UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DEL

CENTRO

Reporte de Investigación

Nombre del Alumno-matrícula

Gissell Alejandra Gonzá lez Cruz-004109

Nombre del Profesor

Sandra de Jesús Hernández Natarén

Asignatura
Análisis de Bioprocesos

Cuatrimestre: 3
Grupo: 1
Fecha de entrega 9 de julio 2020

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 Índice
1. INTRODUCCIÓN 3
2. RESUMEN 4
3. ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN ATÓMICA 5
3.1 Fundamento Teórico 5
3.2 Técnicas 5-6
3.3 Características Instrumentales 7
3.4 Usos y Aplicaciones 7
4. ESPECTROFOTÓMETRO ULTRAVIOLETA 8
4.1 Fundamento Teórico 8
4.2 Técnicas 8
4.3 Características Instrumentales 8
4.4 Usos y Aplicaciones 9
5. ESPECTROFOTÓMETRO INFRARROJO 9
5.1 Fundamento Teórico 9
5.2 Técnicas 9-10
5.3 Características Instrumentales 10
5.4 Usos y Aplicaciones 11
6. ESPECTROFOTÓMETRO ABSORCIÓN MOLECULAR 11
6.1 Fundamento Teórico 11
6.2 Técnicas 11
6.3 Características Instrumentales 12
6.4 Usos y Aplicaciones 12
7. ESPECTROFOTÓMETRO DE EMISIÓN 13
7.1 Fundamento Teórico 13
7.2 Técnicas 13
7.3 Características Instrumentales 13
7.4 Usos y Aplicaciones 13
8. CONCLUSIÓN 14
9. BIBLIOGRAFÍA 15

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 1. Introducción
El espectrofotómetro es un instrumento que permite proyectar un haz de luz a través de
una muestra y medir la absorbancia que es la cantidad de luz absorbida por la muestra o
la transmitancia que es cantidad de luz que pasa a través de la muestra, es decir, a
cantidad de luz absorbida o transmitida a una determinada longitud de onda es
proporcional a la concentración del material.

Las principales aplicaciones de los espectrómetros son determinación de la cantidad en

una solución de un compuesto en identificación de unidades estructurales específicas,
detección de niveles de contaminación en aire y agua, determinación de impurezas en
alimentos y reactivos, determinación de constantes de disociación de indicadores
ácidobase, y estandarización de colores de diversos materiales. (Roberto García 2018)

Los espectrofotómetros nos permiten medir el espectro de absorción completo de una

sustancia. El espectro de una muestra es una representación gráfica de la cantidad de luz
que se absorben en función de la longitud de onda.

los espectrofotómetros han sido un instrumento corriente en laboratorios químicos y

médicos en la actualidad, su cotidianidad en una gran variedad de campos ha conducido a
un desconocimiento de las implicancias y del alcance de esta tecnología. Es por ello que es
necesario reivindicar al espectrofotómetro, y a los que han aportado a su causa, como
generadores del gran avance de la química en los últimos 70 años (Velázquez 2016).

Los recientes desarrollos tecnológicos en el área de la informática, junto con el

perfeccionamiento de los fotodetectores y las lámparas, han permitido producir
espectrofotómetros cada vez más rápidos, precisos y con una reproducibilidad
inimaginables. Es por ello que los aportes realizados hasta ahora por este instrumento tal
vez sólo sean el inicio de muchas otras contribuciones a la química.

En este documento hacemos una recopilación de los espectrofotómetros que se utilizan

en el área de Analís de bioproductos y que se utilizan en la industria para analizar y
realizar alimentos y encontrar sus componentes.

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 2. Resumen
La aparición del espectrofotómetro creado por Arnold Beckman en 1941 revolucionó
el mundo de la biociencia. La cotidianidad actual de este instrumento ha conducido al
desconocimiento de los alcances de su tecnología. En esta investigación se reivindica al
los tipos de espectrofotómetros y las características de cada unos de ellos, la función
que tiene y el tipo de análisis que estos realizan en el campo de laboratorio.
En esta investigación trazamos la importancia de la aplicación de este instrumento
científico desde sus características más básicas hasta las perspectivas de sus usos y
aplicaciones. En este recorrido por los fundamentos del uso de estos equipos, se
incluyen además las nociones básicas de su funcionamiento, su aplicación en diversas
áreas y sus aportes más significativos.

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 3. Espectrofotómetro Absorción Atómica
3.1 Fundamento Teórico
El espectrómetro se basa en analizar la cantidad de radiación absorbida por átomos en
estado libre, para su funcionamiento se necesita que la longitud de onda del haz de luz
incidente coincida con la frecuencia de resonancia del elemento que se está analizando y
que los átomos del analito estén en estado libre. Este método es sensible y específico para
la determinación cuantitativa de más de 60 metales y metaloides

En esencia el equipo de absorción atómica consta de tres partes como muestra la (Fig. 1)
es una fuente de radiación, un medio para la obtención de átomos libres y un sistema para
medir el grado de absorción de la radiación (carabeo -Pérez 2017).

en este apartado consideramos el uso de dos equipos de Espectrofotometría de Absorción

Atómica: Espectrofotometría de Absorción Atómica de Llama Y Espectrofotometría de
Absorción Atómica de Horno de Grafito. (castellanos Cuellar 2018).

Figura 1. Esquema del espectrómetro de absorción

3.2 Técnica
Para realizar las medidas con esta técnica el analito debe ser transformado en átomos
gaseosos aplicando calor. Estos átomos en forma gaseosa absorben la radiación
electromagnética a una longitud de onda que es específica para cada elemento,
produciendo una señal medible esta técnica se fundamenta en tres conceptos:

1. Todos los átomos pueden absorber energía.

2. La longitud de onda (λ) a la cual energía se absorbe es específica para cada

elemento.

3. La cantidad de energía absorbida en esta λ específica es proporcional a la

concentración del elemento en la muestra sobre un intervalo limitado de la
concentración, de acuerdo a la ley de Lambert- Beer.

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Cuando se trabaja en Absorción Atómica de Llama, para obtener átomos libres que
puedan ser excitados por la fuente de radiación, el analito pasa por una serie de etapas,
que se muestran en la Tabla 1:
Tabla 1. Etapas en Absorción Atómica de Llamas.

Etapas Estado de Observaciones

muestra
Nebulización Disolució Muestra inicial, en disolución.
n
Aerosol La muestra es aspirada como fino aerosol hasta la llama.
Desolvatació Solido En la llama se elimina el disolvente y quedan partículas
n sólidas
Licuefacción Liquido Al aplicar más calor se produce la licuefacción de las
partículas de muestra
Vaporización Gas El calor adicional vaporiza la muestra. El elemento de interés
sigue formando moléculas
Aplicando más energía calorífica se produce la disociación en
Atomización Gas átomos individuales (átomos en estado fundamental). En
esta etapa se determina la cantidad de radiación absorbida.
Excitación Gas Átomos en estado excitado tras la absorción de energía

En el análisis en Horno de Grafito, la muestra dispensada en el interior del tubo de grafito,

es sometida a un programa de incremento de temperatura, hasta conseguir la
atomización de la muestra. Normalmente el ciclo de temperaturas se realiza en cinco
etapas Tabla 2:

Tabla 2. Etapas en el programa de temperaturas en Absorción Atómica de Horno de Grafito.

Etapas Observaciones
Secado Muestra dispensada en tubo de grafito se seca a baja temperatura (100-120 °C)
para evitar salpicaduras.
Pirolisis En esta etapa se volatilizan los componentes orgánicos e inorgánicos de la
muestra, dejando el elemento de interés en una matriz menos compleja. La
temperatura no debe superar el valor en la cual se producen perdidas del
analito.
Atomización El propósito de esta etapa es producir vapor atómico del analito y permitir la
absorción de energía. La temperatura de esta etapa está en función del
elemento que se esté analizando.
Limpieza En esta etapa el tubo de grafito se calienta a temperaturas muy elevadas para
eliminar residuos de muestra.

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 Enfriamiento En esta etapa se deja el tubo de grafito a temperatura ambiente y preparado
para la siguiente muestra.
3.3 Características de los instrumentos
Los instrumentos para trabajar en Absorción Atómica requieren tres componentes: Fuente
de energía (radiación), celda para la muestra y equipo de medida de la energía.

Los componentes básicos de un espectrómetro de Absorción Atómica de Llama y de

Horno de Grafito son: fuente de energía radiante que emita en la longitud de onda del
elemento de interés, sistema de atomización que suministre la energía calorífica necesaria
para la disociación del analito y la formación de átomos libres, monocromador para aislar
las radiaciones a la longitud de onda medida, y detector acoplado con un sistema de
registro de los datos obtenidos (Diez Silva 2018).

La diferencia entre estos dos instrumentos de análisis se encuentra en la fase de

atomización de la muestra. En el caso de Absorción atómica de la Llama (Fig. 2a) este
proceso se realiza en una llama, que utiliza como combustible la mezcla de los gases óxido
de nitrógeno/acetileno o de aire/acetileno en función de la temperatura necesaria. En la
técnica de Absorción Atómica en Horno de Grafito la atomización se produce en un horno
que consiste en un tubo de grafito y el calentamiento se produce por una corriente
eléctrica (Fig. 2b)

a) b)

Figura 2. Esquema simplificado del funcionamiento de un sistema de a) Absorción

Atómica de Llama y b) Absorción Atómica en Horno de Grafito.

3.4 Usos y Aplicaciones

La espectrometría de absorción atómica como método instrumental permite realizar una
cuantificación de metales de una muestra líquida por comparación de la absorbancia de la
solución muestra con la absorbancia de soluciones estándar de concentración conocida.
Es una técnica bastante empleada por su alta especificidad, su sensibilidad y su facilidad
en la operación.

Sus aplicaciones son muy diversas y son importantes en distintos campos y constituye
(junto con otras técnicas como la Espectroscopia de Emisión de Plasma Inductivo ICPE o la
espectroscopia de plasma inductivo acoplado a espectrometría de masas ICP-MS) una de
las técnicas recomendadas para la medición de contaminantes en distintos tipos de
matrices (L. Ebdon, 2016).

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 4. Espectrofotómetro Ultravioleta
4.1 Fundamento Teórico
Es un instrumento que mide la absorbancia de una solución (Fig. 3). Por lo tanto, para
medir la concentración de un analito por este método es necesario que el analito o un
producto de reacción del analito tenga la propiedad de
absorber radiación electromagnética (luz) en la región del UV-
visible.

El fundamento de esta técnica es que se basa en la capacidad

de las moléculas en solución de absorber la radiación
incidente, ya sea en forma total o parcial. El instrumento
realiza una transición de los electrones más externos de los
átomos de las moléculas, desde niveles fundamentales a
niveles altos de energía (Villegas y G.O. et al 2019).
Figura 3. Espectrofotómetro UV-Visible.
4.2 Técnica
El principio básico de la técnica de UV-VIS es la absorción de radiación de una frecuencia
determinada en el rango de longitudes de onda de UV-VIS, realizada por una molécula
para producir una transición de un nivel de baja energía a un nivel de mayor energía
(González Curbelo 2018).

La radiación absorbida por las moléculas provoca transiciones electrónicas que pueden ser
cuantificadas, este identifica algunos grupos funcionales orgánicos altamente conjugados,
determina el contenido y fuerza de una sustancia esta se rige por la ecuación de Lambert-
Beer (Francisco Manzano, Garrido y Jiménez et al 2018).

4.3 Características de los instrumentos

los espectrofotómetros Ultravioletas constan, según se indica en la (Fig. 4), de:

1. Una fuente de energía radiante: lámpara

de deuterio y tungsteno.
2. Un monocromador para la selección de
radiaciones.
3. Un compartimento donde se aloja un
recipiente transparente.
4. Un detector de luz y un amplificador
convertidor de las señales luminosas en
señales eléctricas.

8
5. Un registrador o sistema de lectura de datos.

Figura 4. Esquema simplificado del

4.4 Usos y Aplicaciones Funcionamiento del espectrofotómetro.

Los espectrofotómetros UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinación cuantitativa

de soluciones de iones metálicos de transición y compuestos orgánicos muy conjugados
para la determinación de compuestos saturados por ejemplo las sales y metales de
transición, también para compuestos poliinsaturados, para poder identificar el grupo
cromóforo presente en un analito (Murray 2015).

Determinación de constantes de equilibrio de acidez de un indicador acido base,

Caracterización de la estequiometría de un complejo metal-ligando y titulaciones
espectrofotométricas.

5. Espectrofotómetro Infrarrojo
5.1 Fundamento Teórico
Equipo que permite la identificación de grupos funcionales de materiales orgánicos,
pinturas y determinadas estructuras de muestras sólidas y líquidas por transmisión
espectroscópica de infrarrojo por transformada de Fourier
(FTIR), en el rango espectral comprendido entre 400 y 4 000
cm-1.

Los espectrofotómetros infrarrojos son una de las

herramientas más importantes para observar espectros
vibracionales en la (fig. 5), se muestra un esquema del
sistema óptico de un espectrofotómetro FTIR es este la
radiación infrarroja, proveniente de la fuente, se divide en
el divisor y una parte se dirige al espejo móvil y otra al
espejo fijo. Después, estos dos rayos se recombinan, y
dependiendo pueden ser de dos maneras: constructiva o
destructivamente. Figura 5. Espectrofotómetro UV-Visible.

5.2 Técnicas
Dependiendo de la forma física de la muestra, se han diseñado dispositivos para que la
interacción de la radiación infrarroja con la muestra se lleve a cabo en forma óptima.
Básicamente son tres las técnicas de interacción más ampliamente utilizadas:
 Reflexión total atenuada
 Reflexión difusa
 Transmisión.

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  La técnica de reflexión total atenuada: también conocida como ATR, por sus siglas
en inglés (Attenuated Total Reflexión), el
principio de funcionamiento de la técnica
de ATR es la penetración (interacción) del
haz de infrarrojo en forma atenuada en la
muestra (Fig 6), es decir en otras palabras,
el haz lo hace penetrando una distancia
leve en la muestra
 La técnica de reflexión difusa: También Figura
conocida como
6. Esquema DRIFT, Atenuada.
de Reflexión es
preferencialmente utilizada para muestras
en forma de polvo, la cual a menudo se
mezcla en forma homogénea en un polvo
fino de bromuro de potasio (KBr),
compuesto que no ocasiona ningún tipo de
señal espectral en el intervalo de radiación
infrarroja en el infrarrojo medio (Fig 7).
 La técnica de transmisión: Es el método de
interacción más antiguo, y ha sido utilizado Figura 7. Esquema de Reflexión Difusa.
para todo tipo de muestras sin importar su
estado físico (Fig 8). En esta técnica la
muestra se coloca de manera que el haz de
infrarrojo la traspase totalmente
(Mondragón Cortez 2017).

Figura 8. Esquema Técnica de transmisión.

5.3 Características de los instrumentos

Un espectrómetro por transformada de Fourier consta de tres elementos básicos: una
fuente luminosa, un interferómetro de Michelson y un detector (Fig, 8), este nos permite
la obtención de espectros infrarrojos de forma rápida y precisa de muestras tanto solidas
como liquidas y en forma de gas, con relaciones señal y ruido elevadas .

Figura 9. Diagrama óptico detallado del

espectrómetro
5.4 Usos y Aplicaciones

10
La espectroscopia infrarroja tiene dos grandes aplicaciones: Identificar moléculas en una
muestra y determinar la composición de los compuestos moleculares en una muestra.

 análisis cualitativo: Interpretación y caracterización de sustancias, a través de la

Interpretación espectral. Esta observación la podemos hacer mediante una
comparación visual (utilizando referencias conocidas) o utilizando Tablas o cartas
de asignación de bandas o pico.

 análisis cuantitativo: Este análisis se basa en la ley de Beer-Lambert, mediante la

cual se elabora una curva de calibración (a determinada frecuencia), y a partir de
ahí se puede conocer la concentración de un compuesto específico en una muestra
(Mondragón Cortez 2017).

6. Espectrofotómetro Absorción Molecular

6.1 Fundamento Teórico

Corresponde a los métodos ópticos ultravioleta
visible, infrarrojos y resonancia magnética nuclear,
considera las estructuras de las moléculas que debe
comenzar con estudiar los enlaces químicos que
mantiene unida a los átomos en una molécula (Fig.
10)

Es un has incidente que tiene una longitud de onda

adecuada que golpea a la molécula, se lleva a cabo la
absorción de un fotón y la molécula se excita
(Mondragón Cortez 2017). Figura 10. Espectrofotómetro Absorción Molecular.

6.2 Técnicas
En este procedimiento es necesario preparar una serie de soluciones de concentración
conocida del analito que queremos cuantificar, hacer la reacción previa para generar el
compuesto absorbente y luego medir la absorbancia de estas soluciones coloreadas en el
espectrofotómetro. Tendremos entonces una tabla de datos correspondientes a pares
ordenados conocidos, los que podremos representar en un gráfico de ejes cartesianos.

11
6.3 Caracteristicas del Instrumento
se componen de cinco elementos fundamentales, que son comunes a todos los equipos
de espectroscopia y se muestran en la Tabla 3.

Tabla 1. Componentes de espectrofotómetro de absorción Molecular.

Componente Observaciones
Fuentes continuas: emiten radiaciones de todas las longitudes de
onda.
Fuente de radiación Fuentes discontinuas: emiten radiaciones en pocas longitudes de
onda.
Monocromadores: varían la radiación de forma continua en un
intervalo de longitudes de onda.
Selector de longitud Filtros de absorción: absorben solo en las longitudes de onda
de onda correspondientes al espectro visible.
Filtros de interferencia: provocan interferencias ópticas para
conseguir una banda de radiación estrecha.
Filtros de absorción La muestra es depositada en recipientes que permiten el paso de la
radiación sin interferir
Recipiente Transforma la radiación recogida del análisis en señal eléctrica, que es
proporcional a la intensidad de la radiación emergente.
Detector Registra la señal y la transforma para poder hacer el análisis.

6.4 Usos y Aplicaciones

La aplicación de este tipo de análisis tiene un gran campo en el área de producción de
alimentos en donde es más usado para el seguimiento de:
 Seguimiento de la maduración de un fruto a través de la medida del contenido de
pigmentos: Cuantificación de clorofilas, carotenoides y antocianinas.

 Seguimiento de la senescencia foliar que acompaña a la etapa de llenado de los

granos a través de la medida de pigmentos y proteínas en las hojas

 Análisis de la calidad de granos para diversos usos: determinación del contenido de

hidratos de carbono y de proteínas.

 Determinación de compuestos nitrogenados y cloro libre en agua potable y en

aguas residuales.

12
 7. Espectrofotómetro de Emisión
7.1 Fundamento Teórico
 Equipo que realiza un análisis químico que utiliza la intensidad de la luz emitida por
una llama, un plasma, un arco o chispa eléctricos en una longitud de onda particular para
determinar la cantidad de un elemento en una muestra. La longitud de onda es
característica de la línea espectral atómica y determina la identidad del elemento,
mientras que la intensidad de la luz emitida es proporcional a la cantidad de átomos del
elemento. (Mondragón Cortez 2017).

7.2 Técnicas
Es un método analítico basado en la medida de la luz emitida por átomos o iones de un
elemento que se encuentran en estado de vapor. a temperatura ambiente, todos los
átomos se encuentran en el estado de menor energía posible, esto es su estado
fundamental. la excitación de los átomos en estado de vapor puede realizarse de
diferentes maneras, en el caso particular de la técnica fotometría de llama, la excitación se
logra mediante el calor de una llama energía térmica. el tiempo de vida del átomo
excitado es breve y rápidamente vuelve al estado fundamental emitiendo luz de una
longitud de onda característica la señal de emisión que se mide en el fotómetro de llama
es directamente proporcional a la concentración del átomo que emite. (Graw Hill, 2015).

7.3 Caracteristicas de los Instrumentos

se utilizan instrumentos doble haz para minimizar las fluctuaciones de la fuente, estos
instrumentos se dividen.
Nebulizador: sistema que toma la muestra a analizar y la
coloca directamente como pequeñas gotas sobre la llama
a través de un capilar.
Entrada de aire y entrada de gas natural: ambas con
regulador de presión: comburente y combustible con el
que se formará la llama.
Llama: lugar donde la muestra pasa por una serie de
procesos que terminarán con la emisión de luz por parte
de los componentes de la muestra que logren excitarse.
Sistema óptico: es un filtro que permitirá seleccionar la
longitud de onda que llegue al detector aquella que
corresponde al analito que queremos cuantificar. (Fig.
11).

Figura 11. Esquema de la estructura del

Espectrofotómetro.
7.4 Usos y Aplicaciones
8. Conclusión
Este método lo utilizamos para el análisis cualitativo y cuantitativo de los elementos metálicos.
13
En el desarrollo de la investigación he entendido la aplicación que tiene la
Espectrofotometría para la realización de análisis cualitativo y cuantitativo, muchos de
estos métodos de espectrofotometría se utilizan para el análisis de los alimentos.
Cada uno de estos espectrofotómetros tienen una aportación importante para la
experimentación ya que estos análisis ayudan a poder saber de qué están compuestos
muchos de nuestros alimentos.
Ejemplo través de la técnica de espectroscopia de infrarrojo es posible observar
compuestos asociados con los carbohidratos del pan dulce y en la leche agua,
carbohidratos, proteínas y lípidos.
Como de la misma manera el espectrofotómetro de absorción molecular nos ayuda a
tener un seguimiento de como muchos de los frutos maduran a través de la concentración
de sus pigmentos a la determinación de hierros en harinas y panificados.
En lo personal estos quipos se me hace interesantes ya que aplican en muchas áreas de la
biotecnología y aplicamos muchos conocimientos de química, es más interesante de estos
métodos para mi es el espectrofotómetro de absorción e infrarrojo ya que con ellos se
hacen análisis a los alimentos para determinar las aportaciones nutrimentales que no
hacen y el tipo de enlacen que estos contienen.

9. Bibliografía

14
 Skoog, D.A. (2014). Química analítica. Séptima edición. México: McGraw-Hill
 Hernández, L. y González, C. (2018). Introducción al análisis instrumental.
Barcelona, España: Editorial Ariel.
 Educ. Quí. (2017). La cuarta revolución De las sustancias a las especies químicas.
México
 RM Dondelinger. Spectrophotometers. Biomed. Instrum. Technol., 45(2), 139-143
(2015).
 Rubinson, K. A., Rubinson, J. F. (2016). Análisis Instrumental. Madrid, España:
Pearson Educación,
 S.A. Skoog, D.A. (2018). Principios de Análisis Instrumental. Séptima edición.
México: Ed. CENGAGE.
 I. Castellanos, J. Velandia, M. González, D. Varela & E. Ramírez. (2018).
Aplicaciones y generalidades de un espectrofotómetro UV-Vis UV-1800 de
Shimadzu. (1. A ed.) Ediciones EAN (Bogotá).
 F. Manzano, J. A. Garrido, E. Jiménez. (2018). Técnicas de investigación
avanzadas en agronomía y ciencias afines. (1. A ed.) Edual (Almería).

15