GUÍA PARA LA PREPARCIÓN DE LA SESIÓN TEÓRICA: MICOSIS

SISTÉMICAS SECUNDARIAS CAUSADAS POR LEVADURAS DE

IMPORTANCIA MÉDICA

Preparación de la sesión: Para contribuir con el éxito de la sesión, es importante

que dedique un tiempo del trabajo independiente para leer los siguientes recursos:
1. Opportunistic yeast infections: candidiasis, cryptococcosis, trichosporonosis
and geotrichosis
Recuerde que los recursos se encuentran disponibles en la sección: “material de
estudio” del aula extendida.
A continuación se presentan unas preguntas orientadoras para preparar el tema. Se
aconseja que para solucionarlas, se consulten algunas de las fuentes señaladas en
los recursos bibliográficos complementarios. Por favor respóndalas y participe
activamente de la discusión de clase:
 ¿Cuáles son los agentes etiológicos de la criptococosis y la candidiasis?
Criptococosis: Cryptococcus neoformans y Cryptococcus gattii

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Img.1
Micromorfología Cryptococcus neoformans
Candidiasis: C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. dubliniensis, C.
parapsilosis, C. orthopsilosis, C. metapsilosis, C. krusei, C. famata, C.
guilliermondii, y C. lusitaniae

Img. 2
Micromorfología Candida albicans
 ¿Cuáles son los criterios empleados en el laboratorio de microbiología para
identificar levaduras?
Existen criterios empleados a nivel macroscópico y microscópico
Macroscópico:
Se observa con detenimiento el crecimiento de levaduras en diferentes
agares.
Entre ellos se destacan medios de cultivo comúnmente usados, pero en
este caso el más recomendado es el agar glucosado de Sabouraud (SDA),
con o sin antibióticos, es el medio de aislamiento por excelencia para la
identificación de levaduras.
Las levadoras se pueden observar en este medio:
 Completas
 Ligeramente abombadas o planas
 Consistencia mantecosa
 Lisas o rugosas
 Olor dulzón agradable
 Apariencia más pastosa a medida que envejecen

Img. 3
Aspecto macroscópico de las colonias de Candida albicans en SDA.
Microscópico:
1. Prueba del tubo germinal o filamentación precoz:

El tubo germinal es una extensión filamentosa de la levadura, sin

estrechamiento en su origen, cuyo ancho suele ser la mitad de la célula
progenitora y su longitud tres o cuatro veces mayor que la célula madre.
Sólo C. albicans es capaz de producir verdaderos tubos germinales; sin
embargo, otras especies como C. tropicalis pueden producir pseudohifas. Se
emplea plasma de conejo, pero pueden hacerse algunas variaciones como
con leche diluida, medio de cultivo sólido Oxgall-Tween-ácido cafeico (TOC).
Es importante tomar un inoculo de un tamaño adecuado para no arriesgarse
a obtener falsos positivos. La prueba será positiva al evidenciarse tubos
germinales.

Img.4
Producción de tubo germinal o filamentación precoz por Candida albicans.
 2. Tinciones:

El estudio microscópico de los organismos levaduriformes o

microorganismos relacionados se puede llevar a cabo mediante tinciones, ya
sea tinción simple o tinción de Gram, con esta tinción, las levaduras suelen
comportarse como Gram positivas. Mediante estas tinciones también se
puede observar la formación de blastosporas, artrosporas, hifas,
pseudohifas o endosporas.

Img. 5
Aspecto microscópico de Candida albicans. Tinción de Gram (x1.000).

Img.6
Aspecto microscópico de Candida parapsilosis. Tinción simple con azul de
metileno (x1.000)

 Relacione brevemente cuáles son los test o pruebas fenotípicas (análisis

micro-morfológicos) que de forma convencional se emplean en el laboratorio
para la identificación de las especies de Candida, con su respectivo
fundamento
El Auxanograma Dye Pour-Plate (DPPA) es un enfoque más práctico para
la identificación fenotípica integral de Candida spp. Este método permite
probar múltiples sustratos en la misma placa de agar el púrpura de
bromocresol (indicador de pH). En los medios permite una fácil
interpretación de los resultados. El método auxiliar es lento y se reemplaza
por kits comerciales como el Índice de perfil analítico (API) 20C y API 32C y
muchos otros. Estos kits comerciales son modificaciones de las técnicas de
asimilación auxanográfica
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  ¿Qué estrategias convencionales (microbiología clásica) se pueden emplear
en el laboratorio para diferenciar C. albicans de C. doubliniensis?

A) Crecimiento en agar Staib: 25 El agar Staib es básicamente una semilla

de Níger agar sin antibióticos. En este medio, C. albicans produce
colonias blancas con bordes lisos mientras que; colonias de C.
dubliniensis son de color blanco con flecos. En agar Staib, C. albicans
no produce clamidosporas mientras que, C. dubliniensis si lo hace
 Crecimiento en azul de metilo SDA: en este medio, C. albicans aísla la
fluorescencia con un color amarillo en la exposición a la luz UV de onda
larga, mientras que C. dubliniensis los aislamientos no pueden
fluorescer bajo esta condición. La propiedad de fluorescencia puede
perderse en aislamientos sometidos a almacenamiento y subcultivo
repetido. 
C) Agar caseína: este agar es útil para la diferenciación de C. albicans de y
C. doubliniensis. C. doubliniensis produce abundantes clamidosporas a
comparación de C. albicans en este medio.

 Qué métodos de microbiología clásica se pueden implementar en el

laboratorio para diferenciar el complejo de Cryptococcus neoformas y C.
gatti?
Agar CGB: El primer enfoque utiliza la prueba bioquímica simple, previamente
reportada, que evalúa el crecimiento en el medio selectivo agar canavanina
glicina azul de bromotimol. El método de agar es de baja complejidad y
económico, y se puede incorporar fácilmente al flujo de trabajo de laboratorios
clínicos de cualquier tamaño. Describimos la capacidad de CGB para
diferenciar C. gattii desde C. neoformans y otras levaduras encontradas en
nuestra práctica clínica.

RECURSOS BIBLIOGRÁFICOS COMPLEMENTARIOS

1. Sudhan, S., Sharma, P., Sharma, M. and Shrivastava, D., 2016. Identification of Candida
Species in the Clinical Laboratory: A Review of Conventional, Commercial and Molecular
Techniques. International Journal of Medical Research Professionals, 2(6).
2. Linares, M., y Solis, F. Identificación de levaduras. Guía Práctica de Identificación y
Diagnóstica en Micología Clínica. Revista Iberoamericana de Micología, pp. 11-1 a 11-18.
3. Klein, K., Hall, L., Deml, S., Rysavy, J., Wohlfiel, S. and Wengenack, N., 2009. Identification
of Cryptococcus gattii by Use of L-Canavanine Glycine Bromothymol Blue Medium and DNA
Sequencing. Journal of Clinical Microbiology, 47(11), pp.3669-3672.