Sembrar una cepa de Decantar el sobrenadante

E.coli (TOP10) en una y resuspender en 5 ml de Resuspender en vortex.

placa con medio LB CaCl2 (x cada tubo)
Nota: Durante
todo el proceso se
mantiene las
Inocular una UFC de E.coli
Una vez resuspendido muestras de la
Centrifugar los tubos a traspasar todo a un mismo
(TOP10) en 5 ml de medio cepa y el ClCa2 en
6000 RPM por 4 minutos. tubo (volumen final:
LB
10ml )
hielo.

Transferir 1 ml de E. coli a Decantar el sobrenadante

un matraz preincuvado a y resuspender en 20 ml de Centrifugar el tubo a 6000
37°c con 125ml de medio RPM por 4 minutos.
CaCl2
LB por 3 horas

Decantar el sobrenadante Hacer alicuotas de 50μl en

Transferir 35 ml a 1 un y resuspender en 1250 μl microtubos; sumergir en
Centrifugar los tubos a
tubo falcon (ESTERIL) por nitrogeno liquido para su
6000 RPM por 4 minutos. de CaCl2 y 250 μl de
duplicado. posterior
glicerol al 100% almacenamiento.