Universidad Nacional Abierta y a Distancia

Vicerrectoría Académica y de Investigación

Curso: Microbiología de Suelos
Código: 303019

Actividad Práctica Alterna Frente a la Contingencia de COVID-19

Guía de actividades y rúbrica de evaluación – Tarea 4. Conocer
técnicas fundamentales para identificar y medir biomasa microbiana.

1. Descripción de la actividad

Tipo de actividad: Individual

Momento de la evaluación: Intermedia en la unidad 3
Puntaje máximo de la actividad: 70 puntos
La actividad inicia el: miércoles, 9 La actividad finaliza el: lunes, 30 de
de septiembre de 2020 noviembre de 2020
Con esta actividad se espera conseguir los siguientes resultados de
aprendizaje:

Distinguir desde el conocimiento teórico y el fundamento práctico, la demostración y

cuantificación de la actividad microbiana en suelos.

La actividad consiste en:

Componente práctico a distancia con mediación virtual. Por lo tanto, 6 semanas

antes de su componente práctico, usted debe iniciar las actividades B y C
propuestas en esta guía. Este componente práctico tendrá tres sesiones virtuales con
su tutor práctico: una de base y dos de acompañamiento. Una vez usted se inscriba,
verá que en la plataforma, en las secciones Nota, Temática o Materiales, su tutor
pondrá la fecha, hora y enlace de reunión de cada sesión virtual. En dichos espacios,
se desarrollarán las partes A y D de la guía, y se aclararán dudas sobre los
resultados obtenidos en las partes B y C.

A. Prelaboratorio

Leer y analizar textos especializados

Antes de asistir a la práctica de laboratorio, cada estudiante debe abordar desde una
lectura analítica, el siguiente texto enfocado en conocer la fundamentación de
técnicas fundamentles empleadas en microbiología: Madigan, M. (2015). Brock.
Biología de los microorganismos (14a. ed., pp. 610-636). Pearson
Educación. Recuperado de http://www.ebooks7-
24.com.bibliotecavirtual.unad.edu.co/?il=5285

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Estructurar el conocimiento

Para llevar a cabo el ejercicio de asimilar y estructurar el conocimiento, durante la

sección de laboratorio, su tutor práctico, realizará una fundamentación sobre la
lectura realizada previamente y podrá incluir otras técnicas que él considere
significativo mencionar. Es importante que el estudiante preste especial atención y
tome este tiempo para despejar sus dudas.

B. Experimento en Columna de Winogradsky

Con la finalidad de estudiar las relaciones entre diferentes tipos de microorganismos

en un mismo hábitat, el microbiólogo Sergei N. Winogradsky utilizó por primera vez
las columnas que llevan su mismo nombre. Cuyo montaje es sencillo y permite bajo
condiciones controladas el estudio de comunidades microbianas, simulando un
microecosistema que refleja cómo los microorganismos autótrofos y heterótrofos
ocupan microespacios altamente específicos de acuerdo con sus necesidades vitales,
basadas en requerimientos de carbono, electrones y energía, A su vez permite
observar cómo la actividad metabólica de un microorganismo posibilita el crecimiento
de otros y viceversa.

A continuación las temáticas desarrolladas en la práctica: 1.Columna de

Winogradsky, 2. Metabolismo microbiano, 3. Respiración microbiana, 4. Ciclos
biogeoquimicos, 5. Ecología microbiana, 6. Diversidad microbiana.

Materiales

 1 botella de PET de 500 mililitros (botella de plástica de agua o gaseosa) lo más

clara y lisa posible para facilitar entrada de luz
 Agua a temperatura ambiente previamente hervida
 Suelo preferiblemente rico en materia orgánica (oscuro)
 Fuente de carbono (puede ser cualquier tipo de papel finamente picado, por
ejemplo: papel periódico, papel toalla, servilletas, papel higiénico, etc.)
 Fuente de Calcio (puede ser Carbonato de Calcio, cascara de huevo molida, tiza
molida)
 Fuente de azufre (puede ser sulfato de calcio, sulfato de magnesio o una yema de
huevo cocida).
 Papel film, también llamado vinilpel (para sellar la superficie de la botella a la cual
se cortará la parte superior)
 Elástico de caucho (para apretar el papel film alrededor de la parte superior de la
botella).

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Metodología

 Cortar parte superior de la botella

 Llenar la 1/3 parte de la botella con suelo
 Adicione la fuente de carbono y compacte.
 Adicione la fuente de calcio y compacte.
 Adicione la fuente de azufre y compacte.
 Agregar 1/3 de agua y dejar el resto como espacio para la cabeza.
 Sellar con papel film/vinilpel y colocar el elástico de caucho.
 Dejar en un lugar con exposición directa al sol.
 Revisar y documentar evolución semanal hasta completar la semana número
cuatro a seis para posterior análisis.

Video de apoyo: Venegas (2019) ¿Qué es y cómo funciona la Columna de

Winogradsky? - Microbiología Ambiental. Recuperado de:
https://www.youtube.com/watch?v=el-fVxr7CcE

Documentación del experimento

Realizar un video individual, no mayor a 5 minutos, y subirlo a Youtube. En el video

se debe visualizar al estudiante presentando la columna de Winogradsky con una
foto del montaje inicial y el resto del video con el resultado final (semana 6)
explicando dos de los procesos escogidos planteados en este ítem identificados con
las letras minúsculas (en cada proceso deberán incluirse los microorganismos
implicados). Los procesos a escoger dentro del funcionamiento de la columna son los
siguientes: a) fermentación microbiana, b) metabolismo microbiano, c) ciclo del
azufre, d)fuente de oxigeno microbiano, e)Respiración microbiana aerobia y
anaerobia f) fuente de carbono microbiano, g) fuentes de energía microbiana,
h)Diversidad microbiana, i)Ecología microbiana, j)Interacción microbiana.

C. Ensayo para el aislamiento de microorganismos del suelo

El suelo que se conoce hoy es el resultado de un gran trabajo de la naturaleza el cual

se ha afectado por las actividades humanas, modificando la calidad y salud de este
(Burbano-Orjuela, 2016) y (Beltrán Pineda et al, 2017) y constituyendo un punto de
encuentro de los ciclos de la vida, facilitando provisión de alimentos, además de
consolidarse como hábitat de gran cantidad de especies que tienen diferentes
funciones ecológicas, entre las cuales puede enumerarse: Producción de biomasa,
transformación de sustancias (Ciclaje de nutrientes), sistemas de regulación, reserva
de genes, herencia y soporte físico, entre otros (Insuasti Bravo & Burbano Orjuela).

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Lamentablemente el estudio de los suelos, carece de interés o puede verse como
bastante complejo, posiblemente porque en la sociedad no hay un interés directo en
aquello que “no sea consumido directamente”, además de ser considerados por
muchos sectores como renovables a escala humana (Burbano-Orjuela, 2016).
Generalmente las metodologías utilizadas para el estudio de microorganismos son
algo costosas y requieren de permanecer en el laboratorio, pero en la búsqueda por
facilitar el trabajo de los productores, con los recursos que tiene en su finca se han
propuesta diferentes metodologías “artesanales” que permiten el acercamiento de
este a su riqueza natural microbiana; entre las metodologías mencionadas, se
presenta el uso de las trampas de arroz, con el fin de aislar los llamados
microorganismos de montañas o microorganismos benéficos. Entre muchos hongos,
bacterias y actinomicetos posibles de aislar con esta metodología, se tienen:
Trichoderma sp, Pseudomona sp, Bacillus sp, Aspergillus sp, Streptomyces sp, etc.
(Campo-Martínez et al, 2014).

Materiales

 4 Frascos de vidrio (de los usados para mermeladas, por ejemplo).

 Gasa o tela delgada (lino o muselina) que permita cubrir la boca de cada frasco.
 Bandas de caucho.
 15 gramos de arroz por cada frasco.
 Olla exprés o baño maría.

Métodología

 Cocinar el arroz normalmente, sin sal ni aliños.

 Lavar los frascos con jabón, enjuagar muy bien y secar.
 Servir el arroz en los frascos.
 Tapar los frascos con la tela y ajustar con la banda de caucho alrededor.
 Esterilizar. Para estoy hay dos opciones: a) Poner los frascos con el contenido, al
baño maría, y contar 20 minutos a partir del momento en que el agua comienza a
hervir; b) Introducir los frascos con arroz en una olla exprés. Se pone a calentar
hasta que pite por primera vez; a partir de ese momento se deja en bajo durante
media hora. Para cualquiera de las dos opciones que elija, tenga en cuenta que el
agua no debe ingresar e inundar los frascos en el interior.

 Establecer las cuatro trampas de arroz en la rizosfera (zona del suelo donde se
encuentran la mayoría de las raíces secundarias) de suelos con diferentes
coberturas. Para esto, se deben seleccionar diferentes plantas (una por cada
trampa).
 Establezca los frascos de manera que la superficie quede a unos pocos centímetros
del nivel del suelo. Luego tape con un poco de tierra y hojarasca. Entierre los
frascos así: 2 frascos con la boca hacia arriba; 1 frasco con la boca hacia abajo; 1
frasco acostado.
 Después de 8 días o dos semanas recupere los frascos y documente

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 forográficamente lso resultados, así: una foto donde se evidencie al estudiante con
el resultado del experimento, una foto de las trampas en el sitio dónde las
estableció, al menos una foto nítida y clara del resultado de cada trampa.
 Observe los colores que se presentan y explique por qué.

Figura 1. Establecimiento de trampa con gasa.

Para el montaje e interpretación de los resultados, consulte el siguiente

video: Amador, I. (2013). Trampas para Microorganismos y Análisis de
Suelos. Recuperado de http:
https://www.youtube.com/watch?v=WcXEH_mIYSE

D. Laboratorio Virtual

La siembra en agar (medio de cultivo gelificado con características nutricionales

específicas), así como la tinción de Gram, son técnicas básicas ampliamente
empleadas en microbiología. Existen numerosos tipos de agar y medios nutritivos
líquidos (caldos), según los requerimientos nutricionales de los microorganismos que
se deseen cultivar en el laboratorio. De la misma, manera existen diversas técnicas
de siembra, que dependen del resultado al que se quiera llegar. Por lo tanto, cuando
se va a cultivar un microorganismo en el laboratorio, bien sea con fines de aislarlo o
someterlo a diferentes pruebas, se ha de determinar la composición y tipo de medio
de crecimiento, así como la técnica de siembra. Ahora bien, cuando se requiere
acercarse a la identificación de una bacteria, un primer paso es realizar tinción de
Gram, esta es importante porque demuestra diferencias fundamentales sobre la
pared celular de tales microorganismos.

Repique de colonias aisladas (siembra en agar)

 Diríjase a la siguiente dirección web:

http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/streakplate/streak_plate/streak_plate.html

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 Haga click en el botón “Steps” y lea las instrucciones.

 Seleccione el botón “Start”, tome el asa e inicie el repique de las colonias aisladas
en el cultivo de la caja de Petri. Es posible que en este punto, deba permitirle a su
navegador ejecutar Adobe Flash Player (se recomienda usar Firefox).

 Una vez haya logrado correctamente la siembra, tome una captura de pantalla del
resultado.

Identificación de bacterias Gram positivas y Gram negativas a partir de las colonias

aisladas

 Diríjase al siguiente enlace:

http://vlab.amrita.edu/index.php?pg=bindex&bsub=login_page

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 Regístrese en el botón “Create an account”.

 Con su sesión iniciada, siga este link:

http://vlab.amrita.edu/index.php?sub=3&brch=73&sim=208&cnt=2

 Verá una serie de instrucciones. Observe y comprenda las instrucciones de la

técnica (podrá requerir el apoyo de su tutor práctico).

 Seleccione el botón “Animation” y observe detalladamente lo que sucede. Tenga en

cuenta que para observar la animación, debe permitirle a su navegador ejecutar
Adobe Flash Player (se recomienda usar Firefox).

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 Seleccione el botón “Simulator”.

 Cuando esté en el simulador, debe elegir la opción “Binocular”.

 Realice el siguiente ejercicio:

1. Select sample: elegir la opción “Gram positive cocci” (ver flechas fucsias en
la imagen abajo).
2. Select lense: elegir la opción 10x y enfocar; una vez haya obtenido una
imagen nítida en 10 x, pase al lente 100x (ver flechas fucsias en la imagen
abajo). Debe tomar una captura de pantalla de la imagen en 100x.
3. Para obtener una imagen nítida y enfocada, use los tornillos micro y
macrométrico del microscopio (ver flechas fucsias en la imagen abajo).
4. Repita este mismo procedimiento para las muestras de bacilos y cocos
gram postivos y gram negativos que se señalan con flechas fucsias en la
siguiente imagen:

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E. Informe de laboratorio

Recopile los resultados obtenidos en los ítems B, C y D de la presente guía.

Estructure un informe de práctica basado en la práctica realizada, el cual deberá

enviar al correo de su tutor práctico en la fecha acordada con él durante la sesión
virtual.

Estructura del informe de práctica

 Introducción
 Objetivos: después del objetivo general, se debe describir un objetivo específico
por cada sección de la práctica (B, C y D).
 Metodología: se divide la metodología en tres secciones (de acuerdo a las secciones
B, C y D abarcadas en la presente guía).
 Resultados y discusión: se dividen los resultados en las secciones B, C y D, de
manera que:

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 Para la sección B, los resultados y discusión se limitan al enlace al video sobre la
columna de Winogradsky.

Para la sección C, en cuanto a los resultados se deben adjuntar fotos según lo

especificado en la sección C. Cada foto debe ser descrita y se debe explicar por qué
se presenta una coloración u otra, o la presencia de ciertas estructuras en la
trampa.

Para la sección D, debe adjuntar capturas de pantalla de su resultado del repique

de colonias aisladas (siembra en agar), así de como de cada una de las imágenes
en 100X de los bacilos y cocos Gram positivos y Gram negativos, observados en el
microscopio.

 Conclusiones: se debe hacer al menos una conclusión por cada sección (B, C y D).
 Referencias
 Anexos. En los anexos, responda las siguientes preguntas orientadoras:

¿A qué se deben puntualmente cada uno de los patrones de color observados en la

columna de Wionogradsky?.

¿Qué microorganismos identificó en la rizósfera de las plantas donde instaló la

trampa de arroz?, ¿Por qué se usa arroz en la trampa?.

Cuando se realiza la tinción de Gram y se observan las placas en el microscopio,

¿por qué las bacterias Gram positivas se ven moradas y las Gram negativas se ven
rosadas?.

Para el desarrollo de la actividad tenga en cuenta que:

En el entorno de Información inicial debe:

No aplica.

En el entorno de Aprendizaje debe:

No aplica.
En el entorno de Evaluación debe:

No aplica.

Evidencias individuales:

Video, registro fotográfico e informe de práctica.

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 Evidencias grupales:

En esta práctica, las evidencias son individuales.

2. Lineamientos generales para la elaboración de las evidencias a entregar.

Para evidencias elaboradas individualmente, tenga en cuenta las siguientes

orientaciones:

1. Antes de entregar el producto solicitado se debe revisar que cumpla con todos los
requerimientos que se señalaron en esta guía de actividades.
2. El video debe verse y escucharse claramente.
3. Las imágenes deben ser claras y legibles.
4. El desarrollo de cada sección debe ser explícito y con referencias bibliográficas,
excepto los objetivos y las conclusiones.

Tenga en cuenta que todos los productos escritos individuales o grupales deben cumplir
con las normas de ortografía y con las condiciones de presentación que se hayan
definido.

En cuanto al uso de referencias considere que el producto de esta actividad debe cumplir
con las normas APA
En cualquier caso, cumpla con las normas de referenciación y evite el plagio académico,
para ello puede apoyarse revisando sus productos escritos mediante la herramienta
Turnitin que encuentra en el campus virtual.

Considere que en el acuerdo 029 del 13 de diciembre de 2013, artículo 99, se considera
como faltas que atentan contra el orden académico, entre otras, las siguientes: literal e)
“El plagiar, es decir, presentar como de su propia autoría la totalidad o parte de una
obra, trabajo, documento o invención realizado por otra persona. Implica también el uso
de citas o referencias faltas, o proponer citad donde no haya coincidencia entre ella y la
referencia” y liberal f) “El reproducir, o copiar con fines de lucro, materiales educativos o
resultados de productos de investigación, que cuentan con derechos intelectuales
reservados para la Universidad”

Las sanciones académicas a las que se enfrentará el estudiante son las siguientes:
a) En los casos de fraude académico demostrado en el trabajo académico o
evaluación respectiva, la calificación que se impondrá será de cero puntos sin perjuicio de
la sanción disciplinaria correspondiente.
b) En los casos relacionados con plagio demostrado en el trabajo académico
cualquiera sea su naturaleza, la calificación que se impondrá será de cero puntos, sin
perjuicio de la sanción disciplinaria correspondiente.

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 3. Formato de Rúbrica de evaluación

Tipo de actividad: Individual

Momento de la evaluación: Intermedia en la unidad 2
La máxima puntuación posible es de 70 puntos
Nivel alto: el estudiante cumple de forma completa y satisfactoria
con las actividades solicitadas y sus especificaciones de entrega.
Primer criterio de Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 9
evaluación: puntos y 10 puntos

Oportunidad y Nivel Medio: las actividades realizadas cumplen parcialmente respecto

pertinencia. al contenido y especificaciones de entrega.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 7
Este criterio puntos y 8 puntos
representa 10
puntos del total de Nivel bajo: existen profundos problemas de cumplimiento a las
70 puntos de la actividades planteadas y sus especificaciones. El estudiante solicita
actividad. entregar la actividad fuera del tiempo establecido sin excusa previa y/o
soporte.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 0
puntos y 6 puntos
Nivel alto: el estudiante demuestra en el producto de la actividad, una
buena comprensión y dominio de la práctica, así como de los
resultados obtenidos.
Segundo criterio de
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 32
evaluación:
puntos y 40 puntos
Aprendizaje
Nivel Medio: el estudiante demuestra en el producto de la actividad,
significativo
algunos vacíos comprensión y dominio de la práctica, así como de los
resultados obtenidos.
Este criterio
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 24
representa 40
puntos y 31 puntos
puntos del total de
70 puntos de la
Nivel bajo: el estudiante demuestra en el producto de la actividad,
actividad
serias dificultades y vacíos importantes comprensión y dominio de la
práctica, así como de los resultados obtenidos.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 0
puntos y 23 puntos
Tercer criterio de Nivel alto: entre ejercicios desarrollados por el estudiante, se aprecia
evaluación: una buena calidad del video (audio e imagen claros), nitidez de las
fotos repostadas en el ejercicio C, e imágenes obtenidas en el
Calidad. microscopio claramente enfocadas.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 9
Este criterio puntos y 10 puntos

12
representa 10
puntos del total de Nivel Medio: entre ejercicios desarrollados por el estudiante, el audio
70 puntos de la o la imagen del video no son claros, las fotos repostadas en el ejercicio
actividad C no se aprecian con claridad, y las imágenes obtenidas en el
microscopio están desenfocadas.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 7
puntos y 8 puntos

Nivel bajo: entre ejercicios desarrollados por el estudiante, se aprecia

una insuficiente calidad del video (audio e imagen claros), no es
posible distinguir los resultados de las fotos repostadas en el ejercicio
C, o las imágenes obtenidas en el microscopio no corresponden con la
descripción reportada.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 0
puntos y 6 puntos
Nivel alto: La redacción es buena, no tiene errores ortográficos, las
ideas están bien articuladas, la estética es armoniosa y se cumple
rigurosamente con las normas de citación APA
Cuarto criterio de Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 9
evaluación: puntos y 10 puntos

Nivel Medio: el trabajo entregado tiene problemas con la redacción, la

Estilo ortografía, la articulación de ideas, la estética o la citación de
referencias.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 7
Este criterio puntos y 8 puntos
representa 10
puntos del total de Nivel bajo: El trabajo entregado tiene profundos problemas con la
70 puntos de la redacción, la ortografía, la articulación de ideas, la estética o la citación
actividad de referencias.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener entre 0
puntos y 6 puntos

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