Foro 12: “Aplicación de la citometría a flujo al diagnóstico de las IDP”

¿Qué valor le concede a la citometría de flujo en el diagnóstico de las IDP, en el

contexto de otras pruebas diagnóstico? Utilice como modelo la enfermedad Hyper
IgM para evidenciar el valor de combinar diferentes técnicas en las estrategias de
diagnóstico de una IDP

Las inmunodeficiencias primarias (IDP) son enfermedades que se desarrollan

naturalmente, cuando existen defectos en el sistema inmune. Como resultado de estos
defectos primarios, los pacientes presentan infecciones recurrentes, debidas a virus,
bacterias, protozoos y hongos, con una severidad variable. El sistema inmunitario
también puede ser alterado secundariamente, como resultado de la presencia de
diferentes condiciones patológicas (desnutrición, enfermedades metabólicas, procesos
malignos, infección, etc) produciéndose inmunodeficiencias secundarias. En ambos
casos se debe evaluar el estado del sistema inmunitario, estudiando el fenotipo y la
función de las distintas células que componen este. Una herramienta fundamental para
este estudio es la citometría de flujo (CMF) ya que nos permite averiguar con gran
exactitud, precisión, detectabilidad, objetividad, rapidez y poca muestra los parámetros
que nos interesan. Por lo que los datos inmunológicos necesarios para el diagnóstico
de las inmunodeficiencias son obtenidos en parte gracias a la CMF. Cuando existe una
sospecha de IDP en un paciente, en nuestro Laboratorio realizamos un "screening" del
fenotipo de las principales poblaciones linfocitarias, estudiando los siguientes
antígenos de membrana:

a) Linfocitos T: CD3, CD4, CD8, TCR ,á, TCR ¾.

Subpoblaciones CD4 y CD8: CD45RA, CD45RO

Activados: CD25, HLA-DR
b) Linfocitos B: CD19
c) NK: CD16, CD56
d) Moléculas de adhesión: CD18
e) Antígenos de activación tras estímulo con mitógenos: CD25.
Dependiendo de los resultados obtenidos en este primer estudio se ampliará
posteriormente el mismo, analizando otros antígenos.

Referencia bibliográfica
M. Hernández, I. Caragol y T. Español. Unidad Inmunología. C.S.Vall d'Hebron.
Barcelona. Contribucion de la Citometria de flujo al Dignostico y Estudio de las
Inmunodeficiencias Primarias. CITADO {01-06-2020} DISPONIBLE:
http://www.cyto.purdue.edu/cdroms/cyto1/7/37.htm
APORTE AL GRUPO EXPOSITOR

CITOMETRÍA DE FLUJO Y LA INVESTIGACIÓN EN ENFERMEDADES

PULMONARES

En los últimos 20 años, la citometría de flujo ha jugado un papel primordial en el

avance del entendimiento y habilidad para diagnosticar una variedad de desórdenes
linfoproliferativos. Una de las aplicaciones nuevas más interesantes es en la
evaluación de pacientes con enfermedades inmunológicas del pulmón. Una muestra
típica es aquella que es recolectada a partir de lavados bronquioalveolares (LBA),
cuya utilidad diagnóstica ha quedado ampliamente demostrada. Cuando el lavado es
realizado en pulmones normales, la célula presente más predominante es el
macrófago, el cual está en un porcentaje de aproximadamente 90% o más de
celularidad. Los linfocitos usualmente representan menos del 10% de la población
celular, los granulocitos representan la población celular minoritaria con el 1-2%. En
fumadores, el porcentaje de linfocitos es aún menor. En muchos pacientes con
enfermedades pulmonares inmunológicas, el LBA puede estar acompañado por un
incremento en linfocitos o eosinófilos. Cuando las células que están incrementadas
son los linfocitos, resulta importante saber qué subpoblación se encuentra elevada. La
citometría de flujo es ideal para esta evaluación. La proporción relativa de linfocitos,
macrófagos y granulocitos se determina fácilmente a partir de gráficas de tamaño
(Forward scatter FSC) contra complejidad celular (Side scatter SSC). Los estudios de
fluorescencia empleando diferentes fluorocromos permiten determinar fácilmente la
composición de subconjuntos de linfocitos (CD4+ y CD8+). De esta manera, es posible
ensayar hasta siete colores, con citómetros modernos, que representan siete
marcadores diferentes sobre poblaciones celulares, requiriéndose sólo una pequeña
cantidad de muestra (250,000 células en 50uL) a partir de un LBA.

Ejemplo

Un incremento en el número de células inflamatorias en un LBA sugiere una alveolitis.

El tipo de células en el lavado puede correlacionar con el tipo de inflamación visto en
las paredes alveolares de la biopsia. Aunque esas correlaciones no son diagnósticas,
pueden ayudar en el diagnóstico cuando son combinadas con otros datos.

Referencias bibliográficas

LOURDES MARÍA B.R. ANA C.Z. FABIOLA GÓMEZ A.,CITOMETRÍA DE FLUJO:

VÍNCULO ENTRE LA INVESTIGACIÓN BÁSICA Y LA APLICACIÓN CLÍNICA. Rev.
Inst. Nal. Enf. Resp. Mex. vol.17 no.1 México mar. 2004. Sección XVI, C.P.14080
México, D.F., México. Citado: (01-06-2020) Disponible:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-
75852004000100007