UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y DE RECURSOS

NATURALES
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL Y DE RECURSOS NATURALES

PRACTICA DE LABORATORIO

ANALISIS INSTRUMENTAL Y MONITOREO

DOCENTE

ALIAGA MARTINEZ, MARIA P.

INTEGRANTES

MARZANO VASQUEZ LIZ MILAGROS 1719530026

NÚÑEZ MANDARACHI TABITA INÉS 1719510129
ÑOPO VALENCIA GABRIELA ISABEL 1719510147
PEREZ HURTADO MABEL NICOL 1719510025
TORRES LOPEZ GISELLE GIULLIANA 1719520138

CALLAO, 11/06/2020
 CÁLCULOS CON ABSORBANCIA Y CONCENTRACIÓN

1. Una disolución 15 mM de un colorante azul tiene una absorbancia de 0.600. ¿Cuál

es la concentración de una muestra del mismo colorante cuya absorbancia es 0.400?
SOLUCIÓN:
DATOS:
• A 1 = 0.6
• A 2 = 0.4
• c 1 = 15mM
• c 2 =? mM
a) Calcular la concentración para una nueva absorbancia:
Usando la ecuación de Lambert- Beer
A 1 = a. b. c1
0,600 = a . b .15 mM
0,6
= a .b
15mM
0,04 m−1 M−1 = a . b
La concentración para una muestra cuya absorbancia es 0.400
A 2 = a. b. c2
0,400 = 0,04 m−1 M −1 . c2
c2 = 10 mM
REPRESENTACION GRAFICA

ABSORBANCIA vs CONCENTRACION
18 mM
1
CONCENTRACION ABSORBANCIA 0.8
ABSORBANCIA

10 mM 0.4 0.6
15 mM 0.6 0.4 5 mM
0.2
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
CONCENTRACION (mM)

2. Un compuesto de color rojo disuelto a 0.10 M tiene una absorbancia de 1.20.

¿Cuál es la concentración de una muestra del mismo compuesto cuya absorbancia
es 0.90?
SOLUCION:
a) Calcular la concentración para una nueva absorbancia:
Usando la ecuación de Lambert- Beer
A 1 = a. b. c1
1,2 = a . b . 0,10M
1,2
= a .b
0,10 M
12 M −1 = a . b
La concentración para una muestra cuya absorbancia es 0.9
A 2 = a. b. c2
0,9 = 12 M −1 . c2
c2 = 0,075 M = 75 Mm
REPRESENTACION GRAFICA

ABSORBANCIA vs CONCENTRACION
18 mM
1
ABSORBANCIA

0.8
0.6
CONCENTRACION ABSORBANCIA 0.4 5 mM
0.075 M 0.9 0.2
0.1M 1.2 0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
CONCENTRACION (M)

3. Una disolución con 5 mg/mL de una proteína coloreada tiene una absorbancia de
0.250. ¿Cuál es la concentración de una muestra de esa proteína cuya absorbancia
es 0.90?
SOLUCION:
a) Calcular la concentración para una nueva absorbancia:

Usando la ecuación de Lambert- Beer

A 1 = a. b. c1
0,250 = a . b . 5 mg/mL
0,250
= a .b
5 mg/mL
0,05 mg −1 · mL = a . b
La concentración para una muestra cuya absorbancia es 0.90
A 2 = a. b. c2
 0,90 = 0,05 mg −1 · mL × c2
mg
c2 = 18
mL
REPRESENTACION GRAFICA
ABSORBANCIA vs CONCENTRACION
18 mM
1
CONCENTRACION ABSORBANCIA 0.8

ABSORBANCIA
5 mg/mL 0.25 0.6
18 mg/mL 0.9 0.4 5 mM
0.2
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
CONCENTRACION (mg/mL)

4. Una muestra se diluye añadiendo 20 µL a 780 µL de agua. Su absorbancia es

entonces de 0.950. Una muestra patrón del mismo compuesto 3.0 mM da una
absorbancia de 0.475. ¿Cuál es la concentración de la muestra problema?
SOLUCION:
datos
• 𝑣1 = 20𝑢𝐿
• 𝑣2 = 800𝑢𝐿
• 𝐶3 = 3.0𝑚𝑀
• 𝐴2 = 0,950
• 𝐴3 = 0,475
• 𝐶1 =?
SOLUCION:
Primero calcularemos la concentración de la mezcla
c1 . v1 = c2 . v2
c1 . 20 μL = c2 . (20 μL + 780 μL)
c1 800 μL
= = 40
c2 20 μL
c1 = 40 × c2 … … . (1)

Usando la Ecuación de Lambert- Beer

A 2 = a . b . c2
0,950 = a . b . c2
0,950
= a. b
c2
Para la concentración 3:
A = a . b . c3
0,950
0,475 = . 3 mM
c2
0,950
c2 = . 3 mM
0,475
c2 = 6 mM
Reemplazando en (1):
c1 = 40 × c2
c1 = 40 × 6 mM
c1 = 240 mM

5. Se mide la velocidad de una reacción mediante la producción de un compuesto

coloreado, encontrando que aumenta la absorbancia a una tasa de 0.72 unidades por
minuto. Si una disolución 25 µM del compuesto puro da una absorbancia de 0.36,
¿cuál es la velocidad de la reacción en unidades de concentración?
DATOS:
𝑑𝐴
2
• 𝑑𝑡
𝑑 𝑐2 = 0,72
𝑑𝑡
• 𝑒1 = 25𝑢𝑀
• 𝐴1 = 0,36
• 𝑉 =?
SOLUCION:
𝐀 = 𝐚𝐛 × 𝐜
dA 𝐝𝐜
Entonces también: 𝐝𝐭
= 𝐚𝐛 × 𝐝𝐭
dA2 dA2
A1 dt A1 dt
Luego: = ab ∧ ab = dc2 → = dc2
c1 c1
dt dt
 𝐝𝐜
Por definición, vx = dt
es la velocidad de la reacción, entonces:
dA2
dc2 × c1 dc2 0.72 × 25 μM
= dt → = → 𝐯𝐱 = 𝟓𝟎 μ𝐌
dt A1 dt 0.36

6. Una reacción produce en 6 minutos un color de 0.90 unidades de absorbancia. Si

se sabe que una disolución con 10 mg/mL del producto da una absorbancia de 0.50,
¿Cuál es la velocidad de la reacción en unidades de concentración?
DATOS:
• 𝑑𝐴2 = 0,90
• 𝑑𝑡 = 6𝑚𝑖𝑛
𝑚𝑔
• 𝐶1 = 10 ⁄𝑚𝐿
• 𝐴1 = 0,50
• 𝑉 =?
SOLUCION:
𝐀 = 𝐚𝐛 × 𝐜

dA 𝐝𝐜
Entonces también: 𝐝𝐭
= 𝐚𝐛 × 𝐝𝐭

Luego:
dA2 dA2
A1 dt A1
= ab ∧ ab = → = dt
c1 dc2 c1 dc2
dt dt
𝐝𝐜
Por definición, vx = dt
es la velocidad de la reacción, entonces:
dA2 dA2 0.90 mg
A1 × c1 × 10 mL
= dt → vx = dt = 6 min
c1 vx A1 0.50
→ 𝐯𝐱 = 𝟑 𝐦𝐠 · 𝐦𝐋−𝟏 · 𝐦𝐢𝐧−𝟏

7. Se realiza una reacción para la cual se mezclan 100 µl de disolución 48 mM de

sustrato, 50 µl de muestra que contiene la enzima y 650 µl de tampón. Cuando
comienza la reacción, la absorbancia es de 1.20, y en los siguientes 12 minutos
disminuye hasta 0.90. Calcula la velocidad de la reacción (en unidades de
concentración).
SOLUCIÓN:
DATOS:
• v1 : 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙: 100 μL
• c1 : 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑖𝑛𝑐𝑖𝑎𝑙: 48 mM
• v2 : 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑒𝑧𝑐𝑙𝑎: 100 μL + 50 μL + 650 μL: 800 μL
• A: 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 ∶ 1.20
• A: 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑝𝑢𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 12 𝑚𝑖𝑛𝑢𝑡𝑜𝑠 ∶ 0.90
• V: velocidad de reaccion: ?

a) Primero calcularemos la concentración de la mezcla

c1 . v1 = c2 . v2
48 mM . 100 μL = c2 . (100 μL + 50 μL + 650 μL)
48 mM . 100 μL = c2 . 800 μL
6 mM = c2
b) Usamos la Ecuación de Lambert- Beer
A = a . b . c2
1.20 = a . b . 6 mM
0. 2 m−1 M −1 = a . b
c) En 12 minutos su absorbancia disminuye hasta 0.90
0.90 = 0. 2 m−1 M−1 . c
4.5 mM = c
d) Nos piden calcular la velocidad de reacción:
dC
V=
dt

La velocidad de reacción es la disminución de la concentración en un determinado tiempo,

entonces reemplazamos:
(6 mM − 4.5 mM)
V=
12min
1.5 mM
V=
12min
V = 0.125 mM /min
• Con los datos proporcionados y obtenidos se encontró la siguiente relación:

ABSORBANCIA(Y)
4.5 0.9
48 1.2
 Al realizar la gráfica, se observa que
ABSORBANCIA/CONCENTRACION
1.4 los valores de absorbancia con
1.2
respecto a las concentraciones
ABSORBANCIA

1
0.8 varia de forma lineal, es decir de
0.6 forma directamente proporcional.
0.4
0.2
0
0 10 20 30 40 50 60
CONCENTRACION nM

Mientras avance el tiempo, la absorbancia va disminuyendo teniendo como resultado la

velocidad de reacción.
1.4
ABSORBANCIA vs TIEMPO
TIEMPO(MIN) ABSORBANCIA 1.2
ABSORBANCIA

0 1.2 1
0.8
12 0.9
0.6
0.4
0.2
0
0 5 10 15
TIEMPO

8. Una muestra 0.2 M se diluye 40 veces, ofreciendo entonces una absorbancia de

0.81. Este compuesto se consume en una reacción a una tasa de 0.09 unidades de
absorbancia por segundo.
a) Calcula la velocidad de la reacción (en unidades de concentración).
SOLUCIÓN:
DATOS:

• c: concentracion de 0.2 M se diluye 40 veces: 5 Mm

• A: absorbancia inicial: 0.81
dA
• : tasa de 0.09 unidades de abbsorbancia por segundo
dt

SOLUCIÓN:
• La concentración de la reacción es:

0.2 M 200 mM
= = 5 Mm
40 40
 • Usando la ecuación de Lambert- Beer
A = a .b .c
0.81 = a . b . 5 mM
0.162 m−1 M −1 = ab

• La disminución de absorbancia se puede transformar en disminución de

concentración:
A = a .b .c
dA dC
= ab.
dt dt
dA
= ab. V
dt
dA/dt
=V
ab
• Reemplazando datos:
dA/dt
V=
ab
0.09 𝑠 −1
V=
0.162 𝑚−1 𝑀−1
𝑉 = 0.56 𝑚𝑀/𝑠

Se determinó que mientras se consume el compuesto la absorbancia se disminuye de 0.81

a 0.09.

b) Si esa reacción es el resultado de una catálisis enzimática, indica el valor de la

concentración de actividad enzimática presente, en unidades internacionales y en unidades
del S.I.
SOLUCIÓN:
En unidades internacionales:
• Para la actividad enzimática es 1U = 1μmol/min
mM 1000μm 60 s
V = 0.56 × ×
s 1mm 1min
μ. mol
V = 33600
L. min
U
V = 33600
L
En unidades del S.I.:
• Para la actividad enzimática es 1kat = mol/s
mM
V = 0.56
s
mol
V = 0.56 × 10−3 ×
L. s
Kat
V = 0.00056
L
9. Tienes una disolución 150 mM del compuesto DCPIP, cuya absorbancia es
demasiado alta para poderla medir con precisión. Por ello, la diluyes 5 veces,
consiguiendo una lectura de absorbancia de 1.5 a 600 nm. Calcula la concentración
de una muestra de DCPIP cuya A600 = 0.5
SOLUCIÓN:
DATOS
• c1 : 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑖𝑛𝑐𝑖𝑎𝑙: 150 mM
v1 1
• :
v2 5
• A3 : 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑎 𝑢𝑛 𝑎𝑙𝑜𝑛𝑔𝑖𝑡𝑢𝑑 𝑑𝑒 𝑜𝑛𝑎𝑑𝑎 𝑑𝑒 600𝑛𝑚: 0.5
• A2 : 𝑎𝑏𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑝𝑢𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛: 1.5

a) Calcularemos la concentración de la mezcla

c1 . v1 = c2 . v2
c1 . v1
c2 =
v2
150 mM . 1
c2 =
5
c2 = 30 mM

b) Usando la ecuación de Lambert- Beer:

A 2 = a . b . c2
A2
= a .b
c2
A 3 = a . b . c3
A3
= a .b
c3
Igualando:
A2 A3
=
c2 c3
A 3 . c2
c3 =
A2
0.5 × 30 mM
c3 =
1.5
c3 = 10 Mm

Con los siguientes resultados se obtuvo:

 ABSORBANCIA/CALIBRACION
2

ABSORBANCIA
CONCENTRACION, 1.5
mM(X) ABSORBANCIA(Y) 1
30 1.5
0.5
10 0.5
0
0 5 10 15 20 25 30 35
CONCENTRACION mM

El compuesto DCPIP, colorante azul, tiene una absorbancia alta por lo cual presenta una
concentración alta y se visualiza una recta ascendente en relación a la longitud de onda de
la luz incidente

10. Se sabe que una solución de un compuesto orgánico con una concentración de
0.008739 M presentó una absorbancia de 0.6346, medida a λ=500 nm y con una celda
de 0.5 cm de longitud. Calcule cuál es la absortividad molar del complejo a dicha
longitud de onda.
SOLUCIÓN:
Datos:
• A(λ) = 0.6346
• b = 0.5 cm
• c = 0.008739 M
• ε(λ) = ?
SOLUCIÓN:

Aplicando la ecuación de Lambert- Beer

A(λ) = ε(λ) . b . c

A(λ)
ε(λ) =
b .c
0.6346
ε(500 nm ) =
0.5 cm × 0.008739 M

ε(500 nm ) = 145.23 cm−1 M −1

11. El compuesto orgánico 3-ciano-5- metilpirrolina (C7H6N2, PM: 118,14) Presenta una
banda de absorción UV en 272 nm en solución de etanol. Una solución que contiene
0,274 mg de este compuesto en 10 ml de etanol dio una absorbancia de 0,700 en una
celda de 1,00 cm. Calcule: a) la absortividad, b) la absortividad molar del compuesto
R: a) a = 25,6 L/g cm b) ε = 3018,5 L/mol cm

SOLUCIÓN:
a) Calcular la absortividad:
Usando la ecuación de Lambert- Beer
A = a .b .c
0,274 mg
0,700 = a × 1,00 cm ×
10 ml
0,700 × 10 ml
=a
0,274 mg × 1 cm
L
25,55 =a
g. cm
b) Calcular la absortividad molar:

Aplicando la ecuación de Lambert- Beer

A(272 nm) = ε(272 nm) . b . c
0,274 mg
118,14 g/mol
0,700 = ε(272 nm) × 1,00 cm ×
10 ml
0,274 g × 1 mol
0,700 = ε(272 nm) × 1,00 cm ×
118,14 g × 10 L
0,274 mol
0,700 = ε(272 nm) × 1,00 cm ×
1181,4 L
0,700 × 1181,4 L
= ε(272 nm)
0,274 mol . cm
L
3018,18 = ε(272 nm)
mol . cm
ε(272 nm) = 3018,18 M −1 . cm−1
12. El % de transmitancia de una solución medida a cierta longitud de onda en una
celda de 1,00 cm es de 63,5%. Calcule el % de transmitancia de esta solución en
celdas de trayectoria óptica de A) 2,0 mm; b) 2 ,0 cm y c) 5,00 cm. R: a) 91,3 %T; b)
40,4 %T; c) 10,3 %T
SOLUCIÓN:
63.5
%T = 63.5% = = 0.635
100
Usando la fórmula de la absorbancia:
A = −log T
A = −log (0.635)
A = 0.1972
Aplicando la ecuación de Lambert- Beer
A = a .b .c
0.1972
= a. c
1 cm
a. c = 0.1972 cm−1
a)
A = a .b .c
−log T = a × c × 2.0 mm
0.1 𝑐𝑚
−log T = 0.1972 cm−1 × 2.0 mm ×
1 𝑚𝑚
−log T = 0.03944
T = 0.913
T% = 0.913 × 100% = 91.3 %
b)
A = a .b .c
−log T = a × c × 2.0 cm
−log T = 0.1972 cm−1 × 2.0 cm
−log T = 0.3944
T = 0.4032
T% = 0.4032 × 100% = 40.32 %
c)
A = a .b .c
−log T = a × c × 5.0 cm
−log T = 0.1972 cm−1 × 5 cm
−log T = 0.986
T = 0.1033
T% = 0.1033 × 100% = 10.33 %

ANALISIS: En este problema podemos ver que al aumentar el paso óptico la transmitancia
será menor. Esto se debe a la distancia que tendrá que atravesar la fracción de luz en la
solución.
 13. Se tiene las siguientes absorbancias medidas a diferentes concentraciones de un
complejo metálico a una longitud de onda de 460 nm, y con una celda de 1 cm de
longitud:
A: 0.03010 0.1033 0.1584 0.3961 0.8093
C: 1.8∙10-5 6∙10-5 9.2∙10-5 2.3∙10-4 5.6∙10-4
Calcule la absortividad molar del complejo.
SOLUCION:
Primero graficamos en Excel las Absorbancias y las concentraciones.

X(Concentraciones) Y(Absorbancia)
0,000018 0,03010

0,00006 0,1033

0,000092 0,1584

0,00023 0,3961

0,00056 0,8093

Como sabemos por la Ecuación de Lambert–Beer

𝐀(𝛌) = 𝛆(𝛌) . 𝐛 . 𝐜
𝐀(𝟒𝟔𝟎𝐧𝐦)
𝛆(𝟒𝟔𝟎𝐧𝐦) =
𝐛 .𝐜

Para calcular la Absortividad Molar que la que varía la longitud de onda de paso, para eso necesitamos
sabes la absorbancia, la concentración. En este caso si nos damos cuenta podemos calcular la
absorbancia entre la concentración mediante la pendiente de la recta que formaremos con los datos
dados por el problema.

Absorbancia/Concentración y = 1429.6x + 0.025

1 R² = 0.9937

0.8
La pendiente nos resultara
Absorbancia

0.6 𝒀( 𝑨)
0,149816= 𝑿(𝑪)
0.4 Ahora remplazamos en la
0.2
ecuación Lambert- Beer.
0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006
Concentración
 𝐀(𝛌)
𝛆(𝛌) =
𝐛 .𝐜

A
ε(460 nm ) =
A
1 cm × 0,149816

𝛆(𝟒𝟔𝟎 𝐧𝐦 ) = 𝟎, 𝟏𝟒𝟗𝟖𝟏𝟔 𝐜𝐦−𝟏 𝐌−𝟏

La absortividad Molar me quiere decir la cantidad de luz absorbida en una solución.

14. A partir de una solución patrón de 100 ppm (100 mg/L) de un compuesto orgánico
que presenta una banda de absorción máxima a 270 nm se preparó una curva de
calibración, se obtuvieron los siguientes datos:

Concentración(x) A(y)
1mg/L 0,1282
1.5 mg/L 0,1940
2 mg/L 0,2615
3 mg/L 0,3995
4 mg/L 0,5422

Si 2 ml de una solución desconocida de este compuesto son diluidos a 50 ml se obtiene

una absorbancia de 0,425. Calcule la concentración de la muestra en mg/l.
SOLUCION

y = 1429.6x + 0.025
Absorbancia/Concentración R² = 0.9937
0.9

0.8

0.7

0.6
Absorbancia

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006
Concentración
 PENDIENTE:0,13811724
𝐀(𝛌)
𝛆(𝛌) . 𝐛 = = 𝟎, 𝟏𝟑𝟖𝟏𝟏𝟕𝟐𝟒
𝐜

La línea de calibración nos indica la relación

Calculo de la cantidad Calculemos la concentración entre la concentración y la absorbancia que va
del compuesto de la muestra ser

Abs = 0,1381C - 0,0126 C1x V1= C2 x V2 Y(ABSORBANCIA) = 1429,6x(CONC) + 0,025

0,425 = 0,1382C – 0,0126 C1 x 2ml = 3,16 mg/L x 50ml Este va ser el mismo para la mezcla 2ml de un
C2= 3,16 mg/L C1= 79mg/L compuesto y luego llenarlo 50 ml con agua ya
que la anterior muestra de calibración es
nuestra solución patrón.

15. Un método para la determinación cuantitativa de Pb++ en la sangre proporciona

una Absorbancia de 0,712 en una muestra de 5,00 ml de sangre. Tras añadir a la
muestra de sangre 5,0µL de un patrón de Pb++ con 1,560 ppb se determina una
absorbancia de 1,546. Indique la concentración de Pb++ en la muestra de sangre
original.
SOLUCION
*𝐀 𝟏 = 𝐚 . 𝐛 . 𝐜𝟏
0,712 = 𝐴. 𝐵 . 𝑐1 …. (I)
∗ 𝐀 𝟐 = 𝐚 . 𝐛 . 𝐜𝟐
1,5646 = 𝐴. 𝐵 . 𝑐2 ….(II)

Calculando la relación entre C1 y C2

𝒂 𝒎𝒈
C1: Tenemos 5 ml de sangre C1 =𝟓𝒎 ( )
𝒍

C2: Nos dice que añadimos a la muestra de 5ml unos 5,0µL de un patrón de Pb++ con
1,560 ppb .
1L -> 1,560 mg
5 µL -> X
X = 7,8 µmg

𝒎𝒈
C2 = (𝒂 + 𝟕, 𝟖μ)(𝟓µ𝒍+𝟓𝒎𝒍)
Dividiremos la Ecuación I entre la ecuación II remplazando las concentraciones y nos resultara el
valor de “a”

𝐀𝟏 = 𝐚 . 𝐛 . 𝐜𝟏
𝐀𝟐 = 𝐚 . 𝐛 . 𝐜𝟐

𝐀𝟏 /𝐀𝟐 = 𝐜𝟏 /𝐜𝟐

0,712 𝑎/5𝑚(𝑚𝑔/𝑙)
=
1,5646 𝑎 𝑚𝑔 7,8 𝑚𝑔
( ) + ( )
5,005𝑚 𝑙 5,005𝑚 𝑙

a = 6,715 x𝟏𝟎−𝟑 𝒎 𝒎𝒈

Nos piden la concentración C1, procedemos a remplazar

𝟔,𝟕𝟏𝟓x10−3 𝑚 𝒎𝒈
C1 = 𝟓𝒎
( 𝒍 )

𝒎𝒈
C1= 1,343𝑥10−3 𝒍

𝒎𝒈
C2= 1,83𝑥10−3 𝒍

Absorbancia/Concentracion y = 0.8526x - 0.1406

R² = 1
1.8

1.6

1.4

1.2
Absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0.001343 0.00183
Concentración