PRACTICA 3.

MEMRANAS Y
OSMOSIS.

Biología Molecular de la Célula II

Grupo: 5188------- 2020-1 Profesor: César Ortiz Martínez
Chagoyán Macotela Cynthia

Introducción.
Todas las células están delimitadas por una membrana, la cual puede concebirse como una estructura
que separa el líquido intracelular del líquido extracelular y realizan funciones de gran importancia para
la integridad y actividades de la célula y los tejidos. La bicapa lipídica está compuesta por tres clases
principales de lípidos: fosfolípidos, glucolípidos y colesterol. Los lípidos son anfipáticos, es decir, la
composición lipídica de la membrana interna y externa es diferente (bicapa asimétrica) y existe una
composición lipídica particular dependiendo del organelo y del tipo celular. La permeabilidad de una
membrana celular para un soluto se define por la facilidad con la que el soluto puede desplazarse a
través de la membrana por difusión. Las membranas celulares a menudo se definen como
selectivamente permeables debido a que permiten que ciertos solutos la atraviesan por difusión con
mayor facilidad que otros. El principal factor determinante de la permeabilidad de la membrana
plasmática es la bicapa lipídica que constituye su fase continua.

La permeabilidad de la membrana depende de varios factores relacionados con las

propiedades
fisicoquímicas de la sustancia:
● Solubilidad en los lípidos: Las sustancias que se disuelven en los lípidos (moléculas
hidrófobas, no polares) penetran con facilidad en la membrana dado que esta está compuesta
en su mayor parte por fosfolípidos.
La permeabilidad de la membrana depende de varios factores relacionados con las propiedades
fisicoquímicas de la sustancia:
● Solubilidad en los lípidos: Las sustancias que se disuelven en los lípidos (moléculas hidrófobas,
no polares) penetran con facilidad en la membrana dado que esta está compuesta en su mayor parte
por fosfolípidos.
● Tamaño: La mayor parte de las moléculas de gran tamaño no pasan a través de la membrana. Sólo
un pequeño número de moléculas no polares de tamaño pequeño puede atravesar la capa de
fosfolípidos.
● Carga: Las moléculas cargadas y los iones no pueden pasar, en condiciones normales, a través de
la membrana. Sin embargo, algunas sustancias cargadas pueden pasar por los canales proteicos o con
la ayuda de una proteína transportadora.

Transporte pasivo. Ósmosis: Fenómeno que se produce cuando dos soluciones con diferente
concentración son separadas por una membrana semipermeable y el solvente difunde a través de la
membrana (sin soluto), del líquido de menor concentración de sólido al de mayor concentración de
sólido hasta equilibrar las concentraciones. Este fenómeno se produce de forma espontánea sin gasto
energético. A la presión que ejerce el solvente (agua) sobre la cara de la membrana donde hay menor
concentración hacia el compartimento de mayor concentración se le denomina presión osmótica.
En los seres vivos es un proceso fundamental ya que para la supervivencia de las células es
fundamental mantener lo que se llama el equilibrio osmótico necesario para que la célula pueda realizar
sus funciones.

Según la concentración de solventes y solutos se pueden clasificar los medios en:

● Hipotónicos: cuando la concentración de soluto es menor respecto al medio con el que se compara.
● Hipertónicos: cuando la concentración de soluto es mayor respecto al medio con el que se compara.
● Isotónicos: cuando ambos medios tienen la misma concentración.

Ósmosis en una célula animal.

● En un medio isotónico, tanto la entrada como salida de agua es constante, es decir, existe un
equilibrio dinámico.
● En un medio hipotónico, la entrada de agua es superior a la salida, en consecuencia, la célula absorbe
el agua hasta reventar, fenómeno conocido como citólisis.
● En un medio hipertónico, la salida de agua es superior a la entrada de agua por tanto la célula se
deshidrata perdiendo su contenido hasta arrugarse y morir, este fenómeno es conocido como crenación.

Ósmosis en una célula vegetal.

● En un medio hipertónico, la célula elimina agua y el volumen de la vacuola disminuye, produciendo
que la membrana plasmática se despegue de la pared celular, ocurriendo la plasmólisis.
● En un medio isotónico, existe un equilibrio dinámico.
● En un medio hipotónico, la célula toma agua y sus vacuolas se llenan aumentando la presión de
turgencia, dando lugar a la turgencia

Objetivos

• Observar la morfología de la célula vegetal.

• Identificar el proceso de ósmosis mediante la observación macroscópica de los
cambios que presente la célula vegetal al modificar la concentración salina del medio
extracelular.
• Distinguir las soluciones hipotónica, hipertónica e isotónica, basándose en los
cambios en masa o volumen que cada solución provoque en la célula vegetal.
• Interpretar los resultados de la prueba de fragilidad osmótica de los eritrocitos.

HIPÓTESIS
Será formulada por el alumno
Al agregar los rectángulos de papa, a los diferentes medios isotónicos, hipotónico e hipertónico,
podemos observar el tipo de transporte de la osmosis en los 15 rectángulos de papa a cada medio que
tendrán un cambio en su peso y tamaño.
Al someter la muestra de sangre a distintas soluciones podemos observar los fenómenos de citólisis y
crenación. Aumentará la susceptibilidad de los eritrocitos a la hemólisis cuando se exponen
crecientemente a una solución salina hipotónica
MATERIAL Y EQUIPO QUE DEBERÁN TENER LOS ALUMNOS

• 1-2 papas frescas

• Papel tipo Servitoalla
• 1 cuchillo
• 1 regla graduada o vernier
EQUIPO
Balanza granataria digital
5 recipientes de 250 a 500 mL
REACTIVOS
NaCl al 6% (p/v) 500 mL
NaCl al 0.9% (p/v) 20 mL o solución fisiológica Agua destilada
1 horadador del número 1

Procedimiento

Célula vegetal
Papa

Hacer perforaciones sobre una papa fresca utilizando el horadador. Escoger la mejor porción de papa
que no tenga entrenudos y quitar la cáscara.
Obtener varios cilindros de papa (en su defecto si no cuentan con el horadador, pueden hacer cortes
cuadrados).
Hacer cortes en los cilindros o rectángulos de papa de 1-2 cm de longitud hasta obtener 15 piezas.
(1)

Medir el diámetro y longitud de cada cilindro de papa y anotarlos en la tabla de la sección de

resultados.
Pesar cada cilindro de papa y anotarlos en la tabla de la sección de resultados. 6. Colocar cinco
cilindros de papa en cada uno de los siguientes tratamientos:
Vaso 1. Solución isotónica. 50 mL de agua de la llave.
Vaso2. Solución hipertónica. 50 mL de solución de NaCl 6%.
Vaso3. Solución hipotónica. 50 mL de agua destilada. 7. Dejarlos por 3
horas a temperatura ambiente.
8. Sacar los trozos, secarlos con papel absorbente. 9. Repetir los puntos 4 y 5.
Fragilidad osmótica de los eritrocitos.
Etiquetar siete tubos de ensayo limpios (del uno al siete)

1. Pipetearen cada uno de los tubos los siguientes volúmenes de las soluciones de acuerdo
con el orden que se indica en la Tabla 1:
TABLA 1. Fragilidad osmótica de los eritrocitos.

No. tubo 1 2 3 4 5 6 7

Amortiguador de fosfatos, NaCl 1% pH

0 0.25 1 1.15 1.25 1.5 2.15
7.4 (mL)

Agua destilada (mL) 2.5 2.25 1.5 1.35 1.25 1 0.35

Mezclar con vortex suavemente

Sangre total (µL) 25 25 25 25 25 25 25

Mezclar con vortex suavemente

2. Dejar los tubos a temperatura ambiente durante 30 minutos.

3. Mezclar nuevamente y colocar 1.5 ml de esta preparación en un microtubo de 2 ml. 5.
Centrifugar a 2,000 rpm durante 5 minutos.
6. Sacar los tubos con cuidado para no resuspender el precipitado membranal.
5. Recuperar 1 ml del sobrenadante y ponerlo en una celda de espectrofotómetro. 6.

Leer a 540 nm, calibrar a cero con el sobrenadante del tubo siete.
6. Observar, describir y registrar los resultados en el apartado D.

RESULTADOS Y CÁLCULOS

Célula vegetal. Papa

1. Completar la siguiente tabla:

Diámetr Diámetro Longitud
Longitud Peso inicial Peso final
Papa o inicial final inicial
final (g) (g)
(cm) (cm) (cm)
(cm)
 1 1 2 2 1.3 1.3
5 1 1 2 2 1.3 1.3
unidades 1 1 2 2 1.5 1.5
Solución 1 1 2 2 1.2 1.2
1 1 2 2 1.2 1.2
isotónica 1 1 2 2 1.2 1.1
5 1 1 2 2 1.4 1.4
(agua de la llave) unidades 1 1 2 2 1.3 1.3
1 1 2 2 1.2 1.2
1 2 2 1.2 1.2
1 1 2 2 1 1
5 1 1 2 2 1.1 1.1
unidades 1 1 2 2 1.2 1.2
1 1 2 2 1.2 1.2
1 1 2 2 1.3 1.3
Promedio ± D.E. 1 1 2 2 1.24 1.23

1 1 2 2 1 0.9
5 1 1 2 2 1.3 1.2
unidades 1 1 2 2 1.3 1.3
Solución 1 1 2 2 1.3 1.2
1 1 2 2 1.2 1.2
hipertónica 1 .9 2 1.7 1.3 1.1
5 1 .9 2 1.7 1.2 .09
(NaCl 6%) unidades 1 .9 2 1.5 1.4 1.2
1 .9 2 2 1.3 1.1
1 .9 2 1.5 1.3 1

1 1 2 1.5 1.5 1.2

1 1
5 2 1.7 1.2 1
1 1
unidades 2 2 1.2 1.2
1 1
1 1 2 2 1.3 1.2
2 2 1.2 1.1
Promedio ± D.E. 1 1 2 1.84 1.26 1

1 1 2 2 1.1 1.3
5 1 1 2 2 1.2 1.3
unidades 1 1 2 2 1.3 1.2
Solución 1 1 2 2 1.3 1.3
1 1 2 2 1.3 1.2
hipotónica 1 1 2 2 1.3 1.3
5 1 1 2 2 1.3 1.3
(agua destilada) unidades 1 1 2 2 1.2 1.2
1 1 2 2 1.3 1.3
1 1 2 2 1.3 1.3
1 1 2 2 1.2 1.2
5 1 1 2 2 1.2 1.2
unidades 1 1 2 2 1.3 1.3
1 1 2 2 1.3 1.3
1 1 2 2 1.3 1.3
Promedio ± D.E. 1 1 2 2 1.26 1.1
1. Calcular los cambios relativos del diámetro, longitud y peso de los cilindros de papa con
las siguientes fórmulas:

Cambio relativo en diámetro (%) = 100 * (diámetro final) / (diámetro inicial)

Cambio relativo en longitud (%) = 100 * (longitud final) / (longitud inicial) Cambio

relativo en peso (%) = 100 * (peso final) / (peso inicial)

CAMBIO RELATIVO Diámetro Longitud Peso

(%) (%) (%)

Solución isotónica 100 100 99.1

Solución hipotónica 100 92 79.3

Solución hipertónica 100 100 87.3

 2. Elaborar una gráfica de barras con los datos de las tablas anteriores.

2.5

1.5
1.5 1.4
1.31.3 1.3 1.3 1.3 1.31.3 1.3 1.31.3 1.31.3 1.31.31.3
1.21.2 1.21.2 1.21.2 1.23 1.2 1.21.2 1.2 1.2 1.21.2 1.2 1.2 1.2 1.21.2
1.1 1.1 1.1 1.1 1.1 1.1
1 1 1 1
1 0.9

0.5
0.09
0
Promedio

Promedio

Promedio
Solucion hipotonica
Solucion Isotonica

Solucion Hipertonica

Cambio relativo
Solución isotónica Solución hipotónica Solución hipertónica

120

100

80

60

40

20

0
(%) (%) (%)
Diámetro Longitud Peso
Célula Eritrocito

1. Integrar esquemas de los resultados esperados en el cuadro que corresponda:

solución fisiológica Solución de NaCl al 6% Agua destilada

Los eritrocitos se mantienen igual.

La entrada y salida de H2O en el Los eritrocitos se contraen, Hay Los eritrocitos se hinchan el flujo
eritrocito no se observa salida del disolvente fuera del neto del disolvente al interior del
eritrocito eritrocito.

Describir los cambios esperados en las diferentes soluciones.

Resultados obtenidos sobre

Fragilidad osmótica de los eritrocitos.

Figura 1. Después de la incubación a temperatura ambiente durante 30 minutos

 Figura 2. Después de centrifugar a 2,000 rpm y antes de tomar lecturas de Absorbancia.

1. Completar la siguiente tabla:

No. de Abs NaCl Hemólisis

Color/Apariencia
tubo 540 nm (%) (%)

1 0.547 Suspensión roja, no 0 100

se observa ninguna
aglomeración.
2 0.495 Suspensión roja, 0.1 90.4
imperceptible.
3 0.043 Suspensión roja 0.4 7.86
pálido, se observa un
poco de
aglomeración
4 0.018 Suspensión muy 0.46 3.3
diluida, casi incolora.
Se aprecia
aglomeración
5 0.008 Suspensión incolora. 0.5 1.46
No se aprecia tanta
aglomeración
6 0.004 Suspensión incolora, 0.6 0.73
imperceptible.
7 0 Suspensión incolora 0.86 0

2. El porcentaje de hemólisis se obtiene con la siguiente fórmula:

Hemólisis (%) = Abs 540 nm tubo problema / Abs 540 nm tubo 1 * 100
3. Construir una gráfica de absorbancia (540 nm) contra porcentaje de NaCl usando los
datos de la tabla anterior.

Absorbancia 540 nm VS NaCl (%)

0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.2 0.4 0.6

4. Construir una gráfica de porcentaje de hemólisis contra porcentaje de NaCl usando los
datos de la tabla anterior. Se debe obtener una curva sigmoidea casi simétrica. El extremo
inferior de la curva corresponde al comienzo de la hemólisis, la porción media corresponde a
la salida de la hemoglobina en gran cantidad y el extremo superior a la hemólisis total. Un
aumento de la fragilidad osmótica desplaza la curva hacia la derecha, mientras que una
disminución la desplaza hacia la izquierda.

Hemolisis(%) VS NaCl (%)

0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 20 40 60 80 100
5. Con la gráfica anterior, calcular la concentración de solución salina en la cual se obtiene
el 10% y el 90% de hemólisis.

Se obtiene con 0.1% de solución salina el 90% de Hemolisis y 0.05% de solución salina el
10 % de Hemolisis.

La relación entre la concentración de la solución salina y el

porcentaje de hemólisis en condiciones normales es la siguiente:

Solución salina Hemólisis

(%) (%)

0.3 97 a100

0.35 90 a 99

0.4 50 a 95

0.45 5 a 45

0.5 0a6

0.85 0

La fragilidad osmótica de eritrocitos se incrementa en algunos padecimientos como

esferocitosis congénita, anemia hemolítica adquirida, enfermedad hemolítica del recién
nacido debido a la incompatibilidad ABO y puede estar disminuida en talasemia, anemia de
células falciformes, ictericia y anemia por deficiencia de fierro.
Video de la metodología de la práctica.
https://drive.google.com/file/d/1v1iacwEfZFLEzMDGpNAfwlWKwI3ixJs4/view?usp=sharing

BIBLIOGRAFÍA
Kleinzeller, A. y Overton’s E. 1997. Contribution to the cell membrane concept: A centennial
appreciation. News Physiol Sci. 12:49-53.

Guyton, A. C. y Hall, J. E. 2001. Tratado de Fisiología Médica. 10ª Edición Mc Graw-Hill

España.

Edidin, M. 2003. Lipids on the frontier: a century of cell-membrane bilayers. Mol. Cell Biol.
4:414-418

Referencias:

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,En%20un%20medio%20hipot%C3%B3nico%2C%20la%20c%C3%A9lula%20toma
%20agua%20y%20sus,no%20requiere%20gasto%20de%20energ%C3%ADa.(Con
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• W. Schön et al. 1994. Heavy ion induced damage: hemolysis of erythrocytes and
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