(Bonet et al.

, 2009)
69

Elaboración y conservación de dosis seminales

z Cálculo del número de dosis seminales por eyaculado: (concentración útil)

A x 107 x V AxV
Nº de dosis (N) = ----------------- = -----------
N
3 x 109 300
V = Volumen del eyaculado en cc
A=E Espermatozoides
t id contados
t d en 40 cuadrados (0 01 mm3)
d d (0,01
Número de espermatozoides totales por eyaculado:
¾ en 1 mm3 = A x 100
¾ en 1 cc = ((A x 100)) x 1.000
¾ en semen puro (dilución 1/100): (A x 100) x 1.000 x 100 = A x 107
¾ Totales en el eyaculado = A x107 x V

z El cálculo de la cantidad de diluyente necesario para la preparación de las

dosis seminales (para dosis seminales de 100 cc):
N x 100 = Volumen total (volumen de diluyente + volumen de eyaculado)
N x 100 – V = Volumen del diluyente necesario a añadir
Título de la dilución (1/10 – 1/25): volumen total (N x 100)/Volumen
70 del eyaculado
 z Los diluyentes deben cumplir dos objetivos principalmente:
– aumentar el volumen del eyaculado,
eyaculado sin afectar la calidad seminal,
seminal para
aumentar el número de inseminaciones
– conservar la capacidad fecundante de los espermatozoides durante el mayor
tiempo posible
z Un diluyente permite la conservación de las células espermáticas por:
– su aporte nutritivo (glucosa)
– su capacidad
id d tampón
t ó (bicarbonato
(bi b t sódico,ódi citrato
it t sódico,
ódi TRIS…
TRIS )
– el control de los parámetros físico-químicos (presión osmótica, pH, pK y
fuerza iónica de interacción con el espermatozoide y plasma seminal)
– l captación
la t ió de d iones
i C ++, Mg
Ca M ++ y Zn
Z ++ (sustancias
( t i quelantes
l t como ell EDTA)
– el control en la precipitación de las proteínas
– el control de la acción enzimática sobre el semen
– el control que ejerce sobre el metabolismo de la célula espermática y la
preservación de su membrana
– su control sobre la contaminación: la adición de antibióticos (penicilina,
estreptomicina,
i i gentamicina,
i i etc.)) a los
l diluyentes
dil es esencial
i l para controlar
l ell
crecimiento bacteriano en el esperma de verraco
z Tipos de diluyentes:
– Diluyente de corta duración: 1-3 días de conservación
– Diluyente de media duración: 4-5 días
– Diluyente
y de larga
g duración: 6-8 días de conservación
– Diluyente extra-larga duración: hasta 10-14 días de conservación
71

Composición de varios diluyentes porcinos (1) (Flowers, 2004)

Ingredientes BTS Kiev Modena Zorlesco Androhep
Sustrato energético
Glucosa (anhidra), g/l 37,00 66,00 27,50 11,70 -
Glucosa (monohidrato),
(monohidrato) g/l - - - - 26 00
26,00
Sistema tampón
(2)
Citrato sódico , g/l 6,00 3,75 6,90 11,70 8,00
Bicarbonato sódico, g/l 1,25 1,25 1,00 1,80 1,20
EDTA (disodio), g/l 1,25 3,70 2,35 2,10 2,40
Cloruro de potasio
potasio, g/l 0 75
0,75 - - - -
Ácido cítrico, g/l - - 2,90 3,80 -
Tris buffer (base), g/l - - 5,65 6,50 -
HEPES, g/l - - - - -
Estabilización de la membrana
Cisteína g/l
Cisteína, - - - 0 10
0,10 -
BSA (fracción V) - - - - 2,50
(3)
Antibióticos
Neomicina sulfato, g/l - - - 1,00 -
Penicilina G (Na), g/l 0,60 0,60 0,60 - 0,60
Dihid t t i i
Dihidrostreptomicina, g/l/l 1 00
1,00 1 00
1,00 1 00
1,00 - 1 00
1,00
(1) las fórmulas de los diluyentes se han obtenido de informaciones originales publicadas en artículos.
(2) el EDTA, citrato sódico y otros agentes quelantes también ayudan a la estabilización de las membranas.
(3) el tipo y la cantidad de antibióticos agregados se ajustan a menudo según las situaciones individuales. 72
 Conservación en refrigeración:
´ Para que ell semen diluido
P dil id mantenga
t su capacidad
id d
fecundante a lo largo de su almacenamiento (15 ºC) es
indispensable cumplir con las siguientes condiciones:
« El material debe estar limpio y esterilizado,
esterilizado sin residuos
químicos
« Utilizar agua bidestilada
« Utilizar diluyentes
y de larga
g conservación (Quiles y Hevia, 2008)

« Recoger exclusivamente la fracción espermática

« Diluir a un período inferior a 15-30 minutos desde la
recogida del semen (grado de dilución óptimo 1:10) a 37 ºC.
C
Concentración
t ió por dosis
d i 2-42 4 x 109 espermatozoides
t id en 100
cc
« Descender lentamente la temperatura de 37 ºC a 15 ºC
« Conservar en anaerobiosis a 1515-16
16 ºC
C
« Evitar las oscilaciones de temperatura durante el período de
conservación. La temperatura crítica en la cual se produce
un daño irreversible en la membrana espermática se
encuentra
t por debajo
d b j ded los
l 12 ºC
« No exponer durante períodos largos de tiempo a la luz
directa
« El semen almacenado debe ser rotado (mezclado)
suavemente cada 12 h con objeto de mantener a los
espermatozoides en suspensión con el diluyente
« Control de la dilución y conservación: las dosis seminales
almacenadas antes de ser utilizadas deben ser observadas
con el microscopio (motilidad 3 y 70 %)
73

Acondicionamiento de las dosis seminales

Botellas flexibles (60-100 ml)

Bolsas (blisters) (60-100 ml)

Máquina de
envasado
automático
(30-45 ml)

(30-45 ml)

Unidades de inseminación (dosis + catéter)

(20 cm) 74
Tubos soldables (80-100 ml)