UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

UNIDAD XOCHIMILCO

PROYECTO DE SERVICIO SOCIAL

Nombre del alumno: Octavio Omar Villegas Villegas.
Matricula: 210362561.
Licenciatura: Qumica Farmacutica Biolgica.
Divisin: Ciencias Biolgicas y de la Salud.
Departamento: Sistemas Biolgicos.
Ttulo del proyecto especfico: Evaluacin del equipo Ves-Matic
Cube 200, para la determinacin automatizada de la velocidad de
sedimentacin globular.
Proyecto genrico: evaluacin de productos relacionados con la
salud.
Etapa: desarrollo de reactivos analticos y de diagnstico.
Lugar de realizacin: Instituto Nacional de Cardiologa
Chvez.

Ignacio

Asesor interno: I.Q. Celerino Muoz Estrada.

Asesor Externo: Q.F.B. Evelyn Corina de la Rosa.

Fecha: X de abril del 2015

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NDICE
RESUMEN..
INTRODUCCIN

MARCO TERICO

Fases de la VSG
Valores de referencia en VSG.
Factores que afectan la VSG..
Interpretacin clnica de la VSG.
Mtodos para determinar la VSG
Recomendaciones de la ISCH para la medicin de la VSG.
Mtodo de referencia o estandarizado de la ISCH.
Descripcin de Ves-Matic Cube 200..
Funcionamiento general de Ves-Matic Cube 200 .

Objetivos.
Hiptesis.
Justificacin
Materia y mtodos
Resultados
Discusin..
Conclusin

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Evaluacin del equipo Ves-Matic Cube 200, para la

determinacin automatizada de la velocidad de
sedimentacin globular
_________________________________________________
Octavio Omar Villegas Villegas*
*

Estudiante de la Licenciatura de Qumica Farmacutica Biolgica de la

Universidad Autnoma Metropolitana unidad Xochimilco.

RESUMEN

INTRODUCCIN

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La prueba de velocidad de sedimentacin globular (VSG) sigue siendo una de las

pruebas de rutina importantes en los laboratorios de hematologa ya que es de
importancia clnica. A pesar de ser una prueba inespecfica, ayuda a diagnosticar
diversas patologas como por ejemplo: procesos inflamatorios, anemias, entre
otras que se mencionaran ms adelante. En la actualidad se han introducido
diversos mtodos automatizados para la medicin de la VSG, facilitando el trabajo
y agilizando el proceso, en esta investigacin se aborda el estudio de la VSG, as
como una tcnica automatizada con el analizador Ves-Matic Cube 200 .
El fenmeno de eritrosedimentacin, se basa en el hecho conocido ya desde
hace varios aos, que los eritrocitos, puestos en reposo y en posicin vertical caen
al fondo del recipiente que los contiene. El inters de la prueba radica en hacernos
conocer la mayor o menor velocidad con que se verifica la cada de los hemates.
El mecanismo ntimo del fenmeno de la eritrosedimentacin es an en parte
desconocido, debido sin duda a su gran complejidad. Son numerosos los
investigadores que han dedicado sus estudios para dilucidar dicho fenmeno,
siendo igualmente muchas las teoras e hiptesis que se ha planteado para aclarar
su esencia misma, en este trabajo se exponen sucintamente las ideas ms
aceptables sobre la intimidad de este complejo fenmeno.

MARCO TERICO

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Se puede definir la VSG como el tiempo que tardan los eritrocitos en sedimentar
cuando son sacados del torrente sanguneo y dejados en reposo. Los glbulos
rojos, eritrocitos o hemates son algunos de los elementos formes

que ms

abundan en la sangre, estas clulas sanguneas presentan una densidad

ligeramente superior al del resto de las dems, por lo tanto sern las primeras
clulas en sedimentar una vez que se encuentren en reposo. En condiciones
normales cuando se encuentran en movimiento en el interior de un organismo vivo
los hemates presentan una carga elctrico-negativa (potencial Z) en su
membrana, que origina una repulsin entre ellos y una constante suspensin de
los mismos en la sangre venosa. Cuando se extrae la sangre venosa y es
colocada en un tubo, se pierden las caractersticas normales y los eritrocitos al ser
sometidos a cambios de temperatura y sin movimiento, comienza a afectarse el
potencial Z y comienzan a precipitarse al fondo del tubo. En pocas palabras,
cuando colocamos la sangre en un tubo con anticoagulante y la dejamos sin
movimiento la fuerza de la gravedad hace que los glbulos rojos sedimenten en el
fondo del tubo.
FASES DE LA VSG
En el proceso de la sedimentacin eritrocitaria se distinguen tres fases: La primera
fase, se le llama fase de agregacin o fase lag, sta refleja el perodo por el cual
los eritrocitos individuales forman rouleaux (figura 1) habiendo una pequea
sedimentacin, esta fase tiene una duracin de aproximadamente 10 minutos y
durante esta fase la sedimentacin ocurre de manera lenta. La segunda fase, se le
denomina decantacin o fase de precipitacin, en sta la interface entre plasma y
eritrocitos se forma ms rpidamente, su duracin es aproximadamente de 45
minutos

la

velocidad

de

precipitacin

ocurre

de

manera

constante,

incrementando la sedimentacin. La tercera fase o fase final, se le denomina fase

de empaquetamiento, los eritrocitos se agregan en forma de pilas en el fondo del
tubo que estn contenidos (figura 2), en esta ltima fase la sedimentacin es un
poco ms lenta como resultado de la mutua interferencia entre los agregados
celulares, su duracin es de aproximadamente 5 minutos.

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Figura 1: Fotografa de los agregados eritrocitrios o rouleaux formados en la

fase de agregacin.

Figura 2: Representacin de las fases de la eritrosedimentacin

El tamao de los agregados formados en la fase lag son crticos para el

comportamiento de la sedimentacin. La agregacin y sedimentacin son
manifestaciones de la inestabilidad en la suspensin de la sangre, la cual est

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basada en el recproco efecto entre la superficie de la membrana del eritrocito y la

concentracin de ciertas protenas plasmticas, las cuales han sido llamadas
aglomerinas. Existe una alta afinidad por las glicoprotenas de la membrana del
eritrocito y ciertas aglomerinas dando como consecuencia una reduccin del
potencial Z de los eritrocitos y como consecuencia un aumento de la VSG. El
fibringeno, IgM y alfa-2-macroglobulinas tienen propiedades de aglomerinas; los
fragmentos

producidos

por

el

fibringeno

muestran

una

actividad

de

sedimentacin baja por la disminucin de su tamao. La actividad de la

sedimentacin

para

las

alfa-1-cido

glicoprotenas,

alfa-1-antitripsina,

ceruloplasmina, y la haptoglobina no han sido claramente demostradas; sin

embargo, una correlacin positiva entre la concentracin de estas protenas de la
fase aguda y la VSG ha sido reportada. La IgG incrementa la sedimentacin de los
eritrocitos solamente en altas concentraciones. As pues, Las interrelaciones entre
las protenas plasmticas y la formacin de rouleaux es la base para la medicin
de la VSG.
La VSG en la sangre normal es relativamente lenta. Sin embargo, en muchas
enfermedades tienen lugar alteraciones de las propiedades fisicoqumicas del
plasma y sus coloides, tales como aumento del fibringeno, alteraciones de la
concentracin de protenas, alteracin en la proporcin entre las distintas
fracciones proteicas; nmero, forma, tamao y propiedades de la membrana del
eritrocito, entre otros. Varios de estos factores afectan la VSG y se discutirn ms
adelante.

VALORES DE REFERENCIA EN VSG

Los valores de referencia vienen definidos mediante el mtodo Westergren,
aunque existe otro mtodo como el Wintrobe menos preciso. En general, la

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normalidad de la VSG puede determinarse mediante la siguiente frmula: Varones:

VSG = edad (aos)/2. Mujeres: VSG = (edad + 10)/2. Los Valores normales de
VSG son mayores en mujeres (varones: 0-15 mm en la primera hora, y mujeres: 020 mm en la primera hora). Diversas situaciones clnicas y patolgicas pueden
condicionar una modificacin de los valores de VSG as como diversos factores
fsicos al momento de la realizacin de la prueba, sin embargo se debe tener en
cuenta que no todos los organismos humanos son iguales, con lo que los valores
normales de VSG pueden presentar una ligera variacin a los establecidos como
referencia.
FACTORES QUE AFECTAN LA VSG
Hay muchos factores que afectan la sedimentacin de los eritrocitos, tales como el
hematocrito (relacin porcentual eritrocitos-plasma) o cambios en la viscosidad del
plasma. La VSG se ve incrementada con respecto a la edad en ambos sexos,
cuyo valor es significativo en cada dcada del adulto. En mujeres embarazadas la
VSG se ve acelerada a partir del segundo y tercer mes as como en el puerperio.
Como ya se mencion anteriormente, se ha observado que en sujetos sanos, las
mujeres poseen una VSG ms alta que los hombres, y se ha establecido que
probablemente sea por la concentracin de hemoglobina. Otro factor que afecta la
VSG es la temperatura. Un incremento en la temperatura usualmente incrementa
la velocidad. La presencia de aglutininas en fro activas a temperatura ambiente
puede disminuir la sedimentacin. En la tabla 1 se muestran algunos factores que
pueden aumentar o disminuir la VSG.

Tabla 1: factores ms comunes que modifican la VSG.

Factores que aumentan la

Factores que disminuyen

Factores sin efecto clnico

VSG

la VSG

significativo o efecto
cuestionable

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Obesidad
Edad elevada
Embarazo, menstruacin

Leucocitosis extrema

Temperatura corporal

Policitemia
Anormalidades de glbulos rojos:

Ingesta reciente

esferocitosis, acantocitosis,
microcitosis
Factores tcnicos: problema

AAS

dilucional, mezcla incorrecta, tubo

Mujeres

de VSG corto, vibracin durante la

AINE

determinacin
Anormalidades de protenas:
hipofibrinogenemia,
Anemia

disproteinemia con estado de

hiperviscosidad

Anormalidad de glbulos rojos:

macrocitosis

Sales biliares

Factores tcnicos: problema

dilucional, aumento de

Altas dosis de corticoides

temperatura, inclinacin del

tubo
Valores elevados de
fibringeno: infeccin,
inflamacin, malignidad, fallo

Fallo cardiaco

renal terminal, diabetes

mellitus, enfermedad cardiaca,
enfermedad vascular.
Hipercolesterolemia

Caquexia

Heparina

Hipogammaglobulinemia

Una elevacin de la VSG indica una disproteinemia o una paraproteinemia, cuya

causa an se est investigando. La VSG est incrementada en inflamaciones
agudas y crnicas, tumores malignos, nefrosis, enfermedades de la sangre
(especialmente en plasmocitoma, macroglobulinemia, leucocitosis aguda, anemia
hemoltica autoinmune y linfogranulomatosis). Un bajo hematocrito, da como
resultado un incremento moderado de la VSG y al contrario

un hematocrito

elevado da como consecuencia una reduccin de la VSG, especialmente en

policitemia vera. Cabe destacar que en enfermedades hepticas, incluyendo
congestin heptica en insuficiencia cardaca, la VSG puede encontrarse reducida

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o estar normal, a pesar de la presencia de inflamacin, por lo cual una VSG

normal no puede significar una exclusin de alguna patologa. La VSG puede estar
reducida

por

frmacos

especialmente

por

corticoides,

salicilatos

tiosemicarbamidas. Puede estar elevada en muchas otras enfermedades

incluyendo cncer, neumona, mieloma mltiple, leucemia, tuberculosis y
enfermedad de Hodgkin.
La concentracin de hemoglobina en cada eritrocito se considera un factor
importante, ya que se piensa que los hemates con mayor cantidad de
hemoglobina, son ms pesados y por eso sedimentan ms rpidamente, sin
embargo an no se ha llegado a un acuerdo sobre su posible influencia. El pH
sanguneo es un factor importante, por estar ntimamente ligado a la carga
elctrica de los hemates. As la acidosis retarda la sedimentacin globular,
probablemente por aumentar la carga elctrico-negativa del hemate. El aumento
de colesterol sanguneo ocasiona modificaciones, sin que se sepa a punto fijo si
su aumento acelera o retarda la velocidad de cada de los hemates, sin embargo
existen estudios donde se admite que la hipercolesterinemia en los gestantes,
corre paralelamente con el retardo de la VSG. Se debe destacar que el nmero de
leucocitos, no parece tener mayor influencia en la VSG, ya que existen estudios
donde no se ha encontrado relacin entre las modificaciones de VSG y la
leucocitosis o la leucopenia. Sin embargo algunos autores en la actualidad
aseguran que la VSG acelerada se acompaa de leucocitosis. Los gases de la
sangre, la tensin superficial, el metabolismo basal o las sales minerales en la
sangre son otros tantos factores que influyen en la VSG, sin que se haya
precisado su modo de accin de manera definida.
Finalmente se deben destacar los factores tcnicos de la prueba que pueden
afectar la VSG. Los anticoagulantes como la heparina aumentan la VSG. El
dimetro interno y el largo del tubo afectan, se ha observado que a mayor longitud
del tubo se acelera la VSG, sin embargo en cuanto al dimetro del tubo no se
presenta alguna diferencia significativa. En cuanto a la inclinacin del tubo se ha

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observado que si el tubo se encuentra desviado de su posicin vertical, existe una

aceleracin de la VSG siendo as que cuando existe una desviacin de 2.3% en
un tubo de 100 mm de longitud, la velocidad se ve acelerada en un 30%. La
temperatura del laboratorio en el cual se lleva a cabo la prueba de VSG influye de
manera directa,

es por ello que se recomienda que la temperatura de los

laboratorios deba fluctuar entre 22 y 27C. Otro factor importante es la demora en

la realizacin de la prueba despus de la toma de muestra sangunea ya que se
ha afirmado que se producen modificaciones en la estabilidad de suspensin de la
sangre despus de las 4 horas posteriores a la venopuncin, presentndose
variaciones en el valor de VSG.
Como ya se mencion anteriormente, se ha demostrado repetidamente que el
hematocrito es un factor muy importante que influencia la VSG. Cuanto menor es
el hematocrito, mayor es la velocidad de cada de los eritrocitos, muchos
investigadores han recomendado que el valor de la sedimentacin sea corregido
por el grado de dilucin (anemia) o concentracin (policitemia) de la sangre. Por
un sencillo procedimiento que hace la correccin de acuerdo con el valor del
hematocrito, solo si es que se usa el tubo de Wintrobe en la determinacin de la
VSG. Rourke y Ernstene prepararon una grfica para corregir la VSG teniendo en
consideracin el periodo de ms rpida cada de los hemates y el periodo de
sedimentacin constante, logrando grficamente lo que se conoce como el ndice
de sedimentacin corregida, dicha grafica puede ser satisfactoriamente empleada
en conexin con el mtodo de Wintrobe, se hizo necesario, en consecuencia,
preparar una grfica que sirviera para corregir la VSG determinada al final de una
hora. Tal labor fue llevada a cabo por Wintrobe y Landsberg. Por medio de
experimentos con muestras sanguneas se revelo un alto grado de correlacin
entre la velocidad de sedimentacin y el hematocrito, as se lleg a la construccin
de la grfica de correccin (figura 3) la cual se puede aplicar a la correccin de
cualquier VSG en funcin de su respectivo hematocrito.

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Figura 3: grfica o tabla de correccin de Wintrobe-Landsberg, en la cual se

puede ver una columna vertical gruesa a nivel de 47 que corresponde al
hematocrito de los hombres adultos normales. En 42 vemos otra columna a rayas
que corresponde al hematocrito de las mujeres adultas normales y finalmente en
35 una nueva columna que representa el valor del hematocrito que se ha
encontrado en nios normales.

El modo de utilizar la tabla de correccin es el siguiente: se localiza la lnea

horizontal correspondiente a la VSG obtenida; se busca luego la lnea vertical que
corresponde al hematocrito de la misma sangre, seleccionndose la lnea curva
ms prxima a la interseccin de la lnea horizontal y vertical y sgase esa lnea
curva hasta encontrar la columna gruesa correspondiente al hematocrito normal, la
lnea horizontal ms prxima a este ltimo punto de interseccin es la velocidad
de sedimentacin corregida. Por ejemplo: una VSG en una hora de 40.00 mm y
de hematocrito de la misma sangre de 25% tendr una VSG corregida de 20.00
mm a la hora.
INTERPRETACIN CLNICA DE LA VSG

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La VSG es una prueba inespecfica, mide la presencia y severidad de los procesos

patolgicos; sin embargo la estimacin de la VSG es ampliamente utilizada en
medicina clnica y frecuentemente se usa en el laboratorio para evaluar la
respuesta de la inflamacin en la fase aguda. El uso ms importante que se le da
a la VSG es como un examen que ayuda a detectar la presencia de algunas
enfermedades clnicamente ocultas, por eso es considerada una prueba
indispensable en los procedimientos hematolgicos de rutina. La VSG puede
usarse para monitorear el curso de muchas enfermedades reumticas y colgenovasculares, sin embargo, es de muy poca utilidad en individuos asintomticos y en
pacientes con enfermedad incierta no confirmada, ya que sta es muy
inespecfica.

MTODOS PARA DETERMINAR LA VSG

Existen diversos mtodos por los cuales se puede determinar la velocidad de
sedimentacin globular, sin embargo un grupo de expertos que pertenecen a el
consejo internacional para la estandarizacin en hematologa (ISCH) propusieron
un mtodo estandarizado de referencia basado en el mtodo tradicional de
Westergren que se describe ms adelante, el cual ha permitido estandarizar
dichos procedimientos en los diversos laboratorios y de esta manera contar con un
proceso uniforme en el cual se puedan comparar las diversas tcnicas de
medicin. A continuacin se describen algunos de los mtodos conocidos para la
medicin de la VSG seguido del mtodo estandarizado de la ISCH.

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Mtodo de Linzenmeier: Utiliza una pipeta especial que consiste en un tubo

capilar con una ampolla para agitacin similar a la pipeta de Thoma. Este capilar
se llena hasta la marca de uno con citrato de sodio como anticoagulante y luego
hasta la marca de tres con sangre proveniente de una puncin capilar. La sangre
se lleva hasta la ampolla en donde se efecta el homogenizado. La sangre se
lleva a la columna capilar, la pipeta se coloca en un soporte especial y se deja
reposar durante una hora a temperatura ambiente.
Mtodo de Smith: Es un micromtodo que utiliza una pipeta especial con solucin
de citrato sdico al 5% y se coloca en el fondo de un tubo. La sangre se aspira con
la misma pipeta, recogiendo 0.1 mililitros que se traslada al tubo que contiene el
citrato. Esto se repite tres veces, completando a 0.3 mililitros la cantidad de
sangre, se agita el tubo para evitar coagulacin. Se traslada la mezcla al tubo
especial de sedimentacin por medio de una pipeta capilar; y la lectura se realiza
a la hora.

Mtodo de Hellige-Vollmer: Es un micromtodo, el cual utiliza tubos cortos

graduados, la pipeta que ya contiene citrato, se llena por capilaridad con sangre
de una puncin capilar, se mezcla en una placa de celuloide y se lleva hasta la
marca cero. La pipeta se pone en contacto con una gota de mercurio que sella la
punta, se coloca en un soporte especial y la lectura se realiza a la hora.

Mtodo de Cutler: En un frasco se colocan 2 mililitros de sangre y 0.2 mililitros de

citrato de sodio al 3.8 %, se mezcla y luego se traslada 1 mililitro de sangre a un
tubo de sedimentacin de Cutler, el cual tiene 2 mililitros de capacidad y est
graduado en 50 divisiones, con el cero a nivel de mililitro. Se coloca la pipeta en
posicin vertical, la lectura se realiza a la hora o cada treinta minutos.

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Mtodo Guest Dispette: Utiliza tubos de poliestireno, los cuales se llenan a la

marca de 150 milmetros con sangre mezclada con EDTA y luego se adiciona
citrato de sodio 31.3 g/L en una relacin de cuatro a uno. El dimetro interno de
los capilares es de un milmetro y su longitud 230 milmetros. Se colocan los tubos
en posicin vertical y a la hora se obtiene la lectura.

Mtodo de Wintrobe: Se utilizan tubos de 100 milmetros de longitud y oxalato de

potasio y amonio como anticoagulante, en la mayora de los casos se utiliza
EDTA. Se necesita una pipeta capilar para llenar el tubo a partir de la seal cero
del fondo del tubo el cual se coloca en posicin vertical, la lectura se realiza a la
hora. En muestras que presentan velocidades elevadas puede dar error en la
lectura, y se recomienda realizar una correccin de VSG, debido a la longitud corta
del tubo las clulas se empacan ms rpidamente.

Mtodo de Westergren: Es el mtodo de referencia recomendado por el ICSH.

Utiliza una pipeta graduada de 0 a 200 mm; requiere sangre venosa en relacin
1/10 con el anticoagulante citrato de sodio al 3.8%. La pipeta se llena hasta la
seal de 200 mm y se coloca en un bastidor especial con unos sujetadores de
muelle que mantienen el extremo inferior de la pipeta fuertemente sujeto contra
una base de goma en posicin vertical. La pipeta se deja en reposo por espacio de
una hora.

Mtodos de Westergren modificados: Utilizan como variante el ngulo de

inclinacin. Despus de colocadas las pipetas en la gradilla vertical, se colocan en
un soporte con una inclinacin de 45 grados con la vertical o bien a 60 grados, en
este momento se acciona el cronmetro. La ventaja que presentan es que se
reduce el tiempo de lectura por efecto de la inclinacin; sin embargo, las

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desventajas son que la pipeta no est diseada para esta modificacin y debe
tenerse un soporte debidamente calibrado, el cual no est comercialmente
disponible. Otra de las modificaciones del mtodo clsico de Westergren es la
utilizacin de K3EDTA como anticoagulante, el cual se utiliza porque no afecta la
morfologa celular. Se emplea en una relacin de 1.6 a 2.4 miligramos por mililitro
de sangre.

RECOMENDACIONES DE LA ICSH PARA LA MEDICIN DE LA VSG

El mtodo de referencia original de la ISCH para la medicin de la VSG se bas
en la metodologa de Fahraeus y Westergren utilizando sangre diluida (4
volmenes de sangre ms 1 volumen de citrato esto es 4:1) en un tubo de vidrio
de 300 mm de longitud con un extremo abierto, y montado verticalmente en un
soporte.
MTODO DE REFERENCIA O ESTANDARIZADO DE LA ISCH
En 1988 la ISCH propuso para fines de comparabilidad entre mtodos, una prueba
de VSG realizada con muestras de sangre sin diluir bajo condiciones
estandarizadas en una pipeta westergren de vidrio con un extremo abierto y que
reconoce las especificaciones de la ISCH. Estas muestras de sangre sin dilucin
son anticoaguladas con EDTA (dilucin menor de 1%) pero no estn diluidas con
anticoagulante citrato de sodio. Este mtodo est reconocido actualmente por la

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ISCH como su mtodo de referencia. Los resultados deben expresarse como VSG
= (sin dilucin) x mm.
Para la comparacin con el mtodo tradicional usando sangre diluida, se puede
aplicar una correccin a la frmula: sangre diluida VSG mm = (sangre sin dilucin
VSG mm x 0.86) 12. El mtodo estandarizado de la ISCH se puede utilizar como
una alternativa para la verificacin o control de calidad de los mtodos de trabajo
rutinario.
La ISCH prefiere el uso de metodologas que minimizan el riesgo de peligro
biolgico durante la realizacin de la prueba.

Muestras de sangre: Las muestras sanguneas deben ser obtenidas por una
venopuncin limpia terminada en un periodo mximo de 30 segundos y sin una
excesiva estasis venosa. Sangre de hematocritos elevados no debe ser usada por
que la reproducibilidad de la sedimentacin puede ser escasa en tubos estrechos.
La tcnica manual de venopuncin por extraccin a vaco puede ser usada y la
sangre debe ser tomada en anticoagulante EDTA (dilucin menor de 1%) sin
dilucin adicional en citrato. La prueba de VSG debe realizarse en un periodo de 4
horas posteriores a la venopuncin, las muestras de sangre se pueden almacenar
durante ms de 4 horas en refrigeracin a 4C, cualquier otro periodo largo de
almacenamiento debe ser validado. Para ciertos tipos de muestras de sangre
como por ejemplo muestras con hiperlipidemia o hiperbilirrubinemia, si no son
adecuadas para la realizacin de la prueba entonces tambin se deber indicar.
Para las muestras de sangre que usan dilucin, pueden tomarse directamente de
la venopuncin 4 volmenes de sangre directamente en 1 volumen de

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anticoagulante citrato de sodio el cual acta como diluyente. Los tubos de vaco y
tubos que contienen el lquido anticoagulante para este propsito tienen un tiempo
definido de almacenamiento el cual debe ser definido o especificado por el
fabricante al igual que las condiciones de almacenamiento.
Alternativamente, la sangre puede ser tomada primero con un anticoagulante
primario (EDTA) el cual no causa una dilucin significativa de las protenas
plasmticas (<1%), seguido por una dilucin con citrato de sodio. Para lo
anteriormente mencionado, la concentracin de citrato de sodio (citrato trisdico
dihidrato Na3C6H507.2H20) debe estar en un rango de 0.10-0.136 mol/L. esta
solucin debe desecharse cuando comienza a observarse de aspecto turbio, sobre
todo si se mantiene en un recipiente reutilizable, esta solucin tambin debe
usarse para eliminar los restos de jabn o algn contaminante en el material a
utilizar en la prueba.
Si se utiliza un anticoagulante o diluyente alternativos (por ejemplo solucin salina)
o se utiliza otro factor de dilucin, la comparabilidad de los resultados debe
validarse.
Mezclado de las muestras de sangre: El mezclado de la sangre es necesario
justo despus de la venopuncin, pero tambin se debe realizar un mezclado
adicional inmediatamente antes de la prueba de VSG el cual es sumamente
importante para la reproducibilidad de la prueba. Para tubos estndar (10-12 mm x
75 mm, que contiene 4 mL de sangre con una burbuja de aire que comprende
hasta un 20 % del volumen del tubo) se deben hacer un mnimo de 8 inversiones
completas (180 x 2) esto es cuando la burbuja de aire viaja completamente de
extremo a extremo del tubo. El mezclado de la muestra no debe causar hemolisis.
Para tubos que no son estndar, especialmente cuando son ms estrechos,
pueden requerir ms de 8 inversiones. El mezclado debe continuarse justo hasta
antes que la pipeta se llene con la sangre al comienzo de la prueba de VSG.
Si el mtodo utilizado para trabajo, incorpora el uso de mezcladores automticos,
la efectividad de los mismos debe estar validada por el fabricante.

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Especificaciones de las pipetas de sedimentacin: Las pipetas deben ser

incoloras, circulares, y de una longitud suficiente para dar una escala de
sedimentacin de 200 mm. La escala debe estar marcada en la pipeta y la
separacin debe verse claramente con lneas de 1 mm de separacin entre cada
una, las cuales deben ser numeradas en un intervalo desde 200 mm en la parte
inferior hasta 0 mm en la parte superior (figura 4).

La pipeta debe estar en

posicin vertical, sujeta a un soporte de manera que la escala de lectura pueda ser
clara y precisa para asegurar una buena reproducibilidad. Si la lectura no se
realiza de manera visual y en su defecto es ptico-electrnica, no es necesaria
una escala de lectura. El dimetro de las pipetas de sedimentacin westergren
para VSG tradicionalmente ha sido de 2.55 mm

0.15 mm. La ISCH actualmente

recomienda que el dimetro debe de ser no menor que 2.55 mm. Las pipetas de
VSG deben ser desechables, pueden ser de plstico o de vidrio, en caso de ser
de plstico, la pipeta no deber de presentar propiedades adhesivas hacia las
clulas sanguneas y no debe liberar plastificantes o contaminantes que puedan
afectar a la muestra o alterar la sedimentacin. Si al momento de la fabricacin de
las pipetas se utiliza un compuesto especifico, este de igual manera no debe de
afectar la composicin de la sangre ni alterar la sedimentacin.
Figura 4: fotografa de una pipeta de Westergren de plstico

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La pipeta debe ser llenada con sangre a una altura de al menos 200 mm. El
cambio en la sangre con respecto a la columna en la escala, debe comenzar a
registrarse desde 0 mm.
En el inters por la seguridad es preferible que las pipetas sean desechables, pero
si son reutilizadas se debe prestar especial atencin al momento de la limpieza,
con la eliminacin de los contaminantes y con una apropiado control de
verificacin.
Caractersticas de la pipeta en el soporte de sujecin: La pipeta debe
mantenerse en posicin vertical (figura 5), en un dispositivo especial (soporte para
pipetas de Westergren) en donde se mantienen de manera totalmente vertical e
inmvil

(confirmado por un ngulo de 90), no deben estar sometidas

directamente a la luz solar, ni a las corrientes de aire, ni a las vibraciones y deben

mantenerse a una temperatura constante (con variacin de
un rango de 18-25C durante el periodo de sedimentacin.

C) dentro de

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Figura 5: fotografa de un soporte para pipetas de Westergren, en donde se

puede observar la posicin totalmente vertical de las mismas en la realizacin de
la prueba.

Expresin de los resultados: Los resultados deben registrarse como la

sedimentacin que se produce a los 60 min desde el comienzo de la prueba, y se
expresa como: VSG (sin diluir) = x mm. Sin embargo algunos otros sistemas de
lecturas utilizan un tiempo distinto el cual oscila entre 20 a 120 minutos, a veces la
lectura se va realizando cada 5 minutos Actualmente la ISCH recomienda que la
lectura se realice a los 60 minutos.
En la actualidad se ha desarrollado diversas tcnicas basadas en la utilizacin de
diversos analizadores automatizados, los cuales facilitan el trabajo del personal

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del laboratorio ofreciendo una serie de ventajas como la disminucin al riesgo de

trabajar con fluidos biolgico infecciosos, entre otros aspectos como por ejemplo:
la disminucin del tiempo de anlisis. Uno de los equipos que recientemente se ha
introducido en los laboratorios de diversos hospitales en Mxico y en muchas
partes del mundo es el Ves-Matic Cube 200 , el cual se describe a continuacin
siendo uno de los mtodos automatizados en los que se pone gran nfasis en esta
investigacin.

DESCRIPCIN DE VES-MATIC CUBE 200

Es un instrumento cerrado designado y programado para la determinacin de la

VSG. Es capaz de analizar hasta un mximo de 180 muestras en una hora. El
equipo ejecuta el anlisis de las muestras directamente de los tubos que se
emplean en la recoleccin de la muestra sangunea anticoaguladas con K 3EDTA o
K2EDTA. Por lo tanto no existe la necesidad de darle un doble procesamiento a la
muestra para realizar la prueba de la VSG. El anlisis se ejecuta de forma
completamente automatizada y el primer resultado se obtienen en tan solo 20
min, los siguientes resultados se van obteniendo cada 18 segundos, los cuales
por medio de un algoritmo matemtico son extrapolados a los valores Westergren
en 60 minutos siendo comparables con los obtenidos por el mtodo manual. El
instrumento est diseado con una correccin de la temperatura siempre activa,
que relaciona los resultados a una temperatura de 18 C de acuerdo con el
nomograma de Manley. En algunos casos la desactivacin de esta correccin de
temperatura es adaptable a las necesidades del laboratorio. La prueba de VSG se
realiza con la correccin de la temperatura activada, esto debido a que la ISCH
recomienda el control de la temperatura en un intervalo de 18-25C.
FUNCIONAMIENTO GENERAL DE VES-MATIC CUBE 200
Las muestras sanguneas son colocadas en los racks analizadores y
posteriormente se colocan en un bastidor exclusivo para los racks dentro del
equipo, las muestras son mezcladas por un compartimento especial integrado al
instrumento, a continuacin las muestras son transportadas hasta el punto 1 de

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lectura dentro de una cadena especial donde la muestra puede permanecer en

reposo para permitir que se produzca la sedimentacin durante un perodo de 20
min antes de la lectura final en el punto 2 de lectura, posteriormente a travs de
sensores opto-electrnicos (luz blanca, LED de alta potencia y un foto-sensor) el
equipo determina automticamente el nivel de sedimentacin de los eritrocitos.
Seguido de una extrapolacin de los resultados que automticamente se imprimen
o se muestran en la pantalla. El instrumento est creado para expresar los
resultados de la medicin de la VSG en unidades Westergren citrato, sin embargo
durante la instalacin del equipo es posible de acuerdo a las adecuaciones del
laboratorio seleccionar la modalidad de expresin de los resultados en unidades
Westergren EDTA.

OBJETIVOS
General: comparar el mtodo manual westergren para la medicin de la velocidad
de sedimentacin globular con el mtodo automatizado Ves-Matic Cube 200 .
Especficos: evaluar el desempeo del Ves-Matic Cube 200 , la reproducibilidad,
sensibilidad y especificidad as como obtener valores de referencia.

HIPTESIS

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El mtodo automatizado Ves-Matic Cube 200, presenta una buena correlacin

con respecto al mtodo manual de Westergren, obtenindose sensibilidad,
reproducibilidad y especificad.

JUSTIFICACIN
En el laboratorio de hematologa del Instituto Nacional de Cardiologa Ignacio
Chvez el personal se encuentra constantemente bajo exposicin con fluidos
biolgicos que representan un riesgo para la salud. La introduccin del mtodo
automatizado Ves-Matic Cube 200, permite que estos riesgos sean minimizados
al realizar la prueba de VSG en comparacin con el mtodo manual de
Westergren, por lo cual se prefiere su uso para realizar las labores rutinarias en
los laboratorios, adems de que es un mtodo que ofrece mayor comodidad y un
menor tiempo empleado en la prueba, permitiendo analizar un gran nmero de
muestras agilizando el proceso de anlisis as como otras ventajas con respecto
al mtodo manual. La realizacin de esta investigacin es de suma importancia,
en vista que en nuestra poblacin los estudios de este tipo son recientes.
Tomando en cuenta que el mtodo tradicional es un procedimiento manual
laborioso que puede introducir un sin nmero de errores y desventajas debidos a
varios factores. El mtodo automatizado que ofrece el Ves-Matic Cube 200, es una
opcin para efectuar la prueba de VSG ya que ofrece varias ventajas, por lo tanto
es conveniente realizar estudios para confirmar lo ya establecido en otros pases.

MATERIAL Y MTODOS
El estudio se realiz con pacientes de consulta externa y pacientes hospitalizados
del Instituto Nacional de Cardiologa Ignacio Chvez, de los cuales se tomaron
muestras venosas y fueron analizadas en el laboratorio de hematologa por el
mtodo manual de Westergren y de manera automatizada con el equipo Ves-Matic
Cube 200. El estudio se realiz con un total de X muestras de las cuales X
fueron mujeres y X hombres, en un periodo de X semanas.

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Las muestras sanguneas se analizaron en un periodo no mayor a 4 horas

posteriores a la venopuncin, la sangre se recolect en tubos de la marca BD
Vacutainer de polietilenftalato o PET (tapn morado, con dimensiones de 13 mm
x 75 mm con 7.2 mg de K 2EDTA dispersado por las paredes del tubo y ajustado
para el altiplano mexicano) con capacidad de 4 y 3 mL. La toma de muestra se
realiz en el banco de sangre y en el rea de hospitalizacin del instituto en un
periodo de tiempo de 6:00 a.m. a 9:30 a.m.
Posteriormente se trasladaron las muestras al

laboratorio de hematologa, se

ordenaron y se procedi con el anlisis como se describe a continuacin.

Mtodo manual de Westergren: Se comprob que el material estuviera limpio y
libre de contaminantes. Las muestras se colocaron en un dispositivo de mezclado
por 4 minutos asegurando la homogenizacin de la sangre. En un tubo de ensayo
de PET de 4 mL se agregaron 250 L de solucin del anticoagulante diluyente
citrato de sodio a la concentracin 0.05 M, aadindose tambin 1000 L de la
muestra sangunea. Se tap el tubo de PET con papel parafilm y se mezcl
dndole 8 inversiones completas (180 x 2). Posteriormente con el contenido del
tubo de PET se llen la pipeta de Westergren hasta donde la escala marco 0 mm.
Finalmente la pipeta llena fue colocada en el soporte para pipetas de westergren y
se dej transcurrir 60 minutos para el registro de la VSG. Las pipetas que se
utilizaron fueron de plstico de la marca EZ-Rate. Al finalizar la prueba las
pipetas fueron desechadas y las muestras sanguneas almacenadas a 4C.
Mtodo automatizado: Antes de iniciar las pruebas de VSG en las muestras
obtenidas de los pacientes, se detect la VSG de 2 controles especiales para el
equipo Ves-Matic Cube 200, para analizar estas muestras control se tuvo que
desactivar la correccin de temperatura.
Primeramente se procedi a una revisin del instrumento, se revis que los
bastidores donde se colocan los racks con las muestras sanguneas realizaran un
recorrido completo. Posteriormente se verific que la correccin de temperatura
estuviera activada. Una vez que se realiz lo anterior, se cargaron y acomodaron

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las muestras sanguneas en los racks, los cuales fueron montados en los
bastidores del analizador, se program el instrumento para que iniciara el proceso,
y en los posteriores 30 minutos el anlisis finalizo de manera automtica se
obtenindose los resultados de VSG impresos en un ticket. Finalmente se
descargaron las muestras del equipo y fueron guardadas a 4C.
Anlisis estadstico: Los mtodos para determinar la repetibilidad y la
reproducibilidad de las mediciones estn basados en la evaluacin estadstica de
las dispersiones de los resultados, ya sea en forma de rango o su representacin
como varianzas o desviaciones estndar. Los mtodos que se utilizan son: Rango,
Promedio y Rango, y ANOVA (anlisis de varianza). El mtodo que se utiliz para
evaluar la reproducibilidad fue un Anlisis de varianza de Fisher. La sensibilidad se
analiz realizando 10 mediciones de muestras repetidas con valores bajos,
medianos y altos de VSG. Para la comparacin de los mtodos automatizado y
manual se utiliz la prueba de t de student de datos pareados para comparar las
medias. La prueba no paramtrica de Spearmen fue utilizada para evaluar la
correlacin. El anlisis de regresin lineal fue realizado con el mtodo de PassingBablok. Para evaluar los sesgos y la concordancia se emple el anlisis de
BlandAltman. Todos los clculos estadsticos fueron realizados utilizando
Microsoft

Excel

2003.

Los

valores

de

estadsticamente significativos.

Resultados
Discusin
Conclusin

<0,05

fueron

considerados

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