PARCIAL FINAL

MICROBIOLOGÍA 2020-2
NOMBRE: ESTEBAN ALEJANDRO TRUJILLO MATEUS

A lo largo del parcial encontrará el planteamiento de un experimento hipotético (no es una

investigación real y solo se formuló para este ejercicio) que le otorgará información para
responder las preguntas enunciadas.

En una primera fase de la investigación se recuperaron muestras de un suelo contaminado con

percloroetileno (PCE) y se realizó un recuento en placa en superficie (0,1 ml) de microorganismos
con capacidad de degradar el compuesto de interés, para lo que utilizaron un medio de cultivo
de composición en g/L de Ca(NO 3)2, 15; KNO3, 1.75; NH4Cl, 17.5; FeSO4. 7H2O, 5; MnCl2. H2O, 3.5;
ZnSO4, 0.75, Agar, 18. Adicionalmente el medio fue suplementado con 5 ml de PCE. Los
resultados de los recuentos de bacterias degradadoras de PCE (donador de electrones y fuente
de carbono) fueron:

DILUCIÓN FACTOR DE RECUENTO RECUENTO PROMEDIO

DILUCIÓN CAJA 1 CAJA 2 COLONIAS
0.1 g de suelo en 9.9 ml 102 >300 >300 >300 *103 UFC
de solución salina (bacterias
degradadores de
PCR) /g

0.1 ml de la dilución 104 152 160 156 *105UFC

anterior en 9.9 ml de (bacterias
solución salina degradadores de
PCR) /g

1 ml de la dilución 105 10 16 23*106 UFC

anterior en 9 ml de (bacterias
solución salina degradadores de
PCR) /g

1. Determine la clasificación del medio de cultivo (0.2)

El medio de cultivo es definido ya que conocemos su composición química además es un
medio enriquecido pues se encuentra suplementado con 5ml de PCE para estimular las
 bacterias que degradan está molécula, el medio no es ni diferencial ni selectivo y su estado
es sólido, ya que su concentración de agar es >1%

2. Determine la clasificación metabólica de los microorganismos cultivados (0.2)

La clasificación metabólica corresponde a un organismo quimiorganoheterótrofo

3. Complete la tabla y determine la concentración de bacterias degradadoras de PCE (0.4)

Posteriormente se aislaron las colonias de morfologías diferentes por medio del método de
agotamiento y se determinó que había tres de ellas con potencial para ser utilizadas para
biorremediar suelos contaminados por este compuesto. Se hicieron diferentes tinciones y se
determinó que había dos bacterias con morfología de bacilos, una Grampositiva y una
Gramnegativa, a las que se les realizaron varias pruebas bioquímicas como: citrato, indol, urea,
degradación de almidón. Además, se recuperó también una levadura.

4. Describa en no más de 5 renglones las diferencias entre los organismos recuperados. (0.3)

Para bacilos Gram- positivos la diferencia está en la composición de su pared con 90% de
peptidoglucanos, para las Gram – la composición de su pared celular es de 10% de
peptidoglucanos además de poseer una doble membrana, en la externa tienen una estructura
llamada lipopolisacárido, la levadura es un organismo eucariota unicelular se reproducen en
asexualmente por fisión binaria o gemación, no forman hifas y hacen fermentación

5. La bacteria Gram – arrojó los siguientes resultados:

a. Citrato: medio de cultivo azul después de incubar
b. Indol: No hubo cambios después de la incubación
c. Urea: El medio permaneció de color amarillo
d. Degradación de almidón: Se observó un halo transparente alrededor de la colonia

Explique qué significa cada uno de esos resultados (no más de dos renglones por prueba)
(0.4)

a. El cambio de color se da por la variación en el PH a un medio alcalino, debido a la

actividad metabólica.
b. La bacteria no está degradando la molécula.
c. Esto quiere decir que las bacterias no liberaron CO 2 y las concentraciones de amonio
fueron altas, por eso su color amarillo.
d. Esto se debe a que el almidón se está hidrolizando.
Se realizaron pruebas haciendo amplificación del gen 16srRNA o 18srRNA y se determinó que los
microorganismos son: Bacillus sp., Pseudomonas sp. y Candida sp. Se hicieron curvas de
crecimiento para los tres, pero se presentan aquí los resultados de Bacillus:

HORA RECUENTO DIRECTO (células/ml)

0 100
2 1* 103
4 2* 104
6 1 * 105
8 1* 106
10 1* 106

6. ¿Cuánto dura la fase exponencial de crecimiento? (0.2)

La fase exponencial dura 6 horas, inicia a las 2 horas y finaliza a las 8 horas.

7. Determine: número de generaciones, velocidad de crecimiento y tiempo de duplicación

(0.6)

Número de generaciones: 10.002.492

Velocidad de crecimiento: 502.554,25
Tiempo de duplicación: 5,99 * 10−7

Se cultivaron estos microorganismos en medio líquido y se obtuvieron concentraciones de 10 10

UFC/ml. Posteriormente se Identificó un área de suelo cultivable que estaba contaminada con
PCE y se tomaron parcelas de 75x75 cm. En cada parcela se inoculó un microorganismo diferente
y adicionalmente se adicionó una solución de 5 g/ml de NH4Cl. Se usó además un control donde
no se inoculó nada y otro control donde solo se puso la solución de cloruro de amonio.

8. Defina la(s) estrategia(s) de biorremediación utilizada(s). Explique en no más de tres

renglones. (0.8)

Esta estrategia es una biorremediación in situ con bioaumentacion ya que se adicionan

organismos para degradar el compuesto contaminante.

Se encontró que la cepa de Pseudomonas es capaz de utilizar el Nitrato y convertirlo en N2, y que
tenía efectos positivos en la degradación de PCE. Por parte de Bacillus se encontró que produce
ácidos orgánicos que ayudan a hacer disponibles formas insolubles de fósforo. Sin embargo, se
plantea que se debería evaluar el efecto sobre el microbioma del suelo tratado.
 9. En qué parte del ciclo del nitrógeno participa activamente la cepa de Pseudomonas
(explique en no más de tres renglones) (0.6)

La cepa de Pseudomonas participa activamente en la desnitrificación del ciclo del

nitrogeno

10. ¿Cuál es el nicho de Bacillus según la información expuesta? (0.3)

Su nicho es el ciclo del azufre (solubilizadora de fosfato)

11. Plantee un método para evaluar el efecto sobre la diversidad microbiana del suelo de
acuerdo con lo visto en clase y por qué lo utilizaría (no más de 10 renglones) (1)

Primero realizaría una PCR para secuenciar el genoma con la finalidad de identificar los genes de
los microorganismos, posterior a esto buscaría genes funcionales dentro de su genoma e
intentaría ponerlos en un plásmido para realizar clonación, a continuación, inocularía el plásmido
en otro microorganismo, para aplicar una técnica para detección de metabolitos, verificando si esa
degradación es llevada a cabo por ese gen.