hay crecimiento después de 5 días de incubación o según las

instrucciones del fabricante. Positivo: informe del organismo con la correspondiente
susceptibilidad a los antimicrobianos.

NOTA: Los organismos que son comensales cutáneos normales, como los
estafilococos coagulasa negativos, pueden ser contaminantes. El aislamiento de este
tipo de organismo en un solo frasco / cultivo puede indicar contaminación. Esto deberá
resolverse mediante discusión con el médico. La notificación de contaminantes puede
resultar en el uso inadecuado de antibióticos.
Referencias:
1. CUMITECH 1C – Blood Cultures 111 (2005)
Michael A.
Pfaller, Manual of Clinical Microbiology, 9th ed., 2007: American Society of Microbiology

LÍQUIDOS CEREBROESPINALES Y LÍQUIDOS CORPORALES ESTÉRILES
Antecedentes:
La meningitis bacteriana es el resultado de una infección de las meninges causada por

organismos aeróbicos o anaeróbicos. Las muestras cultivadas incluyen líquido de
derivación cerebroespinal y ventricular.
Los líquidos corporales estériles incluyen muestras como líquido articular, pleural,
peritoneal y amniótico. El líquido cefalorraquídeo y otros líquidos corporales estériles
pueden contener muy pocos organismos por mililitro de líquido y se recomienda la
concentración de la muestra. Se deben informar todos los aislamientos de fluidos
corporales estériles.
Recogida y transporte de muestras:
El líquido cefalorraquídeo y otros fluidos corporales estériles deben recogerse en un

tubo estéril. Para fluidos corporales estériles, si hay suficiente muestra, inocular un
frasco de hemocultivo aeróbico o un frasco de hemocultivo pediátrico. Procese el
hemocultivo de acuerdo con el procedimiento de laboratorio.
No refrigere las muestras recolectadas.
La PCR para Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae y Streptococcus

pneumoniae en muestras de LCR se puede enviar a pedido y revisión del MHO.
a) Procesamiento de muestras:
1. Registre el volumen y el aspecto general del LCR, es decir, claro, sanguinolento,

turbio, xantocrómico. Si la muestra está turbia, se debe realizar una tinción de
Gram antes de la centrifugación.
2. Centrifugue la muestra de LCR para la tinción de Gram.
3. Centrifugue la muestra:
a. Si el volumen de líquido es> 1 ml, centrifugue durante 15 min. a
2500-3000 rpm (1500 x g). Se prefiere la velocidad más alta para
sedimentar las bacterias.
b. Retire el sobrenadante y agite el sedimento vigorosamente durante al
menos 30 segundos. Este paso es fundamental. No utilice una pipeta
para mezclar el sedimento, porque las bacterias y las células pueden
adherirse a los lados del tubo y causar resultados falsos negativos.
c. Si recibe ≤1 ml, no centrifugue, agite la muestra en vórtex.

4. Utilizando una pipeta estéril, inocular el medio y rayar para colonias aisladas.
Además, agregue una sola gota de líquido al cuarto cuadrante de la placa y deje secar
al aire. No esparza esta gota de líquido.
b) Preparación de líquidos corporales estériles
1. Describa brevemente la apariencia de la muestra, es decir, el color, la

viscosidad, las propiedades de transmisión de luz y la presencia de un coágulo.
2. Centrifugue la muestra si se reciben> 5 ml.
a) Si el volumen de líquido es> 5 ml, centrifugue durante 15 min. a 2500-3000 rpm
(1500 x g).
b) Retire el sobrenadante y agite el sedimento en un vórtex.
c) Si se reciben <5 ml, agite en el vórtex.
c) Procese las muestras (tanto LCR como líquidos corporales estériles) con coágulos
grandes de la siguiente manera:
a. Vierta el sedimento que contenga material coagulado en un triturador de tejido
estéril. Agregue un pequeño volumen (<0.5 ml) de caldo nutritivo estéril al
molinillo y homogenice suavemente esta mezcla para dispersar los coágulos y
liberar las bacterias atrapadas.
b. O, alternativamente, use un palito estéril, ya que el coágulo se adhiere al
pegarse, dé vuelta y exprima el coágulo.
NOTE: No triture los coágulos si también se solicita un cultivo de hongos en la

muestra. Separe los coágulos. Una trituración vigorosa puede destruir las células
fúngicas.
d) Examen directo del tinción de Gram: observe la presencia de células

polimorfonucleares, células epiteliales y organismos. Cuantifique según las pautas para
la interpretación cuantitativa de tinciones de Gram.
e) Cultivo de los siguientes medios e incube las placas como se indica.

* En caso de LCR: agregue el caldo solo cuando esté trabajando en infecciones de la

derivación.
a. Muestras de LCR: Examine las placas BA, MAC, CHOC y BRUC diariamente
durante 72 horas. En infecciones de derivación, examine el medio de caldo THIO
diariamente durante 7 días.
b. Fluidos corporales estériles: Examine las placas BA, MAC, CHOC y BRUC
diariamente durante 48 horas. Frascos anaeróbicos: examínelos después de 48
horas o 72-96 horas antes de desecharlos. El caldo se puede examinar a diario.
c. Los patógenos potenciales incluyen los organismos enumerados en la siguiente
tabla. Identificar y proporcionar susceptibilidad a los antimicrobianos en todos los
microorganismos, independientemente de la cantidad aislada. Correlacionar con
los resultados del frotis de Gram directo.
LCR: organismos comunes que causan meningitis bacteriana aguda:
NOTA: Para LCR y líquidos corporales estériles: los patógenos potenciales incluyen
todos los aislados, especialmente en pacientes inmunodeprimidos.
C. Pruebas de susceptibilidad
Según protocolo de laboratorio. Para el LCR, siga las Directrices de notificación de

antibióticos del Comité de garantía de calidad de microbiología.
A. Tinción de Gram: Informe con cuantificación de la presencia de polimorfonucleares,

células epiteliales y organismos. Llame por teléfono los resultados a la sala / médico.
B. Cultivo: Informe todos los aislamientos con cuantificación y con las susceptibilidades
antimicrobianas adecuadas. Nota: los subcultivos de caldos no se pueden cuantificar.

NOTA: Un cultivo positivo es un valor crítico y debe comunicarse al médico.
Notas de procedimiento para fluidos corporales estériles:
Aunque en el pasado no se recomendaba el uso de botellas de sangre para la

recolección de líquidos, estudios recientes sugieren que el gran volumen de muestra
que se puede cultivar puede mejorar la recuperación de cantidades bajas de
organismos en líquidos como la ascitis. Sin embargo, al igual que con cualquier sistema
de caldo, el organismo de crecimiento más rápido suele ser el único aislado, lo que
pone en peligro la recuperación de los de crecimiento lento. Cuando se usa un caldo,
no se dispone de información directa sobre el frotis y, por lo tanto, no se puede realizar
una evaluación de la distribución inicial de organismos o células inflamatorias. Sin
embargo, se puede preparar un frotis en el momento de la obtención de la muestra y
enviarlo con el medio de caldo. Además, a menos que se disponga de un sistema
bifásico, un cultivo en caldo retrasa al menos 24 h el análisis preliminar de los
organismos que solo es posible a partir del crecimiento en medios sólidos.
Limitaciones del procedimiento:
Este procedimiento no es adecuado para la recuperación óptima de todos los

microorganismos patógenos que se encuentran en los fluidos corporales estériles,
incluidos hongos, micobacterias, parásitos o virus.
Cultivo de muestras de LCR negativas de pacientes que han recibido antibióticos

pueden enviarse al Laboratorio de Control de Enfermedades de Saskatchewan para
PCR, a pedido del MHO.
Referencias:
Michael A.
Pfaller, Manual of Clinical Microbiology, 9th ed., 2007: American Society of Microbiology
2. Meredith F.T., Phillips H.K, and L. B. Reller, Clinical Utility of Broth Cutures of
Cerebral
Spinal Fluid from Patients at Risk for Shunt Infections, 1997, JCM, 35:3109-3111
3. Dunbar, S.A., Eason R.A., Musher D.M., & J.E. Clarridge, Microscopic Examination
and
Broth Culture of cerebral Spinal Fluid in Diagnosis of Meningitis, 1998 JCM, 36:1617 –
1620.
4. Sturgis C.D., Petersen L.R. & J.R. Warren, Cerebral Fluid Broth Culture Isolates:
Their
Significance to Antibiotic Treatment, Am J Clin Pathol. 1997, 108(2): 217-221.

5. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; M100-S11 Vol. 21.

No.1.
CLSI.

DIRECTRIZ DE REPORTE DE ANTIBIÓTICOS
● Se deben informar los antibióticos alternativos, solo si el organismo es resistente

a dos o más antibióticos de primera elección, si el paciente no puede tolerar
esos antibióticos o si el paciente ya está tomando el antibiótico de elección.
● Para las especies de Enterococcus, las cefalosporinas, los aminoglucósidos, la
clindamicina y el trimetoprim / sulfametoxazol pueden parecer susceptibles in
vitro, pero no son eficaces clínicamente y no deben informarse.
● Se debe utilizar una placa de cribado de agar oxacilina para la detección de
Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA)
● La placa de cribado de agar vancomicina debe usarse para la detección de
Enterococcus resistente a vancomicina (VRE)
● Todos los patógenos entéricos distintos de Shigella y Salmonella typhi: no
informan de susceptibilidad, a menos que el paciente tenga menos de dos años
o esté inmunodeprimido.
● Para las especies de Salmonella y Shigella, las cefalosporinas de primera y
segunda generación pueden parecer susceptibles in vitro, pero no son efectivas
clínicamente y no deben informarse.

● La prueba de ß-lactamasa debe realizarse en todos los aislamientos de: (1)

Estafilococo susceptible a la penicilina. aureus; (2) Haemophilus sp .; (3) N.
gonorrhoeae; (4) M. catarrhalis; (5) Enterococcus sp. Aislado de sitios corporales
estériles; (6) bacilos gramnegativos anaeróbicos (grupo B. fragilis)
1 SXT se refiere a trimetoprima / sulfametoxazol

2 Las fluoroquinolonas no deben informarse en pacientes <17 años de edad o mujeres
embarazadas. Las fluoroquinolonas que se pueden usar son levofloxacina,
gatifloxacina, ciprofloxacina o moxifloxacina. La ciprofloxacina no es el fármaco de
elección para Strep. pneumoniae.
3 No se dispone de directrices para la interpretación de las pruebas de sensibilidad de
los antibióticos tópicos. Sin embargo, puede estar indicada la prueba de aislamientos
de ojos o oídos utilizando puntos de corte séricos ya que estas infecciones pueden
volverse sistémicas
4 Para Strep Viridans, las pruebas de susceptibilidad deben realizarse mediante un
método MIC.
5 Especies productoras de betalactamasas de espectro extendido inducibles
potenciales (BLEE), Klebsiella pneumoniae, K. oxytoca, Escherichia coli y Proteus
mirabilis (cepas bacteriémicas). Estos organismos producen enzimas betalactamasas
que promueven la resistencia a los antimicrobianos betalactámicos de amplio espectro,
como cefotaxima (<27 mm), ceftriaxona (<25 mm), ceftazidima (<22 mm), cefpodoxima
(<17 mm) y aztreonam (<27 mm). Estas posibles cepas de BLEE deben examinarse
utilizando los puntos de interrupción recomendados de difusión en disco o MIC. (CMI>
1ug / ml para todos los antibióticos). La prueba de confirmación fenotípica que utiliza
ceftazidima y cefotaxima solas y en combinación con ácido clavulánico confirmará las
cepas productoras de BLEE. En todas las cepas de BLEE, los diámetros de las zonas
deben aumentar en presencia de ácido clavulánico. Para todas las cepas productoras
de BLEE confirmadas, la prueba. La interpretación debe notificarse como resistente
para todas las penicilinas, cefalosporinas y aztreonam. CLSI M100 Tabla 2A.
6 Enterobacteriaceae-parentral (IV / IM) La cefazolina se usa generalmente para tratar
pacientes hospitalizados, y la cefalotina oral generalmente se usa para tratar pacientes
ambulatorios..
7 Considere estas pruebas de susceptibilidad para pacientes con alergias conocidas a
la penicilina. Considere la cefazolina si la paciente está embarazada.
8 CLSI recomienda que todas las cepas de S. pneumoniae en LCR se analicen
inmediatamente mediante un método de CMI para determinar la susceptibilidad a la
penicilina, cefalopatía de tercera generación y vancomicina. Reporte Ceph y
Vancomicina de tercera generación únicamente cuando la penicilina sea resistente.
9 Las cepas de estafilococos y estreptococos que son sensibles a la clindamicina, pero
resistentes a la eritromicina, deben analizarse para determinar la resistencia inducible a
la clindamicina mediante la prueba de la zona D. La eritromicina debe incluirse en las
pruebas para este propósito, incluso si no se informa.
10 La resistencia de las especies de Salmonella al ácido nalidíxico se puede utilizar
para predecir el potencial de resistencia a las fluoroquinolonas.
11 Organismo de alta resistencia inherente. SXT en dosis altas más otros antibióticos
(si son susceptibles) usados.

12 Uso de detección de aminoglucósidos de alto nivel para predecir la sinergia.

Hay varias razones para prescribir dos medicamentos antimicrobianos juntos y una es
lograr un efecto sinérgico. Se observa una sinergia bacteriana entre dos fármacos, que
individualmente no son completamente bactericidas, aunque actuando juntos matan
completamente el inóculo. Los enterococos son inherentemente resistentes a los
aminoglucósidos. Sin embargo, las cepas de enterococos con resistencia de nivel
medio (CMI <2000 mg / ml) muestran una muerte sinérgica por una combinación de
penicilina / ampicilina y gentamicina. Para las infecciones por enterococos de sitios
estériles como la sangre, la terapia recomendada es una combinación de
betalactámicos (p. Ej., Ampicilina) o vancomicina combinada con un aminoglucósido
(gentamicina o estreptomicina). En el JCM 25: 2443 - 2444 (1987) Zervos et al.
demostraron que el crecimiento en un pozo de microdilución de caldo único que
contenía gentamicina a una concentración de 500 mg / ml predijo un alto nivel de
resistencia a la gentamicina (CMI> 2000 mg / ml). Los paneles de prueba de
antimicrobianos utilizan un aminoglucósido de alto nivel de concentración única como
pantalla de sinergia. La tira reactiva de susceptibilidad ATB ENTEROC5 prueba la
sensibilidad de alto nivel a la gentamicina y la estreptomicina. La elección de
MicroScan también se basa en la observación de que, en presencia de un alto nivel de
resistencia a la gentamicina, muchos aislados pueden ser sensibles a la
estreptomicina. La resistencia a la gentamicina de alto nivel indica que existe
resistencia a la sinergia de la gentamicina, tobramicina, sisomicina y netilmicina, debido
a la presencia de la enzima común bifuncional 6'-N-acetiltransferasa y 2
"-O-fosfotransferasa. Esto enzima no afecta a la estreptomicina. Por tanto, la
estreptomicina tiene su propia pantalla. De enero de 2005, Normas de rendimiento para
las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos de CLSI (antes CLSI), documento
M100 - S15; La Tabla 2D recomienda los siguientes parámetros para la detección de
resistencia de alto nivel (HLR) a los aminoglucósidos entre los enterococos: (i)
concentraciones de dilución en agar gentamicina 500 mg / ml y estreptomicina 2000
mgm / ml; punto final cualquier crecimiento superior a 1 colonia, (ii) microdilución en
caldo, gentamicina 500 mg / ml y estreptomicina 1000 mg / ml;
punto final - cualquier crecimiento; (iii) concentraciones de difusión en disco
gentamicina 120 mgm disco y estreptomicina 300 mgm / disco; punto final 5 mm = HLR,
7-9 mm no concluyente (use el método de dilución en agar),> 10 mm sensible. En
resumen, enterococos aislados de sitios estériles deben tener pruebas de
susceptibilidad antimicrobiana para ampicilina MIC, detección de alto nivel para
gentamicina y estreptomicina, y detección de vancomicina.
EXCEPCIONES
Cualquier organismo que no presente el patrón antibiótico típico para ese organismo
debe tener pruebas repetidas (identificación y susceptibilidad) realizadas + / o enviadas
al laboratorio de referencia (es decir, SDCL).

New resistance in a species never reported before (e.g. Streptococcus A resistant to

penicillin G).
Estreptococos y enterococos:
Resistente a la vancomicina
No es necesario volver a probar si el aislamiento tiene resistencia intrínseca (por
ejemplo, E gallinarum)
Staphylococcus aureus:
Susceptible o intermedio a la penicilina G sin comprobar la ß-lactamasa
Resistente a la oxacilina y sensible a la penicilina
Resistente a la clindamicina y sensible a la eritromicina
Resistente a la vancomicina
No es necesario volver a realizar la prueba si es resistente a la oxacilina y si es
susceptible a cualquiera de los lactámicos o beta. Esto se espera y se maneja
reflejando la interpretación de esos organismos basada en el resultado de
Oxacilina.
Enterobacteriaceae:
Resistente a una cefalosporina de tercera generación cuando la cepa es sensible a
la cefalotina
Resistente a la ampicilina y susceptible a la ticarcilina y la cefalotina (verifique el
disco de ampicilina)
Salmonela:
Susceptible a la ampicilina y resistente a la cefalotina
Enterobacter y Serratia:
Susceptible a cefalotina, informar como resistente
Klebsiella pneumoniae:
Susceptible a la ampicilina, informar como resistente
Pseudomonas aeruginosa:
Susceptible a cefalotina, ácido nalidíxico o trimetoprima
Susceptible a ticarcilina y resistente a ceftazidima o piperacilina
Haemophilus influenzae:
Susceptible o intermedio a la ampicilina sin comprobar la betalactamasa
Proteus mirabilis y Serratia marcescens:

Susceptible a la nitrofurantoína
LIMITACIONES

Los siguientes organismos no tienen estándares CLSI para susceptibilidad e

interpretación. Si se realizan pruebas, se debe utilizar un método de CIM y todas las
interpretaciones se deben informar como "no estandarizadas".
Estas pautas son para el uso de varios antibióticos en el tratamiento de infecciones

causadas por estos organismos.
Pasteurella multocida
La penicilina sigue siendo el fármaco de elección. La ampicilina, SXT, cefuroxima, ácido
amoxicilina clavulánico, tetraciclina y fluoroquinolonas también demuestran una buena
actividad in vitro.
Para las especies de Pasteurella, la oxacilina, los macrólidos, los aminoglucósidos y las
cefalosporinas de 1ª generación no son eficaces y no deben informarse.
Listeria monocytogenes
La ampicilina o amoxicilina combinada con un aminoglucósido es la opción principal de
tratamiento. El cotrimoxazol es un fármaco alternativo. Resistente a las cefalosporinas
Moraxella catarrhalis
La mayoría de las cepas de M. catarrhalis son betalactamasas positivas. No se sugiere
la terapia con ampicilina, amoxicilina, penicilina y cefalosporina de primera generación.
Terapia recomendada: generalmente sensible a macrólidos, SXT, cefuroxima,
ceftriaxona, quinolonas y amoxicilina / ácido clavulánico. Las fluoroquinolonas no se
recomiendan en el embarazo o en personas <17 años.
Bacillus sp.
Corynebacterium sp.
Eikenella sp.
Micrococcus sp

RESISTENCIA INTRÍNSECA A LOS ANTIMICROBIANOS EN ALGUNAS

ENTEROBACTERIACEAE COMUNES
Género o especie La mayoría de las cepas son resistentes a:
Especies de Buttiauxella. Cefalotina

Especies de cedecea. Polimixinas, ampicilina, cefalotina
Citrobacter amalonaticus Ampicilina
Citrobacter freundii Cefalotina
Citrobacter diversus (C. koseri) Cefalotina, carbenicilina
Edwardsiella tarda Colistin
Enterobacter cloacae Cefalotina
Enterobacter aerogenes. Cefalotina
Muchas otras especies de Enterobacter. Cefalotina
Escherichia hermannii Ampicilina, carbenicilina
Ewingella americana Cefalotina
Hafnia alvei Cefalotina
Klebsiella pneumoniae Ampicilina, carbenicilina
Kluyvera ascorbata Ampicilina
Kluyvera cryocrescens Ampicilina
Proteus mirabilis Polimixinas, tetraciclina, nitrofurantoína
Proteus vulgaris Polimixinas, ampicilina, nitrofurantoína,
tetraciclina
Morganella morganii Polimixinas, ampicilina, cefalotina

Providencia rettgeri Polimixinas, cefalotina, nitrofurantoína,
tetraciclina
Otras especies de Providencia Polimixinas, nitrofurantoína
Serratia marcescens Polimixinas, cefalotina, nitrofurantoína
Serratia fonticola Ampicilina, carbenicilina, cefalotina
Otras especies de Serratia Polimixinas, cefalotina
A La mayoría de las cepas de Providencia stuartii también son resistentes a cefalotina y

tetraciclina.
B Serratia marcescens también puede ser resistente a ampicilina, carbenicilina,
estreptomicina y tetraciclina.
C La mayoría de las especies de Serratia son resistentes a las polimixinas, pero
algunas cepas tienen zonas de inhibición inusuales, de 10 a 12 mm o más, aunque son
resistentes cuando se prueban con otros métodos.
Referencia: Antibiotics in Laboratory Medicine, Lorian 4th Edition

PROCEDIMIENTO / MÉTODO ESTUDIO ESTADÍSTICO / DIRECTRICES PARA EL

ESTUDIO DE VALIDACIÓN: MICROBIOLOGÍA
Directrices de trabajo y definiciones (cambio de método / instrumento):

Cuantitativo:
Requisitos de trabajo cuando un instrumento se traslada del sitio "A" al sitio "B": (se
supone que el instrumento se ha utilizado recientemente con un rendimiento
aceptable).

Procedimientos y Directrices en El Laboratorio de Microbiología.

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Traducción técnica inglés-español

Profesora: Lic. Margarita de Jesús Pucheta Rosario

ÍNDICE DE TRADUCCIÓN POR INTEGRANTE

Nombre Número de Página

Águila López Román ……………………………………………………... 1-25

Primo Málaga Irene ………………………………………………………. 26-50

Contreras Olivares América………………………………………………. 51-70

Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 2

Colegio de Médicos y Cirujanos de Saskatchewan.

Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 3

Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 4

CONTROL DE CALIDAD EN LOS LABORATORIOS DE MICROBIOLOGÍA

Los laboratorios de microbiología deberán utilizar procedimientos de control de calidad

El alcance de las pruebas de control de calidad realizadas estará determinado por el

(i) M22, correspondiente al control de calidad de medios de cultivo

(ii) M100 de estándares de desempeño para pruebas de susceptibilidad

(iii) M2 de estándares de desempeño para pruebas de disco en susceptibilidad

(iv) M7 Métodos de dilución para la realización de pruebas de susceptibilidad

v) M11 Métodos de pruebas de susceptibilidad antimicrobiana de bacterias

b) Los paneles de identificación deben ser sometidos a un control de calidad de

c) Se utilizarán organismos ATCC para el control de calidad adecuado de los medios y

CLSI: Instituto de Normas Clínicas y de Laboratorio.

ATCC: Recolección Americana de Tipos de Cultivos.

Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 5

Directrices para la interpretación cuantitativa de las tinciones de Gram.

El examen microscópico sigue siendo la prueba diagnóstica inicial en el procesamiento

Revisar la práctica actual en Canadá y la evidencia de la literatura para establecer un

Aunque existen varios criterios publicados para la notificación de tinciones de Gram, la

-Un conjunto de criterios de interpretación para todos los tipos de especímenes

-Criterios de rechazo de muestras publicados por separado para los esputos..

-Criterios estándar para el diagnóstico de la vaginosis bacteriana (9, 10).

Los laboratorios especifican los criterios utilizados al comunicar los resultados de la

Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 6

Criterios de cuantificación para la Tinción de Gram:

1) Sistema de clasificación para evaluar la calidad del esputo*:

Tipo de célula y #/campo de baja Rango

Células epiteliales escamosas: 1

Para determinar la puntuación media, cuente el número de neutrófilos y células

ii) Número de células epiteliales escamosas (SEC)11.

Examinar 20-40 campos a baja potencia. Promediar el número de células en campos

Criterio de rechazo: ³10 SEC / LPF

Aceptable: <10 SEC / LPF

NOTA: si el número de PMN es 10 veces superior al número de SEC y hay 3-4+ de un

Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 7

2) Todos los demás tipos de muestras:

Células Epiteliales o Microorganismos (bacterias,

NOTA: En el caso de las muestras de fluidos en las que se utilizan preparaciones de

3) Criterios de control de calidad para la interpretación de la tinción de Gram:

Para calificar las tinciones de Gram se recomienda un esquema de clasificación de

- Informar de la presencia de polimorfos cuando no están presentes.

- Informar de la presencia de un organismo no presente o;

UN ERROR MUY IMPORTANTE:

- No informar de la presencia de un microorganismo

Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 8

2. Evangelista, AT and HR Beilstein. 1993. Cumitech 4A, Laboratory diagnosis of gonorrhea.

Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 9

Esquema de identificación de estafilococos

1. Algunas colonias de SARM y S. intermedios son negativas al factor de aglutinación.

2. Se pueden obtener "falsos" positivos de Staph aureus con S. saprophyticus.

3. Recuerde hacer una placa de oxacilina para descartar el SARM.

4. Remitir para la identificación completa del estafilococo.

Procedimientos y directrices de la microbiología- Edición 2010 10

CEPAS DE ESTAFILOCOCOS COAGULASAS NEGATIVOS (ECN)