9.

Reacciones generales de los Aminoácidos

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OBJETIVOS:

 Identificar algunos aminoácidos, basados en los grupos de las cadenas

laterales mediante reacciones químicas específicas.

 Determinar la solubilidad de los aminoácidos en diferentes soluciones.

9.1 Fundamento teórico

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Las proteínas son moléculas de alto peso molecular, integradas por unidades o
aminoácidos, que se unen entre sí mediante un enlace covalente que se conoce
como enlace peptídico. Cada aminoácido contiene la misma estructura
fundamental: un grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2). En los
aminoácidos, el grupo amino funciona como una base débil, mientras que el grupo
carboxilo actúa como un acido débil, por esta razón se ionizan cuando están en
solución.

Los aminoácidos a pH bajo (ácido) se encuentran mayoritariamente en su forma

catiónica (carga positiva), mientras que a un pH alto (básico) se encuentran en su
forma aniónica (carga negativa). Sin embargo, existe un pH específico para cada
aminoácido, donde la carga negativa es igual a la carga positiva, y la carga neta es
cero. En este caso se dice que el aminoácido se encuentra en su forma de ion
dipolar o zwitterión.

catión zwitterión anión

La solubilidad de los aminoácidos es función de la composición iónica del medio, el

pH y la temperatura. La adición de solventes orgánicos, como acetona o alcohol, a
una solución de proteínas tiende a disminuir la solubilidad de las proteínas, y por
ello se utilizan estos disolventes para precipitar proteínas. Las moléculas de agua,
por su parte, entran en interacción con los grupos polares de las proteínas y tienden
a aumentar su solubilidad.

Los aminoácidos difieren unos de otros por la naturaleza de sus cadenas laterales,
o grupos “R” que varían tanto en estructura, como en tamaño y carga eléctrica e
influyen en la solubilidad en agua. Las reacciones debidas al grupo carboxilo y al
grupo amino son generales y se dan para todos los aminoácidos, mientras que las
reacciones del radical “R” son reacciones específicas.

Adicionalmente, los aminoácidos se caracterizan por el hecho de que contienen:

nitrógeno, oxigeno, carbono, hidrogeno y en casos particulares azufre (cisteína y
metionina). Los grupos químicos funcionales de los aminoácidos intervienen en las
reacciones químicas generales esperadas para estos grupos, conduciendo
frecuentemente a la formación de complejos coloreados, los cuales se emplean para
su reconocimiento en diferentes pruebas de laboratorio.

9.2 Materiales
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 Tubos de ensayo (5).

 Pipeta graduada de 5 ml. *Material conseguido por el
 Gradilla. estudiante.
 Pera de goma.
 Pinzas para tubo de ensayo.
 Pipeta Pasteur.
 Mecheros.
 Placa de calentamiento.
 HCl al 0.1 M
 NaOH al 0.1 M
 Etanol.
 Ninhidrina.
 HNO3.
 Muestras problema
(aminoácidos: fenilalanina,
triptófano, tirosina, glicina,
lisina y alanina)
 Cinta de enmascarar.*
 Papel absorbente.*
 Guantes. *
 Goteros.*
 huevo*
9.3 Procedimiento experimental.
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a. Solubilidad de los aminoácidos:

 Tome 1 ml de cada una de las muestras problema (aminoácidos

suministrados) en los tubos de ensayo, y rotúlelos por separado.
 Agregue 1 ml de agua a cada uno de los tubos.
 Observe las reacciones al mezclar cada una de las muestras y reporte los
resultados en la tabla 1.
 Repita el procedimiento con cada una de las muestras problemas, agregando
1 ml de ácido clorhídrico, hidróxido de sodio y etanol, respectivamente.

b. Prueba de la Ninhidrina:

La ninhidrina es un agente altamente oxidante, que remueve los grupos amino de

los aminoácidos liberando amoniaco, bióxido de carbono, un aldehído y una forma
reducida de ninhidrina. Los grupos α-amino libres reaccionan con la ninhidrina
formando un complejo de color violeta. La prolina y la hidroxiprolina reaccionan de
la misma forma con la ninhidrina, pero el complejo obtenido es de color amarillo.

 Tome 1 ml de una muestra problema y ubíquelo en un tubo debidamente

rotulado.
 Agregué 1 ml de ninhidrina y caliente durante dos minutos.
 Registre sus observaciones en la tabla 7.
 Repita el mismo procedimiento con cada uno de los aminoácidos
suministrados.

c. Prueba Xantoproteica:

En la prueba Xantoproteica se consigue la nitración de los aminoácidos con anillos

aromáticos, formando nitroderivados de color amarillo por calentamiento; las sales
de estos derivados son de color naranja.

 Tome 1ml de los aminoácidos suministrados en cada tubo de ensayo,

previamente rotulado.
 Agregue 1 ml de ácido nítrico (HNO3) concentrado.
 Caliente suavemente durante 2 minutos, reporte los cambios que se
presentan en la tabla 3.
 Deje enfriar y adicione hidróxido de sodio hasta que la mezcla se fuertemente
básica. El cambio de coloración de amarillo en solución ácida a naranja
brillante en solución álcali, constituye un resultado positivo.
 Registre los resultados obtenidos en la tabla 3.
d. Prueba Biuret:

Esta prueba se emplea para reconocer la presencia de enlaces peptídicos de las

proteínas. El sulfato cúprico alcalino reacciona con compuestos que contienen dos
o más enlaces peptídicos produciendo un complejo de coloración violeta. El carácter
positivo de la prueba se obtiene con un mínimo de dos enlaces peptídicos y la
intensidad del color depende del número de estos. La reacción no es absolutamente
específica para los enlaces peptídicos, ya que los compuestos que poseen dos
grupos carbonilo asociados mediante un átomo de nitrógeno o carbono, reaccionan
positivamente.

 Coloque 1 ml de albumina en un tubo de ensayo.

 Agregue 1 ml de hidróxido de sodio al 1% y mezcle bien.
 Adicione 0.5 ml de sulfato cúprico al 1%, agitando contantemente hasta que
se presenten cambios en la coloración de la mezcla.
 Registre los resultados obtenidos en la tabla 4.
 Repita el procedimiento empleando agua.

7.4 Preguntas: DESARROLLAR ESTAS PREGUNTAS AL FINAL DEL INFORME

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a) ¿Cuáles son los aminoácidos que se presentan en las proteínas que

contienen anillos aromáticos?

b) Si tienes tres muestras biológicas no etiquetadas, en la cual una de ellas es

un carbohidrato, otra un lípido y otra una proteína; ¿cuál prueba usarías para
identificar rápidamente cual es la proteína?

c) Escriba las estructuras de los aminoácidos que analizó en cada prueba e

identifique el grupo responsable de la coloración positiva del ensayo
(xantoproteica y ninhidrina).

d) ¿Qué ocasiona la adición de acetona a una disolución de aminoácidos?

9.5 Literatura recomendada

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 Mathews C.K., Van Holde K.E., Ahern K.G. Bioquímica. 3ª. Ed. Editorial
Pearson Educación. 2002

 Horton H.R., Moran L.A., Ochs R.S., Rawn J.D., Scrimgeour, K.G.
Bioquímica. 1a. Ed. Editorial Prentice-Hall Hispanoamerica. 1995.
  Nelson D.L., Cox M.M. Lehninger: Principios de Bioquímica. 4a. Ed. Editorial
Omega. 2006.

Anexos Gráficos.

Tabla 9.1.

Solvente

NaOH
HCl
agua

Etanol
Muestra

AA1
AA2
AA3
AA4

Tabla 9.2 Registro del carácter positivo o negativo en la prueba de la

ninhidrina. Marque con X el carácter positivo o negativo de la observación. En
la columna de reconocimiento indique cual es el factor responsable de la
prueba (aminoácido o enlace peptídico).

Muestra Reacción Reconocimiento

(+) ó (-)

Tabla 9.3 Registro del carácter positivo o negativo de la prueba xantoproteica.

 Muestra Positiva Negativa Reconocimiento

Tabla 9.4 Registro del carácter positivo o negativo de la prueba biuret según
el tipo de muestra.

Muestra Positiva Negativa Reconocimiento

Albumina (huevo)

Agua destilada