UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y DE RECURSOS

NATURALES
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL Y DE RECURSOS NATURALES

PRACTICA DE LABORATORIO

ANALISIS INSTRUMENTAL Y MONITOREO

DOCENTE

ALIAGA MARTINEZ, MARIA P.

INTEGRANTES

MARZANO VASQUEZ LIZ MILAGROS 1719530026

NÚÑEZ MANDARACHI TABITA INÉS 1719510129
ÑOPO VALENCIA GABRIELA ISABEL 1719510147
PEREZ HURTADO MABEL NICOLE 1719510025
TORRES LOPEZ GISELLE GIULLIANA 1719520138

CALLAO, 2020
 CÁLCULOS CON ABSORBANCIA Y CONCENTRACIÓN

1. Una disolución 15 mM de un colorante azul tiene una absorbancia de 0.600. ¿Cuál es la

concentración de una muestra del mismo colorante cuya absorbancia es 0.400?
SOLUCIÓN:

a) Calcular la concentración para una nueva absorbancia:

Usando la ecuación de Lambert- Beer

A 1 = a. b. c1

0,600 = a . b .15 mM
0,6
= a .b
15mM
0,04 m−1 M−1 = a . b

La concentración para una muestra cuya absorbancia es 0.400

A 2 = a. b. c2

0,400 = 0,04 m−1 M −1 . c2

c2 = 10 mM

2. Un compuesto de color rojo disuelto a 0.10 M tiene una absorbancia de 1.20. ¿Cuál es
la concentración de una muestra del mismo compuesto cuya absorbancia es 0.90?

SOLUCION:

a) Calcular la concentración para una nueva absorbancia:

Usando la ecuación de Lambert- Beer

A 1 = a. b. c1

1,2 = a . b . 0,10M
 1,2
= a .b
0,10 M
12 M −1 = a . b

La concentración para una muestra cuya absorbancia es 0.9

A 2 = a. b. c2

0,9 = 12 M −1 . c2

c2 = 0,075 M = 75 mM

3. Una disolución con 5 mg/mL de una proteína coloreada tiene una absorbancia de 0.250.
¿Cuál es la concentración de una muestra de esa proteína cuya absorbancia es 0.90?
SOLUCION:

a) Calcular la concentración para una nueva absorbancia:

Usando la ecuación de Lambert- Beer

A 1 = a. b. c1

0,250 = a . b . 5 mg/mL
0,250
= a .b
5 mg/mL
0,05 mg −1 · mL = a . b

La concentración para una muestra cuya absorbancia es 0.90

A 2 = a. b. c2

0,90 = 0,05 mg −1 · mL × c2

mg
c2 = 18
mL
4. Una muestra se diluye añadiendo 20 µL a 780 µL de agua. Su absorbancia es entonces
de 0.950. Una muestra patrón del mismo compuesto 3.0 mM da una absorbancia de 0.475.
¿Cuál es la concentración de la muestra problema?
SOLUCION:
Primero calcularemos la concentración de la mezcla
c1 . v1 = c2 . v2

c1 . 20 μL = c2 . (20 μL + 780 μL)

c1 800 μL
= = 40
c2 20 μL

c1 = 40 × c2 … … . (1)

Usando la Ecuación de Lambert- Beer

A 2 = a . b . c2

0,950 = a . b . c2

0,950
= a. b
c2

Para la concentración 3:

A = a . b . c3

0,950
0,475 = . 3 mM
c2

0,950
c2 = . 3 mM
0,475
c2 = 6 mM
Reemplazando en (1):
c1 = 40 × c2
c1 = 40 × 6 mM
c1 = 240 mM
5. Se mide la velocidad de una reacción mediante la producción de un compuesto
coloreado, encontrando que aumenta la absorbancia a una tasa de 0.72 unidades por
minuto. Si una disolución 25 µM del compuesto puro da una absorbancia de 0.36, ¿cuál es
la velocidad de la reacción en unidades de concentración?
SOLUCION:
𝐀 = 𝐚𝐛 × 𝐜

dA 𝐝𝐜
Entonces también: 𝐝𝐭
= 𝐚𝐛 × 𝐝𝐭

Luego:
dA2 dA2
A1 dt A1
= ab ∧ ab = → = dt
c1 dc2 c1 dc2
dt dt
𝐝𝐜
Por definición, vx = dt
es la velocidad de la reacción, entonces:
dA2
dc2 × c1 dc2 0.72 × 25 μM
= dt → = → 𝐯𝐱 = 𝟓𝟎 μ𝐌
dt A1 dt 0.36

6. Una reacción produce en 6 minutos un color de 0.90 unidades de absorbancia. Si se

sabe que una disolución con 10 mg/mL del producto da una absorbancia de 0.50, ¿Cuál es
la velocidad de la reacción en unidades de concentración?
SOLUCION:
𝐀 = 𝐚𝐛 × 𝐜

dA 𝐝𝐜
Entonces también: 𝐝𝐭
= 𝐚𝐛 × 𝐝𝐭

Luego:
dA2 dA2
A1 dt A1
= ab ∧ ab = → = dt
c1 dc2 c1 dc2
dt dt
𝐝𝐜
Por definición, vx = es la velocidad de la reacción, entonces:
dt
dA2 dA2 0.90 mg
A1 × c1 × 10 mL
= dt → vx = dt = 6 min
c1 vx A1 0.50
→ 𝐯𝐱 = 𝟑 𝐦𝐠 · 𝐦𝐋−𝟏 · 𝐦𝐢𝐧−𝟏
7. Se realiza una reacción para la cual se mezclan 100 µl de disolución 48 mM de sustrato,
50 µl de muestra que contiene la enzima y 650 µl de tampón. Cuando comienza la reacción,
la absorbancia es de 1.20, y en los siguientes 12 minutos disminuye hasta 0.90. Calcula la
velocidad de la reacción (en unidades de concentración).
SOLUCIÓN:
Primero calcularemos la concentración de la mezcla
c1 . v1 = c2 . v2

48 mM . 100 μL = c2 . (100 μL + 50 μL + 650 μL)

48 mM . 100 μL = c2 . 800 μL

6 mM = c2

Ecuación de Lambert- Beer

A = a . b . c2

1.20 = a . b . 6 mM

0. 2 m−1 M −1 = a . b
En 12 minutos su absorbancia disminuye hasta 0.90
0.90 = 0. 2 m−1 M −1 . C

4.5 mM = C

Nos piden calcular la velocidad de reacción:

dC
V=
dt

La velocidad de reacción es la disminución de la concentración en un determinado tiempo,

entonces reemplazamos:
(6 mM − 4.5 mM)
V=
12min

1.5 mM
V=
12min

V = 0.125 mM /min
8. Una muestra 0.2 M se diluye 40 veces, ofreciendo entonces una absorbancia de 0.81.
Este compuesto se consume en una reacción a una tasa de 0.09 unidades de absorbancia
por segundo.

a) Calcula la velocidad de la reacción (en unidades de concentración).

SOLUCIÓN:

La concentración de la reacción es:

0.2 M 200 mM
= = 5 mM
40 40

Usando la ecuación de Lambert- Beer

A = a .b .c

0.81 = a . b . 5 mM

0.162 m−1 M −1 = ab

La disminución de absorbancia se puede transformar en disminución de concentración:

A = a .b .c

dA dC
= ab.
dt dt

dA
= ab. V
dt

dA/dt
=V
ab

Reemplazando datos:

dA/dt
V=
ab
 0.09 𝑠 −1
V=
0.162 𝑚−1 𝑀−1

𝑉 = 0.56 𝑚𝑀/𝑠

b) Si esa reacción es el resultado de una catálisis enzimática, indica el valor de la

concentración de actividad enzimática presente, en unidades internacionales y en unidades
del S.I.

SOLUCIÓN:

En unidades internacionales:

Para la actividad enzimática es 1U = 1μmol/min

mM 1000μm 60 s
V = 0.56 × ×
s 1mm 1min

μ. mol
V = 33600
L. min

U
V = 33600
L

En unidades del S.I.:

Para la actividad enzimática es 1kat = mol/s

mM
V = 0.56
s

mol
V = 0.56 × 10−3 ×
L. s

Kat
V = 0.00056
L

9. Tienes una disolución 150 mM del compuesto DCPIP, cuya absorbancia es demasiado
alta para poderla medir con precisión. Por ello, la diluyes 5 veces, consiguiendo una lectura
de absorbancia de 1.5 a 600 nm. Calcula la concentración de una muestra de DCPIP cuya
A600 = 0.5
SOLUCIÓN:
Calcularemos la concentración de la mezcla
c1 . v1 = c2 . v2

c1 . v1
c2 =
v2

150 mM . 1
c2 =
5

c2 = 30 mM

Usando la ecuación de Lambert- Beer:

A 2 = a . b . c2

A2
= a .b
c2

A 3 = a . b . c3

A3
= a .b
c3

Igualando:

A2 A3
=
c2 c3

A 3 . c2
c3 =
A2

0.5 × 30 mM
c3 =
1.5

c3 = 10 mM
10. Se sabe que una solución de un compuesto orgánico con una concentración de
0.008739 M presentó una absorbancia de 0.6346, medida a λ=500 nm y con una celda de
0.5 cm de longitud. Calcule cuál es la absortividad molar del complejo a dicha longitud de
onda.
SOLUCIÓN:
Aplicando la ecuación de Lambert- Beer

A(λ) = ε(λ) . b . c

A(λ)
ε(λ) =
b .c

0.6346
ε(500 nm ) =
0.5 cm × 0.008739 M

ε(500 nm ) = 145.23 cm−1 M −1

11. Se tiene las siguientes absorbancias medidas a diferentes concentraciones de un

complejo metálico a una longitud de onda de 460 nm, y con una celda de 1 cm de longitud:
A: 0.03010 0.1033 0.1584 0.3961 0.8093
C: 1.8∙10-5 6∙10-5 9.2∙10-5 2.3∙10-4 5.6∙10-4
Calcule la absortividad molar del complejo.
 SOLUCION:
Primero graficamos en Excel las Absorbancias y
Como sabemos por la Ecuación de Lambert–Beer
las concentraciones.
𝐀(𝛌) = 𝛆(𝛌) . 𝐛 . 𝐜
𝐀(𝛌)
X(Concentraciones) Y(Absorbancia) 𝛆(𝛌) =
0,03010 𝐛 .𝐜
0,000018
0,00006 0,1033
Para calcular la Absortividad Molar necesitamos
0,000092 0,584
sabes la absorbancia la concentración y la longitud de
0,00023 0,3961
la celda. En este caso si nos damos cuenta podemos
0,00056 0,8093
calcular la absorbancia entre la concentración
mediante la pendiente de la recta que formaremos con
los datos dados por el problema.

ABSORBANCIA/CONCENTRACION y = 0.2x - 0.3

R² = 0.5
1

0.8 PENDIENTE
0,00069504
0.6
ABSORBANCIA

0.4

0.2
La pendiente nos
0
0.000018 0.00006 0.000092 0.00023 0.00056 𝒀( 𝑨)
resultara 7x10-4 = 𝑿(𝑪)
-0.2

-0.4
Ahora remplazamos en
CONCENTRACION
la ecuación Lambert-
Beer.

𝐀(𝛌)
𝛆(𝛌) =
𝐛 .𝐜

A
ε(460 nm ) =
A
1 cm ×
7𝑥10−4

ε(460 nm ) = 7𝑥10−4 cm−1 M−1

12. El % de transmitancia de una solución medida a cierta longitud de onda en una celda
de 1,00 cm es de 63,5%. Calcule el % de transmitancia de esta solución en celdas de
trayectoria óptica de A) 2,0 mm; b) 2 ,0 cm y c) 5,00 cm. R: a) 91,3 %T; b) 40,4 %T; c) 10,3
%T
SOLUCIÓN:
63.5
%T = 63.5% = = 0.635
100
Usando la fórmula de la absorbancia:
A = −log T
A = −log (0.635)
A = 0.1972
Aplicando la ecuación de Lambert- Beer

A = a .b .c

0.1972
= a. c
1 cm

a. c = 0.1972 cm−1

a)
A = a .b .c

−log T = a × c × 2.0 mm

0.1 𝑐𝑚
−log T = 0.1972 cm−1 × 2.0 mm ×
1 𝑚𝑚

−log T = 0.03944

T = 0.913
T% = 0.913 × 100% = 91.3 %
b)

A = a .b .c

−log T = a × c × 2.0 cm

−log T = 0.1972 cm−1 × 2.0 cm

−log T = 0.3944

T = 0.4032
T% = 0.4032 × 100% = 40.32 %
c)

A = a .b .c

−log T = a × c × 5.0 cm

−log T = 0.1972 cm−1 × 5 cm

−log T = 0.986

T = 0.1033
T% = 0.1033 × 100% = 10.33 %

13. El compuesto orgánico 3-ciano-5- metilpirrolina (C7H6N2, PM: 118,14) Presenta una
banda de absorción UV en 272 nm en solución de etanol. Una solución que contiene 0,274
mg de este compuesto en 10 ml de etanol dio una absorbancia de 0,700 en una celda de
1,00 cm. Calcule: a) la absortividad, b) la absortividad molar del compuesto
R: a) a = 25,6 L/g cm b) ε = 3018,5 L/mol cm
SOLUCIÓN:

a) Calcular la absortividad:

Usando la ecuación de Lambert- Beer

A = a .b .c

0,274 mg
0,700 = a × 1,00 cm ×
10 ml

0,700 × 10 ml
=a
0,274 mg × 1 cm

L
25,55 =a
g. cm

b) Calcular la absortividad molar:

Aplicando la ecuación de Lambert- Beer

A(272 nm) = ε(272 nm) . b . c

0,274 mg
118,14 g/mol
0,700 = ε(272 nm) × 1,00 cm ×
10 ml

0,274 g × 1 mol
0,700 = ε(272 nm) × 1,00 cm ×
118,14 g × 10 L

0,274 mol
0,700 = ε(272 nm) × 1,00 cm ×
1181,4 L

0,700 × 1181,4 L
= ε(272 nm)
0,274 mol . cm

L
3018,18 = ε(272 nm)
mol . cm

ε(272 nm) = 3018,18 M −1 . cm−1

14. A partir de una solución patrón de 100 ppm (100 mg/L) de un compuesto orgánico que
presenta una banda de absorción máxima a 270 nm se preparó una curva de calibración,
se obtuvieron los siguientes datos:

Concentración(x) A(y)
1mg/L 0,1282
1.5 mg/L 0,1940
2 mg/L 0,2615
3 mg/L 0,3995
4 mg/L 0,5422

Si 2 ml de una solución desconocida de este compuesto son diluidos a 50 ml se obtiene

una absorbancia de 0,425. Calcule la concentración de la muestra en mg/l.
y = 0.1381x - 0.0126
Absorancia/Concentración R² = 0.9998

0.6

0.5

0.4
ABSORANCIA

0.3

0.2

0.1

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
CONCENTRACION

PENDIENTE:
0,13811724

𝐀(𝛌)
𝛆(𝛌) . 𝐛 = = 𝟎, 𝟏𝟑𝟖𝟏𝟏𝟕𝟐𝟒
𝐜

Calculo del factor de Calculo de la cantidad Calculo de la concentración de la

del compuesto muestra
dilución
f = Aforos/ Alicotas Abs = 0,1381C - 0,0126 3,16 mg compuesto/Ml *25 = 79 mg/L
50 0,425 = 0,1382C – 0,0126
f= 2
=25
c= 3,16 mg/L
15. Un método para la determinación cuantitativa de Pb++ en la sangre proporciona una
Absorbancia de 0,712 en una muestra de 5,00 ml de sangre. Tras añadir a la muestra de
sangre 5,0µL de un patrón de Pb++ con 1,560 ppb se determina una absorbancia de 1,546.
Indique la concentración de Pb++ en la muestra de sangre original.

*𝐀𝟏 = 𝐚 . 𝐛 . 𝐜𝟏

0,712 = 𝐴. 𝐵 . 𝑐1 …. (I)

∗ 𝐀𝟐 = 𝐚 . 𝐛 . 𝐜𝟐

1,5646 = 𝐴. 𝐵 . 𝑐2 ….(II)

Calculando la relación entre C1 y C2

𝒂 𝒎𝒈
C1: Tenemos 5 ml de sangre C1 =𝟓𝒎 ( 𝒍
)

C2: Nos dice que añadimos a la muestra de 5ml unos 5,0µL de un patrón de Pb++ con 1,560
ppb .
1L -> 1,560 mg
5 µL -> X
X = 7,8 µmg

𝒎𝒈
C2 = (𝒂 + 𝟕, 𝟖μ)( )
𝟓µ𝒍+𝟓𝒎𝒍

Dividiremos la Ecuación I entre la ecuación II remplazando las concentraciones y nos resultara el

valor de “a”

𝐀𝟏 = 𝐚 . 𝐛 . 𝐜𝟏
𝐀𝟐 = 𝐚 . 𝐛 . 𝐜𝟐

𝐀𝟏 /𝐀𝟐 = 𝐜𝟏 /𝐜𝟐
 0,712 𝑎/5𝑚(𝑚𝑔/𝑙)
=
1,5646 𝑎 𝑚𝑔 7,8 𝑚𝑔
( ) + ( )
5,005𝑚 𝑙 5,005𝑚 𝑙

a = 6,715 x𝟏𝟎−𝟑 𝒎 𝒎𝒈

Nos piden la concentración C1, procedemos a remplazar

𝟔,𝟕𝟏𝟓x10−3 𝑚 𝒎𝒈
C1 = 𝟓𝒎
( 𝒍 )

𝒎𝒈
C1= 1,343𝑥10−3 𝒍