Recuento de Clostridios sulfito

reductores de agua de pozos: Método de

los Tubos Múltiples.

Dra. Olga V. Francia Arana

Docente
Asignatura: Microbiología Acuática
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Introducción
• Las bacterias sulfito reductoras son microorganismos
de morfología bacilar, Gram positivos, anaerobias estric-
tos, capaces de formar esporas y tienen la capacidad de
reducir los sulfatos a sulfuro.
• Las especies del género Clostridium tienen una supervivencia
mucho mayor que cualquier otro indicador bacteriano
de contaminación fecal debido a su capacidad formadora de
esporas.
• Si se evidencian simultáneamente coliformes y Clostridium es
evidente el origen fecal
de la contaminación. Si sólo se detectara Clostri-
diium indicaría una contaminación fecal remota.
• Clostridium, no dispone de sistemas citocrómicos ni de los
mecanismos de fosforilación por transporte electrónico
(indicativos de un sistema aeróbico), por lo que únicamente
pueden obtener energía por fosforilación a nivel de sustrato
(Madigan et al., 2004, pag. 405-406).
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• Objetivo
• Hacer el recuento de colonias de Clostridios sulfitirreductores

• Materiales
Muestra de agua de pozo
Medio de cultivo: Agar Clostridium o agar SPS
Tubos de ensayo con tapa de rosca de 150 x 15 mm
Pipetas de 10 y 1 mm
Placas Petri de 100 mm de diámetro
Láminas
Microscopio compuesto
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• Procedimiento
• 20 ml del medio de cultivo para Clostridium doble concentrado,
se reparte en tubos de 50 ml de capacidad. En el momento de
realizar el análisis, se funde el medio en baño maría
• Calentar la muestra en baño maría termorregulado a 80°C
durante 5 minutos
• Enfriar hasta 60°C aproximadamente
• Sembrar cada tubo de medio preparado con 20 ml de la
muestra de agua calentada a 60°C.
• Rápidamente, se homogeniza, se enfría y se incuba en
anaerobiosis a 37°C durante 48 horas.
• Al cabo de este tiempo de incubación se hace la evaluación de
los tubos.
• El crecimiento de colonias negras en el medio de cultivo
caracteriza al género Clostridium
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Aislamiento de esporas de Clostridum
Agar SPS

 Sulfito sódico 0.5 gramos

 Polimixina sulfato 0.01 g
 Sulfadiacina sódica 0.12 g
 Peptona de caseína 15 g
 Extracto de levadura 10 g
 Citrato férrico 0.5 g
 Tioglicolato sódico 0.1g
 Polisorbato-80 0.05 g
 Agar-agar 15 g
 Agua destilada un litro
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Características del crecimiento de Clostridios

Sulfitorreductores
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Agar perfringens TSC más emulsión de

yema de huevo
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Observación microscópica de Clostridium pergringens

 Tarea 9

• Hacer el informe de Práctica

• Confeccionar tablas de resultados
• Interpretar los resultados con la normatividad vigente
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Bibliografía

• Responder las preguntas siguientes:

1. ¿Porque es importante el análisis microbiológico de los
sulfitorreductores en aguas?
2. ¿Qué características de cultivo y de morfología microscópica
le permite reconocer a este grupo de bacterias?
3. Con relación a los sulfitorreductores, ¿Qué método de análi-
sis microbiológico es el más indicado para determinar la
calidad del agua de consumo?