EXPERIMENTO 5.

Localización y demostración de la actividad de la

citocromo-oxidasa.
RESULTADOS.
Tubo
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo
0 min. - - - - - - - - - -
5 min. - - - - - + - - - -
10 min. - - - - - + - - - -
15 min. - - - - - + - - - -
(-) No hubo reacción.
(+) Reacción de formación del azul de indofenol.

DISCUSIÓN.
La citocromo oxidasa es un complejo proteíco que cataliza reacciones de la
cadena respiratoria (complejo IV), específicamente cataliza la reaccion de cuatro
electrones de O2 para formar agua (McKee, 2014), por lo que es una enzima
encargada de activar al oxígeno. Esta enzima es altamente sensible al cianuro,
debido a esto cuando en los tubos de ensayo a los que se agregó KCN (tubos 5 y
10), no ocurrió la reacción, pues el cianuro de potasio actuó como un inhibidor.
El alfa naftol y el diametil-para-fenilendiamina forman azul de infodenol. El
diametil-para-fenilendiamina es un indicador redox. En esta reacción se observa
un color azul oscuro cuando es oxidada, en cambio se verá transparente si se
encuentra reducida. El único tubo donde se observó una reacción de oxidación fue
en el tubo 6, debido a que los componentes antes mencionados (alfa naftol y
diametil-para-fenilendiamina) se encontraban presentes en el tubo junto a la
suspensión del hígado, en la cual estaba la fracción mitocondrial. En el resto de
los tubos se encontraba ausente alguno de estos 3 componentes, lo cual impidió
que se llevara a cabo la reacción
EVIDENCIAS DE APRENDIZAJE.
1) Escribir la reacción de formación del azul de indofenol.

O2 oxidado
Dimetil-para-fenilendiamina + alfa naftol Azul de indofenol
(Insoluble en agua) Citocromo C

2) Explicar por qué no se usó vaselina en este experimento.

Para que se lleve a cabo esta reacción es necesario que entre el oxígeno para
que se lleve a cabo una oxidación. Si se usara vaselina esta impediría la
 entrada de aire, aislando al azul de indofenol del oxígeno e impidiendo a su vez
que ocurra la reacción.
3) Explicar sus resultados sobre la base del análisis del contenido de cada
tubo.
Tubo Análisis
Aunque tiene el contenido para que se lleve a cabo la reacción, esta no
1 es posible porque se colocó sobrenadante de hígado y hay ausencia
de fracción mitocondrial.
Es necesaria la presencia de dimetil-para-fenilendiamina y alfa naftol
para que se lleve a cabo la reacción, este último se encuentra ausente.
2 Además, se añadió sobrenadante de hígado, como se explicó en el
tubo anterior, no podría haber reaccionado por ausencia de fracción
mitocondrial.
En este tubo está ausente la solución de dimetil-para-fenilendiamina,
3
necesaria para que se lleve a cabo la reacción.
No se añadió la suspensión de hígado, siendo este el único
4
componente que hace falta para que la reacción ocurra.
5 Al añadir KCN (cianuro de potasio) se inhibe la reacción.
La reacción se lleva acabo porque están presentes alfa naftol, diametil-
para-fenilendiamina y la suspensión de hígado (en la cual sí se
6
encuentra la fracción mitocondrial), elementos necesarios para que
ocurriera la reacción.
No se encuentra presente alfa naftol, el cual se necesita para
7 reaccionar junto a dimetil-para-fenilendiamina y la suspensión de
hígado.
Contrario al tubo pasado, diametil-para-fenilendiamina no fue añadido,
8 por lo que aunque alfa naftol y suspensión de hígado se encuentren la
reacción no ocurre.
Al igual que en el tubo 4, hace falta la fracción mitocondrial, misma que
9
está presente en la suspensión de hígado.
10 Se agregó un inhibidor al tubo (KCN).